肝泡状棘球蚴病门脉血供的实验研究

目的观察活体碘油门静脉灌注在大鼠肝泡状棘球蚴病模型中的分布,初步探讨肝泡状棘球蚴病的门脉血供。方法30只健康Wistar大鼠随机分为健康对照组(10只)和实验组(20只)。两组又各分为3个亚组,正常组每个亚组分别为4只、3只和3只大鼠。实验组20只感染肝泡球蚴病的大鼠每个亚组分别为8只、6只和6只大鼠。所有动物均开腹直视下穿刺门静脉,于透视下缓慢注射碘化油0.2 ml,分别在15 min、4 d和7 d后处死动物,取新鲜肝脏行钼靶摄影后进行HE染色及苏丹Ⅳ染色,观察碘油分布。结果活体条件下对感染肝泡球蚴病的大鼠经门静脉灌注碘油后,通过低电压X线摄影共9只实验动物肝脏中可见碘化油选择性地进入病灶,而苏丹Ⅳ染色有8只于病灶周围的炎症反应带中可见碘油沉积,两者的差异无统计学意义(P>0.05)。结论①活体碘油门静脉灌注方法简单易行,结果真实可靠;②门静脉参与了部分晚期肝泡状棘球蚴病灶的供血;③本实验为肝泡球蚴病双重途径介入治疗的实验研究提供了可靠的理论依据。     

早期大鼠肝泡状棘球蚴病模型的超声表现与病理对照

目的探讨大鼠早期肝泡状棘球蚴病模型的超声特征。方法对接种肝泡状棘球蚴9周且健康存活的157只大鼠进行超声检查,记录大鼠早期肝泡状棘球蚴病的超声表现,并与病理结果对照。评价超声筛查早期大鼠肝泡状棘球蚴病的效能。结果超声筛查早期大鼠肝泡状棘球蚴病模型敏感度(130/139,93.53%)和特异度(15/18,83.33%)均较高。早期大鼠肝泡状棘球蚴病灶超声主要表现为高回声(114/142,80.28%),19.72%(28/142)的病灶表现为混合性回声。病灶大体病理表现为米黄色或乳白色囊泡样结构,呈针尖样或多囊泡状,内含囊液;HE染色呈中央红染纤维结构,周边环以微小血管及炎性细胞。结论早期大鼠肝泡状棘球蚴病灶的超声主要表现为高回声伴或不伴无回声及低回声囊泡样结构,超声筛查早期大鼠肝泡状棘球蚴病模型具有很高的敏感度。     

DSA评价大鼠肝泡状棘球蚴病血供

目的观察大鼠肝泡状棘球蚴病模型的血供情况。方法雌性Wistar大鼠30只,造影前经B超筛查病灶。对每只大鼠在分别行选择性肝动脉及门静脉DSA。结果病理检查证实30只大鼠共48个肝泡状棘球蚴病灶,B超共筛查出43个;门静脉造影显示33个,肝动脉造影显示26个病灶。门静脉参与直径≤3mm病灶的供血,直径4～8mm的病灶有门静脉及肝动脉双重供血,直径〉8mm病灶主要为肝动脉供血。结论大鼠肝泡状棘球蚴病存在门静脉和（或）肝动脉双重血供,供血与病灶直径大小有关。     

Fas及Caspase家族在泡球蚴感染宿主肝脏中的表达及其意义

目的 探讨细胞凋亡信号分子Fas及Caspase家族在肝泡球蚴病宿主中的表达及意义.方法 16例配对泡型包虫患者(AE)肝脏标本,16只雌性BALB/C小鼠.分析肝脏标本中肝细胞病理变化、凋亡及Fas、Caspase-3、Caspase-8和Caspase-9的表达.结果 AE患者病灶周围肝细胞水肿,汇管区周围纤维化,肝细胞造型坏死;病灶周围肝细胞发生显著凋亡[(74.0±15.0)％比(4.2±3.3)％],Fas[ (71.3±19.0)％比(5.2±1.6)％]、Caspase-3[ (39.4±18.3)％比(3.3±2.9)％]、Caspase-8[ (37.6±3.5)％比(4.0±1.8)％]和Caspase-9[ (24.7±13.8)％比(2.0±1.4)％]高表达(P＜0.05).泡球蚴感染小鼠病灶处可见囊泡,肝组织纤维化严重;肝细胞发生显著凋亡[(37.5±5.2)％比(13.9±2.7)％],Fas[ (48.3±6.2)％比(4.6±1.2)％]、Caspase-3[(29.7±6.3)％比(5.2±1.9)％]、Caspase-8[ (23.1±2.9)％比(3.5±1.4)％]和Caspase-9[( 16.7±3.2)％比(2.3±1.1)％]高表达(P＜0.05).结论 泡球蚴感染引起宿主肝细胞凋亡,提示Fas及Caspase家族介导的细胞凋亡信号通路可能参与了泡球蚴所致肝损伤进程.     

胚胎肝细胞移植治疗小鼠肝纤维化

目的 观察移植胚胎肝细胞减轻小鼠肝纤维化的作用.方法 孕14 d的BALB/C小鼠胚胎肝细胞移植到雌性BALB/C小鼠肝脏,二乙基亚硝胺诱导肝纤维化.60只雌性小鼠随机分为对照组,模型组及治疗组.3个月后测定血清谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)、透明质酸酶(HA)、层粘连蛋白(LN)浓度及肝脏羟基脯氨酸(Hyp)含量.免疫组织化学检测肝脏α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)表达及Y染色体性别决定区域蛋白(SRY)表达来确定移植的胚胎肝细胞在肝内的增殖分化.结果 移植胚胎肝细胞能显著降低血清ALT、AST、HA和LN的水平(P＜0.01).胚胎肝细胞移植组肝脏Hyp含量也明显低于模型组(P＜0.01).移植组肝脏α-SMA的表达明显低于模型组.胚胎肝细胞移植及诱导肝纤维化3个月后,胚胎肝细胞能增殖分化为肝细胞和胆管细胞,占肝脏的30%～50%.结论 在诱导肝纤维化过程中,移植胚胎肝细胞有向肝细胞和胆管细胞高增殖分化的能力,并有效地减轻肝损害和肝纤维化.     

小鼠肝组织中胰岛素样生长因子结合蛋白相关蛋白1在肝纤维化发生及发展中的作用

目的 探讨小鼠肝组织中胰岛素样生长因子结合蛋白相关蛋白1(IGFBPrP1)在肝纤维化发生及发展过程中的作用.方法 采用腹腔注射硫代乙酰胺制备小鼠肝纤维化模型,按时间将小鼠分为模型4、5、6周组(各10只),并分别设立正常对照组(各6只),采用Masson染色检测肝组织胶原沉积,免疫组织化学检测肝组织中IGFBPrP1、α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、Ⅰ型胶原蛋白(Collagen Ⅰ)、纤维连接蛋白(FN)、TGF-β1和Smad3蛋白表达和分布,同时以Western blot检测IGFBPrP1、α-SMA和Smad3蛋白表达.采用单因素方差分析、Pearson等级相关检验进行分析,以P<0.05为差异有统计学意义.结果 免疫组织化学检测结果发现,模型组小鼠肝组织中IGFBPrP1由0.21±0.03上升到5.03±0.09,α-SMA由0.11±0.04上升到10.09±0.18,Collagen Ⅰ由0.22±0.01上升到11.01±±0.16,FN由0.31±0.09上升到19.81±1.62,TGF-β1由0.49±0.02上升到5.97±0.19,Smad3由0.22±0.03上升到2.03±0.07,这些检测因子在模型组的表达与正常对照组比较,随时间的增加而明显增强(F=783.141,998.200,886.715,935.242,931.241,697.118,P<0.05).在肝纤维化形成过程中,IGFBPrP1的表达与α-SMA、Collagen Ⅰ、FN、TGF-β1和Smad3的表达均呈正相关(r=0.906,0.927,0.988,0.947,0.977,P<0.05).Western blot检测结果发现,模型组小鼠肝组织的IGFBPrP1蛋白表达量由0.23±0.01上升到0.92±0.07,α-SMA蛋白表达量由0.36±0.02上升到1.39±0.03,FN蛋白表达量由0.03±0.00上升到0.12±0.02,Smad3蛋白表达量由0.09±0.01上升到0.56±0.04,模型组小鼠的蛋白表达量均较正常对照组明显升高(F=57.316,201.214,103.871,72.966,P<0.05).在肝纤维化形成过程中,IGFBPrP1的表达与α-SMA、FN和Smad3的表达均呈正相关(r=0.982,0.924,0.965,P<0.05).结论 IGFBPrP1随着肝纤维化程度的加重,其表达水平逐渐上调,IGFBPrP1的促肝纤维化作用可能与促进肝星状细胞激活、使细胞外基质的重要组成成分Collagen Ⅰ和FN的合成与分泌增加及影响TGF-β1/Smad3信号通路有关.     

细粒棘球蚴重组铁蛋白(中国株)疫苗诱导抗攻击感染保护力的观察

目的 探讨细粒棘球蚴重组铁蛋白疫苗对原头蚴攻击感染的保护性效果.方法 ICR小鼠随机分为3组(每组12只):A组(实验组)、B组(佐剂+PBS组)、C组(空白对照组),A组、B组共免疫3次,每次间隔2周,C组不做任何处理;免疫接种后8周3组均以1100只原头蚴攻击感染,每次免疫前及攻击感染前断尾取血,留取血清;攻击感染后7个月,剖杀小鼠,查检腹腔内包囊数进行统计学分析.结果 实验组与佐剂对照组、空白对照组比较,其结果均具有统计学意义(P＜0.05),经计算保护力分别为:73%,85%;佐剂组与空白对照组比较,其结果亦具有统计学意义(P＜0.05),经计算保护力为:42%.结论 细粒棘球蚴重组铁蛋白可诱导小鼠产生部分免疫保护力,可作为"鸡尾酒"疫苗的组成部分进一步研究.     

泡状棘球蚴感染诱导免疫耐受的研究

目的 观察泡状棘球蚴感染对纯系大鼠异位移植心脏存活时间的影响并探讨发生机制.方法 建立Brwon norway(BN)大鼠到Lewis (LEW)大鼠的颈部异位心脏移植模型.对照组(n=12)以健康的LEW大鼠为受者;实验组(n=12)以感染泡状棘球蚴的LEW大鼠为受者.术后观察移植心的存活时间、组织病理学变化,测定血清内白细胞介素-4(IL-4)和y-干扰素(IFN-γ)水平.FACS 流式检测实验组和对照组大鼠脾内CD4+ CD25+调节性T细胞(CD4+ CD25+ Treg细胞)的数量水平.结果 实验组与对照组移植心的存活时间分别为(16.17±3.19)d及(7.92±1.93)d,两组差异有统计学意义(P＜0.05).实验组移植心的组织病理学分级(平均分级为3.38级)与对照组(平均分级为3.79级)比较,差异无统计学意义(P＞0.05).发生排斥反应后,实验组血清内IL-4水平为(152.21 ±45.62) ng/L高于对照组(50.85±22.15) ng/L,而实验组血清内IFN-γ水平为(12.35±1.02) ng/L水平低于对照组(42.63±4.15) ng/L,两组差异均有统计学意义(P ＜0.05);FACS流式检测结果提示实验组大鼠脾内CD4+ CD25+ Treg细胞数量为10.8％,高于对照组的6.1％,两组差异有统计学意义(P＜0.01).结论 泡状棘球蚴感染造成Th1/Th2向Th2类细胞因子偏移,通过介导CD4+ CD25+ Treg细胞数量增加而导致大鼠异位移植心脏存活时间延长,它可能是诱导移植免疫耐受的原因之一.     

细粒棘球绦虫原头节促进BMSCs纤维化的实验研究

目的探讨细粒棘球绦虫原头节对BMSCs向成纤维细胞分化的影响。方法取4周龄C57BL/6小鼠股骨骨髓,利用贴壁培养法分离培养BMSCs;从感染细粒棘球蚴的羊肝中提取细粒棘球绦虫原头节。实验分为2组,实验组取第3代BMSCs和细粒棘球绦虫原头节共培养,对照组为单纯第3代BMSCs。共培养前后倒置显微镜观察BMSCs形态;培养1、3、5、7 d,采用实时荧光定量PCR检测两组BMSCs中TGF-β_1、Ⅰ型胶原、Ⅲ型胶原基因表达,Western blot检测两组BMSCs中TGF-β_1、Ⅰ型胶原、Ⅲ型胶原、Smad7和磷酸化Smad2/3蛋白表达,ELISA检测两组上清中Ⅰ型胶原和Ⅲ型胶原蛋白含量。结果细粒棘球绦虫原头节与BMSCs共培养7 d后观察到BMSCs形态发生改变,变成梭形和不规则三角形,更接近单独培养的小鼠成纤维细胞。培养1、3、5、7 d,实时荧光定量PCR检测示,实验组TGF-β_1、Ⅰ型胶原、Ⅲ型胶原mRNA相对表达量均显著高于对照组;Western blot检测示,实验组TGF-β_1、Ⅰ型胶原、Ⅲ型胶原、磷酸化Smad2/3蛋白相对表达量均显著高于对照组,Smad7蛋白相对表达量显著低于对照组;ELISA检测示,实验组上清中Ⅰ型胶原和Ⅲ型胶原蛋白含量均显著高于对照组。上述指标两组间比较差异均有统计学意义(P0.05)。结论细粒棘球绦虫原头节可能通过TGF-β_1/Smad信号通路,促进BMSCs分泌Ⅰ型胶原、Ⅲ型胶原和TGF-β_1,进而促进BMSCs纤维化。     

肝包虫病的麻醉处理

肝包虫病又称肝棘球蚴病,是一种人兽共患的寄生虫病。云南省很多地区有吃生肉的刊俗,所以肝包虫病病人并不少见。肝包虫病有两种类型,由细粒棘球蚴引起的单房性包虫病和泡状棘球蚴引起的泡状包虫病。     

IL-17 mRNA在肝脏泡型包虫病中的表达及其临床意义

目的:探讨Th17细胞特异性细胞因子IL-17 m RNA在肝脏泡型包虫病患者肝脏组织中的表达及其临床意义。方法:将14例经手术确诊的肝脏泡型包虫病患者肝脏组织分为3组:病灶组织(L)组,病灶邻近组织(PL)组和正常肝脏组织(N)组。应用实时荧光定量PCR技术检测各组受试者Th17细胞相关细胞因子IL-17 m RNA的表达。结果:IL-17 m RNA水平在L组、PL组和N组分别为(4.920 7±5.386 4)pg/m L(0.234、9±0.417 9)pg/m L和(0.055 7±0.114 9)pg/m L,L组较PL组和N组明显升高(P0.01);PL组较N组轻度升高,但差异无统计学意义(P0.05)。结论:IL-17 m RNA在肝泡型包虫病患者肝脏病灶组织中表达显著升高,可能和棘球蚴感染过程中所致免疫损伤和炎性肉芽肿形成有关。     

HIV-1反式激活蛋白-血红素氧合酶-1融合蛋白对大鼠供肝冷保存期肝细胞凋亡的影响

Objective To study the effects of TAT-HO-1 fusion protein,HIV-1 transactiviting protein (TAT) and heme oxygenase-1 (HO-1),on hepatic cell apoptosis of rat donors in cold storage stage.Methods Forty-eight male SD rats were randomly divided into two groups.Rat livers were flushed and preserved with 4℃ HTK solution containing(group P) or uncontaining(group C) 50 mg/L of TAT-HO-1.The preserved solution and hepatic tissue were collected at 0,6,12,18 h of cold storage stage.TAT-HO-1 transducing into liver,alanine aminotransferase(ALT) level in preserved solution,hyaluronic acid(HA) level and the expression of caspase-3 in hepatic tissue,and the apoptotic index (AI) of hepatocytes and sinusoidal endothelial cells (SECs) were measured or detected.Results ALT level in preserved solution,HA level and the expression of caspase-3 in hepatic tissue,and the AI of hepatocytes and SECs increased time-dependently in cold storage stage in both groups (P＜0.05),with lower increasing extent in group P than that in group C (P＜0.05) at 6h,12h and 18h of cold storage stage.A stronger accumulation of HO-1 staining was also detected at the same time-points in group P than that in group C(P＜0.05).Conclusion TAT-HO-1 may transduce efficiently into rat livers,exerting protective effects on both hepatocytes and SECs during cold storage stage.Protein transduction technology may be a novel therapeutic means to reduce donor liver injury in preservation period for transplantion.     

PDZK1敲除对小鼠肝脏胆固醇代谢和胆囊结石形成影响的实验研究

目的探讨敲除PDZK1(Postsynaptic density-95,disks-large,ZO-1-domain K1,PDZK1)基因对小鼠肝脏胆固醇代谢调节和胆囊结石形成的影响。方法雄性成年PDZK1基因敲除小鼠(PDZK1 knockout,KO组)和野生型小鼠(wild type,WT组),每组各10只,以成石饲料分别喂养4周,观察胆囊成石情况,并收集肝脏和胆囊组织。采用蛋白印迹法测定肝脏PDZK1和清道夫受体B族1型(scavenger receptor B type 1,SRB1)表达。采用胆总管插管收集肝胆汁,测定胆汁分泌率和胆汁胆固醇含量。采用试剂盒酶法测定胆囊胆汁成分并计算胆汁胆固醇饱和指数(cholesterol saturation index,CSI)。以实时定量PCR检测肝脏脂质代谢相关基因的mRNA表达。结果成石饲料喂养4周后,WT组小鼠全部成石(10/10),KO组小鼠则为40%(4/10)成石。两组小鼠肝胆汁分泌率差异无统计学意义,但KO组小鼠肝胆汁胆固醇含量显著降低(P0.05),胆汁酸含量增加(P0.05),且CSI降低(P0.05)。KO组小鼠肝脏SRB1蛋白表达降低(P0.05),甾醇氧-酰基转移酶基因1/2mRNA表达降低(P0.05),而肝型脂肪酸结合蛋白1和胆汁酸转运相关蛋白(ATP结合盒b11)表达则显著增加(P0.05)。结论 PDZK1影响SRB1在小鼠肝脏中表达,降低对高密度脂蛋白胆固醇摄取,减少胆汁胆固醇分泌,继而降低胆囊结石形成。     

INF-γ对肝纤维化大鼠TGF-β1/Smad3蛋白表达的影响

目的通过干扰素-γ(IFN-γ)治疗大鼠肝纤维化,观察大鼠肝脏组织病理学及TGF-β1,Smad3蛋白表达水平的变化,探讨INF-γ抗肝纤维化作用机制。方法将48只雄性SD大鼠随机分成对照组、模型组和实验组3组。用3%硫代乙酰胺(TAA)100mg/kg复制大鼠肝纤维化模型,实验组同时肌肉注射INF-γ5U/d。在肝纤维化诱导第8周处死,用Masson染色观测肝组织纤维化程度,免疫组化法检测肝组织TGF-β1、Smad3蛋白表达水平。结果实验组肝纤维化程度、TGF-β1和Smad3表达比正常组增高(P<0.05),比模型组显著降低(P<0.05)。结论 IFN-γ可能通过抑制TGF-β1/Smad3蛋白的表达,从而起到抗肝纤维化的作用。     

IGFBPrP1对小鼠肝组织胶原含量的影响及其机制的研究

目的 明确外源性胰岛素样生长因子结合蛋白相关蛋白1(IGFBPrP1)对肝组织胶原含量的影响及可能的机制.方法 24只雄性C57BL/6野生型小鼠随机分为3组:正常对照组、rmIGFBPrP1 2周组和rmIGFBPrP1 4周组,每组8只.取肝组织行HE、苦味酸-天狼猩红、免疫组织化学染色及Western blot检测.结果 HE和苦味酸-天狼猩红染色显示外源性rmIGFBPrP1可使肝组织发生病理改变,并导致肝组织中胶原含量显著增多(P＜0.05).Western blot检测显示rmIGFB-PrP1 2周组及4周组肝组织中IGFBPrP1、纤维连接蛋白(FN)、Ⅰ型胶原(Collagen Ⅰ)的表达明显增强,且4周组表达量较2周组高(P＜0.01).免疫组织化学染色显示Ⅲ型胶原(Collagen Ⅲ)在rmIG-FBPrP1 2周组及4周组表达量明显增高,且4周组高于2周组(P＜0.01).Western blot及免疫组织化学染色共同显示转化生长因子β1(TGF-β1)、Smad3、p-Smad2/3在rmIGFBPrP1 2周组及4周组表达显著增强,且4周组强于2周组(P＜0.01).结论 外源性IGFBPrP1可通过TGF-β1/Smad3信号通路导致肝组织中胶原含量明显增加、ECM过度沉积.

Abstract：

Objective To investigate the effect and mechanism of exogenous IGFBPrP1 on collagen content in liver tissue. Methods Twenty-four male C57BL/6 wild-type mice were randomly divided into three groups: Control group (n=8), rmIGFBPrP1 2 weeks group (n=8) and rmIGFBPrP1 4weeks group (n=8). Both hematoxylin-eosin (HE) staining and picric acid-Sirius red staining were performed. The protein expression of IGFBPrP1, Collagen Ⅰ , Collagen Ⅲ, FN, TGF-β1, Smad3 andp-Smad2/3 was evaluated by immunohistochemistry or Western blot. Results Exogenous IGFBPrP1 can cause pathological changes in liver tissue. Collagen content was significantly increased by hematoxylin-eosin (HE) staining and picric acid-Sirius red staining (P＜0.05). The protein expression of IGFBPrP1, FN and Collagen Ⅰ was gradually increased after rmIGFBPrP1 injection for 2 weeks and 4 weeks by Western blot (P＜0.01). The protein expression of Collagen Ⅲ was obviously increased in the rmIGFBPrP1 2 weeks group and rmIGFBPrP1 4 weeks group by immunohistochemistry, and the level in the 4 weeks group was higher than that in the 2 weeks group (P＜0. 01). The protein expression of TGF-β1, Smad3 and p-Smad2/3 in liver tissue was significantly increased after rmIGFBPrP1 injection in a time-dependent manner by both immunohistochemistry and Western blot (P＜0. 01).Conclusion Exogenous IGFBPrP1 can cause a marked increase in collagen content and the excessive deposition of ECM through the TGF-β1/Smad3 pathway in liver tissue.     

肝星状细胞对大鼠肝部分切除术后肝再生修复的影响

目的 探讨肝星状细胞（hepatic stellate cells,HSCs）在大鼠肝部分切除术后对肝损伤修复的影响.方法 体外实验部分：将大鼠肝星状细胞（HSCs）与大鼠肝细胞系（BRL-3A）共培养,CCK-8比色法检测细胞增殖情况;ELISA法检测培养肝星状细胞上清液中细胞因子,即肝细胞生长因子（hepatic growth factor,HGF）、胰岛素样生长因子（insulin growth factor,IGF）、表皮细胞生长因子（epidermal growth factor,EGF）、转化生长因子-α（transfactor growth factor-α,TGF-α）含量.体内实验部分;将45只260 ～330 g健康雄性SD大鼠随机分为三组：正常组（生理盐水组）、对照组（肝星状细胞培养液组）、实验组（肝星状细胞培养上清液组）.各组分别于肝大部切除术后第3、7、12天取血清检测肝功能情况并计算肝再生指数;HE染色切片显微镜下观察肝脏病理结构改变情况;免疫组织化学染色法检测增殖细胞核抗原（proliferating cell nucleus antigen,PCNA）、平滑肌肌动蛋白（α-smooth muscle actin,α-SMA）、甲胎蛋白（a1pha feta1 protein,AFP）及白蛋白（albumin,ALB）的表达情况.结果 ①CCK-8法检测肝星状细胞能促进肝细胞增殖（P＜0.05）;②上清液较培养液中细胞因子HGF、TGF-α含量多,差别有统计学意义（P＜ 0.05）;③实验组肝再生指数比对照组大,差别具有统计学意义（P＜0.05）;④实验组大鼠AST随着时间的推移,较对照组下降明显,差别有统计学意义（P＜0.05）;⑤实验组PCNA表达量较正常组、对照组增多,差别有统计学意义（P＜ 0.05）;⑥平滑肌肌动蛋白、白蛋白、甲胎蛋白三组间差别不显著（P＞ 0.05）.结论 ①体外肝星状细胞能促进肝细胞增殖;②肝星状细胞培养上清液能促进大鼠肝部分切除术后肝再生,其分泌的多种细胞因子在肝损伤再生修复中起了重要作用.     

骨髓间充质干细胞治疗大鼠慢性胰腺炎的实验研究

目的探讨骨髓间充质干细胞(BMSCs)对大鼠慢性胰腺炎(CP)的治疗作用及其机制。方法将SD大鼠随机分为空白组(尾静脉注射无菌生理盐水),模型组(尾静脉注射二氯二丁基酯制作大鼠CP模型),治疗组(造模后尾静脉注射BMSCs),假治疗组(造模后尾静脉注射无菌生理盐水),每组10只。取大鼠胰腺组织进行病理学评分及纤维化程度评分,ELASA法检测胰腺组织中胰腺星状细胞(PSC)活化表达的α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA),I型胶原蛋白,瓜型胶原蛋白水平,白细胞介素10(IL-10)水平;qRT-PCR法检测胰腺组织中PSC凋亡基因BNIP3的表达,Western-blot法检测胰腺组织中TGF-β/Smad信号传导通路中TGF-β1、Smad2、Smad3、Smad4的表达水平。将CP大鼠PSC培养体系分为对照组(单纯PSC培养组)和治疗组(PSC和BMSCs共培养组),每组5份标本,ELASA法检测α-SMA,I型胶原蛋白,Ⅲ型胶原蛋白,IL-10的表达水平;qRT-PCR法检测PSC凋亡基因BNIP3的表达,Western-blot法检测TGF-β1、Smad2、Smad3、Smad4的表达水平。结果(1)治疗组大鼠胰腺病理学评分及纤维化程度评分均低于模型组与假治疗组,且差别有统计学意义(P<0.05);治疗组α-SMA、I型胶原蛋白、Ⅱ型胶原蛋白水平,TGF-βl、Smad2、Smad3、Smad4的表达水平均低于模型组与假治疗组,且差别有统计学意义(P<0.05),但PSC凋亡基因BNIP3以及IL-10的表达水平高于模型组与假治疗组,且差别有统计学意义(P<0.05);(2)治疗组α-SMA、I型胶原蛋白、Ⅰ型胶原蛋白水平,TGF-β1、Smad2、Smad3、Smad4的表达水平均低于对照组,且差别有统计学意义(P<0.05),但PSC凋亡基因BNIP3以及IL-10的表达水平高于对照组,且差别有统计学意义(P<0.05)。结论BMSCs可通过TGF-β/Smad信号传导通路抑制PSC增殖活化,减少胰腺纤维化的形成,进而控制慢性胰腺炎。     

Smad4、Smad7在大鼠慢性前列腺炎前列腺组织中的表达及意义

目的 研究慢性前列腺炎SD大鼠前列腺组织Smad4和Smad7的表达,并初步探讨它对慢性前列腺炎发病机制的意义.方法 将40只6月龄SD大鼠随机分为正常对照组和CP实验组,每组20只.实验组采用去势+高剂量苯甲酸雌二醇肌注方法建模,并以免疫组化和蛋白免疫印迹实验方法检测Smad4、Smad7在前列腺组织中的表达变化.结果 与正常对照组相比,Smad7表达显著下调(P<0.01),Smad4表达亦显著下调(P<0.01);Smad4与Smad7在慢性前列腺炎大鼠前列腺组织中表达无相关性.结论 Smad4、Smad7在慢性前列腺炎前列腺组织中表达异常,提示可能参与CP的病理过程.     

低氧预适应对大鼠肝癌肝切除术后残肝缺血再灌注中细胞凋亡的影响

目的 探讨低氧预适应诱导热休克蛋白70（HSP70）在大鼠肝癌肝切除术后对残肝细胞凋亡的影响及可能的作用机制.方法 采用SD大鼠移植性肝癌模型,根据随机表将60只模型鼠分为A组（假手术组）,B组（缺血状态下肝叶切除组）,C组（低氧预适应＋缺血状态下肝叶切除组）,每组20只.C组的处理方式：术前给予10％氮氧混合气体处理90 min,Pringle法完全阻断入肝血流15 min,同时切除肿瘤所在的肝左外叶.各组分别于术后1,8,12,24 h取残余肝脏标本,用Western blotting免疫印迹法检测HSP70、Bax蛋白的表达,应用流式细胞仪检测肝细胞凋亡率,下腔静脉取血检测ALT、AST,并在光镜下观察各组组织形态学改变,对相关数据进行统计学处理.结果 （1）与A、B组比较,C组检测的各同时相点HSP70的相对量表达明显增加,组间比较差异有统计学意义（均P＜0.05）,A、B组肝组织中仅有微量HSP70表达,两组比较差异无统计学意义（P＞0.05）;（2）与A组比较,B组各同时相点Bax蛋白表达水平明显升高,肝细胞凋亡率明显增加,两组比较差异有统计学意义（均P＜0.01或0.05）,而C组以上各项指标的变化均较B组明显减弱（均P ＜0.05）;（3）C组肝功能较B组改善明显,病理示A组肝组织形态基本正常,C组呈轻微病理学改变,而B组肝组织损伤明显加重.结论 低氧预适应对缺血条件下肝癌肝切除术产生的缺血再灌注损伤具有保护作用,其可能的机制之一是通过上调HSP70蛋白的表达,而HSP70通过降低Bax的表达,抑制细胞凋亡,从而发挥肝脏保护作用.