连续监测法测定腺苷脱氨酶

目的 建立连续监测法测定腺苷脱氨酶的方法。方法 用连续监测法对 pH值、腺苷浓度等反应条件进行实验研究，并对所建立的方法进行评价。结果 用双试剂连续监测法；试剂Ⅰ：含α－酮戊二酸6mmol/L,NADH 0.35mmol/L,ADP0.8mmol/L,EDTA-Na2 0.1mmol/L，谷氨酸脱氢酶1000U／L，试剂Ⅱ：腺苷12mmol/L,均用磷酸盐缓冲液（0．1mol/L);pH7.2。线性范围达97U／L，批内CV＝4．90％，批间CV＝6．53％。与波氏显色法有良好的相关性（r=0.9902)。结论 本法操作简便，结果准确，可用于常规分析。     

应用尿素酶和亮氨酸脱氢酶测定血清或尿中尿素的动力学方法

本文介绍一种采用尿素酶（EC3．5．1．5）和亮氨酸脱氢酶（EC．1．4．1．9）测定血清或尿液中尿素氛（UN）的新的连续监测分析法。原理血清或尿液中的内源性氨离子能与2一酮异己烯酸、NADH和亮氨酸脱氢酶（LED）起反应，而NADH被氧化成NAD+的反应速车取决于内源性氨离子的生成是。反应原理如下试剂试剂1：为在100mmol／I，N，N-二乙醇胺基乙酸缓冲液（pH8．75）中含2-酮基异乙烯酸3．0mmol／L，β-NADH0．3mmol／L和亮氨酸脱氢酶1．5ku／L。试剂2：为在试剂1中加入尿素酶70ku／L。标准波：为含有17．86mmol／L的UN和不含有UN…     

血清钾的色氨酸酶法测定

本文介绍了一种用色氨酸酶法测定血清中钾离子浓度的新的酶学方法。首先用谷氨酸脱氢酶(GLDH)、NADPH 和2-氧戊二酸盐消除内生的胺离子。然后色氨酸、5-磷酸吡哆醛,在钾离子存在下经色氨酸酶作用生成氨离子。生成的氨离子与NADPH 和2-氧戊二酸盐经GLDH 催化生成NADP~+,在340nm 处测定反应液吸光度的下降值,表示NH_4~+的生成量,此量与钾离子浓度成比例,从而推算血清中钾离子的量。将15μl 标准液或血清标本与250μl 试剂Ⅰ(NA-DPH,0.41mmol/L;2-氧戊二酸盐,18.6mmol/L;色氨酸,18.6mmol/L;GLDH55.8KU/L;氯     

脲酶和亮氨酸脱氢酶偶联法动力学测定血清或尿液中尿素

目的　建立适合于自动化分析血清和尿液尿素的脲酶和亮氨酸脱氢酶偶联的连续监测法。方法　对pH、2 酮基异乙烯酸钠、亮氨酸脱氢酶和脲酶浓度等反应条件进行实验研究 ,并对建立的方法进行评价。结果　用双试剂连续监测法 ,试剂Ⅰ :10 0mmol/LN ,N 二乙醇胺基乙酸缓冲液 (pH 8.80 ) ,含 2 酮基异乙烯酸钠 3.0mmol/L、NADH 0 .3mmol/L、亮氨酸脱氢酶 2 .0kU/L。试剂Ⅱ :试剂Ⅰ中加入脲酶 70kU/L。本法线性范围血清 0 .5～ 15 0mmol/L ,尿液 8.0～ 6 5 0mmol/L。血清和尿液的平均回收率分别为 10 2 .1%和 10 1.5 %。血清批内和批间平均CV分别为 1.0 2 %和 1.70 % ;尿液批内平均CV为 1.98%。本法 (Y)和脲酶偶联谷氨酸脱氢酶法 (X)对比相关良好 (血清Y =0 .992X +0 .0 4 0 ,r=0 .993;尿液Y =0 .990X +0 .6 1,r=0 .991)。胆红素 <32 5 μmol/L、血红蛋白 <5g/L、抗坏血酸 <80 0 μmol/L、三酰甘油 (TG) <7.5mmol/L和NH+ 4 <0 .5mmol/L对测定无明显干扰。结论　本法简便、准确、线性范围广 ,可用于常规自动分析。     

液体单试剂检测血氨方法的建立

目的配制液体单试剂，建立酶两点动力法测定血浆中血氨含量。方法在荷兰威图科学公司DPU-41型半自动生化仪和美国贝克曼公司CX5-CE型全自动生化仪上研究酶两点动力法，建立实验参数。结果试剂含量：三乙醇胺缓冲液（pH7．4）0．25mol／L，α-酮戊二酸15mmol／L，还原型辅酶0．3mmol／L，谷氨酸脱氢酶大于160U／L。该法最低检出限为1．9μmol／L，线性范围达321μmol／L（r=0．9961），批内CV=2．2％，批间CV=4．4％，平均回收率=99．3％，胆红素〈175．8μmol／L，血红蛋白〈3．4g／L，对测定结果无显著影响。结论本法灵敏度高，线性、精密度好，结果准确，胆红素、血红蛋白干扰小，操作简便，适用于全自动及半自动生化分析仪，可推广运用。     

新酶法测定血清钙

作者建立了一种简便、快速的血清钙动力学测定法。原理为钙能抑制酵母菌脲胺基裂解酶（EC3，5，1，4，5）的酶促反应．测定先用谷氨酸脱氢酶除去内生铵离子，在脲胺基裂解酶、脲、ATP、重碳酸盐、镁与钾离子存在下产生的铵离子与血清钙离子浓度成反比．生成的铵离子浓度可用下法监测，即在2－氧代戊二酸盐和NADPH存在的介质中，于反应体系中加入GLDH后产生NADP＋，监测340nm处吸光度变化可得。在钙离子浓度为1．53～3．08mmol／L范围内，批内CV为1．7％～3．2％（n＝10），日间CV为2．8％～4．1％回收率为92％～112％，其它离子、…     

用肌酐亚氨水解酶偶联谷氨酸脱氢酶的酐酶法鉴定

目的 建立适合于自动化分析的人血清和尿肌酐亚氨水解酶偶联谷氨酸脱氢酶指示系统的酶促动力学测定方法。方法 在反应体系中加入异柠檬酸脱氢酶及其作用底物异柠檬酸，再生由主反应前氨消耗的NADPH和α－酮戊二酸，其后加入镁离子络合剂CyDTA和肌亚氨水解酶的启动试剂启动反应，在此同时NADPH和α－酮戊二酸的再生反应被终止，测定NADPH于340nm处吸光度的变化，计算样品中肌酐的浓度。结果 本法测定线性范围为40－2000μmol／L，批内和常规条件下的变异系数均小于5％，回收率为98．5％，与高效液相色谱法具有良好的相关性（r=0.9930)。乳糜、黄疸、溶血、酮体、乳酸盐、临床常用的治疗药物和高至2mmol/L的氨对测定没有干扰。结论 本法操作简便、精确，推荐作为常规测定方法。     

尿素酶—谷氨酸脱氢酶偶联法测定尿素氮(摘要)

本科自制尿素酶(Urease,Sigma 巨豆提取,比活350U/mg 蛋白)和谷氨酸脱氢酶(GLDH,牛肝提取,比活32U/mg 蛋白)用于美国IL-508生化自动分析仪酶偶联法测定尿素氮(参数为37℃,340nm,平衡时间13秒反应时间7秒,标本2.5μl和总反应体积875μl),经实验获得最适试剂配方:Urease12000U/L、GLDH1200U/L、α-酮戊二酸3mmol/     

毛细管电泳法分离血清中乳酸脱氢酶同工酶

目的利用还原型辅酶I（NADH）在340nm波长处特异性吸收峰，建立用毛细管区带电泳在线检测人血清中乳酸脱氢酶（LDH）同工酶的方法。方法实验中采用未涂层毛细管，长60cm，内径75μm，pH9．4（23℃）二氨基二甲基1，3丙二醇（AM2P）缓冲液含20mmol/L氧化型辅酶I（NAD^＋）、51，6mmol/L乳酸锂。结果在25min内完成电泳分离，乳酸脱氢酶同工酶1（LDH1）、乳酸脱氢酶同工酶5（LDH5）纯品各自均可得到较好峰形，而且LDH1、LDH2纯品的混合物亦可得到完全分离，在分析正常人血清与肝癌患者血清时，其结果与美国Helena公司REP全自动琼脂糖电泳结果一致，取得满意效果。结论该法快速、低耗，具有较好的推广应用价值。     

镁离子在0.1mmol/L谷氨酸诱发的体外海马神经元损伤中的作用

目的探讨镁离子( Mg2+)在 0.1 mmol/L谷氨酸酸诱发的海马神经元损伤中的作用. 方法将神经元从新生 SD大鼠海马中分离后培养 6～ 9 d,即单纯随机分成 3组.对照组 单纯培养基;谷氨酸组培养基+ 5种不同浓度的谷氨酸;镁离子组培养基 + 5种不同浓度的 Mg2+, 30 min后再加入 0.1 mmol/L谷氨酸. 结果①谷氨酸组海马神经元存活率与对照组相比显著地呈剂量依赖性降低,谷氨酸的剂量为 2 mmol/L时细胞存活率为 4.64%.②与谷氨酸组比较,镁离子组低浓度的 Mg2+可提高海马神经元的存活率 , 4.5 mmol/L MgSO4处理海马神经元的存活率比谷氨酸组增加 78.41%. 结论低浓度的 Mg2+能保护谷氨酸诱发损伤的海马神经元.     

一种酶法测定血清钙的新方法

近几年研究出许多酶法测定某些离子的新方法，本文报告了一种适合于自动化仪器操作测定血清钙的新的酸速率法。1原理用谷氨酸脱氢酶（GLDH）、α-酮戊二酸和NADPH排除内源性NH 4的干扰，GLDHNH了十a一国戍2酸十NADPHM二二一谷氨酸十NADP”由于钙对于尿素进系裂解酶的抑制作用，标本中钙的含量与反应生成NHI的量成反比．＿＿＿＿＿＿尿素酸氢裂解欧尿员十＊＊P＋H＊07一人二·；二二：二二人：一呢KP＋M／十K十ZHCOI＋ZNH：用下列步骤确定NH：的含量GLDHNH了十a一团成二酸十NADPH—…一谷氨酸十NADP”在340urn处测…     

酶学检测精氨琥珀酸酶方法的建立

目的建立酶学检测精氨琥珀酸酶（ASAL）的方法。方法精氨琥珀酸在ASAL的作用下生成精氨酸和延胡索酸,后者被延胡索酸酶催化生成苹果酸,苹果酸被苹果酸脱氢酶催化生成草酰乙酸,同时NAD^＋（烟酰胺腺嘌呤二核苷酸,即辅酶Ⅰ）还原为NADH（还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸）。pH9．0的肼-甘氨酸缓冲液使反应完全。结果ASAL回收率为97％,在0～87U／L内为线性;批内变异系数（CV）为5．3％,天间CV为6．5％;改良酶学检测方法对255μmol／L胆红素无影响;对0．1g／L血红蛋白有轻度影响。结论所建立的酶学检测方法结果准确可靠,易自动化。     

血氨单一酶试剂测定法

本文按Anken的酶法,在操作步骤上加以简化,推荐单一试剂配方,一步即可完成测定。其原理为氨离子在谷氨酸脱氢酶催化下与α-酮戊二酸结合成谷氨酸,同时NADPH氧化成NAD~+,按NADPH在340nm下降速率折算血氨浓度。     

鸟氨酸氨基甲酰转移酶速率法测定的初步探讨

目的建立鸟氨酸氨基甲酰转移酶(OCT)自动化分析的方法。方法在磷酸盐缓冲液(pH值7.2)条件下,以瓜氨酸为底物,经一系列酶偶联反应,尼克酰胺腺嘌呤二核苷酸(NADH+H+)被氧化为氧化型辅酶Ⅰ(NAD+),340 nm处测定吸光度(A)变化值,A值下降的速率与待测样本中的OCT含量成正比关系,间接求出OCT的活性。结果本法最适pH值为7.2,最适底物浓度为2.0 mmol/L。批内、批间平均变异系数(CV)分别为3.80%、4.08%。米氏常数(Km)值为0.16 mmol/L。回收率达91.56%。在320 U/L内线性良好。参考范围为0~18 U/L。结论本方法能够快速、简便、准确的测定OCT活性,适用于各类全自动生化分析仪。     

鸟氨酸氨基甲酰转移酶速率法测定的初步探讨

目的 建立鸟氨酸氨基甲酰转移酶(OCT)自动化分析的方法.方法 在磷酸盐缓冲液(pH值7.2)条件下,以瓜氨酸为底物,经一系列酶偶联反应,尼克酰胺腺嘌呤二核苷酸(NADH+H+)被氧化为氧化型辅酶Ⅰ(NAD+),340 nm处测定吸光度(A)变化值,A值下降的速率与待测样本中的OCT含量成正比关系,间接求出OCT的活性.结果 本法最适pH值为7.2,最适底物浓度为2.0 mmol/L.批内、批间平均变异系数(CV)分别为3.80%、4.08%.米氏常数(Km)值为0.16 mmol/L.回收率达91.56%.在320 U/L内线性良好.参考范围为0～18 U/L.结论本方法能够快速、简便、准确的测定OCT活性,适用于各类全自动生化分析仪.     

镁离子在0．1mmol／L谷氨酸诱发的体外海马神经元损伤中的作用

目的：探讨镁离子(Mg^2 )在0.1mmol／L谷氨酸酸诱发的海马神经元损伤中的作用。方法：将神经元从新生SD大鼠海马中分离后培养6～9d，即单纯随机分成3组。对照组：单纯培养基；谷氨酸组；培养基 5种不同浓度的谷氨酸；镁离子组：培养基 5种不同浓度的Mg^2 ，30min后再加入0．1mmol／L谷氨酸。结果：①谷氨酸组海马神经元存活率与对照组相比显著地呈剂量依赖性降低，谷氨酸的剂量为2mmol／L时细胞存活率为4．64％。②与谷氨酸组比较，镁离子组低浓度的Mg^2 可提高海马神经元的存活率，4．5mmol／L MgSO4处理海马神经元的存活率比谷氨酸组增加78．41％。结论：低浓度的Mg^2 能保护谷氨酸诱发损伤的海马神经元。     

一种改进的肌酐酶学测定法

本文报告了一种新的血(尿)肌酐酶学紫外分光测定法。其原理是肌酐在肌酐亚氨基水解酶作用下水解成N-甲脲乙醇酸酐和NH_1~+,NH_1、α-酮戊二酸和NADPH在谷氨酸脱氢酶的作用下生成谷氨酸、NADP+和H2O。利用两点法测得的NADPH消耗量计算样本中肌酐含量。实验共分两步:第一步是通过“消除系统”排除高脂血症样本的本底吸收和内源性氨。清除内源性氨消耗的NADPH和α-酮戊二酸,利用异柠檬酸脱氢酶的作用使其NADPH恢复至原浓度(NADP(?)异柠檬酸+异柠檬酸脱氢酶→NADPH(?)α-酮戊二酸(?)(O2(?) H(?) )。第二步加入肌酐亚氨基水解酶进行肌酐测定。     

L6细胞胰岛素抵抗的骨骼肌细胞模型

背景:在胰岛素抵抗的细胞模型中,以游离脂肪酸诱导3T3-L1脂肪细胞和高胰岛素诱导的HepG2肝癌细胞最为常见,对分布最为广泛靶组织骨骼肌的胰岛素抵抗模型报道较少.目的:拟使用L6细胞株建立胰岛素抵抗的骨骼肌细胞模型.设计、时间及地点:细胞学体外观察,于2007-06/2008-05在辽宁医学院生物化学与分子生物学教研室完成.材料:L6细胞株由中国协和医科大学细胞中心提供.α-MEM培养基为美国Gibco公司产品.方法:复苏后的L6细胞置于α-MEM培养基中诱导培养14 d,以考马斯亮蓝染色观察肌管出现来确定L6成肌细胞株分化完成.将分化后的细胞建立胰岛素抵抗模型,按1 × 108/孔接种于24孔板内,用含体积分数为0.02胎牛血清的α-MEM培养,以L6细胞贴满24孔板的板底为宜.换液后,向各孔内分别加入含体积分数为0.02牛血清白蛋白的α-MEM无血清培养基饥饿培养5 h.设立2组,实验组的板孔内加入含1×107mol/L胰岛素的HEPES缓冲液(136mmol/LNaCl,4.7mmol/LKCl,1.25 mmol/L MgSO4,1.2 mmol/L CaCl2,0.2%牛血清白蛋白,20 mmol/L HEPES,pH 7.4)孵育1 h;对照组的板孔内加入不含胰岛素的HEPES缓冲液孵育1 h.弃上清后用HBS缓冲液冲洗,每孔内分别加入含0.1 mol/L葡萄糖的HBS缓冲液100 μL,孵育10 min后取出置于冰板上快速回收上清.主要观察指标:考马斯亮蓝染色观察L6细胞出现肌管结构情况,葡萄糖氧化酶法检测上清中葡萄糖浓度.结果:诱导前L6细胞未见肌性结构出现,诱导分化后L6细胞内出现肌管结构.使用α-MEM无血清培养基饥饿培养1,3 h,两组上清中葡萄糖浓度基本相似(P>0.05);使用α-MEM无血清培养基饥饿培养5 h后,实验组上清中葡萄糖浓度明显高于对照组(P<0.05).结论:诱导分化成肌后的L6骨骼肌细胞经α-MEM无血清培养基饥饿培养5 h,在胰岛素浓度为1×10-7mol/L的刺激下可形成胰岛素抵抗的骨骼肌细胞模型.     

酶偶联法测定腺苷脱氨酶

本文介绍一种测定腺苷脱氨酶的新的动力学方法.酶促反应生成的氨在偶联的谷氨酸脱氢酶作用下,使还原型辅酶Ⅰ氧化,同时用自动生化分析仪动态监测340nm 处吸光度的下降。作者对方法的最适条件进行了讨论,方法特异,简单快速,精密度好,适用于常规分析。与氨试剂Berthelots 法比较,相关系数r=0.96.     

纳米颗粒增强透射免疫比浊法检测乳酸脱氢酶同工酶3方法的建立及性能评价

目的建立纳米颗粒增强透射免疫比浊法(PETIA)测定乳酸脱氢酶同工酶3(LDH3)的分析方法。方法确定最适反应条件,包括抗体浓度、胶乳微球粒径、交联剂[1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐(EDAC)/N-羟基琥珀酰亚胺(NHS)]浓度、缓冲液种类及p H值、反应时间,并建立检测血清LDH3的PETIA方法。按美国临床实验室标准化委员会(NCCLS)EP5-A2文件要求,评价方法的精密度、线性范围、回收率、抗干扰能力和分析灵敏度,并初步建立参考区间。结果 PETIA最适反应条件:抗体浓度为0.1 mg/m L、胶乳微球粒径为120 nm、交联剂(EDAC/NHS)浓度为10 mg/m L、缓冲液为磷酸盐缓冲液(PBS)、p H值为7.8时偶联率最佳,室温(25℃)和低温(4℃)放置24 h偶联率保持不变。采用建立的PETIA检测LDH3低值(16.5 U/L)、中值(65.0 U/L)和高值(155.0 U/L)的批内变异系数(CV)分别为5.77%、4.02%、3.77%,批间CV分别为6.59%、4.44%、3.93%;线性范围为3.6~200.0 U/L;平均回收率为102.1%;900 U/L类风湿因子、500μmol/L胆红素、9 mmol/L甘油三酯、5 g/L血红蛋白、5 g/L维生素C均无明显干扰;分析灵敏度为3.6 U/L;参考区间为13.5~75.9 U/L。结论建立的PETIA测定LDH3具有方法简单、快速、灵敏等优点,且结果准确,可用于全自动生化分析仪,能够满足临床检验的要求。