聚合酶链反应检测再生障碍性贫血清中乙型和丙型肝炎病毒

应用聚合酶链反应（ＰＣＲ）检测了３７例非肝炎相关再生障碍性贫血（ＮＨＡＡ）和１８例肝炎相关再生障碍性贫血（ＡＨＨ）血清中的乙型肝炎病毒ＤＮＡ（ＨＢＶ ＤＮＡ）、丙型肝炎病毒ＲＮＡ（ＨＣＶ ＲＮＡ）。结果显示：ＮＨＡＡ的ＨＢＶ ＤＮＡ检出率为１３．５％（５／３７），ＨＡＡ为２２．２％（４／１８），两比较Ｐ＞０．０５。ＮＨＡＡ的ＨＣＶ ＲＮＡ检出率为２．７％（１／３７），ＨＡＡ为３８．９％（７／１８     

原发性肝癌组织HBVDNA存在状态及HBsAg,HBcAg表达的检测

本文采用Ｓｏｕｔｈｅｒｎ印迹杂交技术检测原发性肝癌（ＰＨＣ）组织ＨＢＶＤＮＡ存在状态，同时应用免疫组化染色检测ＰＨＣ组织内ＨＢｓＡｇ、ＨＢｃＡｇ表达，并比较ＨＢｓＡｇ、ＨＢｃＡｇ在ＰＨＣ组织与癌旁肝组织的定位分布。结果显示：整合型ＨＢＶＤＮＡ在３２例ＰＨＣ组织检出率７１．９％（２３／３２），癌旁组织检出率４０．７％（１１／２７）；ＰＨＣ组织内检出ＨＢＳＡｇ阳性细胞１２例（３７．５％）未检出ＨＢＣＡｇ；癌组织检出ＨＢｓＡｇ２６例（９６．３％），ＨＢｃＡ９５例（１８．５％）。结果提示：ＨＢＶ感染与ＰＨＣ发生密切相关，ＨＢＶ可能通过整合于宿主细胞染色体对ＰＨＣ发生起一定作用。     

207例乙肝患者血清HDV RNA和HBV DNA检测及其意义探讨

对２０７例急性，慢性，亚急重型乙型肝炎患者的外周血进行了丁肝病毒（ＨＤＶ）ＲＮＡ和乙肝病毒（ＨＢＶ）ＤＮＡ的检测，结果检出ＨＤＶＲＮＡ阳性２８例（１３．５％）。其中，在抗－ＨＢｅ阳性者和ＨＤＶＲＮＡ检出率较高，为１８．９％，ＨＢｅＡｇ阳性者中的ＨＤＶＲＮＡ检出率较低，为７．９％，在本文２８例ＨＤＶＲＮＡ阳性的患者中６例（２１．４％）检出ＨＢＶＤＮＡ；而在其余１７９例ＨＤＶＲＮＡ阴性病例中，则有６５     

荧光探针定量PCR检测HBV—DNA

本文采用荧光探针定量（ＦＱ－ＰＯＣＲ）法准确定量检测ＨＢＶ－Ｍ阳性标志中的ＨＢＶ－ＤＮＡ数量。结果显示：ＨＢｅＡｇ（＋组（３２份）的阳性率为１００％,ＨＢＶ－ＤＮＡ拷贝数范围在１０＾５－１０＾９／ｍｌ之间。ＨＢｅＡｂ（＋）组（４７份）的阳性率为２３．４％,ＨＢＶ－ＤＮＡ拷贝范围在１０＾３－１０＾５．７／ｍｌ之间;ＨＢｓＡｂ（＋）组（３７份）的阳性率为２．７％,ＨＢＶ－ＤＮＡ拷贝数为１０＾５／ｍｌ。     

不同血清学标志血清中HBV DNA和HCV RNA的分析研究

应用聚合酶链反应（ＰＣＲ）技术检测４８１例乙肝血清学五项指标至少一项阳性血清中ＨＢＶＤＮＡ和ＨＣＶＲＮＡ，结果显示ＨＢＶＤＮＡ的检出率为９１．５％，ＨＣＶＲＮＡ的检出率为１５．４％，并提示（１）当乙肝患者血清中抗ＨＢｅ阳性甚至抗ＨＢｓ阳性时，仍有相当部分的ＨＢＶ存在且仍在复制；（２）ＨＢＶ和ＨＣＶ感染可相互增加其易感性；ＨＢｓＡｇ阳性与否与抗ＨＣＶ可能有一定关系；（３）ＰＣＲ检测ＨＢＶＤＮＡ、ＨＣＶＲＮＡ具有较高的敏感性。     

丙型肝炎病毒RNA非结构区套式聚合酶链反应

目的探讨不同引物对ＨＣＶＲＮＡ检出率的影响，立敏感的ＮＳ５区基因扩增技术。方法选择不同引物，采用非结构５（ＮＳ５）区套式聚合酶链反应（ＰＣＲ）及联合式［ＨＣ非编码区（５′ＮＣＲ）与ＮＳ５联合］ＰＣＲ技术检测１０例抗ＨＣＶ阳性献血员及３７例输血后丙型肝患者的血清ＨＣＶＲＮＡ。结果１０例抗ＨＣＶ阳性献血员应用联合式ＰＣＲ，以ＮＳ５－３＋ＮＳ５－４、ＳＦ２＋ＮＳ５－４、Ｋ１＋ＮＳ５－４、ＮＳ５－１＋ＮＳ５－４引物及套式ＮＳ５－１＋ＮＳ５－４引物扩增时，其ＲＮＡ检出率分别为５／１０、６／１０、７／１０、８／１０和９／１０；而３７例输血后丙型肝炎患者中３５例ＲＮＡ阳性，检出率为９５％，其中１８例１ｂ型和１９例２ａ型样品的检出率分别为１００％和８９％。结论ＨＣＶＮＳ５区的ＲＮＡ检出率与引物的选择有关     

慢性乙型肝炎组织HBV—DNA检测与肝脏超声显像关系的研究

以自行设计的可调式自动活检装置（ＡＡＢＤ），在超声导向下对１２例血清ＨＢＶ标记物阳性的慢性乙型肝炎（ＣＨＢ）病人肝脏进行活检，组织标本进行ＨＢＶＰＣＲ和Ｄｏｔ－Ｂｌｏｔ杂交检测并与超声显像参数做相关关系的研究。１２例ＣＨＢ中，５例血清及肝组织ＨＢＶ－ＤＮＡ阴性，血清ＡＬＴ均≤４５ｕ／Ｌ（ＨＢＶ－ＤＮＡ阴性组）；７例血清及肝组织ＨＢＶ－ＤＮＡ阳性，血清ＡＬＴ均≥６８ｕ／Ｌ（ＨＢＶ－ＤＮＡ阳性组）。超声检查肝实质回声直方图的像素均值（ＡＶ）及其标准差（ＳＤ），两组差异显著（Ｐ＜０．０５）；慢性肝炎中两组分别与正常对照组比较，超声检查的多项指标的差别具有显著性意义（Ｐ＜０．０５或Ｐ＜０．０１）。多元线性回归与相关分析发现，ＣＨＢ病人的肝实质回声及其直方图的ＡＶ和ＳＤ，以及肝内血管走行情况与肝内ＨＢＶ－ＤＮＡ的检出存在相关关系（ｒ＝０．５１２，Ｐ＝０．０２１，各偏回归系数的Ｐ值亦均＜０．０５），并计算出多元回归方程。     

TthDNA聚合酶在丙型肝炎病毒RNA检测中的应用

用ＴｔｈＤＮＡ聚合酶行逆转录聚合酶链反应（ＲＴ－ＰＣＲ）扩增丙型肝炎病毒（ＨＶＣ）５’端非编码序列，对２６２例肝炎患者血清进行ＨＣＶＲＮＡ测定，结果ＨＣＶＲＮＡ阳性者５３例，阳性率２０．２％。凡阳性者用酶联免疫吸附法测其抗ＨＣＶＩｇＧ，其中３０例测到抗ＨＣＶ，阳性重叠率５６％（３０／５３）；ＨＣＶＲＮＡ阳性中的１５例同时用成髓细胞瘤病毒酶行传统逆转录。套式聚合酶链反应检测对照，１４例阳性，符合率达９３．３％（１４／１５）。ＴｔｈＤＮＡ聚合酶用于ＲＴ－ＰＣＲ检测ＨＣＶＲＮＡ５’端非编码序列片段具有敏感性高、特异性强、稳定性好的优点。     

复合PCR检测乙型肝炎和丙型肝炎病毒

设计了ＨＢＶ和ＨＣＶ各一对引物，建立了复合ＰＣＲ，并对临床标本进行检测，５例ＨＢｓＡｇ和ＨＣＶ抗体均阳性者，其ＨＢＶ－ＤＮＡ和ＨＣＶ－ＲＮＡ均阳性；２０例单ＨＢｓＡｇ阳性标本，１１例单ＨＢＶ－ＤＮＡ阳性，５例ＨＢＶ－ＤＮＡ和ＨＣＶ－ＲＮＡ均阳性；２０份单ＨＣＶ抗体阳性者，ＨＣＶ－ＲＮＡ均阳性，３例合并ＨＢＶ－ＤＮＡ阳性；１０例慢性ＮＡＮＢ抗ＨＣＶ阴性肝炎标本８份ＨＣＶ－ＲＮＡ，１例ＨＢＶ－ＤＮＡ和     

环孢霉素A和大剂量甲基泼尼龙治疗重型再生障碍性贫血

为提高对重型再生障碍性贫血（ＳＡＡ）治疗的疗效，１９９０年以来，在雄激素常规联合方案基础上加用环孢霉素Ａ（ＣｓＡ）或大剂量甲基泼尼龙（ＨＤＭＰ）治疗成人ＳＡＡ２２例，并以单用雄激素常规联合方案的１１例为对照组，进行疗效随访观察。结果总有效率ＣｓＡ组为７１．４％（１０／１４），ＨＤＭＰ组为６２．５％（５／８），对照组为１８．２％（２／１１）。显示ＣｓＡ组和ＨＤＭＰ组的疗效均优于对照组（Ｐ＜０．０１和Ｐ＜０．０５）。ＣｓＡ组和ＨＤＭＰ组均未出现严重毒副反应。个别患者ＣｓＡ须维持疗程长达３年，提示对ＣｓＡ维持疗程与剂量的个体化应予一定的注意。认为在雄激素常规联合方案基础上加用ＣｓＡ或ＨＤＭＰ治疗ＳＡＡ，是较为有效、安全和简便的方法。     

护理操作与医院内感染的关系探讨

目的：探讨护理操作与乙型肝炎病毒（HBV）、丙型肝炎病毒（HCV）医院内感染的关系，为制定相应的防护措施提供依据。方法：分别对参与HBVDNA阳性和HCV RNA阳性患护理工作的672名和134名工作人员护理操作前后以及洗手后的手拭子标本进行HBV DNA和HCV RNA检测。结果：参与HBVDNA阳性患护理的672名护理人员的HBVDNA检出率分别为0.89%(6例)和8.04%(54例)；134名参与HCVRNA阳性患护理的工作人员HCVRNA的检出率分别为0.75%(1例)和5.22%(7例)；护理操作后采用流水洗手的工作人员均未检出两种病毒核酸。结论：对HBV DNA和HCVRNA阳性患实施护理操作的人员是HBV、HCV医院内感染的潜在因素，在对此类患实施护理操作前后应采取严格的消毒措施，以防止医院内感染。     

Virological pattern in plasma, peripheral blood mononuclear cells and liver tissue and clinical outcome in chronic hepatitis B and C virus coinfection

BackgrounD: We aim to evaluate in chronic hepatitis B virus-hepatitis C virus (HBV-HCV) coinfection the interplay of these viruses in liver tissue, peripheral blood mononuclear cells (PBMC), and plasma and to analyze the effect on disease course and response to treatment. METHODS: We enrolled 19 patients with chronic HBV-HCV coinfection, 20 with chronic HCV and 20 with chronic HBV infection at their first liver biopsy, all were naive for antiviral therapy. The patients' plasma, PBMC and liver biopsy samples were tested for HBV DNA and/or HCV RNA by real-time PCR, according to the presence/absence of hepatitis B surface antigen and antibodies against HCV in the serum. RESULTS: Contemporary presence of HBV DNA and HCV RNA was rare in plasma (5.3% of cases) and PBMC (10.6%), but frequent in liver tissue (52.6%). Of 10 cases circulating only HCV RNA and treated with pegylated interferon (PEG-IFN) plus ribavirin for 12 months, two showed a sustained response, and eight cleared HCV RNA but became HBV-DNA-positive in plasma; these eight had detectable HBV DNA in liver at baseline. One patient, who was plasma HBV-DNA-positive/HCV-RNA-negative at baseline, showed a sustained response after 18 months of PEG-IFN treatment; another, who was plasma HBV-DNA/HCV-RNA-positive at baseline, cleared only HCV RNA during 12 months of PEG-IFN plus ribavirin treatment. Seven cases remained untreated. CONCLUSION: Despite a reciprocal inhibition in plasma, HBV and HCV frequently coexist in liver tissue, a condition to be taken into consideration when deciding therapy.     

丙型病毒性肝炎与性传播关系的临床研究

目的　研究丙型病毒性肝炎与性传播的关系。方法　应用逆转录巢式聚合酶链反应 (RT PCR)检测丙型病毒性肝炎患者、性病患者精液以及阴道分泌物中HCVRNA。应用ELISA法检测其配偶的抗 HCV ,并与正常健康夫妇 18对作对照观察。结果　① 3 3例男性丙型病毒性肝炎患者精液中HCVRNA阳性 6例 (18 18% ) ,2 5例女性丙型病毒性肝炎患者阴道分泌物中HCVRNA阳性 9例 (3 6 0 % )。② 6例男性丙型病毒性肝炎患者精液HCVRNA阳性者配偶抗 HCV阳性1例 (16 67% ) ,9例女性丙型病毒性肝炎患者阴道分泌物HCVRNA阳性者配偶抗 HCV阳性 7例 (77 78% )。③ 72例性病患者生殖道分泌物HCVRNA阳性 4例 (5 5 % )。④对照组配偶抗 HCV均为阴性。结论　①丙型病毒性肝炎患者精液、阴道分泌物中可检出HCVRNA ,丙型病毒性肝炎病毒存在性传播的可能性。②女性丙型病毒性肝炎患者性传播丙型病毒性肝炎病毒可能性比男性丙型病毒性肝炎患者要大。③性乱人群通过性接触感染丙型病毒性肝炎病毒的可能性高于正常人群     

Features of combined (HBV/HCV-infection) viral lesion of the liver

AIM: To study clinical, biochemical features, course of combined viral hepatitides, dominant viral activity in combination HBV/HCV infection. MATERIAL AND METHODS: A total of 37 patients with HbsAg and anti-HCV, 23 patients with chronic hepatitis C and 48 patients with chronic hepatitis B were examined (the study and comparison groups, respectively). 67 HbsAg carriers with normal,hepatic parameters (no clinical symptoms, normal transaminase activity) served controls. RESULTS: In patients with parallel detection of HbsAg and anti-HCV detectability of HBV-DNA was 8.1% while HCVrNA was detected in 84% cases. Half the patients with HbeAg positive HBV had seroconversion 1.5-2 years after HCV infection. Documented HCV infection in HBV patients leads to elimination of one of the viruses (HBV more frequently) in more than 50% cases. HCV infection may induce seroconversion of HbeAg. Biochemical parameters (bilirubin, AIAT, AP, gamma HTP of blood) in patients with mixed infection compared with those with mono-infection were 1.5 times higher. In mixed infection cytokines (TNF-alpha, IL-1 beta, IL-6, IL-8, TGF-lbeta) levels were also higher, the diameter of the portal vein was larger (16.9 +/- 0.5 mm). Conclusion. In mixed viral infection there are marked changes in clinico-biochemical, morphological and hemodynamic indices with a clear trend to early formation of portal hypertension with significant alterations in the esophago-gastroduodenal zone.     

慢性HBV感染者低浓度HBsAg相关分子调查研究

目的 探讨低浓度HBsAg人群的分子生物学特征及流行病学意义.方法 采用PCR及基因测序的方法 对HBV慢性感染者136份低浓度HBsAg(低浓度HBsAg组)和44份高浓度HBsAg(高浓度HBsAg组)血清标本进行HBV DNA、酪氨酸-蛋氨酸-天冬氨酸-天冬氨酸(YMDD)变异检测,并分别对浓缩法HBV DNA105拷贝/L的47份低浓度HBsAg和37份高浓度HBsAg血清标本进行基因型检测,以及对直接法HBV DNA10~5拷贝/L的14份低浓度HBsAg和29份高浓度HBsAg血清标本进行S基因序列、血清型进行检测分析,S基因序列采用BioEdit软件与中国株参照序列进行比对.结果低浓度HBsAg组HBV DNA阳性率、YMDD变异率和HBV DNA对数值分别为34.6%(47/136)、0(0/136)和6.5±1.4,高浓度HBsAg组分别为84.1%(37/44)、9.1%(4/44)和8.9±1.8,两组之间差异有统计学意义(浓缩法χ~2=30.8,P<0.05;直接法χ~2=53.5,P<0.05;YMDD变异率精确概率法,P=0.003;HBV DNA对数值t=6.5,P<0.05);47例低浓度HBsAg病例中分别检出B基因型16例、C基因型5例、未分型26例,14例血清型分别为adw 7例、ayw4例、adr2例、ayr 1例,在两组人群中基因型的分布差异有统计学意义(χ~2=13.5,P<0.05),血清型的分布差异无统计学意义(χ~2=4.7,P>0.05),S基因测序结果未发现S基因变异,但6处16例次存在核苷酸碱基差异而氨基酸同义的多态性特征.结论 低浓度HBsAg人群HBV DNA存在低复制现象,基因型、血清型分别以B型、adw/ayw为主,S基因呈多态性特征,低浓度HBsAg存在可能与HBV S基因特殊的分子生物学特征使HBsAg表达低下有关,或与患者感染HBV后机体免疫系统的个体反应导致低浓度HBsAg诱导机体免疫耐受有关.     

HBV和HCV重叠感染患者生化免疫指标变化及临床意义

目的了解HBV和HCV重叠感染情况及其对肝功能及血清病毒载量的影响。方法常规检测3816例临床血清样本中的HBV及HcV血清标志物以及肝功能等指标,实时荧光定量PCR检测病毒载量。结果3816例送检样本中HBsAg阳性率8．9％（341／3816）,抗HCV抗体阳性率1．2％（46／3816）,其中HCVRNA检测阳性15例,现症感染率为0．39%。3816例样本中,HBV／HCV重叠感染15例,单纯HBV感染326例,单纯HCV感染31例。单纯HBV感染患者血清转氨酶（ALT和AST）及总胆红素（TBil）水平均明显高于重叠感染患者和单纯HCV感染患者。HBV／HCV重叠感染组患者HBVDNA栽量低于单纯HBV感染组,两组比较,差异有统计学意义（P〈0．05）;HBV／HCV重叠感染组患者HCVRNA载量也低于单纯HCV感染组,但两组比较,差异无统计学意义（P〉O．05）。结论重庆地区HBV／HCV感染情况与我国一般人群分布基本一致,重叠感染患者肝功能血清学指标改变低于单纯HBV感染患者。     

2260例静脉注射海洛因依赖者HBV、HCV感染状况分析

应用ELISA法对 2260例iv海洛因依赖者进行血清HBsAg、抗 -HCV、ALT检测。结果表明 ,iv海洛因依赖者血清HBsAg、抗 -HCV阳性率分别为 37.8%、53.9% ,HBsAg、抗 -HCV同时阳性者 4 56例 ,重叠感染率 20.2 %均显著高于对照组 (24.9%、22.3%、10.8% )。两组之间的差异有非常显著性 (均P 0.05)。在iv海洛因依赖者中 ,HCV感染率较HBV感染率更高 ,抗 -HCV阳性者 ,ALT异常率高于HBsAg阳性者。提示iv毒品传播HCV已成为一种不可忽视的重要途径。     

Hepatitis B virus (HBV) DNA screening of blood donations in minipools with the COBAS AmpliScreen HBV test

BACKGROUND: The risk of hepatitis B virus (HBV) transmission by blood transfusion (estimated at 1 in 63,000-1 in 205,000 units in the United States) exceeds that of hepatitis C virus (HCV) or human immunodeficiency virus (HIV). Reduction of window-period HBV transmissions through detection of HBV DNA-positive units by minipool nucleic acid testing (MP NAT) would be expected to decrease this risk. STUDY DESIGN AND METHODS: A large multicenter study of the COBAS AmpliScreen HBV test (Roche Molecular Systems) was conducted on minipools of 24 blood donation specimens. The yield of HBV DNA-positive, hepatitis B surface antigen (HBsAg)-negative window-period donations was determined relative to current and newly licensed HBsAg assays. Donors with selected HBV DNA, HBsAg, and anti-hepatitis B core antigen (HBc) results were further evaluated. RESULTS: The detection rate of window-period units was 1 in 352,451 (95% confidence interval, 1 in 2,941,176-1 in 97,561). Assay specificity was high (99.9964%). HBV DNA was detected in 84 percent of HBsAg-positive, anti-HBc-positive donations by MP NAT and in 94 percent when individual-donation (ID) NAT was added. HBV DNA was detected in 0.03 percent of HBsAg-negative, anti-HBc-positive donations by MP NAT and in 0.41 percent when ID NAT was added. CONCLUSIONS: Implementation of HBV MP NAT will provide an increment in safety relative to HBV serologic screening, similar to that for HCV and in excess of that for HIV. Our data indicate that the implementation of HBV MP NAT would likely interdict 39 HBV window-period units and prevent 56 cases of transfusion-transmitted HBV infection annually. The current data indicate that HBV MP NAT should not lead to discontinuation of anti-HBc testing but that discontinuation of HBsAg testing with retention of anti-HBc testing may be possible.     

维持性血液透析患者肝炎病毒感染发生情况及原因分析

目的调查分析维持性血液透析患者病毒感染情况及相关因素。方法收集于解放军总医院肾内科行维持性血液透析的163例患者的临床资料,观察乙型肝炎病毒(hepatitis B virus,HBV)及丙型肝炎病毒(hepatitis C virus,HCV)感染情况并分析其与透析时间、肾移植史、外科手术史及输血的关系。结果纳入研究的163例患者中,感染HBV的患者18例(11.0%),感染HCV的患者14例(8.6%)。感染HCV患者的透析龄最长,为(79.0±51.6)月,同时,感染HCV的患者肾移植病史及外科手术史比例也高于其他两组患者。分析HCV及HBV首次发现时间,患者感染HCV多发生在肾移植术后,感染HBV多发生于透析开始前,而发生在透析间期的比例不高。结论血液透析患者中,感染HCV与HBV患者的比例无明显差异,但感染HCV的患者多继发于肾移植、手术及输血,而感染HBV的患者多为原发。因此,加强对血液透析患者继发感染HCV的控制十分重要。     

脐血采集和分离过程中病原微生物污染概率的研究

为探讨脐血采集，分离过程中病原微生物污染的概念及不同检测方法的有效性，采用BACTEC9050细菌培养系统和改良马丁/硫乙醇酸盐（22℃）及硫乙醇酸盐（35℃）培养法对60份脐血同时进行采集后及分离后细菌和真菌的培养；对206份脐血血清标本采用ELISA法检测HBC，Anti-HBC,Anti-HCV,Anti-HCMV-IgM,HTLV-1,HTLV-2,HIV-1及HIV-2；用分子生物学方法检测HBVDNA和HCVRNA；用红细胞凝集法检测TPHA，研究结果显示；采用BACTEC9050细菌培养系统，采集后脐血中细菌污染率为3.33%，真菌污染率为0%；细胞分离后细菌和真菌污染率分别增高到6.67%和1.67%；在该系统中，厌氧菌的阳性检出率远高于改马丁/硫乙醇酸盐(22℃和35℃）。脐血血清病原菌检测结果表明；采用ELISA方法，HBsAg阳性率2.4%，Anti-HBC单项阳性率29.4%,Anti-HCMV-IgM阳性率1.89%；采用分子生物学方法，HBVDNA阳性率5.8%,HBsAg阴性而HBCAb单项阳性标本中HBVDNA阳性率6.7%,HCVRNA阳性率2.4。结论：采集及分离后脐血细胞中病原微生物阳性率甚高；目前沿用的改良马丁/硫乙醇酸盐（22℃和35℃）培养系统，会导致脐血中厌氧菌漏检，有必要更新该培养方法，如采用先进的BACTEC9050培养体系，分子生物学方法可弥补ELISA等常规脐血传染病检测方法的缺陷，从而提高脐血造血细胞移植的安全系数。