人牙髓细胞原代培养方法的研究

目的 确定酶解消化法牙髓细胞原代培养的合适条件与时间。方法 选取年轻患者因正畸拔除的完整和无龋坏牙齿，取出牙髓，分别采用胶原酶一步法消化牙髓组织30分钟及1、2、3小时，胶原酶分步消化法，组织块法和组织块酶解法进行原代培养，倒置显微镜台盼蓝染色观察细胞解离及存活状况，免疫组化法鉴定细胞来源。结果 胰酶消化2小时后，组织块基本未解离，用0.1%胶原酶一步法消化1、2、3小时后组织块均彻底解离为单细胞，基本无残余。0.1%胶原酶消化30分钟后组织块解离不完全，0.1%胶原酶分步法消化1小时后组织解离彻底，台盼蓝染色表明经胶原酶一步法消化获得的牙髓细胞被台盼蓝着色的比例随消化时间减短而下降，分步法消化细胞着色率低于一步法，组织块酶解法的组织块解离，贴附和细胞游出状况均优于组织块法。结论 Ⅰ型胶原酶在37℃，持续振荡条件下消化1小时是彻底酶解消化人牙髓的最短时间，分步酶解法能获得比一步酶解法更高的活细胞数量，而从效果，操作难易和耗时多少等多方面因素综合考虑，组织块酶解法是人牙髓组织原代培养的最佳方法。     

人脐动脉平滑肌细胞体外培养的生物学特性及其永生株的初步建立

目的 建立人脐动脉血管平滑肌细胞（HUASMC）原代．传代培养的最佳方法，并初步建立其永生株。方法 采用人脐动脉血管中膜组织块贴壁法原代培养，比较不同培养养基对原代及传代细胞增殖的影响；选择标记为新霉素（G418）的带有端粒酶催化亚基（hTERT)基因的重组质粒导入人脐动脉血管平滑肌细胞。结果 经α肌动蛋白鉴定，组织块贴壁洒可获得高纯度的HUASMC。原代培养的HUASMC1－4代细胞增殖能力强，生长旺盛，此后细胞的增殖逐渐降低，到第10代几乎丧失增殖力。原代培养以MCDB131为最佳培养基。hTERT转染细胞克隆由长梭形变为短梭形，接触抑制消失，生长速度快，目前已传至20代，增殖能力与第1代无差别。转染前后平滑肌特异的α－肌动蛋白表达阳性。结论 hTERT转染的HUASMC保留了HUASMC的基本生物学特征，能保持较强的增殖能力持续传代。     

人牙髓细胞原代培养方法的研究

目的　确定酶解消化法牙髓细胞原代培养的合适条件与时间。方法　选取年轻患者因正畸拔除的完整和无龋坏牙齿 ,取出牙髓 ,分别采用胶原酶一步法消化牙髓组织 30分钟及 1、2、3小时 ,胶原酶分步消化法 ,组织块法和组织块酶解法进行原代培养。倒置显微镜台盼蓝染色观察细胞解离及存活状况 ,免疫组化法鉴定细胞来源。结果　胰酶消化 2小时后 ,组织块基本未解离。用 0 .1%胶原酶一步法消化 1、2、3小时后组织块均彻底解离为单细胞 ,基本无残余。 0 .1%胶原酶消化 30分钟后组织块解离不完全。 0 .1%胶原酶分步法消化 1小时后组织解离彻底。台盼蓝染色表明经胶原酶一步法消化获得的牙髓细胞被台盼蓝着色的比例随消化时间减短而下降。分步法消化细胞着色率低于一步法。组织块酶解法的组织块解离、贴附和细胞游出状况均优于组织块法。结论　 型胶原酶在 37℃ ,持续振荡条件下消化 1小时是彻底酶解消化人牙髓的最短时间。分步酶解法能获得比一步酶解法更高的活细胞数量。而从效果、操作难易和耗时多少等多方面因素综合考虑 ,组织块酶解法是人牙髓组织原代培养的最佳方法     

BXSB狼疮小鼠胸腺上皮细胞培养方法的建立

目的：比较不同培养条件下原代狼疮小鼠胸腺上皮细胞生长情况。 方法：分别采用剪切法、剪切加胶原酶消化法、剪切加胰蛋白酶消化法建立培养体系获取自发性系统性红斑狼疮小鼠（BXSB小鼠）胸腺上皮细胞;用光镜、免疫细胞化学染色法进行细胞鉴定。 结果：含血清的培养基与含生长因子的培养基均能培养出较纯的胸腺上皮细胞;剪切法成纤维细胞污染较多,剪切加胰蛋白酶消化法细胞生长状态较差,经剪切加胶原酶消化的BXSB胸腺植块,生长状态好,成纤维细胞污染少;当原代培养的细胞长满瓶壁的90％左右时可传代,角蛋白染色阳性细胞纯度达95％以上。 结论：剪切加胶原酶消化法仅用含血清的培养基即可培养出符合实验要求的BXSB小鼠胸腺上皮细胞,是低成本、简便易行的系统性红斑狼疮模型鼠胸腺上皮细胞培养体系。     

小鼠肾小管上皮细胞的培养和鉴定

目的 建立小鼠肾小管上皮细胞培养方法,为有关肾损伤体外研究提供实验平台。方法 分别采用肾小管节段贴块法、胰蛋白酶和胶原酶Ⅰ法消化分离肾小管节段,用含10%血清的培养基培养,然后用含EDTA的0.25%胰蛋白酶消化,对原代和传一代肾小管上皮细胞进行鉴定。结果 三种培养方法培养细胞3 d基本贴壁,胶原酶Ⅰ法3-4 d长满瓶底,肾小管节段贴块法4-5 d长满瓶底,胰蛋白酶7 d左右。细胞均鹅卵石铺路样生长,经细胞免疫组织化学染色鉴定cytokeratin 18呈阳性。结论 肾小管节段贴块法和胶原酶Ⅰ消化都可以得到较理想的肾小管上皮细胞,后者细胞生长较快,为研究肾损伤的发生原因和机制提供实验基础。     

人肾小管上皮细胞的原代培养及鉴定

目的 :建立人肾小管上皮细胞原代培养、传代、冻存及鉴定方法。方法 :采用肾小管节段贴块培养法 (A法 )与消化培养法 (B法 )对比原代培养 ,并以 0 .2 5 %胰蛋白酶消化、传代 ,以免疫细胞化学方法鉴定细胞种类 ,常规冻存和复苏。结果 :A法成功培养、传代、冻存、复苏并鉴定了人肾小管上皮细胞 ,B法失败。结论 :肾小管节段贴块培养法用于人肾小管上皮细胞原代培养是可行的     

人黄韧带细胞体外原代培养方法的比较研究

摘要：目的 比较不同的人黄韧带细胞（LFCs）原代培养方法,优化培养条件,提高培养成功率。方法 采集成年腰椎间盘突出症患者后路椎间盘摘除术中的黄韧带,分别采用组织块法、酶消化法、胶原酶消化加组织块法体外原代培养LFCs,传代培养;倒置相差显微镜下观察细胞从组织块内迁出时间、细胞形态和生长状态;四甲基偶氮唑盐比色法（MTT）测定其吸光度（OD）值,评价细胞增殖状况,绘制细胞生长曲线;用免疫荧光染色法检测传3代细胞的波形蛋白和Ⅰ型胶原的表达。结果 胶原酶消化加组织块法中组织块解离、贴附和细胞游出状况均优于单纯组织块法或单纯酶消化法,成功率较高。原代培养细胞的波形蛋白和Ⅰ型胶原免疫荧光染色呈阳性。结论 胶原酶消化加组织块法可提高LFCs原代培养的成功率。     

人脐静脉内皮细胞分离培养的改进及其鉴定

目的 改进静脉内皮细胞原代培养的方法，提高体外培养血管内皮细胞的成功率。方法 采用5号带柄一次性静脉输液针灌注消化液，分别用0．125％、0．25％胰蛋白酶和0．1％胶原酶消化脐静脉内膜，比较三种酶液消化的结果，并在倒置相差显微镜下观察其形态特点，同时用免疫组织化学的方法对所得细胞进行鉴定。结果 0．125％、0．25％胰蛋白酶和0．1％胶原酶的最佳消化时间分别为15min，10min，12min，倒置相差显微镜下观察内皮细胞为单层生长，鹅卵石样镶嵌排列。免疫组织化学检测表明细胞内有Ⅷ因子相关抗原。结论 胶原酶是分离培养脐静脉内皮细胞的首选消化液，且0．1％胶原酶消化12min获得的细胞数量多，成活率高。     

人脐静脉内皮细胞的培养及鉴定

目的：摸索人脐静脉内皮细胞体外培养的方法和注意事项。方法：采用0．25％胰蛋白酶分离人脐静脉内皮细胞,含20％FBSDMEM养基培养,待细胞80％融合后,以O．25％胰蛋白酶消化传代,并以倒置显微镜观察内皮细胞的生长情况,以免疫组化方法对内皮细胞进行鉴定。结果：原代培养的细胞在接种4h后开始贴壁生长,3－5天后融合成单层,倒置显微镜下观察细胞呈铺路石状排列,免疫组化显示人第Ⅷ因子相关抗原阳性。结论：用胰蛋白酶消化脐静脉可获得内皮细胞且成活率较高,是一种可靠的方法。     

人脐静脉内皮细胞的培养及鉴定

目的　探讨新生儿脐静脉内皮细胞的培养及鉴定方法 ,建立血管内皮细胞培养模型 ,为体外研究血管内皮细胞提供实验手段。方法　采用胶原酶Ⅱ灌流消化法培养人脐静脉内皮细胞 ,当原代培养细胞 80 %以上汇合后 ,用胰蛋白酶消化传代 ;根据细胞生长特点、形态特征、细胞表型和分泌蛋白流式细胞术 (FM术 )免疫荧光检查对细胞进行鉴定。结果　种植在培养瓶中的内皮细胞 12小时贴壁生长 ,48～ 72小时生长最快 ,7～ 10天汇合。内皮细胞呈接触抑制生长、呈鹅卵石样外观 ,FM术检测CD3 1和VⅢ -R -Ag均为阳性表达。 结论　消化酶灌注脐静脉消化内皮细胞是获取血管内皮细胞的一种好方法 ,可靠性大 ,成功率高 ,可以构建体外研究血管内皮细胞的模型     

电力电缆故障闪络二次检测法

目前,电力电缆故障的测试仪器和方法五花八门,本文所阐述的电力电缆故障闪络二次检测法,主要解决了单次采样法测试波形不易读和国内外二次脉冲以及多次脉冲法不易放电的问题。真正做到了快速、准确的检测电力电缆故障。     

血小板三种测定方法实验比较

本文对血小板三种测定方法——直接计数法、血涂片计数法和自动化仪器（东亚Ｆ—８００型血球计数仪）分析法作了方法比较实验研究。结果表明：自动化分析法准确度好、精密度高，直接计数法次之，与自动化法比较，其相关系数为０．９２１４，回归方程Ｙ＝０．８８６７Ｘ＋６．１５２８；血涂片法误差较大，与自动化法比较Ｐ＜０．０１，具有显著性差异。故本文认为血涂片法的推广应用尚有一定的局限性。     

酶法与苦味酸法测定血清肌酐水平的转换方法

目的：探索酶法与苦味酸法测定血清肌酐在不同水平段的测定偏差，并建立新旧方法测定结果的转换方法，以满足临床医生的需求。方法：用两种血清肌酐测定方法同时测定667例来我院门诊就医的不同疾病患者血清肌酐水平，并根据酶法测定值，将其分为5个水平组，统计两种方法的测定数据。结果：酶法与苦味酸法测定值在各水平组的平均值分别为：A：64．0μmol／L，92．7μmol／L；B：182．5μmol／L，201．9μmol／L；C：378．4μmol／L，384．6μmol／L；D：561．2μmol／L，549．4μmol／L；E：1077．7μmol／L，1025．7μmol／L。两种方法相关均良好，相关系数分别为0．971，0．987，0．950，0．983，0．994。结论：血清肌酐水平较低时，酶法测定值较与苦味酸法测定值低；在血清肌酐水平为471μmo]／L以上时，酶法因方法学优于苦味酸法，而使测定值能够达到真实水平；若已知酶法测定值，临床医生可通过以下公式y（苦味酸法）：0．9186x（酶法）＋34．385，得出苦味酸法测定值。反之，则可通过公式y（酶法）=1．0872x（苦味酸法）-37．065，得出酶法测定值。     

石家庄市三类艾滋病高危人群规模估计方法与结果

目的：了解石家庄市艾滋病高危人群规模,为艾滋病疫情估计提供依据。方法采用普查法估计暗娼人群规模,采用乘数法估计吸毒/注射吸毒人群规模,采用捕获-再捕获法调查估计男男性行为人群规模。结果石家庄市暗娼规模估计数量为6369人;吸毒人群规模估计5598人,其中,注射吸毒人群规模估计933人;男男性行为人群规模估计11878人。结论三类人群所占人口比例均较低,但规模估计结果均超过了日常掌握的情况,今后应进一步落实完善宣传、干预、监测等综合措施。     

清热、温阳、养阴为消渴病三大基本治法

消渴为气血津液病证,由于患者体质、病程、并发症以及医家的学术流派不同,其治法较多。该文主要归纳分析清热法、温阳法、养阴法三大治法的产生背景、治法、方药。清热法主要包含清热泻火生津、清热解毒法,其代表方药分别为白虎加人参汤、三黄丸;温阳法主要包含温补脾阳、温肾助阳法,其代表方药分别为附子理中丸、肾气丸;养阴法主要包含养肺阴、养脾阴、滋肾阴,其代表方药分别为麦门冬饮子、增液汤、六味地黄汤。     

部分头孢菌素类药物快速检测方法研究

目的建立同时检测多种头孢菌素类药物的方法,从而使得检验过程更加快捷方便。方法采用TLC法,应用适宜展开系统同时检测三种头孢菌素类药物,并应用HPLC法对此方法进行验证。结果所建立的展开系统可同时检测头孢曲松钠、头孢唑林钠和头孢噻肟钠三种药物。结论所建立的薄层色谱法专属性强、灵敏度高、重现性好,可以作为该类头孢菌素类药物真伪检测方法。     

吸附澄清-高速离心-微滤法制备菖蒲益智口服液

采用吸附澄清高速离心－微滤法制备菖蒲益智口服液,并与醇沉法和吸附澄清法工艺进行了比较。结果表明,吸附澄清－高速离心－微滤法工艺能够提高制剂的有效成分含量,实现连续化生产,具有简化工艺,缩短生产周期,提高制剂剂稳定性的优点。     

比较捣法、提插法与雀啄法三种针刺手法异同

针刺手法是影响针灸疗效的重要因素。针刺手法具有较强的实践操作性,现代医家对古籍中针刺手法的记载更有着不同的理解和发挥,故产生了种类多样的针刺手法。捣法、提插法与雀啄法均是以上下进退为主要操作形式的针刺手法,三者操作形式类似,但是,由于针刺幅度和频率不同,在临床治疗中产生的效果亦各不相同。捣法以大幅度的重捣轻提为主要操作特点,体现刺激量大、针感强的特征;提插法以幅度均匀的上提下插为主要操作特点,刺激量与针感因人因病等各异;雀啄法以进针原处的小幅度高频率的提插动作为主要操作特点,侧重于下插,刺激量与针感略小。临床应用中,可以根据病情的需要,运用不同刺激方式,对穴位发挥不同作用,从而提高临床疗效。     

三种血清尿素测定方法的比较

目的旨在找出三种测量尿素方法之间的异同处，以利于指导临床实验。方法在Beckman Coulter Synchron CX3上用尿素酶电极法，在Beckman Coulter Synchron CX4上用尿素酶速率法，在721分光光度计上用二乙酰一肟法，对这三种方法进行方法学比较。结果三种方法之间相关性良好。尿素酶电极法线性范围大于尿素酶速率法大于二乙酰一肟法。尿素酶电极法，尿素酶速率法精密度均明显大于二乙酰一肟法，尿素酶速率法的批内变异小于尿素酶电极法，而批间变异则大于尿素酶电极法。溶血对三种方法均有影响。结论三种方法均符合临床对尿素的检测要求，各有利弊，但尿素酶电极法准确、简便、快速、范围宽，应是未来尿素测量的发展方向。     

不同灭菌方法灭菌效果及对目标成分影响考察

目的:考察4种灭菌方法用于六味地黄方6种原生药粉灭菌的效果以及灭菌过程中对目标成分丹皮酚和熊果酸含量的影响。方法:分别用干热、流通蒸汽、臭氧、60Co辐射4种灭菌方法对六味地黄方6种原生药粉进行灭菌处理,检测灭菌前后原生药粉的微生物限度指标;用水蒸气蒸馏-UV法测定灭菌前后牡丹皮粉中丹皮酚含量,用薄层扫描法测定灭菌前后山茱萸粉中熊果酸含量。结果:60Co辐射灭菌、流通蒸汽灭菌和臭氧灭菌效果均较好,干热灭菌效果不太稳定。目标成分检测结果表明:60Co辐射灭菌和臭氧灭菌对丹皮酚影响较小,流通蒸汽灭菌对丹皮酚影响最大:4种灭菌方法对熊果酸的影响均较小。结论:综合灭菌效果和对目标成分的影响,六味地黄方原生药粉灭菌方法可选用60Co辐射灭菌或臭氧灭菌。