武汉市HIV-1相关基因序列分析及亚型分布

目的研究武汉市HIV感染人群中的HIV毒株的亚型分布特点和流行规律。方法采集武汉市60名已被确认为HIV-1感染者的抗凝全血样品,提取前病毒DNA,用巢式聚合酶链反应方法（nested-PCR）扩增病毒膜蛋白env基因的C2-V5区及gag基因的部分区段,对PCR纯化产物直接测序,并应用GCG软件对序列进行分析。结果通过PCR扩增得到60份样品的结果,其中env基因序列45份、gag基因序列52份。依据env和gag区基因序列,与HIV-1各个亚型国际参考株比较,通过系统进化分析,最后确定武汉市样品分属5个亚型,分别为HIV-1B亚型中的泰国B（B’）亚型32份,流行重组型CRF07-BC12份,流行重组型CRF01-AE9份,A亚型1份和C亚型6份。结论武汉市存在多种HIV-1亚型,应加强对HIV-1毒株亚型变异的监测,及时调整防治策略。     

广州市2004-2005年HIV-1感染者亚型分析

目的 了解广州市艾滋病病毒Ⅰ型(HIV-1)流行株的亚型及分布情况.方法 从2004-2005年采集的92份HIV-1抗体阳性者抗凝全血中,提取前病毒DNA,经套式聚合酶链反应(Nested-PCR)扩增gag和env区基因并测定序列,与国际标准参考序列比较确定亚型.结果 经系统进化树分析,92份样本中34份为CRF01AE,40份为CRF07BC,7份为CRF08BC,3份为欧美B,6份为泰国B(B'),2份为C.结论 广州市HIV-1流行株以CRF01AE和CRF07BC为主,也存在CRF08BC、B、B'及C亚型.     

广西地区人类免疫缺陷病毒-1流行毒株gag基因系统进化和基因变异特征分析北大核心CSCD

目的了解广西壮族自治区HIV-1流行毒株gag基因分子进化及遗传变异特征。方法收集2011年10月至2012年3月广西地区HIV-1感染者血液样本158份,采用反转录／套式PCR对HIV-1gag基因片段进行扩增并测序。运用MEGA5．03构建系统进化树,并计算gag区及各编码区段的基因离散率和选择压力（globleω）。两样本基因离散率的比较采用两独立样本t检验,多个样本的基因离散率比较采用单因素方差分析。结果158份样本中获得140条gag基因序列,存在4种亚型：CRF_01AE80份（57．1％）,CRF08BC46份（32．9％）,CRF07BC10份（7．1％）,B（B’）4份（2．9％）。gag基因离散率在CRF01AE亚型为0．036±0．001,CRF08BC亚型为0．031±0．002,CRF07-BC亚型为0．043±0．003,B（B’）亚型为0．102±0．006,差异有统计学意义（F=220．62,P〈0．01）。p17和p24编码区均受到负向选择压力作用,globlem〈1。各亚型p17编码区的globleω值相近,差异无统计学意义（F-0．761,P=0．469）,p24编码区的globlem值差异也无统计学意义（F=0．037,P=0．964）。结论广西地区HIV-1亚型以CRF_01AE为主,gag基因各编码区段在进化上相对保守,但HIV-1流行特征的变化可能会影响gag基因的遗传变异,应继续追踪检测。     

广州市男男性行为者HIV-1分子流行病学研究

目的了解广州市男男性行为人群（MSM）中,人类免疫缺陷病毒Ⅰ型（HIV-1）亚型流行状况和基因变异特征。方法从2006～2007年广州市发现的、全部19份经男男性传播感染的HIV-1阳性血清样本,应用套式聚合酶链式反应（Nested—PCR）分别扩增gag和fitly区基因,并测定、分析序列。结果被成功扩增的有17份样本,获得13份env基因序列和17份gag基因序列。经系统进化树分析,11份（64．71％）为CRF01_AE,2份（11．76％）为CRF07_BC,4份（23．53％）为B。各亚型组内基因离散率：在env区,CRF01_AE为（8．27±0．93）,CRF07_BC为（11．04±1．72）,B为（16．65±1．78）;在gag区,CRF01_AE为（5．36±0．68）,CRF07_BC为（4．29±1．14）,B为（11．75±1.35）。V3环顶端四肽分析显示：8份CRF01_AE和2份CRF07_BC V3环顶端四肽均为GPGQ;3份B亚型中2份为GPGR,1份为GWGR。根据V3环关键氨基酸推测辅助受体使用情况,结果显示：所有样本均被预测使用CCR5辅助受体。结论广州市MSM人群HIV-1感染者中,至少存在CRF01_AE、CRF07_BC 2种重组亚型和B亚型的流行,且大部分流行株可能为使用CCR5辅助受体的巨嗜细胞嗜性／NSI毒株。     

四川省2014年HIV-1分子流行病学调查北大核心

目的了解四川省艾滋病病毒Ⅰ型(HIV-1)流行毒株的亚型、人群和地域分布。方法通过抽样调查的方法,采集2014年7-9月新报告的、未经抗病毒治疗的HIV-1感染者的血样400份,采用巢式聚合酶链反应(Nested PCR)扩增HIV-1 pol和gag基因区,对获得的核酸序列进行系统进化分析。比较不同亚型毒株感染者首次随访的CD4^+T淋巴细胞(简称CD4细胞)水平。结果四川省HIV-1流行毒株的亚型有:CRF07_BC(58.22%)、CRF01_AE(29.50%)、CRF08_BC(4.96%)、CRF85_BC(3.39%)、B(2.09%)、C(0.78%)、CRF02_AG(0.52%),以及CRF07_BC/CRF01_AE重组型(0.52%)。毒株分布显示出明显的地域特征。CRF01_AE感染者的基线CD4细胞水平更低。结论以C亚型为骨架的BC重组亚型,在四川省表现出明显的流行优势。提示应结合流行毒株有针对性地提供艾滋病防治工作建议。     

CRF07-BC亚型HIV的gag-pol区基因序列分析

目的对2株人类免疫缺陷病毒1型(HIV-1)CRF07-BC亚型病毒的完整gag基因和部分pol基因进行基因重组和耐药位点突变分析。方法从确诊的HIV感染者的全血样本中提取基因组DNA,经套式聚合酶链反应(Nested-PCR)扩增后,将扩增产物进行纯化和测序,然后将所得序列进行系统进化树和氨基酸变异分析。用Simplot软件进行序列重组分析以确定重组断点区域,并分析其pol基因的耐药位点突变。结果在所研究的基因区段内,2份样本均未发现重组断点的变化,在蛋白酶区(PR)出现2个次要耐药相关突变,而未发现主要耐药相关突变。结论所研究的2株HIV-1CRF07-BC亚型病毒与在我国新疆地区广泛流行的CRF07-BC模式毒株非常接近,且不存在天然耐药的情况,适于抗逆转录类药物的应用。     

凉山州2009年HIV-1主要流行区分子流行病学调查

目的了解凉山州艾滋病病毒I型(HIV-1)流行毒株的亚型、传播途径和病毒在人群中的分布。方法运用反转录巢式聚合酶链反应(PCR)的方法,扩增2009年凉山州266份血浆样本中HIV的gag基因片段。对获得的核酸序列进行系统进化分析。结果凉山HIV-1的流行毒株为CRF07_BC和CRF08_BC毒株,其中CRF07_BC比例为98.3%,为最主要的流行毒株。266份HIV-1阳性样本中,静脉注射吸毒感染者的比例为63.5%,其次为异性性接触感染者,比例为14.3%。结论凉山HIV-1感染者最主要的感染途径是静脉注射吸毒,最主要的流行毒株是CRF07_BC毒株,具有共同的病毒来源。     

浙江省2003-2005年HIV-1感染者分子流行病学研究

目的掌握浙江省2003-2005年新发现感染者艾滋病病毒Ⅰ型(HIV-1)毒株基因亚型分布和变异情况。方法对2003-2005年浙江省境内检测新发现的HIV-1感染者进行一般流行病学调查并采集血样,提取前病毒DNA,使用套式聚合酶链反应对gag基因区进行扩增并测定其序列。结果采集143份血样,112份扩增阳性,检出CRF01-AE亚型43例,CRF07-BC 37例,CRF08-BC 11例,B亚型20例,CRF02-AG 1例。CRF01-AE分布在11个市中的9个市,主要存在于异性性途径感染者中(53.5%),并已成为外省籍注射吸毒感染者的主要构成(44.8%)。CRF01-AE和CRF07-BC的亚型组内平均离散率在静脉吸毒感染者和性传播感染者中比较,差异有统计学意义。结论浙江省2003-2005年新检出感染者HIV-1毒株呈现多重组型别特征,CRF01-AE成为分布最广的类别,呈现扩大流行的趋势。HIV-1在性乱人群之间的传播要比在注射吸毒人群复杂,变异更大。     

九江市HIV-1流行毒株基因序列测定和亚型分析

目的了解九江市艾滋病病毒1型(HIV-1)流行毒株的亚型分布情况。方法对采集的6份九江市HIV-1感染者的血浆样品进行RT-PCR扩增,获得gag基因的核酸片断进行核苷酸序列分析。结果在6份样品中发现B’亚型HIV-1毒株4株,B亚型和A/E重组亚型HIV-1毒株各1株。结论HIV-1流行毒株亚型在九江市分布情况复杂,防控形势严峻。     

广东口岸HIV流行毒株基因亚型分析

目的通过对广东口岸国际旅行人员中人类免疫缺陷病毒(HIV)感染者的亚型分析,监测出入境口岸HIV毒株的流行状况及其变化。方法从36例HIV-1抗体阳性样品中提取病毒RNA,逆转录后套式聚合酶链反应(Nested-PCR)扩增HIVgag基因核心蛋白p17/p24片断,对PCR产物直接进行核苷酸序列测定,所获序列与各亚型国际参考序列比对,确定基因型并进行系统进化树分析。结果36例样品gag区序列分析共发现8种HIV-1亚型和重组型,其中CRF BC重组型14例(38.9%)(CRF07 BC重组型13例,CRF08 BC重组型1例),CRF01AE重组型12例(33.3%),CRF02 AG重组型3例(8.3%),B亚型2例(5.6%),Al、C、G及J亚型各1例(2.8%),1例样品分型不明确。这些不同亚型的感染者来自包括中国在内的11个不同国家和地区。结论广东口岸国际旅行人员中HIV-1亚型和重组型种类复杂多样,通过监测国际旅行人员中HIV感染者基因型分布及其变异,发现和鉴定新型毒株,对于艾滋病的预防和控制十分重要。     

妊娠时间与肺结核复发的相关性研究及诊治对策

目的 分析肺结核史患者妊娠时间和肺结核复发间相关性.方法 选取我院收治的有肺结核史的妊娠妇女576例作为研究对象,对其妊娠前肺结核治疗、治愈后妊娠时间、妊娠后复发肺结核等进行分析,总结有肺结核史育龄女性的妊娠时间和肺结核复发之间的关系.结果 肺结核治愈后不同时间段妊娠者的结核复发率比较,差异具有显著性（P＜0.05）,停药后间隔时间越久妊娠,肺结核复发的几率越小.结论 加强孕期痰菌检查,及早发现复发肺结核,提高母婴安全.     

我国骨关节结核诊治的回顾与展望

骨关节结核是危害人们健康的严重感染性疾病,近95％由他处结核病继发而来.罹患骨关节结核疾病后几乎均将致残,严重影响人们的健康、工作和生活.建国以来在党和国家的关心和支持下,骨关节结核的诊治水平取得了长足进步.时至今日,由于多种原因,学科发展和被重视程度受到一定的制约,同整个医疗行业的发展不相适应.回顾过去,展望未来,我们需要重新审视骨关节结核的诊治方法,努力推进骨关节结核诊疗技术的科学发展.     

Effect of phosphorylation of MAPK and Stat3 and expression of c-fos and c-jun proteins on hepatocarcinogenesis and their clinical significance

AIM To study the effect of phosphorylation ofMAPK and Stat3 and the expression of c-fos andc-jun proteins on hepatocellular carcinogenesisand their clinical significance.METHODS SP immunohistochemistry was usedto detect the expression of p42/44~(MAPK), p-Stat3,c-fos and c-jun proteins in 55 hepatocellularcarcinomas (HCC) and their surrounding livertissues.RESULTS The positive rates and expressionlevels of p42/44~(MAPK), p-Stat3, c-fos and c-junproteins in HCCs were significantly higher thanthose in pericarcinomatous liver tissues (PCLT).A positive correlation was observed between theexpression of p42/44~(MAPK) and c-fos proteins, andbetween p-Stat3 and c-jun, but there was nosignificant correlation between P42/44~(MAPK) and p-Stat3 in HCCs and their surrounding livertissues.CONCLUSION The abnormalities of Ras/Raf/MAPK and JAKs/ Stat3 cascade reaction maycontribute to malignant transformation ofhepatocytes. Hepatocytes which are positive forp42/ 44~(MAPK), c-fos or c-jun proteins may bepotential malignant pre-cancerous cells.Activation of MAPK and Stat3 proteins may be anearly event in hepatocellular carcinogenesis.     

Replication and Inhibitors of Enteroviruses and Parechoviruses

The Enterovirus (EV) and Parechovirus genera of the picornavirus family include many important human pathogens, including poliovirus, rhinovirus, EV-A71, EV-D68, and human parechoviruses (HPeV). They cause a wide variety of diseases, ranging from a simple common cold to life-threatening diseases such as encephalitis and myocarditis. At the moment, no antiviral therapy is available against these viruses and it is not feasible to develop vaccines against all EVs and HPeVs due to the great number of serotypes. Therefore, a lot of effort is being invested in the development of antiviral drugs. Both viral proteins and host proteins essential for virus replication can be used as targets for virus inhibitors. As such, a good understanding of the complex process of virus replication is pivotal in the design of antiviral strategies goes hand in hand with a good understanding of the complex process of virus replication. In this review, we will give an overview of the current state of knowledge of EV and HPeV replication and how this can be inhibited by small-molecule inhibitors.     

Effect of phosphorylation of MAPK and Stat3 and expression of c-fas and c-jun proteins on hepatocarcinogenesis and their clinical significance

AIM To study the effect of phosphorylation ofMAPK and Stat3 and the expression of c-fos andc-jun proteins on hepatocellular carcinogenesisand their clinical significance.METHODS SP immunohistochemistry was usedto detect the expression of p42/44MAPK, p-Stat3,c-fos and c-jun proteins in 55 hepatocellularcarcinomas (HCC) and their surrounding livertissues.RESULTS The positive rates and expressionlevels of p42/44MAPK, p-Stat3, c-fos and c-junproteins in HCCs were significantly higher thanthose in pericarcinomatous liver tissues (PCLT).A positive correlation was observed between theexpression of p42/44MAPK and c-fos proteins, andbetween p-Stat3 and c-jun, but there was nosignificant correlation between p42/44MAPK and p-Stat3 in HCCs and their surrounding livertissues.CONCLUSION The abnormalities of Ras/Rat/MAPK and JAKs/ Stat3 cascade reaction maycontribute to malignant transformation ofhepatocytes. Hepatocytes which are positive forp42/ 44MAPK, c-fos or c-jun proteins may bepotential malignant pre-cancerous cells.Activation of MAPK and Stat3 proteins may be anearly event in hepatocellular carcinogenesis.     

心电图、心电向量图与冠状动脉造影结果对比分析

目的:通过分析心电图(Electrocardiogram,ECG)和心电向量图(Vectorcardiogram,VCG)的改变与冠脉造影（CAG）结果进行对比,探讨ECG、VCG在冠状动脉病变中的诊断价值。方法: 选择2008年1月~2009年12月临床拟诊断为冠心病患者108例,行常规ECG、VCG检查,并于1周内进行CAG,对检查结果依据各自的诊断标准进行判定,以CAG为标准诊断法,利用四格表法,计算相关评价真实性的指标并进行比较。结果: ①VCG检测的灵敏度、特异度、准确度显著高于ECG(P<0.05,P<0．01)。②ECG、VCG阳性率与冠脉病变支数组间比较:在单支病变、双支病变中,VCG阳性率明显高于ECG(P<0.05),左主干或三支病变无统计学意义;组内比较:ECG组左主干或三支病变组较单支病变、双支病变阳性率高(P<0.05,P<0.01);VCG组左主干或三支病变组较单支病变阳性率高(P<0.05);与双支病变阳性率比较无统计学意义;③ECG、VCG阳性率与冠脉病变程度组间比较:冠脉病变狭窄50%～69%的VCG阳性率明显高于ECG (P<0.05),其他两组阳性率比较无统计学意义;组内比较:ECG组冠脉病变狭窄≥90%较50%～69%、70%～89%的阳性率高(P<0.05,P<0.01); VCG组狭窄≥90%较50%～69%阳性率高（P<0.01),其他无统计学意义。结论: VCG对冠心病检测价值显著高于ECG。     

Detection and characterization of the product of hydroethidine and intracellular superoxide by HPLC and limitations of fluorescence

Here we report the structural characterization of the product formed from the reaction between hydroethidine (HE) and superoxide (O(2)(.-)). By using mass spectral and NMR techniques, the chemical structure of this product was determined as 2-hydroxyethidium (2-OH-E(+)). By using an authentic standard, we developed an HPLC approach to detect and quantitate the reaction product of HE and O(2)(.-) formed in bovine aortic endothelial cells after treatment with menadione or antimycin A to induce intracellular reactive oxygen species. Concomitantly, we used a spin trap, 5-tert-butoxycarbonyl-5-methyl-1-pyrroline N-oxide (BMPO), to detect and identify the structure of reactive oxygen species formed. BMPO trapped the O(2)(.-) that formed extracellularly and was detected as the BMPO-OH adduct during use of the EPR technique. BMPO, being cell-permeable, inhibited the intracellular formation of 2-OH-E(+). However, the intracellular BMPO spin adduct was not detected. The definitive characterization of the reaction product of O(2)(.-) with HE described here forms the basis of an unambiguous assay for intracellular detection and quantitation of O(2)(.-). Analysis of the fluorescence characteristics of ethidium (E(+)) and 2-OH-E(+) strongly suggests that the currently available fluorescence methodology is not suitable for quantitating intracellular O(2)(.-). We conclude that the HPLC/fluorescence assay using HE as a probe is more suitable [corrected] for detecting intracellular O(2)(.-).     

大鼠骨髓间充质干细胞的分离培养和外源基因的导入

目的探讨绿色荧光蛋白基因转染骨髓间质干细胞的可行性。方法采用F icoll-PaqueTMP lus淋巴细胞分离液,根据细胞密度梯度原理,分离大鼠骨髓间充质干细胞(rM SC s)并进行体外原代培养和传代扩增,倒置相差显微镜观察细胞生长情况,免疫细胞化学法对其初步鉴定。流式细胞仪分析转染效率。结果原代和传代培养的细胞呈现梭形外观,具有较强的生长增殖能力;细胞均一表达CD44、CD54、CD106、CD29抗原。电穿孔法转染rM SC s转染率为32.8%±3%。结论采用比重为1.077 g/L的F icoll-PaqueTMP lus能分离获得大鼠骨髓间充质干细胞,经原代培养和传代培养能够迅速扩增。电穿孔法具有较高的介导外源基因表达于rM SC s的效率。     

Overweight and Obesity and Progression of ADPKD

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医源性消化道出血常见病因及其防治

目的分析医源性消化道出血的常见病因,并探讨防治措施。方法就临床所见的69例医源性消化道出血进行分析。结果医源性消化道出血分布于临床各科室,病因各不相同,但以外科手术、外伤、脑血管意外、。肾功能衰竭、呼吸功能衰竭、激素治疗、阿司匹林治疗等为主,临床上多以黑便为主要症状;对于已发生的医源性消化道出血,及时予制酸剂和胃黏膜保护剂治疗,能及时止血,大出血时经积极止血及抗休克治疗,甚至内镜治疗效果良好。结论医源性消化道出血各个临床科室均常见,病因各异,经积极、合理的治疗多预后良好。