CREPT对胶质瘤U251细胞增殖、侵袭和迁移的影响及机制

目的 探讨肿瘤高表达细胞周期相关蛋白（CREPT）对胶质瘤U251细胞增殖、侵袭和迁移的影响及可能机制。方法 体外培养人胶质瘤细胞株U373、U251、A172、U87-MG、SHG44，并构建过表达或沉默CREPT的U251细胞；免疫印迹法检测蛋白表达水平；CCK-8法检测细胞增殖能力；Transwell实验检测细胞侵袭能力；细胞划痕实验检测细胞迁移能力。结果 U251细胞CREPT蛋白表达水平最高，SHG44细胞最低。沉默CREPT后，U251细胞增殖、侵袭和迁移能力明显下降（P<0.05），p-Wnt和p-β-catenin蛋白表达水平下降（P<0.05）。过表达CREPT后，U251细胞增殖、侵袭和迁移能力明显增强（P<0.05），p-Wnt和p-β-catenin蛋白水平明显升高（P<0.05）。Wnt/β-catenin通路抑制剂KYA1797K可逆转过表达CREPT对细胞增殖、侵袭和迁移的影响（P<0.05）。结论 CREPT可能通过激活Wnt/β-catenin通路促进胶质瘤U251细胞的增殖、侵袭和迁移。     

贝伐珠单抗联合高压氧治疗小鼠胶质母细胞瘤的效果

目的 探讨贝伐珠单抗（Bev）联合高压氧（HBO）对小鼠胶质母细胞瘤（GBM）的治疗作用。方法 体外培养U251细胞,随机分为对照组、Bev组（Bev作用24 h）、HBO组（HBO治疗1次）和Bev+HBO组（Bev作用24 h后,接受HBO治疗1次）,采用MTT法检测细胞增殖能力,采用划痕实验和Transwell小室实验检测细胞迁移和侵袭能力。取100只雄性BALB/c裸鼠,右侧纹状体注射U251细胞建立GBM模型,造模后7 d随机分为对照组（腹腔注射PBS,3次/周,连续2周）、Bev组（腹腔注射Bev,5 mg/kg,3次/周,连续2周）、HBO组（HBO治疗,1次/d,连续2周）、Bev+HBO组（同时接受Bev和HBO处理2周）;每组取10只小鼠记录生存时间;每组取5只小鼠,HE染色测定肿瘤体积;每组取5只小鼠,CD34免疫组化染色测定肿瘤组织微血管密度（MVD）;每组取5只小鼠,PCR检测肿瘤组织基质金属蛋白酶（MMP）9 mRNA表达水平。结果 Bev对U251细胞增殖能力无明显影响（P>0.05）,明显增强U251细胞迁移和侵袭能力（P<0.01）;明显降低肿瘤组织MVD（P<0.05）,明显增加肿瘤组织MMP9 mRNA表达水平（P<0.05）,但对荷瘤小鼠肿瘤体积及生存时间无明显影响（P>0.05）。HBO明显抑制U251细胞增殖、迁移、侵袭能力（P<0.01 ）,明显降低荷瘤小鼠肿瘤组织MMP9 mRNA表达水平（P<0.01）,但对荷瘤小鼠生存时间、肿瘤体积及肿瘤组织MVD均无明显影响（P>0.05）。Bev联合HBO明显抑制U251细胞增殖、侵袭和迁移能力,明显降低荷瘤小鼠肿瘤组织MVD和MMP9 mRNA水平（P<0.05）,明显缩小肿瘤体积（P<0.05）,明显延长荷瘤小鼠的生存时间（P<0.01）。结论 单独应用Bev或HBO对GBM小鼠肿瘤体积及生存时间无明显影响,但Bev联合HBO明显抑制小鼠GBM生长,明显延长小鼠生存时间。     

STIP1对胶质瘤U251细胞增殖、侵袭和凋亡的影响

目的 探讨下调磷酸化应激诱导蛋白1（STIP1）表达对胶质瘤U251细胞增殖、侵袭和凋亡的影响，及其对JAK2/STAT3信号通路的调控作用。方法 免疫印迹法检测体外培养的正常胶质细胞（SVG）和人胶质瘤细胞（U251、U87和U37）STIP1蛋白表达水平。NC-siRNA或STIP1-siRNA质粒转染U251细胞，CCK-8法检测U251细胞增殖；Transwell实验检测U251细胞侵袭能力；流式细胞术检测U251细胞凋亡率；免疫印迹法检测JAK2/STAT3信号通路蛋白表达水平。结果 与正常胶质细胞SVG比较，胶质瘤细胞U251、U87和U373的STIP1蛋白表达水平均明显增高（P<0.05）。与NC-siRNA组比较，STIP1-siRNA组STIP1蛋白表达水平、细胞增殖活力和细胞侵袭力明显明显降低（P<0.05），细胞凋亡率明显增高（P<0.05），而且，p-JAK2和p-STAT3蛋白表达水平明显降低（P<0.05）。结论 STIP1在胶质瘤细胞中呈高表达，抑制STIP1表达可以抑制胶质瘤细胞的增殖和侵袭、促进凋亡，机制可能与抑制JAK2/STAT3信号通路有关。     

lncRNA SNHG16对胶质瘤U251细胞增殖、侵袭和迁移的影响

目的 探讨沉默长链非编码RNA核内小RNA宿主基因16（SNHG16）对胶质瘤U251细胞增殖、侵袭和迁移的影响。方法 实时荧光定量PCR检测正常胶质细胞HEB、NHA和胶质瘤细胞A172、U251、U87、SHG-4中SNHG16的表达。用siRNA沉默U251细胞SNHG16的表达，分为NC-siRNA组和SNHG16-siRNA组，CCK-8法检测细胞增殖，Transwell实验检测细胞侵袭，划痕实验检测细胞迁移。结果 与正常胶质细胞HEB和NHA比较，胶质瘤细胞A172、U251、U87和SHG-4的SNHG16表达水平明显升高（P<0.05）。与NC-siRNA组比较，SNHG16-siRNA组细胞增殖能力、细胞侵袭能力和细胞迁移能力均明显降低（P<0.05）。结论 SNHG16在胶质瘤细胞中高表达，特异性沉默SNHG16基因可以抑制胶质瘤细胞的增殖、侵袭和迁移能力。     

隔蛋白7对胶质瘤细胞系U251细胞周期的影响

目的 检测SEVT7对胶质瘤细胞系U251的细胞周期、增殖、侵袭以及凋亡的影响.方法 流式细胞术分析转染SEPT7对细胞周期的影响,Western blot检测细胞周期因子表达变化,MTT法和Annexin V法评价SEFT7对U251细胞的增殖活性和凋亡的影响,Martrigel三维立体培养分析转染SEPT7后U251细胞侵袭能力的变化.结果 SEPT7使U251细胞G0/G1期阻滞,S期细胞比例(SPF)降低,增殖活性和侵袭能力明显受到抑制,并可诱发细胞凋亡.结论 SEPT7抑制U251细胞侵袭、增殖,促进凋亡.结果 提示,SEPT7是对胶质瘤具有抑制作用的基因.     

SNAI2与E-cadherin参与LRIG1对U251细胞侵袭与转移的抑制作用

目的 探讨多亮氨酸重复区免疫球蛋白样蛋白1（LRIG1）对人脑胶质瘤U251细胞侵袭与转移及U251细胞SNAI2、E-cadherin表达的影响。方法 传代培养U251细胞,随机分为空白对照组、LRIG1空载体组、LRIG1过表达组、LRIG1低表达组、LRIG1低表达阴性对照组,应用脂质体介导的基因转染技术分别转染PBS、PEGFP-N1-U251质粒、PEGFP-LRIG1-U251质粒、LRIG1-siRNA、LRIG1-NC-siRNA。应用PCR、Western blot检测细胞LRIG1、SNAI2、E-cadherin mRNA和蛋白表达水平,Transwell侵袭实验检测细胞侵袭能力,划痕实验检测细胞转移能力。结果 LRIG1过表达组U251 SNAI2表达下调（P<0.05）,E-cadherin表达上调（P<0.05）,细胞侵袭与转移能力明显下降（P<0.05）。LRIG1低表达组U251细胞SNAI2表达上调（P<0.05）,E-cadherin表达下调（P<0.05）,细胞侵袭与转移能力明显提高（P<0.05）。结论 上调LRIG1可抑制U251细胞侵袭与转移,而敲除LRIG1可明显促进U251细胞侵袭与转移,SNAI2及E-cadherin可能参与其调节过程。     

人类重组肝细胞生长因子对人胶质瘤U251细胞系增殖及侵袭的影响

目的探讨人类重组肝细胞生长因子（rhHGF）对人胶质瘤U251细胞系侵袭、增殖的影响及其机制。方法应用细胞培养技术培养U251细胞；用10、20、30μg，L不同浓度rhHGF作用U251细胞48h，以倒置相差显微镜观察、MTT法检测rhHGF对U251细胞增殖的影响；以过河实验、粘附测定、免疫组化法及Western blot检测rhHGF对U251细胞的侵袭力和对增殖细胞核抗原（PCNA）、钙粘素（E-cadherin）表达的影响。结果rhHGF可明显增加U251细胞的增殖和生长，且随浓度提高作用增强，呈剂量效应关系。过河实验、粘附实验显示rhHGF能增强U251细胞的体外侵袭和运动能力，随浓度提高，过河时间缩短，细胞粘附力增加（P〈0．05）。Western blot及免疫组化测定显示rhHGF作用48h后，U251细胞PCNA表达上升，E-cadherin表达下降（P〈0．05）。结论rhHGF可促进人胶质瘤U251细胞的生长和增加其体外侵袭能力，推测其机制与直接增加U251细胞迁移运动，干扰U251细胞PCNA、E-cadherin蛋白表达有关。     

塞来昔布影响胶质瘤细胞增殖及运动、侵袭的生物特性研究

目的研究环氧化酶-2(COX-2)选择性抑制剂塞来昔布对胶质瘤U251细胞的COX-2蛋白表达及细胞增殖、运动、侵袭能力的影响,找出其时间和浓度规律。方法用不同浓度的塞来昔布处理培养的U251细胞不同时间,采用甲基噻唑基四唑(MTT)比色法检测对U251细胞的生长抑制率,用激光共聚焦显微镜检测U251细胞的COX-2蛋白表达;用免疫组化技术检测U251细胞的增殖细胞核抗原(PCNA)表达;设计胶质瘤细胞体外运动侵袭模型研究塞来昔布对U251细胞运动、侵袭能力的影响。结果 MTT法表明,浓度为50μmol/L的塞来昔布作用12h后即对U251细胞增殖产生抑制作用,不同浓度以及不同作用时间对细胞的抑制率有显著性差异(P<0.01)。塞来昔布作用不同时间的U251细胞COX-2的荧光强度有显著性差异(P<0.01)。U251细胞经100μmol/L的塞来昔布处理后中PCNA的表达明显下降,与空白组比差异显著(P<0.01)。塞来昔布处理后细胞较空白组细胞的趋化运动和组织侵袭能力明显下降。结论塞来昔布通过抑制胶质瘤细胞内COX-2蛋白的表达从而抑制肿瘤细胞的生长、增殖及运动、侵袭能力,并呈时间、浓度依赖性。     

C1QBP调节线粒体功能介导胶质母细胞瘤对替莫唑胺耐受作用研究

目的 探讨C1QBP通过调节线粒体功能介导胶质母细胞瘤(GBM)对替莫唑胺(TMZ)的耐受作用。方法 采用MTT法检测GBM细胞系U251及耐受TMZ细胞系U251(U251/TMZ)半抑制指数,采用免疫荧光实验、Western Blot检测U251及U251/TMZ中C1QBP的表达水平,C1QBP过表达转染构建U251/TMZ+OE-C1QBP组,实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测各组C1QBP的mRNA表达水平,MTT法检测U251/TMZ+OE-C1QBP组半抑制指数,流式检测仪检测各组细胞凋亡水平,荧光显微镜下观察线粒体膜电位变化情况。结果 相比较U251细胞系,U251/TMZ细胞系的半抑制指数以及C1QBP的蛋白表达水平要更高,而转染后的U251/TMZ+OE-C1QBP细胞系的半抑制指数最高,U251、U251/TMZ、U251/TMZ+OE-C1QBP三组细胞系中C1QBP的mRNA表达水平依次增高,细胞凋亡水平依次降低,同时线粒体膜电位表达越来越强。结论 C1QBP的表达水平与GBM对TMZ的耐药性有关,随着C1QBP表达水平的增高,线粒体膜电位即功能增强,同...     

白藜芦醇抑制U251人胶质瘤细胞增殖及其相关机制的探讨

目的 探讨白藜芦醇（Res）对U251胶质瘤细胞增殖和侵袭的抑制作用及其机制。方法 将不同浓度Res作用于U251胶质瘤细胞系，相差显微镜下观察其形态的变化，MTT法检测其对细胞生长增殖的抑制作用，流式细胞术（FCM）检测其对细胞周期的影响，用蛋白印迹（Western blot）检测Res处理前后U251细胞表皮生长因子受体（EGFR）、p53、p21、CDK4、CyclinD1、Bcl-2及caspase-3的表达，免疫组化分析MMP9、NFKB、P-AKT及AKT2的表达。结果 U251细胞经Res处理后，细胞形态发生一定变化，U251胶质瘤细胞的增殖被抑制，呈浓度和时间依赖性，细胞周期被阻滞在S期，Western blot检测显示EGFR、CyclinD1、CDK4、Bcl-2的表达降低，p21、p53、caspase-3蛋白表达升高，免疫组化检测显示MMP9，NFKB、P-AKT及AKT2的表达降低。结论 Res有可能通过调节EGFR及p53信号通路而抑制U251胶质瘤细胞的增殖和侵袭，诱导肿瘤细胞凋亡。     

过表达TBX2对胶质瘤细胞增殖和侵袭的影响

目的 探讨TBX2表达对胶质瘤细胞增殖、侵袭的影响。方法 采用RT-qPCR和免疫印迹法检测53例胶质瘤组织和瘤旁组织TBX2mRNA和蛋白表达水平。体外培养胶质瘤细胞（U251、U87和SHG-44）和正常星型胶质细胞（HA1800）,采用RT-qPCR和免疫印迹法检测细胞TBX2 mRNA和蛋白表达水平。构建TBX2过表达或低表达U251细胞株,分别采用WST-1法检测胶质瘤细胞增殖能力,Transwell实验检测细胞侵袭能力。结果 胶质瘤组织TBX2 mRNA和蛋白表达水平明显高于瘤旁组织（P<0.05）,而且,高级别胶质瘤TBX2表达水平显著高于低级别胶质瘤（P<0.05）。相比于人正常星型胶质细胞系HA1800,胶质瘤细胞系U251、U87、SHG-44细胞TBX2 mRNA和蛋白表达水平均明显增高（P<0.05）;而且,U251细胞TBX2表达水平显著高于U87和SHG-44细胞（P<0.05）,因此使用U251细胞进行后续实验。过表达TBX2显著增加U251细胞增殖和侵袭能力（P<0.05）,低表达TBX2显著抑制U251细胞增殖和侵袭能力（P<0.05）。结论 胶质瘤TBX2呈高表达,与胶质瘤增殖、侵袭能力有关。     

miR-21调控人脑胶质瘤细胞侵袭能力的体外研究

目的 探讨miR-21调控人脑胶质瘤细胞侵袭能力的体外机制.方法 脂质体介导反义miR-21(AS-miR-21)转染体外常规培养的U251细胞,同时设无义寡脱氧核苷酸(ODN)组和对照组.测定荧光素酶活性验证3组细胞中miR-21的表达,Matrigel基质生长实验检测U251细胞的生长情况,Transwell细胞体外迁移实验检测U251细胞的迁移能力,Western blotting检测细胞侵袭相关蛋白局部粘着斑激酶(FAK)、基质金属蛋白酶9/2(MMP-9/2)、人基质金属蛋白酶抑制因子1(TIMP-1)、微管蛋白α(Tubulin-α)的表达,免疫荧光检测细胞Tubulin-α蛋白的形态. 结果 与对照组和无义ODN组比较,转染AS-miR-21组U251细胞miR-21表达水平降低,Matrigel基质生长实验显示转染AS-miR-21组U251细胞体外培养克隆平均直径较小,Transwell细胞体外迁移实验显示转染AS-miR-21组穿膜细胞数较少,Western blotting结果 显示转染AS-miR-21组U251细胞FAK、MMP-9/2表达较低,TIMP-1表达较高,差异均有统计学意义(P＜0.05).Tubulin-α的表达无明显变化,免疫荧光染色显示转染AS-miR-21组Tubulin-α蛋白形态扭曲. 结论 miR-21高表达可以促进U251胶质瘤细胞侵袭生长,提示miR-21可以作为基因治疗脑胶质瘤的候选靶点.     

lncRNA LINC00689靶向调控miRNA-634促进胶质瘤U251细胞增殖、侵袭和迁移

目的 探讨长链基因间非蛋白编码RNA689（LINC00689）对胶质瘤细胞增殖、侵袭和迁移的影响。方法 RT-PCR实验检测正常胶质细胞HEB、胶质瘤细胞系A172、U251、U87、SHG-4中LINC00689和miRNA-634的表达。将si-NC、si- LINC00689、miRNA-634 mimics、miRNA-NC、si- LINC00689+anti-miRNA-NC、si- LINC00689+anti-miRNA-634质粒转染至U251细胞中；CCK-8实验检测细胞增殖、Transwell实验检测细胞侵袭和迁移。结果 与正常胶质细胞HEB比较，胶质瘤细胞系A172、U251、U87和SHG-4的LINC00689表达水平较高，而miRNA-634表达水平较低（P<0.05）。与si-NC组比较，si-LINC00689组LINC00689表达水平、细胞增殖活力、侵袭和迁移细胞数明显较低（P<0.05）。与miRNA-NC组比较，miRNA-634 mimics组miRNA-634表达水平明显增高（P<0.05），细胞增殖活力、侵袭和迁移细胞数明显降低（P<0.05）。与si- LINC00689+anti-miRNA-NC组比较，si- LINC00689+anti-miRNA-634组细胞增殖活力、侵袭和迁移细胞数明显增高（P<0.05）。结论 LINC00689可以促进胶质瘤细胞的增殖、侵袭和迁移，其机制可能与靶向调控miRNA-634有关。     

CXCR4表达上调对U251细胞增殖、侵袭、迁移的影响

目的 探讨CXC趋化因子-4受体（CXCR4）表达上调对U251细胞增殖、侵袭及迁移能力的影响及其作用机制。方法 构建携带CXCR4基因的质粒,采用电转染法将携带CXCR4基因的质粒整合到胶质瘤U251细胞的基因组中,然后将细胞分为空白对照组、阴性对照组和CXCR4上调组,分别从mRNA水平和蛋白水平检测CXCR4及其他相关基因的表达;MTT试验检测细胞增殖能力的改变;划痕试验检测细胞的迁移能力;Transwell侵袭试验检测细胞侵袭性的变化。结果 与空白对照组和阴性对照组相比,CXCR4上调组U251细胞CXCR4在mRNA和蛋白水平上表达都增强,细胞增殖、侵袭和迁移能力均显著增强;而空白对照组和阴性对照组之间并无明显变化。结论 CXCR4在胶质瘤的增殖、侵袭、迁移行为中发挥着重要的作用,可以被视为胶质瘤治疗的靶向基因。     

microRNA-613调控CDK14来抑制老年胶质瘤患者瘤细胞的增殖和侵袭作用

目的 探讨microRNA-613调控细胞周期蛋白依赖性激酶14(CDK14)通路来抑制老年胶质瘤患者瘤细胞增殖和侵袭的机制。方法 购自上海北诺生物科技有限公司的人脑胶质瘤细胞株U251共24株,分为shNC组、shmicroRNA-613组、Vector组、microRNA-613组,每组各6株; Western Blotting法和qRT-PCR法检测敲减microRNA-613和过表达microRNA-613后的人脑胶质瘤细胞株U251中CDK14蛋白表达水平,CCK-8细胞增殖实验、Transwell小室实验验证敲除microRNA-613和过表达microRNA-613后U251细胞的增殖、侵袭能力。结果 人胶质瘤细胞株U251敲减microRNA-613后CDK14蛋白表达增加(P<0.05); 人胶质瘤细胞株U251过表达microRNA-613后CDK14蛋白表达减少(P<0.05); 转染第24、36、48 h microRNA-613组U251细胞增殖率P<0.05); microRNA-613组U251细胞侵袭能力>Vector组,shNC组>shmicroRNA-613组(P<0.05)。结论 microRNA-613可通过调控CDK14信号转导通路来抑制人脑胶质瘤细胞U251增殖、转移。     

雄激素受体抑制剂通过AR信号通路对胶质瘤生物学特性的影响

目的研究雄激素受体(androgen receptor,AR)抑制剂(flutamide)对人胶质瘤细胞增殖、凋亡、侵袭的影响。方法采用不同浓度的flutamide(低浓度1.0×10~(-8)、中浓度1.0×10~(-7)、高浓度1.0×10~(-6)mol/L)作用于胶质瘤细胞系U251,Real Time-PCR和Western Blot检测AR m RNA及AR蛋白的表达情况;Cell Counting Kit-8法测定flutamide对胶质瘤细胞增殖的影响;Annexin V-7AAD/PE双染检测flutamide诱导胶质瘤细胞凋亡的作用;Transwell测定flutamide对胶质瘤细胞侵袭能力的改变。结果在体外胶质瘤细胞的增殖、侵袭能力能被AR抑制剂(flutamide)显著抑制且凋亡增加,与药物浓度正相关。结论 AR抑制剂(flutamide)能明显抑制胶质瘤细胞的增殖与侵袭,并且诱导细胞凋亡,AR可能是引起胶质瘤发生、发展的危险因素。     

白藜芦醇通过下调CD44表达抑制胶质瘤U251细胞增殖和侵袭

目的 探讨白藜芦醇对脑胶质瘤细胞增殖和侵袭的影响及可能的分子调控机制。方法 体外培养胶质瘤U251细胞,分别用浓度为0 μmol/L、50 μmol/L、100 μmol/L、150 μmol/L白藜芦醇继续培养48 h,参考Lipofectamine2000TM说明书将pcDNA3.1/CD44（CD44过表达）、pcDNA3.1（过表达对照）等质粒转染胶质瘤U251细胞并培养24 h进行后续实验。利用CCK-8法检测细胞增殖,利用Transwell实验检测细胞侵袭;RT-PCR和免疫印迹法检测细胞CD44、CyclinD1、CDK4、MMP2和MMP9的mRNA和蛋白表达。结果 白藜芦醇明显抑制U251细胞的增殖和侵袭能力（P<0.05）,而且呈浓度依赖性（P<0.05）;所以,用150 μmol/L白藜芦醇进行CD44干预实验。白藜芦醇明显抑制U251细胞CD44、CyclinD1、CDK4、MMP2和MMP9的mRNA和蛋白表达（P<0.05）,而且呈浓度依赖性（P<0.05）。CD44过表达明显抑制白藜芦醇对胶质瘤U251细胞增殖和侵袭的抑制作用（P<0.05。结论 白藜芦醇抑制胶质瘤细胞增殖和侵袭,其机制与下调CD44的表达有关。