氦氖激光对血管性痴呆模型大鼠学习记忆能力和脑组织内微管相关蛋白2表达的影响

目的：观察氦氖激光治疗改善血管性痴呆大鼠学习记忆障碍的作用，并以脑神经元特有的细胞骨架蛋白微管相关蛋白2表达的变化评估脑组织损伤程度。方法：实验于2004—04/07在郑州大学基础医学院人体解剖教研室完成。45只成年健康Wistar大鼠随机分为3组，每组15只。①氦氖激光治疗组和血管性痴呆模型组制备血管性痴呆大鼠模型。氦氖激光治疗组采用氦氖激光照射百会、大椎两穴，1黝，30min/次，7d为1个疗程，共2个疗程，疗程间隔3d。模型组未做治疗。②假手术组不造成脑缺血，未做治疗。用Y-型迷宫检测3组大鼠的空间记忆和学习记忆能力，以连续10次测试中有9次正确反应时所需的电击次数为评估标准。取3组大鼠组织切片，进行微管相关蛋白2免疫组织化学染色检测，用灰度值大小说明其在脑组织内表达的高低。结果：41只大鼠进入结果分析。①大鼠的学习和记忆能力：氦氖激光治疗组第1次和第2次连续10次测试中有9次正确反应时所需的电击次数少于模型组（7．71&;#177;1．59，4．71&;#177;1．94，18．50&;#177;1．68，15，58&;#177;2．64，P〈0．01），接近假手术组（6．60&;#177;1．55，4．20&;#177;1．74）。②大鼠脑组织海马CA1区微管相关蛋白2阳性反应灰度值：氦氖激光组明显高于模型组（0．69&;#177;0．03，0，45&;#177;0．07，P〈0．01），与假手术组比较无显著差别。结论：氦氖激光照射疗法可以改善血管性痴呆大鼠的空间定向能力和学习记忆能力，并使微管蛋白2活性提高，从而保持神经元细胞骨架的完整，减轻脑组织的损伤。     

血管性痴呆大鼠模型学习记忆障碍与海马半胱氨酸蛋白酶1蛋白的表达空白对照及量化盲法评估

目的定量测定血管性痴呆大鼠的学习记忆成绩,同时观察海马半胱氨酸蛋白酶1蛋白在血管性痴呆大鼠海马中的表达及其意义.方法实验于2004-01/11在中国医科大学动物实验室进行,取健康雄性SD大鼠100只,随机分正常对照组(n=28,仅分离双侧颈总动脉)、假手术组(n=28,仅麻醉,不做手术),和血管性痴呆组(n=44).采用血管阻断的方法,复制大鼠血管性痴呆模型,每组随机取10只大鼠,采用水迷宫实验进行行为学检测,定量测定其学习记忆成绩.每组剩余大鼠在缺血后24,48,72,96,120 h及7 d处死,用免疫组化方法检测海马区半胱氨酸蛋白酶1蛋白表达水平的变化.结果100只大鼠死亡4只,进入结果分析96只.①水迷宫学习成绩血管性痴呆组大鼠游完全程的时间、进入盲端的次数及时间[(3.78±1.65)min,(5.21±1.56)次,(1.90±1.38)min]明显多于正常对照组及假手术组[(0.68±0.12)min,(1.13±0.21)次,(0.21±0.08)min;(0.76±0.13)min,(0.98±0.32)次,(0.31±0.09)min].②水迷宫记忆成绩血管性痴呆组大鼠游完全程的时间、进入盲端的次数及时间[(2.98±1.05)min,(5.62±2.11)次,(1.78±0.84)min]明显多于正常对照组及假手术组[(0.24±0.16)min,(0.48±0.73)次,(0.04±0.02)min;(0.35±0.20)min,(0.52±0.80)次,(0.10±0.02)min].③血管性痴呆组脑缺血后24 h半胱氨酸蛋白酶1蛋白表达,为(82±12)个/视野,第3天时达高峰[(198±20)个/视野],明显多于正常对照组和假手术组[(17±3),(20±3)个/视野].结论血管性痴呆大鼠发生了明显的学习记忆功能障碍,在血管性痴呆大鼠海马脑区有大量半胱氨酸蛋白酶1蛋白表达.作为一种抑制细胞凋亡的基因,半胱氨酸蛋白酶1蛋白可能对血管性痴呆大鼠脑内与学习记忆密切相关的海马神经元有保护作用.     

激光调控内源性神经干细胞的增殖分化及脑功能重建

背景: 大量研究表明增强脑内源性神经细胞的增殖能力和自我修复将成为治愈缺血缺氧性脑损伤有价值的方法之一.目的:观察氦氖激光对新生大鼠缺血缺氧性脑损伤内源性神经干细胞增殖分化及脑功能重建的影响.方法:7 d龄健康Wistar新生大鼠,建立缺血缺氧性脑损伤模型后第2天开始,激光穴位照射组给予氦氖激光照射.穴位选取顶骨正中的"百会"穴,以及第7颈椎与第1胸椎间、背部正中的"大椎"穴.假手术组和模型组不给予激光照射.于第2疗程结束后,用Y-型迷宫检测各组大鼠的学习记忆能力.随后制备脑海马切片,分别进行巢蛋白和微管关联蛋白2免疫组织化学染色.结果与结论:①激光穴位照射组大鼠的学习和记忆能力明显高于模型组(P < 0.05),但与假手术组相比,无明显差异(P > 0.05).②大鼠内源性神经干细胞的表达:与假手术组比较,模型组、激光治疗组齿状回内巢蛋白免疫阳性细胞均明显增多(P < 0.05),且激光治疗组增多幅度大于模型组(P < 0.05).③神经元特有结构蛋白的表达:激光治疗组大脑皮质微管关联蛋白2表达相当广泛,强阳性染成棕褐色的树突呈条索样、流星样放射状分布,海马各区锥体神经元和齿状回颗粒细胞层神经元排列比较整齐,树突连续阳性染色呈树枝状交叉分布于分子层.假手术组与激光治疗组染色所见无明显差别.模型组微管关联蛋白2表达明显减弱.结果提示激光治疗能够促进缺血缺氧性脑损伤新生大鼠脑内源性神经干细胞增殖,诱导其向神经元方向分化,并达到学习记忆功能的重建.     

激光调控内源性神经干细胞的增殖与分化

背景:大量研究表明增强脑内源性神经细胞的自我修复和增殖能力将成为治愈缺血缺氧性脑损伤最有价值的方法之一.目的:探讨氦氖激光对新生大鼠缺血缺氧性脑损伤内源性神经干细胞增殖及分化的影响.设计、时间及地点:随机对照动物实验,于2007-12/2008-05在郑州大学护理学院完成.材料:7 d龄健康Wistar新生大鼠36只,随机分为假手术组、模型组、激光治疗组,12只/组.氦氖激光多功能治疗仪由桂林电子仪器厂生产.方法:模型组、激光治疗组新生大鼠通过结扎左颈总动脉后,再吸入低浓度氧(含体积分数为8%的O2、体积分数为92%的N2)建立缺血缺氧性脑损伤模型:假手术组不结扎左颈总动脉,置于正常空气中.造模后第2天开始,激光治疗组给予氦氖激光照射,激光波长632.8 nm,激光功率4 mW,光斑直径3 mm,功率密度56.62 mV,能量密度33.975 J/cm2,10 min/次,1次,d,10 d为1个疗程,共2个疗程,两疗程间隔2 d.穴位选取顶骨正中的"百会"穴,以及第7颈椎与第1胸椎间、背部正中的"大椎"穴.疗程结束后制备腑海马切片,分别进行巢蛋白和微管关联蛋白2免疫组织化学染色.主要观察指标:大鼠脑内巢蛋白标记的神经干细胞和微管关联蛋白2标记的神经元的表达情况.结果:36只大鼠全部进入结果分析.①大鼠内源性神经干细胞的表达:与假于术组比较,模型组、激光治疗组齿状回内巢蛋白免疫阳性细胞均明显增多(F=122.36,P＜0.05),且激光治疗组增多幅度大于模型组(P＜0.05).②神经元特有结构蛋白的表达:激光治疗组大脑皮质微管关联蛋白2表达相当广泛,强阳性染成棕褐色的树突呈条索样、流星样放射状分布,海马各区锥体神经元和齿状回颗粒细胞层神经元排列比较整齐,树突连续阳性染色呈树枝状交叉分布于分子层.假手术组与激光治疗组染色所见无明显差别.模型组微管关联蛋白2表达明显减弱.结论:激光治疗能够促进缺血缺氧性脑损伤新生大鼠脑内源性神经干细胞增殖,并诱导其向神经元方向分化.     

氦氖激光穴位照射后缺氧缺血新生大鼠脑组织中超氧化物歧化酶活性及丙二醛含量的变化

目的:观察缺氧缺血新生大鼠经过氦氖激光穴位照射后脑组织中的活性物质超氧化物歧化酶活性及丙二醛含量的变化情况。方法:实验于2003-03/11在郑州大学基础医学院人体解剖学教研室完成。选择30只7d龄健康Wistar大鼠,体质量12～15g,雌雄不拘。随机分为3组,即假手术对照组、缺氧缺血组和激光穴位照射组,每组10只。缺氧缺血组与激光穴位照射组动物均制作成缺氧缺血模型,在清醒状态下实施左侧颈总动脉结扎术,术后在室温中恢复1～4h后,置于常压缺氧仓中,通入8mL/L氧气、920mL/L氮气(体积比)的混合气体,2h后将动物取出。缺氧缺血组不加任何治疗。激光穴位照射组于缺氧缺血后第2天,采用氦氖激光照射百会、大椎两穴,功率4mW,光斑直径3mm,每次照射10min,1次/d,同一时间进行,10d为1个疗程,共3个疗程,各疗程间隔2d。百会穴在颅顶正中,大椎穴在C7～T1之间,背部正中。假手术组仅分离左侧颈总动脉,不结扎,不缺氧。各组大鼠常规饲养34d后,黄嘌呤氧化酶法测定超氧化物歧化酶活性,比色法测定丙二醛含量。结果:因缺氧缺血对动物造成了伤害,缺氧缺血组死亡3只,激光穴位照射组死亡2只。进入结果分析,假手术对照组、缺氧缺血组和激光穴位照射组分别为10,7和8只。①大鼠脑组织超氧化物歧化酶活性:缺氧缺血组显著低于假手术对照组和激光穴位照射组[(59.70±4.03)NU/mL,(76.24±2.43)NU/mL,(72.56±5.60)NU/mL,(t=5.03,4.83,P<0.05)]。②大鼠脑组织丙二醛含量:缺氧缺血组显著高于假手术对照组和激光穴位照射组[(267.58±30.55)mmol/L,(99.87±15.48)mmol/L,(135.29±32.76)mmol/L,(t=10.68,8.81,P<0.05)]。结论:氦氖激光穴位照射能提高、诱发缺氧缺血大鼠脑组织中超氧化物歧化酶的生成和活力,降低丙二醛水平。新生大鼠未成熟脑的可塑性较大,如果利用此关键时期进行氦氖激光穴位照射,可能对脑功能的恢复有一定帮助。     

氦氖激光穴位照射后缺氧缺血性脑损伤新生大鼠体质量及学习记忆能力的变化

目的:观察氦氖激光穴位照射对缺氧缺血性脑损伤新生大鼠体质量、学习和记忆能力的影响。方法:实验于2003-12/2004-05在郑州大学基础医学院人体解剖学实验室进行,①取7d龄Wistar大鼠56只随机分为假手术组(12只)、模型组(12只)、激光非穴位照射组(16只)、激光穴位照射组(16只)4组。除假手术组外,其他3组大鼠结扎新生鼠左颈总动脉后,再吸入低浓度氧(体积分数为0.08的O2,体积分数为0.92的N2)制成缺氧缺血性脑损伤大鼠模型,氦氖激光照射治疗于模型制备后第2天开始,穴位及非穴位定位参照大鼠常用的针灸穴位。②模型制备前12h、后3,10,22d记录各组大鼠体质量。③大鼠于第2疗程结束后(每个疗程10d,疗程间隔2d)第2和3天做迷宫实验,用Y-型迷宫检测各组大鼠条件反射形成的次数代表其学习记忆能力。④迷宫实验后取脑进行微管关联蛋白2免疫组织化学染色。结果:56只大鼠全部进入结果分析。①体质量:模型组大鼠增长速度明显低于其他各组,而激光穴位照射组虽稍低于假手术组但比模型组和激光非穴位照射组增长快。②激光穴位照射组大鼠的条件反射产生次数低于模型组和激光非穴位照射组(P<0.05),与假手术组比较差异不显著(P>0.05)。③激光穴位照射组微管关联蛋白2阳性染色的表达明显高于模型组和激光非穴位照射组。结论:氦氖激光穴位照射对新生大鼠缺氧缺血性脑损伤具有确切的保护作用,能够促进大鼠生长发育,提高其学习记忆能力,且具有明显的穴位特异性。     

静脉注射同种异体骨髓间充质干细胞对血管性痴呆大鼠海马区脑组织形态及微管相关蛋白2表达的影响

目的:骨髓间充质干细胞移植进入脑组织后,能否影响脑组织的形态及微管相关蛋白2的表达从而改善痴呆状态下的认知功能?观察静脉注射同种异体骨髓间充质干细胞后,血管性痴呆模型大鼠脑海马CA1区脑组织形态及微管相关蛋白2的变化。方法:实验于2004-08/2005-05在解放军第二军医大学完成。①实验动物:健康雄性SD大鼠60只,随机数字表法分为细胞移植组、模型对照组、假手术组,20只/组。②实验方法:另取20只大鼠用于体外分离、培养扩增骨髓间充质干细胞,传至第2代时加入BrdU进行标记,制备单细胞悬液,调整细胞浓度为3×109L-1。细胞移植组、模型对照组采用双侧颈总动脉结扎法建立血管性痴呆动物模型,假手术组仅暴露双侧颈总动脉但不结扎。造模后4周,细胞移植组尾静脉注射骨髓间充质干细胞悬液1mL,模型对照组注射等量磷酸盐缓冲液,假手术组不进行尾静脉注射。③实验评估:细胞移植后4周,苏木精-伊红染色检测各组大鼠脑海马CA1区脑组织形态变化,免疫荧光染色观察经BrdU标记的骨髓间充质干细胞示踪情况,免疫组织化学染色检测脑海马CA1区微管相关蛋白2的表达。结果:细胞移植组5只大鼠死亡,模型对照组3只大鼠死亡,假手术组均进入结果分析。①脑海马CA1区锥体细胞形态变化:细胞移植组和模型对照组CA1区锥体细胞较假手术组排列稀疏、紊乱,细胞肿胀、脱失,核固缩,但细胞移植组细胞排列较模型对照组规则,且细胞肿胀、脱失及核固缩较模型对照组减轻。②脑海马内骨髓间充质干细胞的示踪:细胞移植后4周,大鼠脑海马内可见被绿色荧光标记的骨髓间充质干细胞。③脑海马CA1区微管相关蛋白2的表达:与假手术组比较,细胞移植组及模型对照组脑海马CA1区锥体细胞层微管相关蛋白2阳性产物的吸光度值均明显降低(P<0.05);细胞移植组明显高于模型对照组(P<0.05)。结论:静脉注射骨髓间充质干细胞能够使血管性痴呆大鼠脑海马CA1区神经元损伤及脱失减轻,并使微管相关蛋白2表达增加。     

氦氖激光穴位照射对缺血缺氧性脑损伤新生大鼠行为学的影响

目的：观察氦氖激光穴位照射疗法对缺血缺氧性脑损伤新生大鼠行为学方面的影响.方法：实验于2003-12/2004-05在郑州大学基础医学院人体解剖学实验室进行,取7 d龄普通级健康Wistar大鼠56只随机分为假手术组（n=12）、模型组（n=12）、激光非穴位照射组（n=16）、激光穴位照射组（n=16）4组.除假手术组外,其他3组大鼠结扎新生鼠左颈总动脉后,再吸入低浓度氧制成缺血缺氧性脑损伤大鼠模型,氦氖激光照射治疗于模型制备后第2天开始,10 min/次,1次/d,并在同一时间进行,10 d为1个疗程,共2个疗程,两疗程间隔2 d.照射穴位选择大椎、百会两穴.穴位及非穴位定位参照大鼠常用的针灸穴位.治疗结束后以三等臂辐射状Y迷宫检测Wistar大鼠学习、记忆能力.并取脑组织制备切片,进行脑神经元胆碱乙酰基转移酶免疫组化染色.结果：56只大鼠在实验过程中无缺失值,全部进入结果分析.①激光穴位照射组达到学会标准平均需要的次数（条件反射形成次数）显著低于模型组和激光非穴位照射组,差异有显著性意义[（23.06&;#177;4.74）,（35.92&;#177;5.88）,（33.94&;#177;4.68）次,P＜0.05];记忆能力（错误次数）显著低于模型组和激光非穴位照射组,差异有显著性意义[（17.13&;#177;2.99）,（27.25&;#177;5.63）,（2694&;#177;3.15）次,P＜0.05].模型组和激光非穴位照射组条件反射形成次数显著高于假手术组,差异有显著性意义（P＜0.05）;模型组和激光非穴位照射组记忆能力（错误次数）显著高于假手术组,差异有显著性意义（P＜0.05）.②假手术组海马结构CA1、CA2、CA3、齿状回均有大量脑神经元胆碱乙酰基转移酶免疫反应阳性神经元分布,其中以海马锥体细胞层和齿状回颗粒细胞层最密集;模型组与激光非穴位照射组海马结构内仍有一定量脑神经元胆碱乙酰基转移酶免疫反应阳性神经元分布,CA1区脑神经元胆碱乙酰基转移酶免疫反应阳性神经元数量比假手术组显著减少,差异有显著性意义（P＜0.05）,CA2区、CA3区和齿状回脑神经元胆碱乙酰基转移酶免疫反应阳性神经元分布基本同假手术组;激光穴位照射组CA1区脑神经元胆碱乙酰基转移酶免疫反应阳性神经元数目较模型组与激光非穴位照射组增加,接近假手术组,差异均有显著性意义（P＜0.05）.结论：氦氖激光穴位照射明显提高缺血缺氧性脑损伤新生大鼠的学习记忆能力,可能与氦氖激光穴位照射使脑组织合成神经递质脑神经元胆碱乙酰基转移酶增多有关.     

黄蒲通窍胶囊对血管性痴呆大鼠血浆及脑组织环磷腺苷酸、环磷酸鸟苷和一氧化氮的影响

目的:观察中药黄蒲通窍胶囊对血管性痴呆大鼠血浆及脑组织环磷腺苷酸、环磷酸鸟苷和一氧化氮变化的影响。方法:实验于2004-05在安徽中医学院第一附属医院实验中心进行。选用雄性Wistar大鼠100只,分为空白组15只;假手术组15只;余下70只全部造模,随机选取造模成功大鼠45只,分成模型组、黄蒲通窍组、阿米三嗪3组各15只。空白组不干预,假手术组不阻断大脑中动脉,其他3组线栓法制作大脑中动脉栓塞所致的血管性痴呆大鼠模型。黄蒲通窍组和阿米三嗪组按照大鼠体质量以0.01mL/g的剂量灌胃给药,其他3组予以蒸馏水(0.01mL/g)灌胃,于造模结束第2天开始给药,1次/d,连续处理28d。观察各组大鼠血浆及脑组织环磷腺苷酸、环磷酸鸟苷和一氧化氮的变化。结果:58只大鼠进入结果分析。①环磷腺苷酸:模型组大鼠血浆和脑组织中的环磷腺苷酸浓度降低犤(0.34±0.11),(17.07±2.81)nmol/L犦,黄蒲通窍组、阿米三嗪组较模型组明显升高犤(0.96±0.11),(28.61±6.98),(1.08±0.13),(32.10±6.41)nmol/L犦。②环磷酸鸟苷:模型组大鼠血浆和脑组织中的环磷酸鸟苷浓度升高犤(0.26±0.05),(5.92±1.15)nmol/L犦,黄蒲通窍组、阿米三嗪组较模型组明显降低犤(0.14±0.05),(4.08±0.30),(0.14±0.05),(3.74±0.25)nmol/L犦。③模型组一氧化氮浓     

氦氖激光穴位照射后缺氧缺血性脑损伤新生大鼠体质量及学习记忆能力的变化

目的：观察氦氖激光穴位照射对缺氧缺血性脑损伤新生大鼠体质量、学习和记忆能力的影响。 方法：实验于2003—12／2004-05在郑州大学基础医学院人体解剖学实验室进行，①取7d龄Wistar大鼠56只随机分为假手术组（12只）、模型组（12只）、激光非穴位照射组（16只）、激光穴位照射组（16只）4组。除假手术组外，其他3组大鼠结扎新生鼠左颈总动脉后，再吸人低浓度氧（体积分数为0．08的魄，体积分数为0．92的Nz）制成缺氧缺血性脑损伤大鼠模型，氦氖激光照射治疗于模型制备后第2天开始。穴位及非穴位定位参照大鼠常用的针灸穴位。②模型制备前12h，后3。10，22d记录各组大鼠体质量。③大鼠于第2疗程结束后（每个疗程10d，疗程间隔2d）第2和3天做迷宫实验，用Y-型迷宫检测各组大鼠条件反射形成的次数代表其学习记忆能力。④迷宫实验后取脑进行微管关联蛋白2免疫组织化学染色。 结果：56只大鼠全部进入结果分析。①体质量：模型组大鼠增长速度明显低于其他各组，而激光穴位照射组虽稍低于假手术组但比模型组和激光非穴位照射组增长快。②激光穴位照射组大鼠的条件反射产生次数低于模型组和激光非穴位照射组（P〈0．05），与假手术组比较差异不显（P〉0．05）。③激光穴位照射组微管关联蛋白2阳性染色的表达明显高于模型组和激光非穴位照射组。 结论：氦氖激光穴位照射对新生大鼠缺氧缺血性脑损伤具有确切的保护作用，能够促进大鼠生长发育。提高其学习记忆能力，且具有明显的穴位特异忡。     

护士长管理素质与护士工作压力相关性的调查与分析

目的 :探讨病房护士长的管理素质与护士工作压力的相关性。方法 :采用问卷调查法对 12 5名护士进行调查 ,调查结果用相关性分析进行统计学处理。结果 :护士长的管理素质与护士工作压力呈负相关。结论 :病房管理者只有努力提高自身的管理素质才能相应地减轻护士的工作压力     

老年脓毒血症患者胆碱酯酶水平与病情及预后的关系

目的探讨脓毒血症患者胆碱酯酶水平与患者病情及预后的关系。方法 2007年6月-2009年6月,将89例脓毒血症患者设定为脓毒血症组,进行血清胆碱酯酶测定及APACHEⅡ评分;另择82例健康人为正常组,测定血清胆碱酯酶值,比较两者之间差异;89例脓毒症患者按病况再分为存活组及死亡组,比较两者之间血清胆碱酯酶及APACHEⅡ评分差异。结果治疗前脓毒血症组胆碱酯酶水平明显低于正常组,有统计学意义（P〈0.01）;脓毒血症组APACHEⅡ评分与血清胆碱酯酶呈负相关;死亡组APACHEⅡ评分明显高于存活组,而血清胆碱酶低于存活组（P〈0.01）。结论胆碱酯酶同APACHEⅡ评分呈负相关,能明显反映脓毒症患者病情严重程度及预后。