银松素治疗Nrf2-/-小鼠少弱精症作用机制研究

目的：探究银松素(pinosylvin)对Nrf2基因敲除小鼠少弱精症的治疗作用及机制。方法：将实验小鼠分为野生型(WT)组、Nrf2^-/-组和Nrf2^-/-+pinosylvin组,Nrf2^-/-+pinosylvin组小鼠给予100 mg/kg银松素灌胃,持续灌胃4周,处死小鼠取出睾丸及附睾组织。使用计算机辅助分析系统检测各组小鼠精子浓度与精子活力;苏木素伊红染色观察小鼠睾丸及附睾病理变化;酶联免疫吸附法检测各组小鼠睾丸组织中丙二醛(malondialdehyde,MDA)及活性氧(reactive oxygen species,ROS)水平;Western blot检测各组小鼠睾丸组织中铁死亡相关蛋白谷胱甘肽过氧化物酶4(glutathione peroxidase 4,GPX4)和凋亡相关蛋白Bax、P53表达。结果：与WT组小鼠比较,Nrf2^-/-组小鼠精子浓度和精子活力明显降低,差异均有统计学意义(P<0.05),表明Nrf2^-/-小鼠出现少弱精症。病理切片染...     

前额叶皮质区小胶质细胞活化对卒中后抑郁小鼠远期空间记忆功能的影响

目的:探讨前额叶皮质区小胶质细胞活化对卒中后抑郁小鼠远期空间记忆功能的影响。方法:取48只C57BL/6雄性小鼠按照随机数字表法分为假手术组、卒中组、卒中后抑郁组和抑郁组,另取36只小鼠按照随机数字表法分为溶剂组、恩诺沙星组和米诺环素组,每组12只。采用大脑中动脉栓塞(middle cerebral artery oc...     

麝香保心丸对小鼠缺血性脑卒中的保护作用及机制

 目的 探究麝香保心丸（Shexiang Baoxin Pill,SBP）在小鼠缺血性脑卒中的保护作用及机制。方法 通过大脑中动脉阻塞（middle cerebral artery occlusion,MCAO）构建脑缺血性卒中模型,将96只C57BL/6小鼠随机分成4组：假手术（Sham）组、模型（ischemia/reperfusion,I/R）组、低剂量麝香保心丸（LSBP,22.5 mg/kg）组和高剂量麝香保心丸组（HSBP,45 mg/kg）,每组24只。灌胃4周后制备小鼠MCAO模型。记录各组小鼠的大脑梗死体积及脑组织含水量,利用免疫荧光技术分析激活的小胶质细胞数量,采用qRT-PCR检测炎症因子的表达,通过Western blot法分析NF-κB信号通路相关蛋白质的表达情况。结果 与I/R组相比,LSBP组和HSBP组大脑梗死体积减少,脑组织含水量降低,激活的小胶质细胞数量减少,同时促进小胶质细胞由M1型向M2型极化,并抑制NF-κB信号通路的激活。结论 SBP可以减轻由缺血性脑卒中引起的小鼠脑组织损伤,其机制可能与改变小胶质细胞M1/M2的极化状态和抑制NF-κB信号通路的激活有关。     

C57BL/6小鼠与BALB/c小鼠对脓毒症反应的差异

目的 探讨C57BL/6与BALB/c两种小鼠对脓毒症的反应能力.方法 C57BL/6小鼠和BALB/c小鼠各30只,分别随机分成假手术组与脓毒症组,每组15只.脓毒症组用盲肠结扎穿孔法(CLP)建立小鼠脓毒症模型.术后6h,每组随机选出5只,Bio-plex悬浮蛋白芯片系统检测其外周血IL-1β、IL-2、IL-4,IL-5、IL-10、GM-CSF、IFN-γ和TNF-α的浓度.剩余小鼠用于1周存活率分析.结果 两品系小鼠假手术组1周存活率均为100%.C57BL/6小鼠脓毒症组1周存活率为10%,BALB/c小鼠脓毒症组存活率为50%.C57BL/6小鼠脓毒症组的存活率显著低于BALB/c小鼠脓毒症组(P＜0.05).与假手术组相比,C57BL/6小鼠脓毒症组分泌的IL-4、TNF-α和IL-10明显升高.而BALB/c小鼠脓毒症组分泌的8种细胞因子较假手术组均未见明显增加.结论 C57BL/6与BALB/c两种小鼠对脓毒症的反应能力有差异,C57BL/6小鼠反应更敏感.     

右美托咪定减轻脑缺血再灌注大鼠氧化应激损伤的作用

目的 探索右美托咪定(Dex)后处理对脑缺血再灌注大鼠氧化应激损伤及转录因子E2相关因子2(Nrf2)/抗氧化反应元件(ARE)信号通路的影响.方法 将30只SD大鼠随机分为假手术组、模型组和Dex组各10只.模型组和Dex组参照改良Longa法制备脑动脉缺血再灌注模型.Dex组于再灌注即刻腹腔注射100μg/kg的Dex(浓度为10 mg/L).再灌注24 h后,对各组大鼠进行神经功能缺失评分;TTC染色法检测大鼠脑梗死体积分数;ELISA法测定脑组织超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)和一氧化氮(NO)的水平;实时定量聚合酶链反应(RT-PCR)和免疫印迹(Western blot)检测B细胞淋巴瘤2(Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)、裂解的半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3(cleaved caspase-3)、转录因子E2相关因子2(Nrf2)、血红素加氧酶(HO-1)和醌氧化还原酶1(NQO-1)的表达水平;HE染色和TUNEL染色检测脑组织损伤.结果 与假手术组相比,模型组和Dex组大鼠神经功能缺失评分、细胞凋亡率、MDA和NO水平升高(P<0.05),脑组织SOD活性下降(P<0.05),Nrf2、HO-1、NQO-1、cleaved caspase-3/Bcl-2、Bax/Bcl-2的表达上调(P<0.05);与模型组相比,Dex组大鼠神经功能缺失评分和脑梗死体积分数、细胞凋亡率、MDA和NO水平下降(P<0.05),脑组织SOD活性升高(P<0.05),Nrf2、HO-1、NQO-1的表达上调(P<0.05),cleaved caspase-3/Bcl-2、Bax/Bcl-2的表达下调(P<0.05),HE染色显示脑组织病理变化减轻.结论 Dex后处理可以减轻CIRI大鼠的氧化应激损伤,其作用机制可能与激活Nrf2/ARE信号通路有关.     

敲除TSP1通过氨基酸和糖代谢通路对阿霉素所致心肌损伤的作用

目的 利用代谢组学方法阐明敲除血小板反应蛋白1(TSP1)通过调节小分子化合物的代谢,减轻阿霉素(ADM)致心肌损伤。方法 以24只野生型C57BL/6小鼠和24只TSP1基因敲除(TSP1^-/-)小鼠为实验对象,分为4组：WM组(n=12)、TSP1^-/-组(n=12)和WM-ADM组(n=12)、TSP1^-/--ADM组(n=12)。WM组和TSP1^-/-组小鼠腹腔注射生理盐水,WM-ADM组和TSP1^-/--ADM组小鼠腹腔注射ADM以建立慢性心功能衰竭(CHF)模型。以血清生化[肌酸激酶(creatine kinase, CK)、肌酸激酶同工酶(creatine kinase isoenzymes, CK-MB)、乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase, LDH)]和心脏组织苏木精-伊红(hematoxylin-eosin, HE)染色为指标评价注射ADM后小鼠心肌损伤情况,以基于核磁共振(¹HNMR)的代谢组学技术来研究4组小鼠血...     

小鼠原代海马神经元培养方法优化及HT22-GRK2-/-细胞构建

目的 探究并优化新生小鼠海马神经元体外原代培养方法；构建小鼠海马神经元HT22细胞中G蛋白偶联受体激酶2(GRK2)基因敲除细胞株(HT22-GRK2^-/-)。方法 为优化小鼠原代海马神经元的培养，取新生1～2 d C57BL6/J小鼠海马组织，经胰酶消化后吹打形成细胞悬液，于Neurobasal-A培养基中加细胞培养添加剂维持细胞生长。利用CRSIPR/Cas9基因编辑技术构建HT22-GRK2^-/-细胞株，并通过免疫荧光染色和Western blot检测GRK2敲除效率。结果 以3×10⁷/孔密度接种的新生小鼠原代海马神经元以无血清培养方式接种于6孔板中，可获得纯度高、活性好的小鼠原代海马神经元细胞；HT22-GRK2^-/-细胞株构建成功。结论 成功建立并优化小鼠海马神经元体外原代培养方法，利用CRSIPR/Cas9基因编辑技术成功构建HT22-GRK2^-/-细胞株。     

基于Nrf2信号通路研究丁苯酞对高危缺血性卒中的保护作用

目的:在急性脑梗死小鼠模型中,检测预使用丁苯酞(n-butylphthalide, NBP)是否可通过核因子红系2相关因子2(nuclear factor-erythroid 2-related factor 2,Nrf2)通路减轻缺血性脑损伤。方法:Nrf2^-/-纯合子和Nrf2^+/+野生型小鼠随机分为3组,分别为对照组(C)、低剂量给药组(20 mg/kg)和高剂量给药组(60 mg/kg),每组6只。将丁苯酞用植物油按30 mg/mL溶解,低剂量给药组以20 mg/kg每天一次灌胃,高剂量给药组以60 mg/kg每天一次灌胃,对照组小鼠给予同等剂量的植物油灌胃,1次/d,持续给药4周。4周末采用电凝法制备小鼠局灶性脑梗死模型(d MCAO)。在脑梗死模型3 d及10 d后,通过Longa评分评估小鼠的脑神经功能。通过氯化三苯基四氮唑(triphenyltetrazolium chloride, TTC)染色检测小鼠的脑梗死体积,并通过Western blot及免疫荧光技术检测小鼠脑组织中Nrf2及H奎尼酮氧化还原酶1(NADPH:qui...     

包虫抗原B通过肿瘤坏死因子受体2调控巨噬细胞极化对小鼠免疫性血小板减少症的改善作用

目的：探讨包虫抗原B (HA-B)对小鼠免疫性血小板减少症(ITP)的改善作用,阐明其相关作用机制。方法：将野生型(WT)和肿瘤坏死因子受体2 (TNFR2)基因敲除(TNFR2^-/-)的C57/B6小鼠分为WT对照组、WT-ITP模型组、WT-HA-B组、TNFR2^-/-对照组、TNFR2^-/-ITP模型组和TNFR2^-/-HA-B组,检测各组小鼠体质量、脏器指数和血常规指标,采用流式细胞术检测各组小鼠外周血中M2巨噬细胞百分率,酶联免疫吸附试验(ELISA)法检测各组小鼠血清中精氨酸酶1(Arg1)、白细胞介素10 (IL-10)、诱导型一氧化氮合成酶(iNOS)和白细胞介素6 (IL-6)水平,采用实时荧光定量PCR (RT-qPCR)法检测各组小鼠骨髓来源巨噬细胞(BMDM)中Arg1、IL-10、iNOS和IL-6表达水平。分别将WT对照组和TNFR2^-/-对照组小鼠BMDM诱导为M2巨噬细胞(WT M2组和TNFR2^-/-M2组),加入HA-B...     

小鼠脑梗死后脑组织HDAC9的表达及其意义

目的 检测线栓法大脑中动脉阻塞(MCAO)后小鼠不同部位脑组织HDCA9的表达及胞内分布变化,探讨HDAC9与缺血性脑卒中的关系.方法 21只雄性C57BL/6小鼠随机分为假手术组(9只)与手术组(12只),将手术组术后Longa评分2~3分的小鼠纳入MCAO组(9只),术后3 d断头取脑,采用免疫荧光染色观察HDAC9脑组织内分布位置与胞内分布变化,采用Western免疫印迹法与实时荧光定量PCR法检测各组不同部位(梗死侧/对侧皮层/MCAO组小脑/假手术组皮层/假手术组小脑)HDAC9的表达变化.结果 (1)免疫荧光染色:脑梗死后,梗死灶周围脑组织HDAC9的荧光强度较其他部位明显增强.高倍镜下与假手术组对比,梗死灶周围HDAC9胞浆内表达增多,核内表达减少;(2)蛋白与mRNA表达检测:与各组对比,梗死侧脑组织HDAC9表达显著升高,具有统计学差异(均P<0.05),蛋白与mRNA表达情况相一致.结论 HDAC9与缺血性脑卒中密切相关,可能参与其病理生理过程.     

七叶皂苷钠通过调节Keap1/Nrf2/HO-1信号通路抑制神经元细胞凋亡改善蛛网膜下腔出血后的早期脑损伤

【目的】探讨七叶皂苷钠对小鼠蛛网膜下腔出血的治疗作用及机制。【方法】将C57BL/6J小鼠随机随机分为3组,包括假手术组(32只)、模型组(48只)、七叶皂苷钠组(38只)。模型组、七叶皂苷钠组小鼠采用颈内动脉穿刺法建立蛛网膜下腔出血模型。假手术组除不刺穿颈内动脉外接受相同的手术。造模结束1 h后,七叶皂苷钠组小鼠给予一次性腹腔注射七叶皂苷钠2.8 mg/kg,假手术组和模型组小鼠给予一次性腹腔注射等体积生理盐水。观察其蛛网膜下腔出血评分,神经功能及血脑屏障变化情况;原位末端脱氧核苷酸转移酶(TdT)标记(TUNEL)染色/神经元核抗原(NeuN)/免疫荧光染色法观察神经元凋亡的变化;蛋白免疫印迹法检测脑组织Kelch样环氧氯丙烷相关蛋白1(Keap1)、核因子E2相关因子2(Nrf2)、血红素氧合酶1(HO-1)蛋白表达的变化。【结果】与假手术组比较,模型组SAH评分增加,Garcia评分和平衡木测试评分降低,脑含水量、伊文思蓝渗出量增加,脑组织Keap1蛋白表达水平降低,而Nrf2、HO-1蛋白表达水平升高(均P<0.05)。与模型组比较,七叶皂苷钠组SAH评分降低,Garcia评分和平衡木测试评分升高,脑含水量、伊文思蓝渗出量减少,脑组织Keap1蛋白表达水平升高,而Nrf2、HO-1蛋白表达水平降低(均P<0.05)。【结论】七叶皂苷钠可通过调节Keap1/Nrf2/HO-1信号通路抑制神经元细胞凋亡改善小鼠蛛网膜下腔出血后的早期脑损伤。     

不同剂量MOG抗原免疫诱导小鼠自身免疫性脑脊髓炎模型的比较

目的 比较不同剂量髓鞘少突胶质细胞糖蛋白(myelin oligodendrocyte glycoprotein,MOG_(35-55))免疫诱导C57BL/6小鼠实验性自身免疫性脑脊髓炎(experimental autoimmune encephalomyelitis,EAE)的作用.方法 将C57BL/6小鼠分为正常组和三组不同剂量MOG_(35-55)诱导的EAE模型组,共4组.模型组分别以每只200、100、50μg的MOG_(35-55)与完全弗氏佐剂(complete Freund''s adjuvant,CFA)混合的乳化抗原皮下注射免疫诱导EAE模型,正常组以生理盐水替代.观察不同剂量MOG_(35-55)对C57BL/6小鼠体重、发病率以及神经功能评分等影响,同时取小鼠脑和脊髓,利用光镜和透射电镜观察小鼠病理组织学改变.结果 三组不同剂量MOG_(35-55)均能诱导EAE模型,发病率为100%,呈慢性单相病程,病理学观察发现小鼠脑和脊髓有炎性细胞浸润、脱髓鞘及轴突损伤等改变.但小剂量组在体重减轻、临床症状评分及病理学改变等方面均较中、大剂量组明显.结论 用MOG_(35-55)50μg剂量免疫诱导的C57BL/6小鼠EAE模型稳定,可在今后的研究中应用.     

lncRNA C2dat2调控小鼠大脑中动脉栓塞再灌注损伤及神经元自噬和凋亡

目的分析lncRNA C2dat2调控小鼠大脑中动脉栓塞再灌注损伤(MCAO/R)及神经元自噬、凋亡的作用机制。 方法构建小鼠MCAO/R模型,实验分为假手术组、模型组、negative shRNA组和C2dat2 shRNA组。HE染色检测大脑组织病理学变化,改良神经功能缺陷评分评估小鼠神经功能,TUNEL染色检测大脑组织细胞凋亡水平,荧光定量PCR检测脑组织半胱氨酸蛋白酶-3(Caspase-3)、磷酸化p38丝裂原活化蛋白激酶(p-p38MAPK)mRNA表达。Western blotting检测脑组织自噬蛋白水平。 结果模型组小鼠脑组织病理损伤明显,降低C2dat2表达后病理损伤明显改善。除假手术组外,神经功能缺陷评分其他组均随时间依次下降,且C2dat2 shRNA组低于negative shRNA组(P＜0.05)。细胞凋亡率模型组和negative shRNA组高于假手术组,C2dat2 shRNA组低于negative shRNA组(P＜0.05)。LC3 Ⅱ/LC3 Ⅰ、Belin 1、Caspase-3和p-p38MAPK表达水平模型组和negative shRNA组高于假手术组,C2dat2 shRNA组低于negative shRNA组(P＜0.05)。 结论C2dat2表达下调可减轻小鼠MCAO/R损伤,抑制细胞自噬和凋亡,其机制可能与MAPK信号通路有关。     

白细胞介素-18在小鼠缺血性脑卒中的损伤作用及其机制

目的:探讨白细胞介素（IL）-18在小鼠缺血性脑卒中的损伤作用及其机制。方法:采用C57BL/6J成年雄性小鼠构建光化学法诱导局灶性大脑皮层缺血性脑卒中模型,随机分为对照组、脑梗死组、IL-18分泌型结合蛋白（IL-18BP）治疗组,每组18只。术后14 d进行神经功能评分并进行HE染色测量小鼠脑梗死面积。术后3 d实时荧光定量PCR检测小鼠脑组织中肿瘤坏死因子-α（TNF-α）、IL-1β、IL-6和IL-10的表达,流式细胞术检测小鼠脑组织中小胶质细胞表型。结果:与脑梗死组相比,IL-18BP治疗组神经功能显著改善并且脑梗死面积显著降低（t=2.750、2.235,均P<0.05）。IL-18BP治疗组脑组织中TNF-α、IL-1β和IL-6的表达显著降低（t=3.091、2.328、3.443,均P<0.05）,IL-10的表达升高（t=4.997,P<0.05）。与脑梗死组相比,IL-18BP治疗组脑组织中M1型小胶质细胞数量明显降低（t=4.779,P<0.05）,M2型小胶质细胞数量明显升高（t=2.619,P<0.05）。结论:在缺血性脑卒中,IL-18可介导免疫炎性损伤并发挥调节作用。     

雌激素缺乏对小鼠抑郁样行为和海马线粒体功能的影响

目的 阐明雌激素缺乏对小鼠抑郁样行为和海马线粒体功能的影响，并探讨其中的联系。方法 将33只C57BL/6雌性小鼠随机分为假手术(Sham)组、去卵巢(Ovx)组、去卵巢+雌激素(Ovx+E₂)组，建立假手术和去卵巢模型，术后1周，Ovx+E₂组小鼠腹部皮下注射17β-雌二醇(E₂)持续4周。另取48只C57BL/6雌性小鼠随机分为假手术(Sham)组、假手术+MnTBAP(Sham+Mn)组、去卵巢(Ovx)组、去卵巢+MnTBAP(Ovx+Mn)组，Sham+Mn组和Ovx+Mn组海马注射锰(Ⅲ)(四苯甲酸)卟啉氯化物(MnTBAP)持续1周。利用糖水偏好实验和强迫游泳实验检测各组小鼠的抑郁样行为。提取小鼠的海马组织线粒体，研究各组动物海马线粒体ATP合成、线粒体膜电位和活性氧(ROS)生成情况。结果 与Sham组相比，Ovx组小鼠表现出抑郁样行为及海马线粒体功能异常，包括线粒体ATP合成减少、线粒体膜电位降低和ROS生成增多，雌激素替代治疗可缓解这种抑郁样行为并逆转海马线粒体功能的障碍；海马注射MnTBAP改善线粒...     

米诺环素抑制星形胶质细胞活化改善老年小鼠70%肝切除手术后远期学习和记忆能力

目的:评价米诺环素对老年C57BL/6小鼠术后30 d学习和记忆能力的影响,并探讨星形胶质细胞在此过程中的作用?方法:45只雄性C57BL/6老年小鼠随机分为3组(每组15只):假手术组,仅接受皮肤切开手术;手术组,该组小鼠接受70%肝切除手术但不接受药物治疗;米诺环素组,术后每天腹腔注射45 mg/kg米诺环素,连续30 d,每组15只?利用Morris水迷宫测试其逃避潜伏期和游泳距离以判断小鼠术后学习记忆能力的改变,行为学测试结束后即刻取小鼠海马组织,利用real-time PCR 检测炎性细胞因子TNF-α和IL-6 mRNA的相对表达量,利用Western blot检测胶质纤维酸性蛋白(GFAP)和离子钙接头蛋白抗体-1(Iba-1)的表达水平,另外取部分海马组织制作冰冻切片样本行免疫组织化学检测?结果:Morris 水迷宫测试显示手术组小鼠逃避潜伏期和游泳距离均延长,显著长于假手术组和米诺环素组(P < 0.05);手术组小鼠海马组织TNF-α mRNA表达水平显著高于假手术组和米诺环素组(P < 0.05),米诺环素组小鼠TNF-α mRNA的表达显著少于手术组(P < 0.05);手术组和米诺环素组小鼠IL-6 mRNA的表达水平显著高于假手术组(P < 0.001),米诺环素组小鼠IL-6 mRNA的表达显著少于手术组(P < 0.001);手术组和米诺环素组GFAP的表达显著高于假手术组(P < 0.001),米诺华素组GFAP的表达水平显著少于手术组(P < 0.001),3组Iba-1的表达水平无差异(P > 0.05);海马组织免疫组化星形胶质细胞的变化与GFAP的变化一致?结论:海马组织星形胶质细胞活化可能与部分肝切除老年小鼠远期学习和记忆能力下降有关,米诺环素可能通过降低TNF-α和IL-6 mRNA的表达,抑制星形胶质细胞的活化改善老年小鼠术后远期学习和记忆能力?     

实验性自身免疫性脑脊髓炎(EAE)C57BL/6J小鼠模型构建

目的建立慢性-非缓解的实验性自身免疫性脑脊髓炎(experimental autoimmune encephalomyelitis,EAE)模型,以便用于多发性硬化症的研究和治疗。方法采用背部多点MOG35-55免疫建立EAE模型,模型期间按Benson评分标准对EAE的病程进行临床评估,取发病高峰期脊髓和脑组织进行H&E染色,观察炎症细胞浸润情况。结果经该方法建立C57BL/6J小鼠EAE模型,具有稳定、发病率高的特点。对EAE小鼠的脊髓、脑组织进行的病理学检测结果表明,与对照组小鼠相比,EAE小鼠的脊髓、脑组织中炎性细胞浸润增多。结论本研究成功构建了MOG35-55免疫的C57BL/6J EAE小鼠模型。     

小鼠慢性脑血流低灌注状态的行为学检测及病理学观察

目的 观察小鼠慢性脑血流低灌注状态下行为学及其病理学变化.方法 62只C57BL/6小鼠均分为模型组和假手术组.模型组:采用内径为0.18 mm的微型弹簧圈套C57BL/6小鼠双侧颈总动脉,造成血管狭窄导致全脑血流低灌注状态;假手术组:仅暴露双侧颈总动脉,不圈套微型弹簧.在成模30 d时两组各取8只小鼠,采用八臂迷宫实验检测小鼠认知功能的改变,并在成模7、14 d和30 d时分别处死动物,采用Kluver-Barrera染色观察神经纤维改变及免疫组化观察胶质细胞增生程度,同时用Evans Blue荧光观察血脑屏障通透性的变化.结果 建模30 d后模型组八臂迷宫实验工作记忆错误显著多于假手术组(P<0.05).在成模7 d时未见显著病理变化,在14、30 d时观察到模型组脑白质区域神经纤维稀疏[胼胝体神经纤维损伤分级分别为(1.13±0.05)和(1.96±0.08),P<0.05],星形胶质细胞和小胶质细胞显著增生[胼胝体星型胶质细胞计数分别为(104.52±12.31)和(192.57±24.23),小胶质细胞计数分别为(98.25±15.27)和(172.36±18.29),P<0.01],Evans Blue荧光观察到脑内微血管血液成分外渗.结论 慢性脑血流低灌注状态导致小鼠的认知功能下降、胼胝体等白质神经纤维稀疏及胶质细胞增生.     

CD-1遗传背景小鼠EAE模型:遗传背景对临床表现的影响

目的:制作不同基因背景小鼠自身免疫性脑脊髓炎(experimental autoimmune encephalomyelitis,EAE)模型,比较不同遗传背景小鼠发病?神经功能评分和病理变化的差异?方法:用髓鞘少突胶质细胞糖蛋白抗原(MOG35-55)免疫C57BL/6和CD-1基因背景小鼠,用完全弗氏佐剂作为抗原载体,并在不同时间点用精制百日咳毒素增强免疫效果,建立自身免疫性脑脊髓炎模型;记录小鼠发病时间与表现,每天进行神经功能评分,并取其脑和脊髓组织进行病理学检查和以CD4?IL-17为靶标的免疫组化染色?结果:C57BL/6组小鼠发病高峰期出现于初次免疫后17~25 d,表现典型的拖尾?单侧或双侧后肢瘫痪等改变,神经功能评分在3分左右;CD-1组小鼠发病高峰期较C57BL/6组推迟,出现于免疫后35~40 d,可见相似的拖尾及偏瘫表现,神经功能评分在2.8分左右?病理检查可见C57BL/6模型小鼠脑?脊髓出现炎症性细胞浸润,而CD-1小鼠的炎性改变相对较轻?且主要出现于脊髓;罗克沙尔固蓝染色法鉴定显示,模型小鼠脑脊髓组织出现脱髓鞘病变,以C57BL/6小鼠更为严重?免疫组织化学法显示2种模型小鼠发病高峰期均存在不同程度的CD4+及IL-17+ 炎性细胞的浸润?结论:不同的遗传背景对EAE模型发病?临床表现和病理改变有明显影响;CD-1小鼠亦可运用于制作慢性迁延性EAE模型,更符合人类多发性硬化的特点?     

地黄饮子对阿尔茨海默病小鼠神经炎性损伤的改善作用

目的:研究地黄饮子对阿尔茨海默病(AD)转基因小鼠炎性损伤的保护作用。方法:60只雄性APPsw/PS1ΔE9转基因小鼠,随机分为模型组,阳性药(安理申)组、地黄饮子高、中、低剂量组,每组12只。以同背景、月龄的C57BL/6J小鼠为空白对照。小鼠4月龄开始灌服地黄饮子水煎液150d。Western blot检测小鼠脑组织中胶质细胞激活标记蛋白(GFAP和Iba-1)、炎性信号通路蛋白(p38、phospho-p38、NF-κB p65、NF-κB phospho-p65)、促炎性反应因子(i NOS、COX-2)的表达,ELISA法测定促炎性反应因子TNF-α和IL-1β的含量。结果:地黄饮子各剂量组小鼠脑组织中胶质细胞激活标记蛋白(GFAP和Iba-1)、炎性信号通路蛋白(phospho-p38和NF-κB phospho-p65)、促炎性反应因子(i NOS、COX-2、TNF-α和IL-1β)的表达量均显著低于模型组(P0.05或P0.01)。结论:地黄饮子能通过抑制炎性反应信号通路p38-NF-κB的活性,降低促炎性反应因子的i NOS、COX-2、TNF-α和IL-1β表达,抑制胶质细胞激活,改善AD小鼠脑内炎性损伤。