补阳还五汤对大鼠脊髓损伤后红核脊髓束再生及功能修复的影响

为探讨补阳还五汤对脊髓损伤后轴突再生及功能修复的影响,将SD大鼠C3-C4右侧红核脊髓束(RST)横断后,分别以补阳还五汤和蒸馏水连续灌胃8周,用BDA顺行束路示踪方法检测轴突再生情况,采用自发性直立探究行为学测试方法评判前肢运动功能的恢复。结果显示:灌服补阳还五汤组的大鼠在损伤RST的尾侧可见少量的BDA标记纤维,伤侧前肢使用率明显高于蒸馏水组(P<0.01)。上述结果提示,补阳还五汤能促进大鼠横断的红核脊髓束轴突再生及部分功能修复。     

灌服中药补阳还五汤的大鼠血清促进胚胎神经上皮细胞存活与分化的研究

为了观察灌服中药补阳还五汤的大鼠血清对胚胎神经上皮细胞生长分化的影响 ,在给 Wistar大鼠灌服中药后 ,麻醉后取血并分离血清 ;取孕 11d大鼠胚胎神经管上皮细胞 ,分别接种于含有补阳还五汤药物血清和对照鼠血清的培养基内 ,于培养后不同时间观察细胞的生长状况 ,测量细胞突起长度 ,并用免疫组化技术检测胚胎神经上皮细胞的分化状况。结果显示 :药物血清组神经上皮细胞的生长明显优于对照组 ,细胞突起长度也大于对照组 ;免疫组化反应显示 ,药物血清组神经元及神经胶质细胞数量均多于对照组。结论 :灌服补阳还五汤的鼠血清既可促进胚胎神经上皮细胞的生长也可诱导其分化。     

大鼠脊髓全横断后神经营养素-3在红核表达的变化

目的:研究大鼠脊髓全横断后神经营养素-3(NT-3)在红核表达的变化,为进一步探索脊髓损伤后的再生修复机制和神经营养因子治疗脊髓损伤提供实验依据。方法:雄性SD大鼠36只随机分为3组,脊髓横断组:大鼠脊髓在胸10~11节段之间完全横断,按存活时间不同又分为术后1、3、7及14d组;假手术组(只行椎板切除术);正常对照组。动物到达存活时间点后,应用免疫组织化学ABC法和图像分析技术检测NT-3在红核的表达。结果:对照组和实验组红核有NT-3阳性细胞。脊髓全横断后红核NT-3的表达逐渐增高,于术后7d达高峰,后缓慢下降。结论:脊髓全横断后红核对NT-3的表达增加,内源性NT-3的增加可能有利于受损的红核内神经元的存活与再生。     

雌激素对大鼠红核神经元保护作用的体视学定量

目的 观察雌激素（E₂）替代治疗对去卵巢SD大鼠脊髓损伤后红核神经元逆行性损伤的影响。方法 成年雌性SD大鼠80只, 随机分为正常组、红核脊髓束(RST)损伤组、E2替代治疗组、雌激素受体拮抗剂（ICI）治疗组和E₂+ICI联合治疗组。SD大鼠去势后1周采用选择性切断脊髓C3～C4左侧背外侧索制作单侧红核脊髓束（RST）横断损伤模型,给予不同条件治疗后1周、2周和4周对各组大鼠采用前肢支撑探测实验进行行为学评价,用红色荧光金（FR）逆行荧光示踪及体视学定量分析法,观察红核神经元的形态及数目变化。结果 前肢支撑探测实验结果显示,各时间点E2替代治疗组的左前肢使用率均高于除正常组外其他各组,但无统计学意义（P >0.05）;形态学检测结果可见各组大鼠中脑右侧FR阳性红核神经元数目除正常组外均有不同程度减少,尤以4周时最为明显。E2替代治疗组右侧中脑FR阳性红核神经元与RST损伤组、ICI治疗组和E₂+ICI 联合治疗组相比胞体饱满、轮廓清晰、突起长,体视框计数结果显示,E₂替代治疗组红核FR阳性神经元数目明显多于其余各组（P<0.05）,但RST损伤组、ICI治疗组和E₂+ICI联合治疗组之间右侧中脑FR阳性红核神经元数目未见明显差异（P>0.05）。结论 大鼠脊髓横断损伤后中脑红核神经元发生逆行性损伤,E₂替代治疗可减轻脊髓损伤引发的继发性红核神经元损伤。     

三七总皂甙对大鼠脊髓损伤后背核和红核神经元存活的影响

目的探讨三七总皂甙对脊髓半横断后受损伤背核和红核神经元存活以及背核神经元表达一氧化氮合酶(NOS)的影响。方法25只成年雌性大鼠在施行脊髓半横断术后,被分为对照组、三七总皂甙低剂量组、三七总皂甙中剂量组、三七总皂甙高剂量组和L-NNA组。三七总皂甙组每天胃饲一定剂量的三七总皂甙,L-NNA组每d腹腔内注射L-NNA。术后30d取出脊髓和大脑行冷冻切片,做NADPH酶组化染色和中性红染色。结果脊髓半横断后,对照组损伤侧背核神经元和红核神经元数目明显降低,背核面积减少,背核NOS阳性神经元增多;应用三七总皂甙和L-NNA后,损伤侧背核神经元数目和背核面积有恢复性增加,尤其是高剂量三七总皂甙的效果更明显。三七总皂甙和L-NNA均可抑制受损伤的背核神经元表达NOS,三七总皂甙还可提高损伤侧红核神经元的存活率。结论三七总皂甙能够促进受损伤的背核神经元和红核神经元的存活,同时能够抑制受损伤的背核神经元表达NOS。     

灵芝孢子和一氧化氮合酶抑制剂对大鼠脊髓损伤后背核、红核神经元存活及轴突再生的影响

目的探讨灵芝孢子和一氧化氮合酶（NOS）抑制剂（L-NNA）联合应用能否促进脊髓半横断后受损伤的背核和红核神经元存活及其轴突再生。方法30只成年雌性大鼠被分为对照组、L-NNA组、灵芝孢子低剂量组、灵芝孢子低剂量＋L-NNA组、灵芝孢子高剂量组和灵芝孢子高剂量＋L-NNA组。灵芝孢子高剂量＋L-NNA组动物在T11脊髓段半横断后注射L-NNA和胃饲高剂量灵芝孢子。结果脊髓半横断后30d,对照组L1脊髓损伤侧背核神经元数量减少,NOS表达阳性。L-NNA组和灵芝孢子低剂量组损伤侧背核神经元增加,但NOS表达降低。灵芝孢子低剂量＋L-NNA组和灵芝孢子高剂量组损伤侧背核神经元明显增加,NOS表达显著降低。灵芝孢子高剂量＋L-NNA组损伤侧背核神经元最多,NOS表达最低,而且有些神经元胞体被荧光金标记。对照组和L-NNA组损伤侧红核神经元密度降低。灵芝孢子低剂量组和灵芝孢子低剂量＋L-NNA组损伤侧红核神经元密度提高。灵芝孢子高剂量组和灵芝孢子高剂量＋L-NNA组损伤侧红核神经元密度明显提高。结论灵芝孢子和L-NNA都能促进脊髓半横断后受损伤背核神经元的存活,两者联合应用能更好地促进受损伤的背核神经元存活及其轴突再生。灵芝孢子也能促进受损伤的红核神经元存活。     

中药补阳还五汤对脊髓神经元的保护作用

目的 研究“补阳还五汤”在体外培养中是否具有一定的神经元保护作用。方法 本研究采用原代培养胎鼠脊髓神经元，分别将高浓度的补阳还五汤（20μl／ml）、低浓度的补阳还五汤（10μl／ml）与体外培养5d的原代脊髓神经元共同孵育24h，空白对照组不加中药只加入等量的培养液。选用100μmol／L的谷氨酸作用于细胞1h，建立谷氨酸诱导原代脊髓神经元调亡的细胞培养模型，采用酶学方法（MTT法）评价神经元损伤程度。结果 补阳还五汤组神经元线粒体内的琥珀酸脱氢酶的活性明显地高于空白对照组，组间有极显著的差异（P〈0．001）。结论 “补阳还五汤”可以部分地抑制谷氨酸的兴奋性神经毒性作用。     

补阳还五汤对大鼠脊髓损伤后移植间充质干细胞转分化的作用

目的观察脊髓损伤(SCI)后补阳还五汤是否有促进移植间充质干细胞(MSC)转分化为神经元作用。方法SD大鼠30只,以自制改良Allen装置造模成功后,随机分为模型组(不治疗)、补阳还五汤组、补阳还五汤加MSC组各10只。补阳还五汤组大鼠造模后当天即开始每天一次中药灌胃(3g/kg);补阳还五汤加MSCs组大鼠造模后随即移植MSC,细胞浓度1×106/mL,每鼠4.5!L,注入大鼠蛛网膜下隙,注射速度1!L/min,并开始每天一次中药灌胃,剂量3g/kg。4周后观察脊髓结构变化。结果与模型组相比,补阳还五汤组脊髓组织结构明显改善,前角运动神经元数量有所增加;补阳还五汤加MSC组结构最佳,并且前角运动神经元数量最多。结论由此推测补阳还五汤可能有促进移植MSC转分化为脊髓前角运动神经元作用。     

大鼠脊髓半横断损伤对脊神经节P物质表达的影响

目的探讨脊髓半横断损伤对脊神经节P物质(SP)表达的影响。方法选取成年SD大鼠30只,随机分为5组,每组6只;实验组为4组,正常对照组为1组。实验组:脊髓右侧行半横断损伤,术后3、7、14和28d于各时间点分别取出损伤区手术侧脊神经节,石蜡切片后行免疫组织化学染色,结合图像分析技术观察SP在脊神经节内含量的变化。对照组不做任何处理,7d后检测同上。结果术后3d脊神经节内SP的阳性神经元数、阳性细胞百分率较对照组明显增多,7d组较3d组呈下降趋势,14d进一步下降,28d组SP的阳性神经元数、阳性细胞百分率逐渐回升,但仍低于正常对照组。结论脊髓半横断损伤可导致脊神经节SP表达改变,提示SP作为一种感觉神经的传导物质,可能在脊髓半横断损伤过程中发挥作用。     

补阳还五汤对大鼠脊髓损伤后移植神经干细胞存活、增殖与迁移的影响

目的:探讨补阳还五汤(Buyang Huanwu Decoction,BYHWD)灌胃对脊髓损伤(spinal cord injury,SCI)后移植胚胎神经干细胞(neural stem cells,NSCs)存活、增殖与迁移的影响。方法:将SD大鼠随机分为SCI组、NSCs移植组、NSCs移植联合补阳还五汤灌胃组。制作大鼠脊髓横断损伤模型,将BrdU标记NSCs细胞按浓度1×106/ml分别移植入移植组和联合组的脊髓横断处,损伤组用等量DMEM/F12完全培养基代替。术后联合组每天用BYHWD予以灌胃治疗1次,损伤组和移植组用生理盐水代替。各组在7、14、28 d后分别取材,用免疫荧光组织化学法检测移植在SCI处的NSCs存活、增殖和迁移情况。结果:损伤组未见BrdU标记阳性细胞;联合组各时间点BrdU标记阳性细胞数量均多于移植组各时间点,并有显著性统计学意义(P<0.05);联合组28 d时BrdU标记阳性细胞数量最多,与联合组7 d和14 d相比有显著性统计学意义(P<0.05);在联合组各时间点,BrdU标记阳性细胞向SCI处头尾端组织迁移的距离明显长于移植组各时间点。结论:脊髓横断损伤后,移植胚胎NSCs能够存活并增殖和迁移。补阳还五汤能够促进大鼠脊髓全横断损伤处移植的NSCs存活、增殖和迁移。     

Recovery of food-taking in cats after lesions of the corticospinal (complete) and rubrospinal (complete and incomplete) tracts

The food-taking movement by which a cat grasps a morsel of food and brings it to the mouth is governed by interneurones in the forelimb segments (C6-Th1) and is normally controlled by the cortico- and rubrospinal tracts. It disappears reversibly when these tracts are transected in C5. The reappearance after some time is at least in part due to a reticulospinal take-over of the command. We have compared the recovery after total transection of both tracts with that after lesions giving subtotal transection of the rubrospinal tract but total transection of the corticospinal tract. With 4-6% of the rubrospinal fibres left, the recovery of food-taking was clearly faster than after total transection.     

Clenbuterol，β_2-肾上腺素能受体激动剂促进成年大鼠脊髓半横切后红核脊髓束轴突再生和运动功能的恢复

目的研究Clenbuterol对于促进脊髓半横切(SCI)后轴突再生和运动功能恢复的功效。方法成年Wistar大鼠(n=10-12)接受硬脊膜内的第7颈段脊髓单侧半横切显微手术。Clenbuterol以9 mg/L的剂量加入饮用水中,而对照组未给予任何治疗。采用Cylinder试验和患肢抓力试验观察运动功能的恢复状况。行为学观察期(6周)结束后,大鼠接受第二胸段脊髓处椎板切开术,4%Fluorogold微量注射进入红核脊髓束,一周后被处死。结果运动功能逐渐恢复,从SCI后第3周开始,Clenbuterol治疗组显著优于对照组(最终患肢抓力:403.45±19.82g vs 335.13±13.48g,p<0.05);在Cylinder试验中,双侧前肢共同使用触壁的百分比,Clenbuterol组显著高于对照组(43.39%±5.85%vs 19.42%±6.61%,p<0.05)。Clenbuterol治疗显著地降低了SCI后继发性组织损伤,提高了pCREB阳性细胞核在整个SCI点的表达水平。与对照组相比,Clenbuterol显著地促进了红核脊髓束轴突的再生。结论脊髓损伤后,Clenbuterol可促进离断的轴突再生以及运动功能的恢复。     

补阳还五汤对EAE 小鼠免疫调节的作用

目的:探讨补阳还五汤对实验性自身免疫性脑脊髓炎的抗炎治疗效果和免疫调节机制。方法:雌性C57BL/6小鼠采用MOG35-55 多肽诱导建立EAE 模型后,随机分为生理盐水组、补阳还五汤组,每组13 只。造模的第3 天给药,生理盐水组给予生理盐水25 ml/ kg 灌胃,补阳还五汤组给予补阳还五汤生药量50 g/ kg 灌胃,共治疗25 d。每天记录临床症状评分和体重变化。HE 染色检测脊髓组织炎细胞浸润,髓鞘染色观察髓鞘脱失情况,免疫荧光技术检测脾脏ROCK 表达。流式细胞术检测脾脏CD4+ T 细胞亚群变化。Western blot 法检测脊髓TLR4、Myd88、NF-B、COX-2、ROCK 和脑ROCK 的表达。结果:与生理盐水组比较,补阳还五汤治疗后明显降低EAE 小鼠神经功能评分(P<0.001),抑制中枢神经系统炎细胞浸润(P<0.05),减轻髓鞘脱失(P<0.05),增加CD25+(P<0.05)、IL-10+(P<0.05)、TGF-β+(P<0.01)、IFN-β+(P<0.05)CD4+ T 细胞的比例;抑制外周和中枢ROCK域的表达(P<0.05);减少脊髓TLR4、Myd88、NF-B、COX-2 的表达(P<0.05)。结论:补阳还五汤可以通过抑制ROCK / TLR4/ NF鄄资B 炎性通路和调节外周T 细胞亚群比例发挥其抗炎和免疫调节作用。     

Brn-4在大鼠海马神经干细胞向神经元分化中的作用

为探讨Brn-4在海马神经干细胞(neural stem cells,NSCs)向神经元分化过程中的作用,分别制备切割海马伞侧和正常侧海马提取液,将鼠胚海马神经干细胞球分成3组:(1)切割组加入含切割侧海马提取液的DMEM/F12无血清培养基;(2)正常组加入含正常侧海马提取液的DMEM/F12无血清培养基;(3)对照组加入单纯的DMEM/F12无血清培养基。培养后第14d行Brn-4/MAP-2免疫荧光双标染色。在荧光显微镜下分别计数每个视野下Brn-4单标神经元和Brn-4/MAP-2双标神经元的数量,并测量双标神经元的胞体面积、细胞周长以及Brn-4的免疫荧光强度。用图像处理系统和Stata7.0软件对所得数据进行统计学分析。结果显示:Brn-4/MAP-2双标神经元数在切割组中较多、胞体较大、突起较丰富,且Brn-4的免疫荧光亦较强;正常组次之,对照组最差。上述数据经组间比较分析,3组间差异有显著性意义(P<0.01)。本研究结果提示Brn-4在海马神经干细胞向神经元分化过程中可能发挥重要作用。     

银杏叶提取物改善AD模型鼠学习记忆功能的作用

目的 :研究银杏叶提取物 (EGb)对早老性痴呆 (AD)模型鼠学习记忆等认知功能的影响和对基底前脑隔区胆碱能神经元的保护作用。方法 :大鼠随机分成预防组、治疗组和对照组。各组切割右侧海马伞后分别用EGb(预防组及治疗组 )和蒸馏水 (对照组 )灌胃连续 6周。其中预防组在手术前先用EGb灌胃 2周。各组在术后次日及灌胃 6周后进行行为学检测。脑切片经Nissl、NOS组织化学和ChAT免疫组织化学染色 ,观察损伤侧内侧隔核和斜角带垂直支中NOS和ChAT阳性神经元的变化 ,并对ChAT阳性神经元作图像分析。数据分别用方差分析、SNK检验及 χ2 检验作统计学处理。结果 :行为学检测证实 ,EGb用药组AD模式鼠的学习记忆等认知功能较对照组明显改善 ,其中预防组效果又较治疗组为好 ;形态学检测证实 ,EGb用药组AD模式鼠损伤侧内侧隔核和斜角带垂直支中NOS、ChAT阳性神经元数目及ChAT阳性神经元的面积和周径等均优于对照组 ,预防组结果又优于治疗组。结论 :EGb对AD模型鼠学习记忆等认知功能障碍有一定的改善作用 ,这一作用是通过保护基底前脑隔区胆碱能神经元而实现的 ,其中预防效果比治疗效果更优     

神经生长因子对穹窿海马伞切割后海马自体神经干细胞增殖和向神经元分化的影响

目的 探讨切割穹窿海马伞及脑室给予神经生长因子(NGF)后,对大鼠海马自体神经干细胞增殖和分化为神经元的影响.方法 12只SD大鼠,随机分成给药组和对照组,每组6只,切割右侧穹窿海马伞,两组切割后即时及第2d、4d向侧脑室分别注射NGF和人工脑脊液, 并在术后第3～7d每日腹腔注射2次BrdU.于术后28d灌注取脑、冷冻切片,行BrdU/NF-200免疫荧光双标检测.结果 海马齿状回内BrdU阳性细胞数,给药组和对照组切割侧明显多于正常侧,给药组切割侧和正常侧分别多于对照组切割侧和正常侧;海马齿状回内的BrdU/NF-200双标神经元数,给药组切割侧最多,给药组正常侧和对照组切割侧较少,而对照组正常侧则无.结论 切割穹窿海马伞后,可致大鼠海马齿状回自体神经干细胞增殖加快并向神经元分化,脑室施加 NGF可促进其增殖和分化.     

Expression of Semaphorin3C in axotomized rodent facial and rubrospinal neurons

Semaphorins are a family of axonal guidance molecules that, by virtue of their chemorepulsive or chemoattractive actions, may be the important factors in determining the success or failure of axonal regeneration in the mature nervous system after injury. Here, we have used two adult mouse models of nervous system injury to evaluate the neuronal expression of Semaphorin3C (Sema3C) in regenerating (facial motoneurons) and non-regenerating (rubrospinal) neurons following axonal injury. Using in situ hybridization (ISH), we observed that uninjured facial motoneurons express Sema3C mRNA and, following axonal injury, there is a transient up-regulation in Sema3C mRNA expression in injured motoneurons. In contrast, Sema3C mRNA was not detected in uninjured rubrospinal neurons; however, following axotomy, injured rubrospinal neurons significantly up-regulate Sema3C mRNA expression. The increase in Sema3C mRNA expression in axotomized rubrospinal neurons was not limited to the mouse nervous system: serial dilution RT-PCR analysis revealed a similar increase in Sema3C mRNA expression in the axotomized rat rubrospinal nucleus, 3 days following a rubrospinal tract lesion. This demonstrates that increased Sema3C mRNA levels in axotomized rubrospinal neurons is common to both mouse and rat injury models.