HPLC-ICP/MS联用测定滑石粉中6种砷形态化合物

摘要：目的:建立一种高效液相色谱联用电感耦合等离子体质谱（HPLC-ICP/MS）测定滑石粉中亚砷酸根[As（Ⅲ）]、砷酸根[As（Ⅴ）]、一甲基砷（MMA）、二甲基砷（DMA）、砷甜菜碱（AsB）和砷胆碱（AsC）共6种砷形态化合物的方法。方法:样品采用0.15 mol·L-1硝酸溶液热水浴振荡提取,CNW Sep AX阴离子交换色谱柱（4 mm×250 mm, 10μm）,0.025 mol·L-1磷酸二氢铵-水梯度洗脱,ICP-MS检测分析。结果:6种砷形态化合物在1～100μg·L-1浓度范围内线性关系良好,r均>0.997;加标回收率在97.7%～99.5%之间,RSD为2.3%～4.1%（n=9）。结论:本法灵敏度高,重现性好,适用于滑石粉中6种砷形态化合物的测定,试验表明药用滑石粉中检出毒性较大的As（Ⅲ）和[As（Ⅴ）],应关注其无机砷风险。     

HPLC-ICP-MS测定泽泻、金银花、鸡血藤中可溶性价态砷及残留限度

目的 建立高效液相色谱-电感耦合等离子质谱(HPLC-ICP-MS)测定方法,分析金银花、泽泻、鸡血藤中4种不同价态砷,评估泽泻、金银花、鸡血藤中4种价态砷的残留情况,为制定相关残留限度提供依据。方法 采用0.05 mol·L^-1 EDTA溶液超声提取样品中可溶性砷,采用HPLC-ICP-MS分析样品中可溶性砷的形态。结果 As(Ⅲ)、DMA、MMA、As(Ⅴ)在5~200 μg·L^-1内线性良好,平均回收率(n=9)为105.1％~108.4％,方法检测限为0.01 mg·kg^-1。泽泻检出少量As(Ⅲ)、As(Ⅴ),金银花检出少量As(Ⅲ)、DMA、As(Ⅴ),鸡血藤则均未检出As(Ⅲ)、DMA、MMA、As(Ⅴ)。结论 该方法操作简便、结果准确、重复性好,能满足4种不同价态砷的残留限度分析。     

五灵脂中重金属及砷形态、价态的研究和安全性评价

目的 研究五灵脂中重金属及有害元素和砷形态、价态，并对其安全性进行评价。方法 采用微波消解法结合电感耦合等离子体质谱（ICP-MS）法对五灵脂中铅（Pb）、镉（Cd）、砷（As）、汞（Hg）、铜（Cu）5种重金属及有害元素进行测定，参照现行《中国药典》2020年版植物药重金属及有害元素的限量标准、采用单项污染指数法对有害元素潜在的安全性风险进行评价；另外采用高效液相联用电感耦合等离子体质谱（HPLC-ICP-MS）法对一甲基砷（MMA）、二甲基砷（DMA）、亚砷酸（AsⅢ）、砷酸（AsⅤ）、砷甜菜碱（AsB）、砷胆碱（AsC）6种砷形态、价态进行研究。结果 2种方法的线性关系、精密度、重复性、回收率均良好。五灵脂中5种重金属及有害元素的安全性较高。HPLC-ICP-MS结果表明，部分药材中检出微量的无机砷（AsⅢ和AsⅤ），结果相对安全可控。结论 为五灵脂重金属及有害元素限量标准制定提供了数据支持，同时有助于未来准确评价有害元素带来的安全性风险。     

SPE-氢化物发生原子荧光联用技术测定昆布中的无机砷含量

目的： 建立氢化物发生原子荧光测定昆布中无机砷含量(As ( III)和As (V))的方法。方法：采用1%硝酸90℃水浴提取昆布中的无机砷,5%双氧水氧化As ( III)成As (V)。以强阴离子交换SPE技术消除MMA、DMA的干扰,无机砷以As (V)形式洗脱。氢化物发生原子荧光法测定无机砷。结果：线性范围为0-20mg/L,线性相关系数0.9997,加样回收试验低、中、高浓度平均回收率分别为83%、90%、92%,样品7次测定RSD为5.3%,方法检出限0.046mg/L。测定结果与HPLC-ICP-MS法结果比对满意。结论：本方法操作简便,仪器配置要求低,满足分析测试要求,适用于一般实验室昆布中无机砷的测定。     

蒙药希日乌日乐中砷元素形态分析

目的:研究蒙药希日乌日乐中砷元素的形态.方法:人工胃液提取希日乌日乐后用0.45nm孔径的滤膜分离出可溶态和悬浮态,通过离子交换树脂动态吸附和溶剂萃取相结合的分离技术对可溶态中砷元素的四种存在形态进行分离:无机三价砷As[(Ш)]、五价砷[As(V)]、一甲基砷(MMA)和二甲基砷(DMA).并利用ICP-AES法测定提取液中砷四种形态化合物的含量.结果:砷元素主要以五价砷[As(V)]、一甲基砷(MMA)和二甲基砷(DMA)三种形态存在,未检测到无机三价砷As[(Ш)]形态.结论:蒙药希日乌日乐中砷元素的毒性很低.     

雄黄及含雄黄中成药中砷的形态分析

目的:建立一种中药中砷的形态分析方法,分离并测定雄黄及含雄黄中成药中4种形态的砷化合物:无机 As(Ⅲ)、As(V)和有机单甲基胂酸(MMA)、二甲基胂酸(DMA)。方法:以稀盐酸溶液(pH 2)浸提雄黄及含雄黄中成药中的可溶性砷,用阴、阳离子固相萃取小柱进行分离,氢化物发生-原子荧光光谱法测定4种形态砷含量。结果:4种形态砷能实现完全分离,测定精密度、准确度良好。结论:本方法较为简便,准确、可靠,适用于分离测定雄黄及含雄黄的中成药中4种形态砷含量。     

中药凤尾草不同部位的砷形态分析

目的:建立凤尾草中砷化合物的分析方法。方法:用高效液相-原子荧光光谱联用方法,以KH2PO4/Na2HPO4的缓冲溶液为流动相(pH5.90),采用等度洗脱方式,用Hamilton PRP-X100阴离子交换色谱柱(250 mm×4.1 mm,10μm),流速1.2 mL.min-1对不同方法提取的凤尾草中的亚砷酸根(AsO33-)、砷酸根(AsO43-)和一甲基砷(MMA)、二甲基砷(DMA)进行分离,进样量10μL,原子荧光光谱仪在线检测。结果:AsO33-和AsO43-线性范围为2.5～25 ng.mL-1(r=0.999 8),日内、日间精密度(RSD)均小于2.5%,平均回收率在96.92%～102.31%之间。50%甲醇为提取溶剂,室温下超声波提取3批凤尾草中的砷化物,叶中含量最高,根中含量次之,茎中含量最低。结论:本研究改进了中药中各种形态的砷化合物的提取和分析方法,操作简便,灵敏度高,结果准确,重现性好,为中药中各种形态的砷化合物分析方法提供了新的依据和方法。     

雄黄及含雄黄复方中砷含量、形态和晶形分析

目的 对雄黄及含雄黄复方制剂中的砷含量、砷形态和雄黄晶形进行分析.方法 采用微波消解-原子荧光法测定雄黄和复方制荆中的总砷含量,人工胃液提取.原子荧光法测定可溶性砷,离子树脂交换分离.原子荧光法测定可溶性三价砷(AⅢ)和五价砷(AsV),X衍射荧光法对雄黄粉末进行物相(晶形)分析,X荧光光谱法进行雄黄粉末的全元素分析.结果 受试雄黄含硫化砷97.3%,主成分是β-雄黄(As4S4)和α-雄黄(AsS)的混合物,同时含有少量二硫化二砷(As2S2)和雌黄(As2S3).As/S(摩尔数之比)为1.00001.还含有少量Al、Si、K、Ca、Ti、Fe、Sb、Ni、Cu、W等杂质.在雄黄及含雄黄复方制剂的人工胃液提取液中均检出了可溶性砷、AsⅢ和AsV;且不同来源的雄黄,可溶性砷以及两种价态的砷的比例也不同.雄黄中可溶性砷百分含量为0.62%,其中AsⅢ和AsV比例为2.30:1.结论 雄黄及含雄黄复方中混杂存在三价和五价无机砷.有必要加强对雄黄药材的质量监控.     

牛黄解毒片中砷元素分析

目的对牛黄解毒片中总砷、可溶性砷、可溶性砷（Ⅲ）和砷（Ⅴ）进行分析,为评价牛黄解毒片的安全性提供依据。方法采用微波消解-原子荧光法测定牛黄解毒片中的总砷含量,50%甲醇浸提-原子荧光法测定可溶性砷,717阴离子交换树脂分离-原子荧光法测定可溶性砷（Ⅲ）和砷（Ⅴ）。结果3种牛黄解毒片制剂中总砷含量为65.72～75.79g/kg,可溶性砷占总砷百分比为0.43%～1.23%,其中可溶性砷（Ⅲ）含量0.19～0.55g/kg,可溶性砷（Ⅴ）含量范围在0.09～0.44g/kg。结论不同的牛黄解毒片中可溶性砷及其中两种价态砷的含量差异较大,因此有必要对牛黄解毒片中砷的含量进行质量控制。     

超声酶水解提取/高效液相色谱-原子荧光光谱联用法测定动物源性中药中的砷形态

目的 采用液相色谱-原子荧光光谱（HPLC-AFS）联用技术对动物源性中药中一甲基砷酸（monomethylarsine,MMA）、二甲基砷酸（dimethyarsine,DMA）、三价砷[As（Ⅲ）]、五价砷[As（V）]的形态进行研究。方法 样品中加入pH 2.5的胃蛋白酶液,于55℃超声20 min,6 000 r·min^-1离心3 min,取其上清液,过滤进样。采用Hamilton PPRP-X100阴离子交换色谱柱（150 mm×4.6mm,5 μm）分离,1 mmol·L^-1磷酸二氢铵溶液（pH 8.5）,20 mmol·L^-1磷酸二氢铵溶液（pH 7.0）体系组成的流动相按一定比例进行梯度洗脱,流速为1.0 mL·min^-1,进样量为100 μL。结果 4种砷形态在13 min内完成分离。MMA、DMA、As（Ⅲ）、As（V）的检出限分别为0.01,0.01,0.01和0.02 mg·kg^-1,样品中加标量为0.03~0.1 mg·kg^-1时,4种砷化合物的回收率为93.4%~105.4%,精密度RSD为0.8%~4.4%。结论 本研究建立的超声酶水解提取/HPLC-AFS测定动物源性中药中砷形态的分析方法样品提取简便,提取率高,测定方法精密度好,准确度高。     

高效液相色谱-电感耦合等离子体质谱联用法对不同产地丹参中总砷和砷形态含量分析

目的：探讨不同产地丹参中总砷及砷形态的含量测定方法,为丹参药材的评价积累数据,同时为含有丹参的中药制剂的风险防控提供数据支持。方法：采用电感耦合等离子体质谱法（ICP-MS）测定不同产地丹参中总砷的含量;采用高效液相色谱仪-电感耦合等离子体质谱联用法（HPLC-ICP-MS）测定不同产地丹参中6种砷形态的含量。结果：总砷在2.0～20ng?mL-1 范围内线性关系良好,标准曲线相关系数r= 0.9992,检测限（LOD）= 0.0016 ng?mL-1,加标回收率为98.3%～99.2%,RSD<3.7%（n=3）;六种砷形态在2.0～20ng?mL-1 范围内线性关系良好,标准曲线的相关系数r均>0.999,检测限（LOD）在0.0029～0.0103 ng?mL-1之间,加标回收率为89.6%～95.9%,RSD<7.7%（n=3）。采用HPLC-ICP-MS联用技术测定了不同产地丹参中六种砷形态的含量,结果表明丹参中含有少量AsB 、As（Ⅲ）,As（Ⅴ）,各产地丹参中的总砷含量虽然高,但是有毒的砷形态含量较低。结论：本法经初步方法学验证,可用于中药材及制剂中的砷含量的测定。     

ICP-MS标准加入法测定氟比洛芬酯脂微球注射液玻璃包装中4种元素的迁移量

目的:建立电感耦合等离子体质谱(ICP-MS)法测定中性硼硅玻璃安瓿包装的氟比洛芬酯脂微球注射液中砷(As)、镉(Cd)、锑(Sb)、铅(Pb)的迁移量，并对3批样品进行定量分析。方法:样品溶液经去离子水稀释20倍后直接进样，用标准加入法测定注射液中的4种元素的含量。ICP-MS工作参数：射频功率为1 600 W,采样深度为10.0 mm,载气(氩气)流量为0.70 L·min^-1,雾化器泵速为0.10 r·s^-1,雾化室温度为2℃,补偿气(氩气)流量为0.45 L·min^-1,分析模式为全定量。结果:As、Cd、Sb在1～100 ng·mL^-1范围内线性良好，铅在5～100 ng·mL^-1范围内线性良好，相关系数为0.999～1.000,加样回收率在91%～104%,RSD均<2%。3批样品中As、Cd、Sb、Pb的含量分别为0.61～0.79 ng·mL^-1、 0.05～0.09 ng·mL^-1、0.51～0.90 ng·m...     

雄黄及含雄黄复方中砷含量、形态和晶形分析

目的对雄黄及含雄黄复方制剂中的砷含量、砷形态和雄黄晶形进行分析。方法采用微波消解-原子荧光法测定雄黄和复方制剂中的总砷含量，人工胃液提取-原子荧光法测定可溶性砷，离子树脂交换分离．原子荧光法测定可溶性三价砷（As^Ⅱ）和五价砷（As^Ⅴ），X衍射荧光法对雄黄粉末进行物相（晶形）分析，X荧光光谱法进行雄黄粉末的全元素分析。结果受试雄黄含硫化砷97．3％，主成分是β-雄黄（As4S4）和α-雄黄（AsS）的混合物，同时含有少量二硫化二砷（As2S2）和雌黄（As2S3）。As／S（摩尔数之比）为1．00001。还含有少量Al、Si、K、Ca、Ti、Fe、Sb、Nj、Cu、W等杂质。在雄黄及含雄黄复方制剂的人工胃液提取液中均检出了可溶性砷、As^Ⅱ和As^Ⅴ；且不同来源的雄黄，可溶性砷以及两种价态的砷的比例也不同。雄黄中可溶性砷百分含量为0.62％，其中As^Ⅱ和As^Ⅴ比例为2、30：1。结论雄黄及含雄黄复方中混杂存在三价和五价无机砷。有必要加强对雄黄药材的质量监控。     

服用盐酸甲氯芬酯后人血浆中二甲氨基乙醇浓度的检测

目的:建立高效液相色谱-质谱联用测定人血浆中二甲氨基乙醇(DMAE)浓度的方法。方法:采用API 3000型LC-MS/MS液质联用仪,Phenomenex Ultimate C₁₈色谱柱(50 mm×3.0 mm,5μm),流动相为甲醇-水(80∶20)(含0.1%甲酸),流速0.3 mL·min^-1。样品在碱性条件下用乙酸乙酯漩涡萃取,定量转移出乙酸乙酯层后再用0.1%的甲酸水溶液反萃,最后取酸性水溶液进样。以MRM模式检测,外标法定量。结果:DMAE的保留时间为2.79 min,在3.125~500 ng·mL^-1浓度范围内线性关系良好,定量下限为3.125 ng·mL^-1,日内、日间RSD分别小于4.8%和6.0%,方法回收率为98.7%~101.9%,萃取回收率为32.5%~34.5%。21位健康受试者交叉服用2种胶囊制剂,在单次口服300 mg盐酸甲氯酚酯后,采用本方法测定血浆中DMAE经时浓度,比较2种制剂的药代动力学参数并评价其相对生物利用度。试验制剂和参比制剂的C_{max分别为(277.66±107.25}、(266.18±118.37)μg·L^-1,AUC0-t分别为(721.05±172.72)、(736.03±216.90)h·μg·L^-1,AUC_0-∞分别为(776.17±203.89)、(835.52±269.99)h·μg·L^-1,2种制剂生物等效。结论:本法具有快速、简便、灵敏、准确等特点,适用于血浆中DMAE的浓度测定及药代动力学、生物利用度研究。     

UPLC-MS/MS法与ELISA法测定胖大海中黄曲霉毒素的比较研究

目的 采用超高效液相色谱-串联质谱法(UPLC-MS/MS)和酶联免疫吸附法(ELISA)对胖大海中的黄曲霉毒素进行检测，比较 两种方法的检测结果以及方法学差异性。方法UPLC-MS/MS法测定：样品采用70%甲醇提取经过免疫亲和柱净化，色谱柱为C₁₈(100 mm×2.1 mm,1.7μm)，柱温为40℃，流动相为水含0.1%甲酸(A)-甲醇含0.1%甲酸(B)，梯度洗脱，流速为0.3 m L·min^-1，多反应检测扫描采集模式，正负离子同时扫描进行数据采集。同时采用ELISA法测定，样品采用甲醇提取，酶联免疫试剂盒反应。结果 UPLC-MS/MS法测定：黄曲霉毒素B₁、B₂、G₁、G₂线性关系良好，检测限分别为0.013 5,0.002 9,0.008 6,0.003 6μg·kg^-1，定量限分别为0.045 0,0.009 8,0.028 6,0.011 9μg·kg^-1，平均回收率分别为98.98%,10...     

仁青芒觉中可溶性砷形态的HPLC-ICP-MS研究

目的:采用HPLC-ICP-MS对藏药仁青芒觉中可溶性砷的形态进行研究。方法:采用Agilent G3154A阴离子交换柱,以0.2 mmol.L-1 EDTA和2 mmol.L-1磷酸二氢钠的溶液(pH 6.0)为流动相,流速1.0 mL.min-1,测定了仁青芒觉中砷的形态。前处理选择微波萃取,比较了1%盐酸、1%硝酸、2%醋酸、50%甲醇不同萃取剂的提取效率。结果:仁青芒觉在不同提取液中砷的形态主要以As(Ⅲ)和As(V)的形式存在,且1%盐酸、1%硝酸的提取效率较高。As(Ⅲ)和As(V)检出限(S/N=3)分别为0.39 ng.g-1和0.72 ng.g-1,样品加标平均萃取回收率(n=3)分别为95.6%和85.3%,精密度试验的RSD(n=8)分别为2.0%和3.2%。结论:藏药仁青芒觉中可溶性砷形态的研究,为藏药中砷的毒理学研究提供了依据。     

双通道原子荧光法同时测定复方丹参片中砷和汞的含量

目的:建立双通道原子荧光法同时测定复方丹参片中砷和汞的含量。方法:样品采用浓硝酸和过氧化氢混合液进行预消化,再采用微波消解仪在3种条件下进行消化。优化的仪器工作参数:光电倍增管负高压为270V,砷空心阴极灯总电流为60mA,汞空心阴极灯总电流为30mA,原子化器高度为8mm,载气流量为400ml·min^-1,屏蔽气流量为800ml·min^-1。结果:本方法砷和汞的线性范围分别为0～60ng·ml^-1和0～5ng·ml^-1,相关系数分别为r=0.999 8（n=6）和r=0.999 5（n=6）,检出限分别为1.38μg·kg^-1和0.078μg·kg^-1,回收率分别为99.34%和98.38%。结论:本法可用于复方丹参片中砷和汞含量的测定。     

米诺地尔搽剂体外透皮一致性研究

目的：比较5%米诺地尔搽剂试验制剂和参比制剂透皮作用的一致性。方法：以巴马香猪皮肤作为透皮渗透的材料,选用立式改良Franz扩散池测定米诺地尔搽剂的渗透规律,采用液相色谱-串联质谱法(LC-MS/MS)分别测定接收液中药物的渗透总量和猪皮中药物的滞留量随时间的变化关系。结果：试验制剂和参比制剂在巴马香猪皮肤中24 h米诺地尔的累积渗透量分别为(49 721±29 707) ng·cm^–2和(45 372±23 755) ng·cm^–2;平均渗透速率分别为(2 352±1 309) ng·cm^–2·h^–1和(2 182±1 080) ng·cm^–2·h^–1;皮肤滞留量分别为(218 276±137 675) ng·g^–1和(188 040±49 523) ng·g^–1;试验制剂与参比制剂在累积渗透量约为总透过量一半时(12 h)的平均渗透速率分别为(2 172±1 330) ng·cm^–2·h...     

银杏叶制剂溶出液中槲皮素、山奈素与异鼠李素的HPLC测定方法研究

目的建立银杏叶制剂的溶出液中槲皮素、山奈素与异鼠李素的HPLC测定法。方法色谱柱为Diamonsil C18柱(200mm×4.6mm,5μm);流动相为甲醇-体积分数为0.4%磷酸水溶液(体积比为55∶45),流速为0.8mL·min-1;检测波长为360nm。结果槲皮素、山奈素和异鼠李素的线性范围分别为0.75¹50mg·L-1、0.65150mg·L-1、0.65¹30mg·L-1和0.3130mg·L-1和0.3⁶0mg·L-1;平均回收率分别为100.0%、99.1%和99.7%,RSD分别为1.8%、2.0%和1.9%(n=9)。结论该方法简便、可行,结果准确,重现性好,为银杏叶制剂的溶出液中槲皮素、山奈素与异鼠李素的测定提供可靠的方法。     

利丙双卡因乳膏在中国健康受试者中的生物等效性研究

目的评价利丙双卡因乳膏受试制剂和参比制剂在中国健康受试者中的生物等效性。方法用单剂量、开放性、双周期、双序列、交叉、随机设计。本次研究共40例健康受试者入组(空腹),每周期于受试者双腿正面均匀涂抹受试制剂或参比制剂60 g/400 cm²,清洗期为14 d。用液相色谱-串联质谱法测定人血浆中利多卡因和丙胺卡因的浓度,用WinNonlin 6.4版软件计算主要药代动力学参数,并评估2种制剂的生物等效性。结果在受试者双腿涂抹等量受试制剂和参比制剂后,血浆中利多卡因的主要药代动力学参数:C_max分别为(179.78±93.10)和(182.89±92.68)ng·mL^-1,AUC_0-t分别为(1676.05±726.76)和(1657.15±673.00)ng·mL^-1·h,AUC_0-∝分别为(1691.72±724.67)和(1671.50±671.65)ng·mL^-1·h;丙胺卡因的主要药代动力学参数:C_max分别为(97.75±47.74)和(105.89±51.29)ng·mL^-1,AUC_0-t分别为(793.40±327.87)和(825.63±324.61)ng·mL^-1·h,AUC_0-∞分别为(810.64±329.11)和(843.79±326.57)ng·mL^-1·h。2种制剂的C_max、AUC_0-t及AUC_0-∞经对数转换后的90%置信区间:利多卡因分别为93.10%~107.25%,97.03%~107.59%和97.20%~107.56%;丙胺卡因分别为87.70%~101.24%,92.02%~102.85%和92.08%~102.68%。结论在空腹条件下,单次使用利丙双卡因乳膏受试制剂和参比制剂均具有生物等效性。