NF-κB和TNF—α在烟曲霉菌感染小鼠肺组织中的表达

目的探讨核因子-κBB（NF-κB）和肿瘤坏死因子-α（TNF-α）在小鼠抗烟曲霉菌早期感染中的作用。方法将小鼠分4组：正常组、免疫抑制组、正常＋烟曲霉菌接种组和IPA模型组。小鼠鼻吸人烟曲霉菌48h处死，取肺组织用western blot法检测胞核NF-κB p65蛋白和细胞中TNF-d的表达。结果正常＋烟曲霉菌接种组和IPA模型组小鼠肺组织细胞核NF-κB p65蛋白和细胞中TNF—α表达的量高于正常组和免疫抑制组；正常组小鼠中检出NF-κB p65蛋白和TNF-α表达的量高于免疫抑制组；免疫抑制组肺组织细胞核NF-κB p65蛋白量最低，并且未检出TNF-α的表达。结论烟曲霉菌早期感染可激活小鼠肺组织中NF-κB并上调TNF-α蛋白的表达。     

NF-κB和TNF-α在烟曲霉菌感染小鼠肺组织中的表达

目的探讨核因子-κB(NF-κB)和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)在小鼠抗烟曲霉菌早期感染中的作用。方法将小鼠分4组:正常组、免疫抑制组、正常+烟曲霉菌接种组和IPA模型组。小鼠鼻吸入烟曲霉菌48 h处死,取肺组织用western blot法检测胞核NF-κB p65蛋白和细胞中TNF-α的表达。结果正     

Dectin-1和TLR4在烟曲霉菌性角膜炎大鼠角膜组织中的表达及其在角膜炎发病中的作用

目的:探讨烟曲霉菌感染大鼠角膜后Dectin-1和Toll样受体-4(TLR4)表达及炎症因子的分泌特点,阐明其在大鼠角膜炎发病中的作用。方法:40只SD大鼠随机分为对照组(n=10)和烟曲霉菌性角膜炎组(n=30),对照组不予任何干预,烟曲霉菌性角膜炎组给予双眼烟曲霉菌感染造模,分别于感染12 h(n=10,12h组)、24 h(n=10,24 h组)和48 h(n=10,48 h组)后取角膜组织,ELISA法检测IL-1、TNF-α、IL-6、IL-10和NF-κB水平,免疫组织化学法、RT-PCR法及Western blotting法测定角膜组织中Dectin-1和TLR4mRNA及蛋白表达。结果:大鼠造模均成功,眼角膜裂隙灯检测观察可见对照组眼睛清澈,感染烟曲霉菌后,12 h组眼睛表面有明显的一层薄膜,薄膜与健康的角膜边界清晰;24 h组可见眼部有一层白色的浸润灶形成,且表面粗糙;48 h组角膜白色浸润灶进一步加深,且范围明显扩大,基本覆盖了整个眼球。烟曲霉菌感染后,12 h组、24 h组和48 h组角膜组织中炎症因子IL-1、IL-6、IL-10、TNF-α和NF-κB水平明显高于空白对照组(P<0.05),其中24 h组和48 h组明显高于12 h组(P<0.05),48 h组明显高于24 h组(P<0.05);免疫组织化学检测,大鼠角膜组织中Dectin-1和TLR4表达水平随着感染时间的增加逐渐增加,RT-PCR法和Western blotting法检测,大鼠眼角膜组织烟曲霉菌性角膜炎组(12 h组、24 h组和48 h组)Dectin-1和TLR4蛋白及mRNA表达水平明显高于对照组(P<0.05),其中24 h组和48 h组明显高于12 h组(P<0.05),48 h组明显高于24 h组(P<0.05)。结论:Dectin-1和TLR4在受到烟曲霉菌感染后可过量分泌,进而造成大鼠炎性相关因子表达,最终促使角膜炎的发生。     

头花蓼对幽门螺杆菌刺激骨髓来源巨噬细胞炎症反应的作用及机制

目的 探讨头花蓼(PC)对幽门螺杆菌(H.pylori)刺激骨髓来源巨噬细胞(BMDMs)炎症反应的作用及机制.方法 室温复苏H.pylori SS2000菌株,培养48 h并鉴定,将H.pylori与BMDMs共孵育,按照不同感染复数(MOI,细菌数:细胞数)分为空白、25:1、50:1、100:1、200:1及400:1组,并培养48 h,采用四甲基偶氮唑盐比色法(MTT)检测各组BMDMs细胞活力;并于3、6、12及24 h收集细胞及上清,采用酶联免疫吸附法(ELISA)检测不同MOI及刺激时间下白细胞介素-1β(IL-1β)IL-18的含量;取BMDMs分为空白组[不加H.pylori,加改良依格尔(DMEM)培养液]、模型组(加H.pylori,DMEM培养液)及PC治疗组(加H.pylori,DMEM培养液,0.08μg/L PC),采用Western blot检测各组BMDMs细胞质与细胞核中核因子κB单体p65(NF-κB/p65)的表达及细胞裂解液中NOD样受体蛋白3(NLRP3)、IL-1β前体(Pro-IL-1β)及细胞上清液中IL-1β蛋白的表达.结果 MOI高于100:1时,细胞抑制率增高,BMDMs的数量减少(P<0.05);模型组BMDMs多数变圆,表面不光滑,颗粒物质明显增多;MOI为100:1且作用12 h时,BMDMs中IL-1β及IL-18含量达到最高;模型组BMDMs细胞质内NF-κB/p65蛋白表达较空白组减少、细胞核内NF-κB/p65蛋白表达较空白组升高(P<0.05),PC治疗组BMDMs胞内NF-κB/p65蛋白表达较模型组升高、核内NF-κB/p65蛋白表达较模型组减少(P<0.05);模型组BMDMs中NLRP3、IL-1β蛋白表达较空白组升高(P<0.05),PC治疗组BMDMs中NLRP3、IL-1β蛋白表达较模型组减少(P<0.05);各组BMDMs中Pro-IL-1β 蛋白表达比较,差异均无统计学意义(P>0.05).结论 PC可改善H.pylori引起的BMDMs细胞炎症反应,其机制可能与抑制NF-κB/NLRP3/IL-1β信号通路的激活有关.     

Sirt1通过去乙酰化NF-κB/p65减轻小鼠肺泡Ⅱ型上皮细胞脂多糖损伤

目的 研究酵母沉默信息调节因子2相关酶1(sirtuin type 1,Sirt1)在肺泡Ⅱ型上皮细胞(AECⅡ)脂多糖(LPS)损伤中对NF-κB的作用.方法 购买Sirt1过表达(Tg)小鼠和野生型(WT)小鼠,饲养、繁殖、鉴定新生小鼠基因型;通过qRT-PCR和Western blot鉴定Tg小鼠和WT小鼠肺组织Sirt1 mRNA和蛋白表达差异;两种不同Sirt1基因背景的小鼠LPS(15 mg/kg)腹腔注射12 h后,HE染色鉴定肺组织病理变化差异;分离纯化两种小鼠的AECⅡ并进行鉴定;两种不同Sirt1基因背景的AECⅡ用LPS 10 μg/mL处理后,分别在0、2、4、6、8、12、24 h用ELISA检测细胞上清液中白细胞介素石(IL-6)和肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)的水平;用LPS 10 μg/mL处理两种AECⅡ,同时设置生理盐水对照组,12 h后用Western blot鉴定细胞NF-κB/p65蛋白和乙酰化NF-κB/p65蛋白的表达差异.结果 新生小鼠有Tg和WT两种不同的基因型;Tg小鼠肺组织Sirt1 mRNA和蛋白的表达水平显著高于WT小鼠(P＜0.05);小鼠腹腔注射LPS 15 mg/kg 12 h后肺组织病理变化显示,Tg小鼠较WT小鼠肺组织损伤程度轻;两种AECⅡ用LPS 10μg/mL处理后,细胞上清液中IL-6和TNF-α的表达水平随时间推移呈现逐渐升高的趋势,Tg组AECⅡ细胞上清液中IL-6和TNF-α的表达水平在多个时间点都显著低于WT组(P＜0.05);两种AECⅡ经LPS(10 μg/mL)处理后,与各自的空白对照组相比Sirt1含量下降,且WT组AECⅡ下降更明显,LPS处理后WT组AECⅡ的NF-κB/p65和乙酰化NF-κB/p65的变化倍数均高于Tg组.结论 Sirt1可能通过去乙酰化NF-κB/p65参与调控AECⅡLPS炎症损伤,抑制急性呼吸窘迫综合征(acute respiratory distress syndrome,ARDS)小鼠肺部炎症反应.     

基于NF-κB信号通路探究狼疮定对红斑狼疮MRL/lpr小鼠炎症反应的调节作用

[目的] 研究狼疮定对系统性红斑狼疮(systemic lupus erythematosus，SLE)MRL/lpr小鼠炎症反应的影响，并分析其对核因子-κB(nuclear factor-κB，NF-κB)信号通路的调节作用。[方法] 将12只MRL/lpr小鼠随机分为模型组(6只)、干预组(6只)，另选取C57BL/6小鼠6只为对照组。干预组灌胃给予0.1 mL/10 g狼疮定浓缩液，对照组、模型组给予等体积0.9%氯化钠溶液，所有动物均干预8周。给药前后分别测定血清炎性因子白细胞介素-6(interleukin-6，IL-6)、α-干扰素(interferon-α，IFN-α)、肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α，TNF-α)及NF-κB信号通路相关蛋白NF-κB抑制蛋白α(NF-κB inhibitor ɑ，IκBα)、NF-κB抑制蛋白α p50(NF-κB inhibitor ɑ p50，IκBαp50)、NF-κB抑制蛋白α p65(NF-κB inhibitor ɑ p65，IκBαp65)表达水平，采用扩增阻碍突变系统-聚合酶链式反应(amplification refractory mutation system Real time fluorescence-quantitative polymerase chain reaction，ARMS-q PCR)检测NF-κB信号通路相关mRNA表达情况。通过苏木精-伊红染色检测肾组织损伤情况，采用免疫印迹法检测肾组织中炎性因子表达水平。[结果] 与对照组比较，模型组血清炎性因子IL-6、IFN-α、TNF-α、NF-κB信号通路相关蛋白(IκBα、IκBαp50、IκBαp65)水平、NF-κB信号通路相关mRNA(IκBα、IκBαp50、IκBαp65)水平均显著升高(P<0.05)，肾组织中IL-6、IFN-α、TNF-α表达水平升高(P<0.05)。模型组小鼠肾组织损伤明显，主要表现为肾小管扩张，肾小球硬化，结构严重破坏，且肾小球、肾小管周围出现明显的炎症反应。干预后，MRL/lpr小鼠血清各指标水平均出现明显降低(P<0.05)，肾组织炎性损伤较模型组减轻。[结论] 狼疮定可抑制MRL/lpr小鼠炎症反应，从而减轻炎性肾损伤，其作用机制可能与下调NF-κB信号通路有关。     

脂多糖诱导的急性炎症小鼠模型血清促炎因子与抑炎因子表达研究

目的:探讨脂多糖(LPS)诱导的急性炎症小鼠模型血清促炎因子、炎性因子表达情况。方法:将120只健康雄性ICR小鼠随机分为空白组、A组、B组和C组，各30只。分别给予A组、B组和C组小鼠经腹腔注射2、4 mg/kg和6 mg/kg LPS 0.9%氯化钠溶液，给予空白组小鼠等体积0.9%氯化钠溶液。建模成功后断头处死小鼠采集血液样本后检测血清中促炎因子[肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-1β(IL-1β)、IL-6、IL-18]、抑炎因子(IL-4、IL-10、IL-13),取肾脏和肺脏采用TUNEL染色法检测细胞凋亡情况，采用Western blot技术检测肾脏和肺脏组织中核因子-κB(NF-κB)、磷酸化NF-κB(pNF-κB)、Toll样受体4(TLR4)相对表达水平。结果:A组、B组和C组小鼠血清TNF-α、IL-1β、IL-6、IL-18、IL-4、IL-10、IL-13水平以及肺和肾脏组织细胞凋亡比例均显著高于空白组(均P<0.05)。随着LPS注射浓度增加，小鼠血清TNF-α、IL-1β、IL-6、IL-18、IL-4、IL-10、IL-13水平以及肺和...     

日本血吸虫可溶性虫卵抗原对B细胞的活化作用及其机制的初步研究

目的:观察日本血吸虫可溶性虫卵抗原(SEA)是否能够诱导小鼠B细胞活化及其机制?方法:SEA和脂多糖(LPS)分别体外刺激小鼠脾脏CD19+B细胞,72 h后用流式细胞术分别检测B细胞表面CD80?CD86及CD40的表达和B细胞细胞周期的改变;用荧光染料CFSE分裂法检测B细胞增殖;用ELISA法检测培养上清中白介素(IL-)10?IL-6?γ干扰素(IFN-γ)和转化生长因子β(TGF-β)的水平?同时利用ERK?JNK?p38MAPK和NF-κB信号转导抑制剂检测B细胞分泌细胞因子水平的变化?结果:SEA与LPS组可以活化小鼠脾脏CD19+B细胞,使其表面高表达CD80?CD86和CD40;同时诱导S/G2期的B细胞比例显著增加,SEA可以诱导B细胞增殖?SEA与LPS能刺激脾脏CD19+B细胞分泌高水平的IL-10?IL-6?分别阻断NF-κB?ERK?JNK和p38MAPK信号转导通路后可以抑制B细胞IL-10和IL-6的分泌?结论:SEA可以上调小鼠脾脏B细胞表面共刺激分子表达?促进其增殖?同时,SEA可以通过NF-κB?ERK?JNK和p38MAPK信号转导通路刺激小鼠B细胞分泌细胞因子?     

白鲜碱对特应性皮炎小鼠PKCα/NF-κB通路及肥大细胞浸润的影响

目的探讨白鲜碱对激活蛋白激酶Cα(PKCα)/核转录因子κB(NF-κB)通路的调控作用,及对特应性皮炎(AD)小鼠肥大细胞浸润的影响。方法按照随机数字表法将C57BL/6小鼠分为正常对照组、模型组、白鲜碱低剂量(1.2 mg/kg)组、白鲜碱中剂量(2.4 mg/kg)组、白鲜碱高剂量(4.8 mg/kg)组、地塞米松组(阳性对照),每组12只。除正常对照组外,其他组小鼠用2,4-二硝基氯苯(DNCB)反复刺激建立AD模型。白鲜碱低、中、高剂量组小鼠背部每天分别涂抹1.2、2.4、4.8 mg/kg白鲜碱,地塞米松组涂抹地塞米松乳膏,模型组及正常对照组涂抹10mL/kg橄榄油,各组连续给药7 d,1次/d。观察小鼠抓搔次数及背部皮损程度;ELISA法检测血清组胺及免疫球蛋白E(IgE)水平;HE及甲苯胺蓝染色检测背部皮损组织病理变化及肥大细胞浸润情况;类胰蛋白酶免疫组化法检测肥大细胞活化状态;WB法测定PKCα、NF-κBp65及磷酸化NF-κBp65(p-NF-κBp65)、酪氨酸激酶(Lyn)及磷酸化Lyn(p-Lyn)、脾酪氨酸激酶(Syk)及磷酸化Syk(p-Syk)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-6(IL-6)、IL-1β等蛋白表达。结果与正常对照组比较,模型组小鼠背部皮肤角化、增厚及炎性损伤较重,血清组胺及IgE水平、搔抓次数、肥大细胞浸润、PKCα、p-NF-κBp65/NF-κBp65、p-Lyn/Lyn、p-Syk/Syk、TNF-α、IL-6、IL-1β表达升高,差异有统计学意义(P0.05)。与模型组比较,白鲜碱低、中、高剂量组和地塞米松组小鼠背部损伤缓解,血清组胺及IgE水平、搔抓次数、肥大细胞浸润、PKCα、p-NF-κBp65/NF-κBp65、p-Lyn/Lyn、p-Syk/Syk、TNF-α、IL-6、IL-1β表达降低,差异有统计学意义(P0.05);且呈剂量依赖性。白鲜碱高剂量组与地塞米松组比较差异无统计学意义(P0.05)。结论白鲜碱可能通过抑制PKCα/NF-κBp65通路活化,降低肥大细胞浸润活化介导的炎症反应,来改善AD小鼠炎症及瘙痒症状。     

参苓白术散联合美沙拉嗪对脾虚湿困型溃疡性结肠炎小鼠结肠组织NF-κB p65蛋白表达及炎症反应的影响

目的探讨参苓白术散联合美沙拉嗪对脾虚湿困型溃疡性结肠炎(UC)小鼠结肠组织核因子-κB p65(NF-κB p65)蛋白表达及炎症反应的影响。方法随机选择20只小鼠作为空白对照组,82只小鼠使用TNBS法(三硝基苯磺酸)及环境和饮食干预法构建脾虚湿困型UC模型,选择2只小鼠判断造模是否成功,剩余80只随机分为模型组、西药组、中药组和联合组各20只,西药组给予美沙拉嗪0. 2 g/(kg·d),中药组给予参苓白术散煎剂12 g/(kg·d),联合组给予相同剂量的美沙拉嗪和参苓白术散煎剂联合治疗,模型组和空白对照组给予等量生理盐水,1次/d,连续21 d。取小鼠结肠组织制作病理切片,使用ELISA法检测血清中白细胞介素-17(IL-17)、肿瘤杀伤因子-α(TNF-α)、白细胞介素-23(IL-23)水平,RT-PCR法检测NF-κB p65 mRNA表达量,免疫组化法检测NF-κB p65蛋白表达。结果西药组、中药组和联合组小鼠结肠黏膜形态均好于模型组。模型组结肠组织NF-κB p65 mRNA相对表达量、NF-κB p65蛋白表达、血清IL-17、TNF-α、IL-23均明显高于空白对照组(P 0. 05);西药组、中药组和联合组中结肠组织NF-κB p65 mRNA相对表达量、NF-κB p65蛋白表达、血清IL-17、TNF-α、IL-23均低于模型组(P 0. 05),联合组结肠组织NF-κB p65 mRNA相对表达量、NF-κB p65蛋白表达、血清IL-17、TNF-α、IL-23低于西药组和中药组(P 0. 05),西药组和中药组各项指标比较差异无统计学意义(P 0. 05)。结论参苓白术散联合美沙拉嗪通过调节NF-κB p65蛋白表达和炎症因子水平,从而促进结肠黏膜修复,改善脾虚湿困型溃疡性结肠炎小鼠症状。