半边旗二萜化合物5F和大黄素影响HO-8910PM细胞中GDF15表达的研究

目的:研究半边旗二萜化合物5F(简称PsL5F)和大黄素对人高转移卵巢癌HO-8910PM细胞中生长分化因子15(GDF15)表达的影响,探讨它们抗肿瘤的作用机制。方法:应用肿瘤基因芯片、荧光定量实时PCR和Western blot法检测PsL5F和大黄素对GDF15表达的影响。结果:PsL5F和大黄素都能明显上调GDF15表达。结论:PsL5F和大黄素的抗肿瘤作用与GDF15高表达有关。     

益肺方对人肺癌A549细胞肿瘤相关生物学通路基因表达的影响

目的:通过PCR基因芯片检测益肺方对人肺癌A549细胞在肿瘤相关生物学通路基因的差异表达,分析其诱发基因谱改变的特征生物学通路,探讨其抗肿瘤作用的分子机制。方法:分别于对照组及实验组A549细胞中提取RNA,反转录成cDNA,以此为模板,应用美国Super Array公司人癌通路发现者PCR基因芯片,进行实时定量PCR反应,检测2组基因表达水平的差异。结果:两组比较在检测的89个基因中发现有8条基因表达水平显著上调,22条基因表达水平显著下调。差异表达基因主要与血管生成、细胞凋亡和细胞衰老、侵袭转移、信号传导等有关。结论:益肺方通过调控血管生成、细胞凋亡和细胞衰老、侵袭转移、信号传导等肿瘤相关生物学通路的基因表达水平,从而抑制人肺癌细胞生长,可能是益肺方抗肺癌作用的主要分子机制。     

理冲生髓饮有效组分对卵巢癌组织的相关基因表达与血管生成影响

目的:应用基因芯片技术对理冲生髓饮作用后人卵巢癌基因表达谱进行分析并且筛选差异表达基因,从信号转导方面和血管生成方面探讨中药复方理冲生髓饮对人卵巢癌作用机制。方法:建立Balb/C裸鼠卵巢癌皮下移植瘤模型,随机分为模型组和中药中剂量组。停药后将肿瘤组织分离。并且采用基因芯片技术,研究其表达图谱,从中筛选出中药中剂量组与模型组差异基因表达,探讨中药可能作用机制。结果:在分析差异基因的表达时,探索中药复方理冲生髓饮作用后,可能改变的信号通路有Jak-STAT信号通路、TNF信号通路、Nf-κb信号、HIF-1信号通路、趋化因子信号通路以及t细胞受体信号通路和胰岛素信号通路,BAG信号通路等。结论:基因芯片分析与卵巢癌相关差异基因12条;差异表达基因可能与肿瘤血管生成相关。     

女贞子对肝癌细胞全基因组表达谱影响

目的观察女贞子对人肝癌细胞全基因组基因表达的影响。方法女贞子处理肝癌Bel-7402细胞,试剂盒抽提RNA,基因芯片检测全基因组基因表达,Onto-Tools软件进行生物信息学分析。结果女贞子作用后,Bel-7402细胞有732个差异表达基因,其中升表达基因477个,降表达基因255个。差异表达基因Ontology分析显示有344个结构基因,325个功能基因,296个生物过程基因和79个信号通路基因;涉及转录调节、信号转导和细胞粘附等生物过程,以及粘着斑通路、MAPK通路和Wnt通路等信号通路。结论女贞子可调控肝癌细胞多个基因的表达,涉及多个生物过程与信号通路;参与调控女贞子对肝癌细胞增殖、凋亡、细胞衰老及免疫反应的作用。女贞子对肝癌细胞转移相关生物过程及信号通路基因表达的作用提示女贞子还可能具有抑制肝癌转移的作用。     

复方丹参注射液对血管内皮细胞基因表达谱的影响研究

 目的探讨复方丹参注射液对血管内皮细胞基因表达谱的影响。方法培养人脐静脉内皮细胞;复方丹参注射液作用细胞18 h,以正常培养的细胞作对照,用心血管疾病及细胞因子相关的基因芯片研究复方丹参注射液对培养的人脐静脉内皮细胞基因表达谱的影响,并用RT-PCR方法对表达上调与表达下调的基因进行了扩增和电泳检测。结果基因芯片分析筛选出复方丹参对内皮细胞的影响基因9个,其中上调基因3个,下调基因6个,包括一些与免疫、血管舒缩、细胞黏附及抗氧化的相关基因;对差异表达的基因用RT-PCR扩增及电泳检测结果与基因芯片结果一致,证实了基因芯片的检测结果。结论复方丹参可通过多种途径在基因水平调节内皮细胞的功能。     

温郁金提取物对食管癌TE-1细胞增殖的抑制作用

目的 研究温郁金提取物对食管癌TE-1细胞增殖的抑制作用。方法 采用超临界CO2萃取法提取温郁金成分。将TE-1细胞贴壁后分成4组：1组加入100 μL含0.1%DMSO的RMPI-1640 培养基,作为对照组;另外3组分别加入浓度为25、50、100 mg/L温郁金提取物完全培养液各100 μL,分别作为温郁金低、中、高剂量组。培养48 h后采用四甲基偶氮唑盐(MTT)比色法测定各组TE-1细胞生长抑制率。应用基因芯片技术检测各组TE 1细胞基因表达谱的变化。对差异表达基因进行基因本体(gene ontology, GO)功能分类。结果 与对照组比较,温郁金各剂量组生长抑制率均升高,差异有统计学意义(P<0.05)。温郁金各剂量组TE-1细胞生长抑制率随着剂量升高而增加,差异均有统计学意义(P<0.05)。通过基因芯片筛选出温郁金提取物作用前后88个基因表达水平发生改变且有统计学意义,包括22个基因表达下调,66个基因表达上调。基因GO分类提示差异表达基因主要涉及信号传导(6个)、细胞周期(8个)、凋亡(14个)或分化调节(10个)等。结论 温郁金提取物对人食管癌TE-1细胞生长有抑制作用,其抗肿瘤作用可能与调控多层次的基因表达改变有关。     

利用基因芯片技术研究乌头碱抗KBV200细胞耐药机制

目的采用基因芯片技术研究乌头碱抗KBV200细胞耐药机制。方法提取乌头碱12.5μg/mL用药组和对照组KBV200细胞的RNA,进行cDNA微阵列分析。结果整张基因芯片5504个基因克隆,其中用药前高表达基因208个,占克隆总数的3.8%,用药后高表达基因196个,占3.6%。用药前后细胞凋亡相关基因、CDKS家族、SMADS家族、MAPK信号转导系统等的基因发生变化。结论乌头碱可能通过影响细胞凋亡相关基因和影响MAPK信号转导系统等机制,最后作用于Mdr1基因的表达,从而起到抗耐药作用。     

基因表达谱芯片对乌三颗粒抗Lewis肺癌相关靶基因的分析研究

目的：在基因组水平上探讨乌三颗粒抗肿瘤的分子生物学机制。方法：抽提经乌三颗粒治疗的Lewis肺癌组织和未经治疗的对照组瘤组织总RNA并纯化mRNA,分别逆转录并进行荧光标记,制作成cD-NA探针,与小鼠MGEC-20S型基因芯片杂交,筛选出两组间差异表达基因。结果：两组间存在差异性表达基因45条,与对照组比较,中药组与恶性肿瘤浸润、转移相关的基因表达下调,与促进细胞凋亡的相关基因表达上调。结论：基因芯片技术能高通量分析中药乌三颗粒防治Lewis肺癌的相关靶基因,为进一步揭示中药抗肿瘤机制提供了新的思路和前沿性生物技术手段。     

18β-甘草次酸对HO-8910PM细胞Fas/FasL表达的影响

目的研究18β-甘草次酸(18β-glycyrrhetinic acid,18β-GA)对人高转移卵巢癌HO-8910PM细胞中Fas,FasL表达的影响,探讨Fas,FasL对卵巢癌细胞凋亡的作用机制。方法不同浓度药物作用HO-8910PM细胞,MTT法检测细胞的生长增殖,流式细胞仪检测细胞周期,FITC法检测Fas,FasL的蛋白表达情况。结果 18β-GA对高转移卵巢癌细胞HO-8910PM的生长和增殖具有显著的抑制作用;药物使8910PM细胞周期阻滞于G1期,凋亡增加。FITC检测发现Fas,FasL蛋白表达上调(P<0.05)。结论 18β-GA通过上调HO-8910PM中Fas,FasL蛋白表达,促使细胞凋亡,抑制细胞增殖,提示18β-GA可能成为治疗卵巢癌的潜在药物。     

菟丝子含药血清干预TNF-α诱导人蜕膜细胞异常凋亡后基因表达谱的变化

目的:观察菟丝子含药血清干预肿瘤坏死因子α(TNF-α)诱导建立人蜕膜细胞异常凋亡模型后基因表达谱的变化,以期从基因表达谱的变化探讨菟丝子安胎的分子机理。方法:体外常规进行人蜕膜细胞的培养,选用适宜浓度的TNF-α诱导建立人蜕膜细胞异常凋亡模型,用菟丝子含药血清干预,采用一步法抽提RNA,用人全基因组17Kc DNA基因芯片来分析菟丝子作用后的基因表达谱变化情况,分析基因的变化趋势。结果:菟丝子含药血清作用于TNF-α诱导的异常凋亡的蜕膜细胞后共检出基因10 230条,其中共检出表达差异基因128条,上调基因76条,下调基因52条;这些表达差异基因有细胞因子及受体、转录相关基因、凋亡相关基因、生长分化相关基因、信号转导相关基因、细胞周期相关基因、电子传递和氧化相关基因、转移酶相关基因、核酸酶相关基因等。结论:菟丝子可能通过以上基因的表达,调控蜕膜细胞的生长周期及异常凋亡,在免疫调节等方面发挥有一定的安胎作用。     

Genistein影响高转移卵巢癌细胞HO-8910PM细胞周期的实验研究

目的：探讨三羟异黄酮（genistein）对人高转移卵巢癌细胞HO-8910PM细胞周期的影响及其作用机制。方法：以台盼蓝拒染法检测genistein对高转移卵巢癌细胞HO-8910PM细胞增殖的影响；流式细胞术分析genistein对HO-8910PM细胞周期的影响；Westemblot法分析NF-KB（P65）、VEGF的表达。结果：不同浓度的genistein分别处理细胞24h后，对HO-8910PM细胞增殖有明显的抑制作用；流式细胞术分析表明各浓度genistein组G，期细胞明显升高，50i,xmol／L组和100μmol／L组与对照组相比差异显著（P〈0．05），而25μmol／L组与对照组比较无显著差异（P〉0．05）；同时genistein可使NF-κB（P65）和VEGF的表达下调。结论：Genistein对HO-8910PM细胞增殖有抑制作用，其作用机制可能与NF-κB（P65）和VEGF表达下调有关。     

苦参碱对人卵巢癌细胞株HO-8910PM增殖及侵袭运动能力的影响

目的 研究苦参碱对人高转移卵巢癌细胞系HO-8910PM增殖及转移相关能力的影响及其作用机制.方法 以MTT法和台盼蓝拒染法检测苦参碱对人高转移卵巢癌HO-8910PM细胞增殖的影响;Transwell小室法检测其对HO-8910PM细胞侵袭运动能力的影响;考马斯亮蓝染色法检测不同质量浓度苦参碱对H0-8910PM细胞细胞骨架的改变及免疫细胞化学方法检测药物作用前后HO-8910PM细胞Ezrin蛋白的表达.结果 苦参碱对HO-8910PM细胞增殖抑制呈明显剂量和时间效应;1.5 g/L苦参碱能明显抑制细胞的增殖,作用6 h后能抑制HO-8910PM细胞体外侵袭人工基底膜和运动能力,抑制率分别为(41.52±10.76)%和(39.73±10.67)%;1.0、1.5g/L苦参碱作用HO-8910PM细胞24 h后使细胞骨架明显改变,并上调Ezrin蛋白的表达.结论 苦参碱能抑制高转移性人卵巢癌细胞HO-8910PM的增殖能力和侵袭运动能力,其抗肿瘤侵袭运动的机制与细胞骨架和Ezrin蛋白表达的改变有关.     

冬凌草甲素对卵巢癌细胞紫杉醇耐药性的拮抗作用及其机制研究

目的探讨冬凌草甲素体内外对卵巢癌细胞紫杉醇耐药性的拮抗作用及其机制。方法通过大剂量冲击法,诱导制备耐紫杉醇的人卵巢癌HO-8910PM细胞株(HO-8910PM/PIX),用不同浓度冬凌草甲素处理HO-8910PM/PIX细胞;或在冬凌草甲素作用HO-8910PM/PIX细胞前以NF-κB激活剂TPA进行预处理。给药后,细胞经DAPI染色,荧光显微镜下观察细胞形态变化;CCK-8法检测细胞增殖;流式细胞仪检测细胞凋亡情况;Western blotting检测卵巢癌细胞中NF-κB蛋白的表达。建立裸鼠卵巢癌皮下移植瘤模型。接种后8周,观察冬凌草甲素对裸鼠皮下移植瘤生长的影响;免疫组织化学法检测肿瘤组织中NF-κB的阳性表达。结果与对照组相比,冬凌草甲素呈浓度相关性抑制卵巢癌HO-8910PM/PIX细胞增殖,显著诱导细胞凋亡,而TPA可显著削弱冬凌草甲素诱导细胞凋亡的作用。与HO-8910PM细胞相比,NF-κB在HO-8910PM/PIX细胞中表达显著上调,冬凌草甲素可抑制HO-8910PM/PIX细胞中NF-κB的表达。冬凌草甲素可显著抑制裸鼠卵巢癌皮下移植瘤生长,明显减弱移植瘤组织中NF-κB的阳性表达。结论冬凌草甲素体内外对卵巢癌细胞紫杉醇耐药性具有拮抗作用,该作用可能通过抑制NF-κB的表达而实现。     

半边旗提取物5F影响高转移卵巢癌细胞HO-8910PM细胞周期的实验研究

目的:探讨半边旗提取物5F对人高转移卵巢癌细胞HO-8910PM细胞周期的影响及其作用机制.方法:以MTT法检测5F对高转移卵巢癌细胞HO-8910PM细胞增殖的影响;流式细胞术分析5F对HO-8910PM细胞周期的影响;Western blot法分析NF-κB(P65)、FAK的表达及FAK酪氨酸磷酸化水平.结果:不同浓度的5F分别处理细胞24 h后,对HO-8910PM细胞增殖有明显的抑制作用;流式细胞术分析表明5F使G0/G1期的细胞减少,阻断细胞于G2/M期;同时,5F可使NF-κB(P65)的表达下调,上调FAK的表达,并降低FAK酪氨酸磷酸化水平.结论:5F对HO-8910PM细胞周期的影响与NF-κB(P65)表达下调及FAK的表达上调有关.     

半边旗二萜类化合物5F对人高转移卵巢癌细胞系HO-8910PMNF-κB(P65)、Smad3蛋白和NF-κB(P65)、ETS-1mRNA表达的影响

目的研究半边旗二萜类化合物5F(11α-羟基-15-氧-16-烯-对映贝克杉烷-19酸)对人高转移卵巢癌细胞系HO-8910PM细胞内核转录因子κBP65亚基[NF-κB(P65)]、Smad3蛋白及NF-κB(P65)、ETS-1mRNA表达的影响,探讨其抗肿瘤的作用机制。方法MTT法检测5F对HO-8910PM细胞增殖的影响;Westernblot分析NF-κB(P65)及Smad3蛋白的表达;RT-PCR分析NF-κB(P65)及ETS-1mRNA的表达。结果5F能抑制HO-8910PM细胞的增殖,抑制率随剂量的增加而增加,具有剂量依赖性;25～100μmol/L5F作用HO-8910PM细胞24h后,NF-κB(P65)、Smad3蛋白表达水平明显下降,并呈剂量效应关系;5F明显下调NF-κB(P65)mRNA的表达,轻微下调ETS-1mRNA的表达。结论5F抗肿瘤活性与NF-κB(P65)、Smad3蛋白和NF-κB(P65)、ETS-1mRNA的表达有关。     

白藜芦醇影响高转移卵巢癌细胞HO-8910PM转移相关能力的实验研究

目的:研究白藜芦醇对人高转移卵巢癌细胞HO-8910PM转移相关能力的影响。方法:以MTT法检测白藜芦醇对高转移卵巢癌细胞HO-8910PM的细胞毒作用;用Transwell小室法检测白藜芦醇对HO-8910PM细胞侵袭能力和趋化运动能力的影响;以细胞粘附人工重组基底膜实验检测白藜芦醇对HO-8910PM细胞粘附能力的影响。结果:白藜芦醇作用细胞6 h后能抑制HO-8910PM细胞体外趋化运动和粘附能力,其中100μmol/L抑制率分别为(30.1±10.8)%,(34.27±1.28)%,但白藜芦醇并不影响HO-8910PM细胞侵袭人工基底膜能力。结论:白藜芦醇能抑制高转移卵巢癌细胞HO-8910PM的运动和粘附能力,是潜在的抗肿瘤转移药物。     

半边旗二萜化合物5F对HO-8910PM细胞中Nr1d1表达的影响

目的:研究半边旗二萜化合物5F(5F from Pteris semipinnata L,PsL5F)对人高转移卵巢癌HO-8910PM细胞中核受体超家族成员1d1(nuclear receptor subfamily 1,group D,member 1,Nr1d1)表达的影响,探讨其抗肿瘤的可能作用机制.方法:培养HO-8910PM细胞,用0.1%DMSO,100 μmol~(-1) PsL5F分别处理HO-8910PM细胞24 h后,提取RNA和总蛋白,应用肿瘤基因芯片和荧光定量实时PCR检测PsL5F对Nr1d1 mRNA表达的影响;Western blot法分析PsL5F对Nr1d1蛋白表达水平的影响.结果:肿瘤基因芯片结果显示,100μmol·L~(-1) PsL5F处理组中Nr1d1 mRNA表达水平是对照组的26.17倍,荧光定量实时PCR结果与芯片结果吻合,PsL5F处理组中Nr1d1 mRNA表达水平是对照组的(35.34±1.07)倍(P<0.01),并且PsL5F处理组中Nr1d1蛋白表达水平是对照组的(7.71±0.43)倍(P<0.01).结论:PsL5F能明显上调HO-8910PM细胞中Nr1d1的表达,提示其与PsL5F抗肿瘤作用密切相关.     

半边旗提取物5F对人高转移卵巢癌细胞HO-8910PMETS-1mRNA和VEGF蛋白表达的影响

目的:研究半边旗提取物5F(以下简称5F)对HO-8910PM细胞内VEGF蛋白及ETS-1mRNA表达的影响,探讨其抗肿瘤侵袭转移的作用机制.方法:RT-PCR分析ETS-1mRNA的表达;Western blot分析VEGF蛋白的表达.结果:25～100 μmol/L 5F作用HO-8910PM细胞24 h后,明显下调ETS-1mRNA的表达;5F明显下调VEGF蛋白表达水平.结论:5F抗肿瘤侵袭转移能力与ETS-1mRNA和VEGF蛋白的表达有关.