海马去神经支配损伤后放射状胶质细胞表达RUNX1T1的变化及向神经元分化的影响

目的 观察海马去神经支配损伤后,海马放射状胶质细胞表达RUNX相关转录因子1转位1（RUNX1T1）和向神经元分化的情况。方法 取6只大鼠,采用物理切割大鼠穹隆海马伞术制备海马去神经支配损伤模型,并制备海马提取液,海马放射状胶质细胞体外培养,培养液中加入海马提取液。实验分为去神经支配组、正常组和空白对照组,共6块24孔板,每组各48孔。采用Real-time PCR、Western blotting及免疫荧光技术检测各组放射状胶质细胞表达RUNX1T1 mRNA和蛋白的变化,以及分化成微管相关蛋白 2（MAP-2）阳性神经元比例。结果 体外培养的海马放射状胶质细胞具有细而长的突起,且表达RUNX1T1,去神经支配组中RUNX1T1阳性细胞的荧光强度高于正常组和空白对照组约1.8倍,细胞突起也较后两组长。去神经支配组RUNX1T1 mRNA和蛋白表的表达量各上调2.9倍和2.4倍,且39.33%细胞表达MAP-2,与正常组和空白对照组相比,阳性细胞数比例明显增高。结论 海马去神经支配损伤后海马放射状胶质细胞上调表达RUNX1T1,并可更多地向神经元分化。     

穹隆海马伞切割后大鼠海马内RUNX1T1 mRNA和蛋白的表达变化

目的 观察穹隆海马伞切割后不同时间点海马内RUNX1T1 mRNA和蛋白的表达变化及定位。方法 行穹隆海马伞切割术,制备模型大鼠。实验分为正常组、切割3d组、切割7d组、切割14d组、切割21d组、切割28d组。1.提取海马组织总mRNA,用Real-time PCR 检测大鼠海马组织中RUNX1T1mRNA 的表达;2.提取海马组织总蛋白,用Western blotting 检测海马内RUNX1T1蛋白的表达;3.行脑冷冻切片,行RUNX1T1免疫荧光检测和Hoechst标记,观察海马齿状回中RUNX1T1/Hoechst双标阳性细胞。 结果 Real-time PCR检测显示,切割3d组海马组织中RUNX1T1 mRNA的表达明显上调,其余各组差异不明显;Western blotting检测结果显示,正常组海马中有微量RUNX1T1蛋白表达,而切割3d组海马组织中RUNX1T1蛋白表达量明显上升,并达到高峰,7d时仍有较多的表达,此后,14d、21d、28d组中RUNX1T1蛋白表达很快又恢复到正常水平;免疫荧光检测结果表明,正常组海马齿状回中有少量的RUNX1T1/Hoechst阳性细胞,切割3d组海马齿状回中RUNX1T1/Hoechst阳性细胞数量最多,切割7d组逐渐减少,切割14d组、21d组和28d组与正常组差别不明显。结论 穹隆海马伞切割后海马内RUNX1T1 mRNA和蛋白表达在早期呈短暂性上调,并定位于海马齿状回颗粒下层,推测可能与海马神经再生过程中神经干细胞向神经元分化有关。     

神经生长因子对穹窿海马伞切割后海马自体神经干细胞增殖和向神经元分化的影响

目的 探讨切割穹窿海马伞及脑室给予神经生长因子(NGF)后,对大鼠海马自体神经干细胞增殖和分化为神经元的影响.方法 12只SD大鼠,随机分成给药组和对照组,每组6只,切割右侧穹窿海马伞,两组切割后即时及第2d、4d向侧脑室分别注射NGF和人工脑脊液, 并在术后第3～7d每日腹腔注射2次BrdU.于术后28d灌注取脑、冷冻切片,行BrdU/NF-200免疫荧光双标检测.结果 海马齿状回内BrdU阳性细胞数,给药组和对照组切割侧明显多于正常侧,给药组切割侧和正常侧分别多于对照组切割侧和正常侧;海马齿状回内的BrdU/NF-200双标神经元数,给药组切割侧最多,给药组正常侧和对照组切割侧较少,而对照组正常侧则无.结论 切割穹窿海马伞后,可致大鼠海马齿状回自体神经干细胞增殖加快并向神经元分化,脑室施加 NGF可促进其增殖和分化.     

大鼠穹隆海马伞切割对海马伞内神经干细胞再生的影响

目的 检测损伤的穹隆海马伞内自体神经干细胞的再生情况.方法 SD大鼠7只,切割左侧穹隆海马伞,术后腹腔注射5-溴脱氧尿嘧啶核苷(BrdU).术后7d取脑组织制备冷冻切片,行Nestin、BrdU免疫荧光检测;取穹隆海马伞组织进行神经干细胞的体外分离培养,对获得的细胞球进行增殖性、胚胎性以及多分化潜能的检测.结果 切割...     

多媒体课件在解剖学理论教学中的利与弊及其优化

随着电子信息技术的发展、应用和普及,多媒体技术在高校教学领域中得到了较为广泛的应用,在医学多个学科的教学中也得到了较好的普及,该文就多媒体课件在解剖学理论教学中的应用进行深入分析,并进一步优化。     

去神经支配大鼠海马内MTSS1的表达变化

目的:探讨切割穹窿海马伞去神经支配大鼠海马内转移抑制蛋白1(metastasis suppressor 1,MTSS1)的表达变化。方法:SD大鼠随机分成正常组和切割穹窿海马伞后1、3、5、7、14 d组,采用Real-time PCR和免疫荧光组织化学技术观察穹窿海马伞切割后海马内MTSS1 mRNA的表达变化和MTSS1阳性细胞的分布情况。结果:(1)Real-time PCR结果显示:海马内MTSS1 mRNA的相对表达量在切割后3 d开始升高(P<0.05),5 d达到最高水平(P<0.01),7 d恢复至正常水平;(2)免疫荧光组织化学染色结果显示:MTSS1阳性细胞主要表达于海马齿状回门区及颗粒下层中,切割后5 d MTSS1阳性细胞数开始增多(P<0.01),7 d继续增多并达到高峰(P<0.01),14 d时开始下降至正常水平。结论:结合本课题组以往的工作,上述结果提示切割穹窿海马伞后MTSS1的高表达可能与海马神经再生过程中神经干细胞向神经元的分化有关。     

切割穹隆海马伞海马提取液促进放射状胶质细胞增殖和向神经元分化

Objective To investigate the proliferation and differentiation effect of hippocampal niche on the radial glia cells EM>in vitro/EM> . Methods Successfully prepared normal hippocampal extracts and transected extracts after hippocampal fimbria-fornix transection. On the proliferation and differentiation stages, the normal and transected extracts were used to investigate their effects on the radial glia cells respectively. Results On the proliferation stage, the proportion of BrdU-positive cells in the transected group was obviously higher than that of the normal group and control group（EM>P/EM>0.05）; on the differentiation stage, the number of Tuj1-positive cells in the transected group was much more than that of the normal and control group（EM>P/EM>0.05）. Conclusion The fimbria-fornix transected hippocampal extracts can promote the proliferation and neurons differentiation of neonatal rats radial glia cells EM>in vitro/EM>. These data indicate     

去神经支配大鼠海马内MTSS1蛋白的表达变化

目的：探讨切割穹窿海马伞去神经支配大鼠海马内（metastasis suppressor 1,MTSS1）蛋白的表达变化.方法：SD大鼠随机分成正常组和切割穹窿海马伞后1、3、5、7、14 d组,采用Western Blot法检测穹窿海马伞切割后海马内MTSS1蛋白表达水平的变化.结果：海马内MTSS1蛋白的相对表达量在切割后1 d开始升高（P〈0.05）,3 d继续升高（P〈0.01）,5 d达到最高水平（P〈0.01）,7 d开始下降（P〈0.01）,14 d时基本恢复至正常水平（P〉0.05）.结论：切割穹窿海马伞去神经支配后海马内MTSS1蛋白表达水平明显上调,可能与海马神经再生过程中神经干细胞向神经元的分化有关.     

慢病毒介导的Lhx8基因过表达在海马胆碱能神经元发生中所起作用的初步研究

目的：明确Lhx8过表达慢病毒在海马齿状回胆碱能神经元发生中的作用。方法：构建Lhx8过表达重组质粒、进行慢病毒包装，通过颅脑立体定位和微量注射的方法，将所得慢病毒Lenti6.3-Lhx8注入SD大鼠海马齿状回中；于注射后第1、3、7、10、14天在激光共聚焦显微镜下直接观察增强绿色荧光蛋白(enhanced green fluorescent protein， EGFP)的荧光表达；检测术后第7天时EGFP/Lhx8/ChAT三标阳性细胞的数目。结果：慢病毒注射后第3天，海马齿状回中 EGFP绿色荧光信号最强；此后EGFP表达下降，注射后第14天，几乎检测不到EGFP阳性细胞；术后第7天，注射Lenti6.3-Lhx8的慢病毒侧海马齿状回门区内能够检测到EGFP/Lhx8/ChAT三标阳性细胞，与阴性对照侧比较明显增多。结论：海马齿状回内注射Lhx8过表达慢病毒能够促进胆碱能神经元的发生。     

激活的星形胶质细胞分泌聚集素蛋白及其对海马神经干细胞向神经元分化的促进作用

目的 探讨切割穹隆海马伞的侧海马提取液“激活”的星形胶质细胞分泌聚集素蛋白（CLU）及体外CLU诱导海马神经干细胞分化为神经元的情况。
方法 分别用切割穹隆海马伞的海马提取液、正常海马提取液、DMEM/F12 培养基培养星形胶质细胞,制备切割12h、24h、48h组,正常组和对照组条件培养基;ELISA检测比较不同条件培养基中CLU蛋白的浓度;体外细胞培养采用CLU诱导海马神经干细胞分化,设诱导组和空白对照组,7d后通过微管相关蛋白2（MAP-2）免疫荧光及Hoechst标记观察海马神经干细胞向神经元的分化情况。 结果 正常组和对照组条件培养基中CLU浓度较低,约为（0.1037±0.0119）ng/L和（0.1170±0.0078）ng/L;切割组12h、24h、48h条件培养基中其浓度明显增高,分别为（0.1940±0.0364）ng/L、（0.4250±0.0724）ng/L和（0.2903±0.0472）ng/L,以24h组最高,约为正常组和对照组的4倍。CLU诱导组中MAP-2阳性细胞数明显高于空白对照组（P<0.05）,其占总细胞数的百分比分别为(11.67±2.57)%和（4.52±1.54）%,且诱导组中MAP-2阳性细胞突起更长、更丰富。 结论 切割穹隆海马伞侧海马提取液“激活”的星形胶质细胞可分泌更多的CLU,体外细胞培养中CLU可促进海马神经干细胞向成熟的神经元分化。