Ad-IL-24诱导U87-MG人脑胶质瘤细胞凋亡的研究

脑胶质瘤是中枢神经系统最常见的恶性肿瘤,约占所有脑肿瘤的50%,目前多采用手术、放疗及化疗等常规疗法,但大部分患者预后不佳[1].我们利用已构建的腺病毒介导白细胞介素-24(IL-24)基因表达载体(Ad-IL-24),观察其对U87-MG人脑胶质瘤细胞的生长抑制和凋亡作用,并探讨其分子机制.     

Ad-IL-24诱导U87-MG人脑胶质瘤细胞凋亡的研究

脑胶质瘤是中枢神经系统最常见的恶性肿瘤,约占所有脑肿瘤的50%,目前多采用手术、放疗及化疗等常规疗法,但大部分患者预后不佳[1].我们利用已构建的腺病毒介导白细胞介素-24(IL-24)基因表达载体(Ad-IL-24),观察其对U87-MG人脑胶质瘤细胞的生长抑制和凋亡作用,并探讨其分子机制.     

Smac蛋白对C6胶质瘤细胞的影响

目的 观察Smac蛋白对c6胶质瘤细胞的影响.方法 以不同浓度(1.5×10-6～1.5×10-2)g/L作用于C6胶质瘤细胞24～72 h,采用噻唑蓝(MTT)比色法检测细胞增殖抑制率,流式细胞术(FCM)检测细胞凋亡率和细胞周期的影响.结果 (1)Smac能以剂量和时间依赖方式抑制C6胶质瘤细胞的增殖,在终质量浓度为1.5×10-2g/L,72 h时抑制率达(57.13±1.41)%,24 h半数抑制浓度(IC50)为:1.34×10-2g/L,其差异具有统计学意义(P<0.01);(2)经流式细胞仪分析,Same蛋白能诱导C6胶质瘤细胞发生凋亡,此作用呈剂量和时间依赖性;(3)Smac蛋白可将c6胶质瘤细胞阻滞在G0/G1期.结论 Smac蛋白能够显著抑制C6胶质瘤细胞生长,诱导其凋亡,其机制可能与C6胶质瘤细胞周期阻滞在G0/G1期有关.     

白细胞介素24和替尼泊甙联合抑制人胶质瘤细胞增殖的机制研究

目的:观察白细胞介素24(IL-24)与化疗药替尼泊甙(VM-26)对人胶质瘤细胞增殖的抑制作用是否相互协同增效,并探讨其可能的作用机制.方法:先用载有人白细胞介素24cDNA的新型重组腺病毒(Ad5F35-IL24)感染人胶质瘤细胞系U251,接着加入替尼泊甙.观察IL-24蛋白表达水平、细胞抑制率、凋亡率及Bcl-2和Bax蛋白的表达情况.结果:Ad5F35-IL24感染色U251细胞后IL-24蛋白高表达,Ad5F35-IL24+VM-26组U251细胞的抑制率、凋亡率明显增高(P＜0.001),Ad5F35-IL24+VM-26组U251细胞的Bax/Bcl-2升高最明显(P＜0.05).结论:IL24和替尼泊甙对U251细胞具有协同杀伤和诱导凋亡的作用,其机制可能与促凋亡蛋白Bax和抗凋亡蛋白Bcl-2的比值的升高有关.     

塞来昔布抑制脑胶质瘤细胞运动侵袭的影响

目的 观察环氧化酶-2(COX-2)选择性抑制剂塞来昔布(Celecoxib)对13251胶质瘤细胞运动侵袭能力的影响.方法 采用脑胶质瘤细胞的体外趋化运动模型和体外侵袭模型,分12、24 h的不同时间进行了Celecoxib抑制胶质瘤细胞运动侵袭的生物特性研究.结果 趋化运动实验中Celecoxib处理后12 h组、24 h组细胞较对照组细胞的趋化运动能力明显下降,两者差异有统计学意义(P＜0.01),12、24 h组细胞趋化运动抑制率为52.57%、73.91%,两者差异有统计学意义(P＜0.01);侵袭实验中Celecoxib处理12、24 h后侵袭至滤膜下表面的细胞数均低于对照组的细胞数,两者差异有统计学意义(P＜0.01),12、24 h组细胞组织侵袭抑制率为55.90%、85.16%,两者差异有统计学意义(P＜0.01).结论 Celecoxib能在模拟体内运动侵袭试验中有效抑制U251胶质瘤细胞的运动侵袭能力.     

Nestin及Musashi-1蛋白在人脑胶质瘤组织中的表达及其临床意义

目的 观察Nestin、Musashi-1蛋白在脑胶质瘤组织中的表达,探讨其与人脑胶质瘤发生及进展的关系.方法 50例人脑胶质瘤标本,应用免疫组织化学染色法检测Nestin、Musashi-1蛋白的表达.结果 50例胶质瘤标本中Nestin、Musashi-1蛋白的表达率分别为76%和68%,Nestin和Musashi-1蛋白在脑胶质瘤组织中的表达呈正相关.Nestin、Musashi-1蛋白在低恶性组和高恶性组脑胶质瘤阳性表达率分别为60.9%(14/23)、88.9%(24/27);52.2%(12/23)、81.5%(22/27),以上两组间阳性率差异均有统计学意义(P<0.05).结论 Nestin、Musashi-1蛋白的表达增高可能与脑胶质瘤的发生、发展有关,其表达还可能与脑胶质瘤的预后有关.

Abstract：

Objective To investigate the expression of Nestin and Musashi-1 in human glioma tissues and its clinicopathogical significance.Methods The expression of Nestin and Musashi-1 was examined in 50 human glioma samples by using immunohistochemistry staining.Results The expression rate of Nestin and Musashi-1 in glioma tissues was 76% and 68% respectively. There was a positive correlation between the expression of Nestin and Musashi-1 in glioma tissues. Immunohistochemical results showed that the positive rate of Nestin and Musashi-1 in low and high grade malignant gliomas was 60.9% (14/23), 88.9% (24/27); 52.2% (12/23), 81.5% (22/27) respectively (P<0.05).Conclusion The expression of Nestin and Musashi-1 may play a pivotal role in the initiation and development of glioma and may be correlated with cthe prognosis of glioma.     

脑胶质细胞瘤低密度脂蛋白受体活性研究

目的 观察人脑胶质瘤组织的低密度脂蛋白受体(LDLR)活性和其mRNA水平,探讨其与胶质瘤肿瘤级别的关系.方法 以125I-LDL为配体,采用受体-放射性配体结合分析法测定63例肿瘤及其周边脑组织的LDLR活性;逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)技术检测LDLR蛋白mRNA在瘤组织的表达.结果 胶质瘤组织LDLR活性为(129.43±48.04)μmol/g组织,其周边正常脑组织LDLR为(34.06±27.62)μmol/g组织,两者比较差异有统计学意义(P＜0.01);高级别胶质瘤组织的LDLR为(154.59±31.68)μmol/g组织,低级别胶质瘤组织LDLR活性为(92.32±24.37)μmol/g组织,高级别胶质瘤LDLR活性高于低级别(P＜0.05);胶质瘤组织LDLR蛋白mRNA水平均增高,但组间差异无统计学意义(P＞0.05).结论 脑胶质瘤组织LDLR活性明显增高,肿瘤级别越高,LDLR活性越高;因此,LDLR有可能成为脑胶质瘤治疗的潜在靶点.     

6例胶质瘤术后放射性脑病误诊为胶质瘤复发的临床分析

目的探讨胶质瘤术后放射性脑病与胶质瘤复发的鉴别。方法回顾分析我院2005年4月～2010年8月6例胶质瘤术后经放射治疗误诊为胶质瘤复发的临床资料。结果 5例病变全切,1例大部切除(切除90%)。6例病理结果为放射性脑病。1例术后右侧肢体肌力较术前转差(术前Ⅳ级,术后Ⅰ～Ⅱ级)。术后9～14 d出院。6例随访6～24个月,平均9.5月,患者恢复良好1,例术后8个月因胶质瘤复发再次入院。结论胶质瘤术后放射性脑病与胶质瘤复发难以区别,临床上容易误诊,应综合患者病史、复发时间、临床症状、影像学表现等多因素特征,提高临床鉴别诊断水平,降低误诊率的发生。     

ERCC1和MGMT在胶质瘤中的表达及意义

目的:探讨胶质瘤化疗耐药相关基因ERCC1及MGMT在正常脑组织和不同级别脑胶质瘤中的表达情况并分析其相关性,为临床个体化化疗方案的制定提供参考.方法:采用免疫组织化学技术,分别检测41例不同级别脑胶质瘤和10例正常脑组织中ERCC1及MGMT蛋白的表达情况,并进行相关性分析.结果:41例脑胶质瘤患者中MGMT阳性表达19例,其总体阳性表达率46.34％,不同级别的胶质瘤之间的差异无统计学意义(P＞0.05);41例脑胶质瘤患者中ERCC1阳性表达21例,其总体阳性表达率51.22％;对照组MGMT及ERCC1的表达呈阴性或弱阳性,胶质瘤组织中MGMT及ERCC1表达有显著性差异(P＜0.05).结论:不同级别脑胶质瘤MGMT表达与胶质瘤恶性程度无相关性.脑胶质瘤ERCC1表达随着胶质瘤级别的增高呈明显上升趋势,脑胶质瘤中MGMT和ERCC1表达有相关性,可以为病人制定个体化化疗方案时提供一定参考.     

人脑胶质瘤中EMP3和PCDH-γ-A11基因的甲基化调控

目的 研究胶质瘤中EMP3和PCDH-γ-A11基因的启动子甲基化与mRNA表达的关系,分析其在胶质瘤恶性进展中的启动子甲基化调控机制.方法 使用甲基化PCR(MSP)检测EMP3和PCDH-γ-A11基因在胶质瘤、正常脑组织及胶质瘤细胞株中的基因启动子甲基化情况;Real-time PCR检测部分胶质瘤中两个基因的mRNA表达情况;统计学方法分析其基因启动子甲基化、mRNA表达及临床情况间的关系.检测去甲基化试剂5-Aza-CdR对U251和SHG-44细胞株中两个基因启动子甲基化和mRNA表达的影响.结果 在88例胶质瘤中,EMP3基因启动子甲基化发生率为47.7%(42/88),其甲基化率随胶质瘤恶性程度的增加而增高;PCDH-γ-A11基因启动子甲基化发生率为86.4%(76/88),其甲基化率随胶质瘤恶性程度的增加而降低.各级别胶质瘤中EMP3和PCDH-γ-A11基因的mRNA表达与正常脑组织相比均下调(P<0.01).U251和SHG-44细胞株中均检测到EMP3和PCDH-γ-A11基因的启动子甲基化,并且5-Aza-CdR能重新激活两个基因的表达.结论 胶质瘤中EMP3和PCDH-γ-A11基因启动子甲基化可能导致了其mRNA表达下调.EMP3和PCDH-γ-A11基因启动子甲基化可能成为胶质瘤恶性程度和预后评价的分子生物学标记,也可为胶质瘤的基因治疗提供新的靶点.     

塞来昔布对胶质瘤细胞线粒体膜电位的影响

目的观察塞来昔布（Celecoxib）降低U251脑胶质瘤细胞线粒体膜电位（MMP）并诱导其凋亡的相关规律。方法采用100μmol／L塞米昔布处理培养的U251细胞，并用流式细胞仪检测其MMP和细胞凋亡的变化。结果经塞来昔布处理后胶质瘤细胞MMP明显降低，并随时间延长而变化。单染实验中12h和24h处理组与对照组比较差异有统计学意义（P〈0．01）；12h组与24h组比较差异有统计学意义（P〈0．01）。双染实验中Rhl23-PI-细胞为细胞膜完整，MMP降低，即将发生凋亡的细胞，12h处理组MMP明显降低，Rhl23-PI-细胞明显增多（P〈0．01）；24h处理组与对照组比较，MMP降低，Pthl23-PI-细胞明显增多（P〈0．01），但与12h组比较，MMP降低，Pthl23-PI-细胞明显增多（P〈0．01）。结论塞米昔布能有效降低胶质瘤细胞线MMP并能诱导U251细胞发生凋亡，从而降低细胞氧化供能，使胶质瘤细胞处于缺氧状态。塞米昔布对胶质瘤细胞MMP的影响可能参与胶质瘤细胞凋亡。     

丙泊酚对胶质瘤细胞替莫唑胺敏感性的影响及lncRNA-GAS5在其中的作用

目的:评价丙泊酚对胶质瘤细胞替莫唑胺敏感性的影响及长链非编码RNA-生长阻滞特异性转录因子5(lncRNA-GAS5)在其中的作用。方法:传代培养人U251胶质瘤细胞,以1×10 5/ml密度接种于6孔板、24孔板或96孔板。采用随机数字表法分为5组( n＝30)：对照组(C组)、替莫唑胺组(T...     

硫氯双酚通过应激活化蛋白激酶通路诱导人胶质瘤细胞凋亡

目的探讨抗寄生虫药物硫氯双酚对人胶质瘤细胞U251的作用及其机制。方法应用CCK8法、流式细胞仪和Western blotting观察不同浓度硫氯双酚对人胶质瘤细胞U251的存活率、细胞凋亡、应激活化蛋白激酶(c-Jun N-terninal kinase,JNK)及其磷酸化水平变化,以及JNK特异性抑制剂SP600125抑制JNK活性对硫氯双酚诱导细胞凋亡的影响。结果与对照组相比,硫氯双酚作用U251细胞24 h后,U251细胞存活率明显降低(P0.05),死亡率明显升高(P0.05),且有剂量依赖性;凋亡相关Capspase3、DNA修复酶PARP(paly ADP-ribose polymerase,PARP)表达和JNK和其化水平均显著升高(P0.05);SP600125抑制JNK活性可显著阻断硫氯双酚诱导的细胞凋亡。结论硫氯双酚可诱导人胶质瘤细胞U251凋亡,其机制可能与激活JNK信号通路有关。     

胶质瘤间质血管增生和细胞增殖与环氧化酶-2基因的关系

目的 探讨环氧化酶-2(COX-2)基因与胶质瘤间质血管增生和细胞增殖的关系.方法 用原位杂交方法 检测胶质瘤组织中COX-2 mRNA的表达;用免疫组织化学检测同等标本中细胞增殖指数(Ki-67LI)及微血管密度(MVD)的表达;并将COX-2 mRNA与Ki-67、CD34作相关分析.结果 胶质瘤中COX-2 mRNA表达阳性率为62.69%,对照脑组织中无阳性表达.COX-2 mRNA阳性着色定位于微血管周围,呈棕黄色园环状表现.C0x-2 mRNA表达阳性率在低度恶性胶质瘤(Ⅰ、Ⅱ级)中为37.14%(14/35),而在高度恶性胶质瘤(Ⅲ、Ⅳ级)中为87.50%.在低度、高度恶性胶质瘤中MVD分别为12.54±3.11和20.31±5.49;其Ki-67LI分别为12.29±5.12和23.31±7.14.COX-2 mRNA表达为阴性和阳性胶质瘤中其MVD分别为16.90±6.48和9.46±2.15,其Ki-67LI分别为18.73±8.87和11.10±2.93.结论 COX-2 mRNA在胶质瘤组织中的表达与胶质瘤间质血管增生和细胞增殖密切相关;MVD和Ki-67U在COX-2 mRNA表达为阴性和阳性组织中比较差异有统计学意义.     

胶质瘤干细胞疫苗治疗恶性脑胶质瘤

利用自体树突状细胞(DC)诱导特异性细胞毒性T淋巴细胞(CTL)抗肿瘤的主动免疫治疗方法 前景广阔[1].我们以胶质瘤干细胞抗原负载树突状细胞(DC),诱导特异性T细胞,并检测其对胶质瘤细胞杀伤能力,探讨其作用机制.     

骨髓基质干细胞靶向胶质瘤迁徙的研究

目的探讨骨髓基质干细胞(MSCs)向胶质瘤迁徙的能力及其分布模式。方法应用纳米超顺磁性氧化铁粒子(SPIO)和增强型绿色荧光蛋白(EGFP)双重标记大鼠MSCs,Transwell系统定量分析MSCs的迁徙能力。将标记的MSCs经静脉注射人胶质瘤荷瘤大鼠体内,普鲁士蓝和荧光染色检测MSCs靶向颅内胶质瘤迁移的分布模式。结果与生理盐水或正常脑组织溶解物比较,F98胶质瘤细胞和F98胶质瘤溶解物显著诱导MSCs向其迁徙(P<0.01)。F98胶质瘤细胞显著刺激MSCs的迁徙(三倍于对照组),而F98胶质瘤溶解物具有最强的诱导MSCs迁徙的能力(五倍于对照组)。移植MSCs后第7天,SPIO/EGFP双标细胞散在分布于肿瘤中;第14天,绝大多数标记的MSCs位于肿瘤和正常脑组织之间沿肿瘤边界分布。结论系统移植的MSCs高度特异性地向颅内胶质瘤"归巢",呈时空分布模式。     

Hedgehog信号通路在脑胶质瘤的表达及其预后意义

目的 观测Hedgehog信号通路在脑胶质瘤的表达,探讨其表达在脑胶质瘤的预后意义.方法 选取118例原发性脑胶质瘤患者的手术切除标本,运用免疫组织化学方法检测Sonic hedgehog(Shh)、受体Patched(Ptch)及下游转录因子Gli1的表达,采用Kaplan-Meier生存分析和Cox比例风险回归模型评价脑胶质瘤患者的预后.结果 免疫染色结果显示Shh、Ptch和Gli1的阳性表达率随胶质瘤病理等级升高呈增强趋势(P＜0.01);随KPS评分的下降而成增强趋势(P＜0.01).生存分析表明,阳性表达Shh、Ptch和Gli1的胶质瘤患者总体存活率低于三者不表达的患者(P＜0.01).多因素Cox分析显示KPS(P＜0.05)、WHO grade(P＜0.01)、Shh(P＜0.05)、Ptch (P＜0.05)和Gli1(P＜0.05)是影响脑胶质瘤预后的独立因素.结论 脑胶质瘤的Shh-Ptch1-Gli1 信号通路处于激活状态,与脑胶质瘤的临床病理特征及预后参数密切相关,提示Hedgehog信号通路的活化在脑胶质瘤的恶性潜能和患者的生存时间起重要的预示作用.     

胰岛素样生长因子结合蛋白-2在脑胶质瘤中的表达及意义

目的　了解胰岛素样生长因子结合蛋白 2 (IGFBP 2 )在不同级别脑胶质瘤中的表达情况及其临床意义。方法　采用逆转录 聚合酶链反应 (RT PCR)和免疫组织化学方法 ,对 3 0例脑胶质瘤IGFBP 2mRNA和蛋白的表达情况进行研究。结果　低级别胶质瘤的IGFBP 2mRNA平均水平为 2 8.6% (8%～ 3 8% ) ,而高级别的平均mRNA为 3 9.3 6% (12 %～ 5 9% ) ;低级别胶质瘤IGFBP 2平均标记指数 (MLS =1.0 0 0 )也明显低于高级别胶质瘤 (MLS =2 .12 9)。结论　IGFBP 2mRNA及蛋白表达水平与脑胶质瘤的恶性程度呈正相关 ,提示IGFBP 2在脑肿瘤的恶性转化、肿瘤坏死及转移中起重要作用。     

高血供脑胶质瘤的诊断和治疗

脑胶质瘤约占颅内肿瘤的45％，其临床表现较为复杂，手术切除病灶仍是目前主要的治疗手段之一。部份脑胶质瘤血供极为丰富，术中出血汹涌，手术难度较大，如肿瘤位置深在或位于重要功能区，则手术更困难。能否在术前明确其血供性质，并在术中有效控制和减少出血，对于肿瘤的切除具有关键作用。我院自1990年1月至1998年12月共收治幕上脑星形胶质细胞瘤153例，根据术前影像学资料和术中肿瘤的血液供给情况，其中24例(15．7％)被列入高血供脑脑质瘤。现结合此24例临床资料就其有关诊断和治疗问题提出讨论。     

STAT3和Cyclin D1在人脑胶质瘤中的表达及其意义

目的 探讨信号转导及转录激活因子3(STAT3)和细胞周期蛋白D1(Cyclin D1)表达与脑胶质瘤生物学行为的关系及意义.方法 用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)和Western blot方法检测并比较68例不同级别胶质瘤和10例正常脑组织中STAT3和Cyclin D1的表达,并对两者表达做相关分析.结果 RT-PCR检测胶质瘤组织STAT3、Cyclin D1的mRNA表达量(2.23±0.32、2.18±0.26)均明显高于正常脑组织(0.53±0.14、0.48±0.11),Western blot检测胶质瘤组织STAT3、Cyclin D1的蛋白表达量(42.3±2.6)%、(45.4±1.8)%均明显高于正常脑组织(9.8±1.1)%、(10.4±0.9)%,其差异均有统计学意义(P＜0.05),STAT3和Cyclin D1的表达与胶质瘤级别呈正相关.结论 STAT3可能通过激活其下游靶基因Cyclin D1,引起胶质瘤细胞异常增殖和分化失控.