中医药调控TGF-β1/Smad信号通路干预肾间质纤维化机制

TGF-β1/Smad信号传导通路是肾间质纤维化发生发展重要的通路之一。随着分子生物学、中药药理学等研究的不断深入,无论中药单方及其有效成份或复方中药,通过调控TGF-β/Smad信号通路拮抗肾间质纤维化已显现出广泛的药理作用：如直接抑制TGF-β1的产生,或抑制TGF-β1刺激的下游因子CTGF等,或抑制Smads磷酸化,或调节TβR、Smad的表达等,显示出多途径、多层次、多靶点对TGF-β1/Smads通路及信号蛋白的调控效应。但由于复方中药成分复杂,应更深入全面地阐明其对TGF-β/Smad信号通路的各个环节、不同靶点及与其他信号通路相互作用的调控机制,并通过拆方研究、有效部位筛选、有效组分分析等,明确各药物之间的协调作用,以筛选出临床疗效可靠、无不良反应的基础方药及其药物最佳配伍剂量或形式,此为复方中药研究应寻找的最佳突破点之一。     

肾衰泻浊丸对肾间质纤维化大鼠TGF-β1/Smads信号转导通路的影响

目的：通过实验研究观察肾衰泻浊丸对腺嘌呤致肾间质纤维化大鼠的TGF-β1/Smads信号转导通路的影响,探讨肾衰泻浊丸抗肾间质纤维化的机理。方法：采用腺嘌呤致肾间质纤维化大鼠模型,观察治疗后实验大鼠肾间质纤维化情况;采用免疫组织化学法分别检测肾组织中的TGF-β1、Smad2/3蛋白的表达,采用Western Blot法检测肾组织内的Smad2/3蛋白的表达,采用半定量RT-PCR检测肾组织内的TGF-β1mRNA的表达水平。结果：肾衰泻浊丸能够减少肾间质纤维化面积;能够降低肾间质纤维化大鼠肾组织中TGF-β1,Smad2/3蛋白的表达,与对照组比较有显著性差异（P〈0.05）;能够下调肾组织中TGF-β1mRNA的表达,与对照组比较有显著性差异（P〈0.05）。结论：肾衰泻浊丸可能是通过降低Smad2/3、TGF-β1的蛋白表达,从而抑制了TGF-β1信号向细胞核内转导的通路,这可能是其延缓肾间质纤维化进展的机制之一。     

TGF-β/Smad信号转导通路在肾纤维化中的作用机制及中药的干预作用

肾纤维化程度是肾脏疾病进展的重要指标。转化生长因子（TGF-β1）是重要的促肾纤维化因子，TGF-β1／Smad信号转导通路是肾纤维化的主要信号转导通路。笔者就TGF-β1／Smad信号转导通路与肾纤维化之间的关系，以及中药制剂对该信号转导通路的干预作用进行综述。     

清化固肾排毒方对单侧输尿管梗阻大鼠肾间质纤维化的保护作用及机制

目的:观察清化固肾排毒方对单侧输尿管梗阻大鼠肾间质纤维化的保护作用及机制。方法:108只SPF级SD大鼠随机分为假手术组、UUO模型组、中药高剂量组、中剂量组、低剂量组、洛丁新组,给予相应药物治疗,各组分别于建模后第7、14、21天处死,留取血清测Scr、BUN,留取梗阻侧肾组织行HE和Masson染色,光镜观察各组大鼠肾组织病理变化。免疫组化检测肾组织TGF-β_1、Smad2/3、Smad7的表达。结果:随着输尿管梗阻时间延长,肾小管间质纤维化程度逐渐加重。免疫组化结果显示:与假手术组相比,各时相点UUO组TGF-β1、Smad2/3表达明显上升,Smad7表达明显下降(P均<0.05);药物干预后,与UUO组相比,中药治疗组和洛丁新组TGF-β_1、Smad2/3表达下降,Smad7表达上升(P均<0.05);中药各剂量组与洛丁新组之间比较无统计学差异。结论:清化固肾排毒方可能通过下调Smad2/3及上调Smad7来抑制TGF-β_1/Smads信号转导通路,发挥改善肾间质纤维化的作用。     

TGF-β1/Smad信号通路在腺嘌呤导致的肾纤维化大鼠肾脏组织中的作用与意义

目的:探讨肾组织中TGF-β1/Smad信号通路在腺嘌呤导致的肾纤维化模型损伤过程中的变化与意义。方法:将23只SD大鼠随机分为正常组10只和模型组13只,采用腺嘌呤制备肾纤维化大鼠模型;采用RT-PCR检测两组大鼠TGF-β1mRNA的表达,ELISA法检测Smad2、Smad3、Smad7蛋白表达,免疫组化法检测a-SMA蛋白表达。结果:模型组较正常组TGF-β1mRNA表达增强,Smad2、Smad3水平升高,Smad7水平下降,差异均具有统计学意义(P0.01)。结论:腺嘌呤导致的大鼠肾纤维化与TGF-β1/Smad信号通路密切相关,通过调节TGF-β1/Smad信号通路,对抑制肾纤维化的发生发展有重大意义。     

TGF-β1/ERK信号通路与糖尿病肾病肾纤维化的发病机制研究进展

肾纤维化是糖尿病肾病(diabetic nephropathy, DN)发生发展并导致终末期肾脏疾病(end-stage renal disease, ESRD)的主要病理变化,转化生长因子-β1(TGF-β1)是已知最重要的致纤维化因子。越来越多研究表明TGF-β1/ERK信号通路是介导肾纤维化的重要非Smad依赖途径通路,在肾纤维化中发挥重要作用。本文对肾纤维化发病机制及TGF-β1/ERK信号通路在DN肾纤维化中的作用进展进行综述。     

桃核承气汤对CRF大鼠TGF-β1/Smad3信号调控的miR-29表达的影响

目的通过观察桃核承气汤对慢性肾功衰竭(chronic renal failure,CRF)大鼠TGF-β1/Smad3信号通路介导的miR-29表达的影响,分析该方延缓CRF的可行性,为治疗CRF提供分子生物学依据。方法将100只7周龄成年雄性Wistar随机分成空白组、假手术组、模型组、治疗组。模型组与治疗组的大鼠均采用5/6肾切除手术的方式造模,假手术组的大鼠只剥除两肾的被膜;空白组不做处理。治疗组予桃核承气汤灌胃,其余三组予生理盐水灌胃,连续灌胃56天后处死,进行相关指标检测和病理组织形态观察。结果 Western Blot结果显示,治疗组相比模型组,左肾组织TGF-β1、Smad3的蛋白表达显著下降(P 0. 05); q PCR示治疗组相比模型组,TGF-β1、Smad3 mRNA表达下调(P 0. 05),miR-29a、miR-29b、miR-29c表达水平上调(P 0. 05);光镜下肾间质纤维化明显HE染色显示,空白组及假手术组左肾组织结构正常;模型组左肾组织结构紊乱,间质纤维增生严重,肾小管萎缩,可见炎性细胞浸润;治疗组与模型组相比较,肾间质中炎性浸润减少,间质纤维化程度明显改善。结论 5/6肾切除大鼠肾间质纤维化模型中TGF-β1/Smad3信号被激活;桃核承气汤能通过抑制5/6肾切除大鼠肾间质纤维化模型中TGF-β1/Smad3信号通路,上调miR-29的表达,发挥抑制肾间质纤维化的作用。     

益气活血法对单侧输尿管梗阻大鼠肾小管上皮细胞转分化的影响

[目的]观察益气活血法中药方剂对单侧输尿管梗阻大鼠肾组织转化生长因子-β1(TGF-β1)、果蝇MAD类似基因2/3(Smad 2/3)和α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)表达的调节,探讨其对肾小管上皮细胞转分化的影响.[方法]采用单侧输尿管结扎致.肾间质纤维化大鼠模型.将30只大鼠随机分为6组:假手术组、模型组、中药大剂量组、中药中剂量组、中药小剂量组、西药组.术后14 d,观察梗阻肾组织病理改变,用免疫组化方法检测肾组织TGF-β1、Smad2/3和α-SMA的表达.[结果]益气活血法能减轻肾间质纤维化程度,并能下调TGF-β1、Smad 2/3和α-SMA的表达.[结论]益气活血法可通过下调TGF-α、Smad 2/3和α-SMA的表达,从而抑制大鼠肾小管上皮细胞转分化.     

中药干预TGF-β1/Smad信号通路抗肝纤维化研究进展

肝纤维化(hepatic fibrosis,HF)是多由于各种损肝因素所致的肝内纤维组织异常增生与沉积的病理过程。现已有研究表明转化生长因子β1(Transforming Growth Factorβ1,TGF-β1)是促肝纤维化的重要因子之一,TGF-β1/Smad信号通路是HF主要的信号转导通路,因此采取各种的措施阻断该信号成为抗纤维化的重要治疗靶点。中药在治疗肝纤维化具有多途径、多环节、多靶点的优势,近年来越来越多学者以中药治疗肝纤维化集中在阻断或转导TGF-β1/Smad信号通路上,文章基于TGF-β1/Smad信号通路抗肝纤维化的中药研究概况做一综述,揭示现代中医药作用的靶点和调控机理,为HF的防治及中医药现代研究提供新的思路和策略。     

扶肾降浊方对肾小管间质损害大鼠TGF-β 1/Smads/ILK信号转导通路的影响

目的研究扶肾降浊方对系膜增生性肾小球肾炎(MsPGN)大鼠肾小管间质损害的疗效机制。方法在MsPGN动物模型基础上,延长建模时间至20周,使其自然发展为肾小管间质损害模型。实验设中药组、西药组、模型组及空白组。中药组给予扶肾降浊方17.01g·kg-1灌服,西药组以贝那普利1.8mg·kg-1灌服,模型组和空白组给予等量生理盐水,连续20周,分别于实验第12,16和20周末剖取大鼠肾组织,采用实时荧光定量-聚合酶链式反应(RT-PCR)检测大鼠肾组织转化生长因子-β1(TGF-β1)、Smad3、Smad7及整合素连接激酶(ILK) mRNA表达水平。结果模型大鼠肾组织TGF-β1/Smads/ILK信号转导通路发生改变,其中TGF-β1、Smad3、ILK mRNA表达上调,Smad7 mRNA表达下调。扶肾降浊方随着给药周期的延长能部分逆转肾小管损害造成的上述mRNA表达异常。结论扶肾降浊方对MsPGN大鼠肾小管间质损害保护作用机制可能与调节TGF-β1/Smads/ILK信号转导通路有关。     

胰泰复方对慢性胰腺炎胰腺纤维化大鼠TGF-β1及Smad2/3表达的影响

目的：观察中药胰泰复方对慢性胰腺炎胰腺纤维化大鼠TGF-β1及Smad2/3表达的影响。方法：13.3%的L-精氨酸左下腹腔注射制备大鼠慢性胰腺炎模型,予相关药物灌胃治疗,2个月后处死各组动物后取材;免疫组织化学法检测各组大鼠胰腺组织TGF-β1及Smad2/3的表达。结果：模型组TGF-β1及Smad2/3的表达明显高于空白组、中药对照组及中药治疗组;中药治疗组的表达低于中药对照组。结论：胰泰复方能降低纤维化胰腺组织中TGF-β1及Smad2/3的表达,有效阻止和逆转慢性胰腺炎纤维化的进程。     

Fuzheng Huayu recipe and vitamin E reverse renal interstitial fibrosis through counteracting TGF-β1-induced epithelial-to-mesenchymal transition

Aim

To investigate the mechanism of action of Fuzheng Huayu recipe (FZHY) and vitamin E (Vit E) against renal interstitial fibrosis related to transforming growth factor-beta1 (TGF-β1) mediated tubular epithelial-to-mesenchymal transition.

Materials and methods

Renal interstitial fibrosis was induced by administration of HgCl₂ at a dose of 8 mg/kg body weight once a day for 9 weeks. Rats were randomly divided into four groups: normal, model, FZHY, and Vit E group. Rats in the latter two groups were treated with the FZHY recipe and Vit E respectively. HK-2 cells were treated with TGF-β1 for 24 h, followed by incubation with either SB-431542 (a potent and specific inhibitor of TβR-I kinase) or FZHY drug-containing serum for another 24 h. Hyp content in rat kidney tissue was assayed with Jamall's method and collagen deposition in kidney was visualized using Masson stain. Protein expression of TGF-β1, TβR-I, Smad2, p-Smad2, Smad3, and p-Smad3 was analyzed by Western blotting. Protein expression and the location of Smad3 in kidney was assayed by immunohistochemistry, E-cadherin, cytokeratin 18 (CK-18), α-SMA and TGF-β1 by immunofluorescent stain.

Results

FZHY and Vit E inhibited renal collagen deposition and reduced Hyp content significantly. They upregulated E-cadherin protein expression and down-regulated the protein expression of α-SMA, TGF-β1, p-Smad2, p-Smad3, and TβR-I. Lastly, they inhibited the nuclear translocation of Smad3 in fibrotic kidney tissue. FZHY drug-containing serum significantly upregulated the expression of CK-18 and down-regulated the expression of α-SMA, TβR-I, p-Smad2/3 in TGF-β1 stimulated HK-2 cells.

Conclusion

The mechanism of action of FZHY and Vit E against renal interstitial fibrosis is related to the reversal of tubular EMT induced by TGF-β1.     

芪卫颗粒对自发性2型糖尿病KK-Ay小鼠肾组织转化生长因子β1蛋白及mRNA表达的影响

目的探讨芪卫颗粒对KK-Ay小鼠肾组织TGF-β1蛋白及mRNA表达的影响。方法采用自发性2型糖尿病KK-Ay小鼠模型。将KK-Ay小鼠随机分为模型组、中药组、西药组,以C57BL/6J小鼠作为正常组,每组15只,连续治疗12周,用HE、PAS及Masson染色法观察肾脏病理改变。采用免疫组织化学法及实时荧光定量PCR法,检测肾组织中转化生长因子β1(TGF-β1)的蛋白及mRNA表达。结果模型组小鼠肾脏病理改变呈现肾小球肥大,系膜基质区增宽,系膜细胞增多,肾小管上皮细胞空泡样变性,肾小管扩张,灶状萎缩,偶见坏死,可见较多蛋白管型,间质内炎性细胞浸润,间质纤维化表现。肾脏细胞内的TGF-β1的蛋白及mRNA表达较正常组明显增多。经芪卫颗粒、缬沙坦处理后,小鼠肾脏病理改变较模型组明显减轻,TGF-β1的蛋白及mRNA表达明显降低(P<0.05)。结论芪卫颗粒可通过抑制TGF-β1的蛋白及mRNA表达起到防治糖尿病肾病的作用。     

肾复康Ⅱ号对大鼠肾间质纤维化及转化生长因子-β1的影响

目的:观察肾复康Ⅱ号胶囊对大鼠肾间质纤维化及转化生长因子-β1的表达情况的影响。方法:采用单侧输尿管结扎的方法制造大鼠肾间质纤维化模型。90只SD大鼠随机分为假手术组(对照组)、模型组、肾复康Ⅱ号2.25g/kg组、4.5g/kg组、9g/kg组,肾复康Ⅱ号胶囊各组分别以以上剂量水溶剂灌胃,假手术组及模型组每天同时间以等体积的蒸馏水灌胃。给药7、14、21天后分别将造模大鼠的肾脏进行HE、Masson染色,观察肾间质纤维化的面积的变化;通过免疫组化的方法检测肾间质中转化生长因子-β1的表达情况。结果:模型组和肾复康Ⅱ号胶囊各组均出现肾间质纤维化病理改变,各剂量组(有效剂量2.25g/kg～9g/kg)病变程度与模型组相比较轻,具有显著性差异。肾复康Ⅱ号胶囊各组之间无显著性差异。TGF-β1表达在模型组和肾复康Ⅱ号胶囊组明显强于假手术组,肾复康Ⅱ号胶囊各组(有效剂量2.25g/kg～9g/kg)TGF-β1表达较模型组明显减少。结论:肾复康Ⅱ号胶囊可以有效抑制肾间质纤维化及转化生长因子-β1的表达,这可能是益肾散结法抗肾间质纤维化的部分途径。     

人参有效单体对活化的肾系膜细胞株的影响

目的:观察人参有效单体对活化的肾系膜细胞株的影响。方法:采用体外培养肾系膜细胞株的方法,将其分为空白对照组、TGF-β12ng/ml组、TGF-β12ng/ml+中药10-5g/ml组和TGF-β12ng/ml+中药10-6g/ml组。采用MTT法观察24h中药单体对系膜细胞株的作用以及ELISA法对TGF-β的分泌情况。结果:与空白对照组相比,加入TGF-β1刺激因子可以促进系膜细胞株的活化(P<0.05),以及TGF-β的分泌(P<0.01),中药单体可以抑制活化的细胞株增殖和TGF-β的分泌(P<0.05或P<0.01)。结论:人参中药单体可以抑制活化的肾系膜细胞株的增殖,有效防治肾纤维化,其可能的作用机制与其抑制TGF-β的分泌有关。     

参蛤散对心室重构大鼠TGF-β1/Smads信号传导的影响

目的:通过观察参蛤散对大鼠心肌TGF-β1/Smads信号传导通路的影响,研究参蛤散干预压力超负荷大鼠心室重构的作用机制。方法:通过缩窄腹主动脉使外径狭窄至0.6 mm,导致心脏压力超负荷,建立压力超负荷大鼠模型,参蛤散或卡托普利干预30天,取心肌组织,采用逆转录多聚酶链反应(RT-PCR)技术检测心肌组织TGF-β1、Smad3、Smad7 mRNA表达;采用蛋白免疫印迹(Western blot)技术检测心肌组织TGF-β1、Smad3蛋白的表达。结果:参蛤散可以部分下调压力超负荷大鼠心肌TGF-β1、Smad3 mRNA表达,上调Smad7 mRNA表达;还可以抑制TGF-β1、Smad3蛋白的表达。结论:文章在"异病同治"的中医理论的指导下,通过体内实验研究证实,参蛤散可以抑制TGF-β1/Smads信号转导通路活化,在一定程度上能够延缓或逆转压力超负荷大鼠心肌肥厚、心肌纤维化,从而起到抗心室重构的作用。     

中医药在抗肾纤维化过程中对CTGF的研究进展

通过分析相关文献从结缔组织生长因子的生物学功能及其与TGF-β1的关系和在肾纤维化中的作用等方面就目前中医药对其研究现状进行综述,为寻求中医药抗肾纤维化的作用靶点提供参考。