非小细胞肺癌细胞株c-erbB-2基因的表达

目的:分析非小细胞肺癌细胞株中人类表皮生长因子受体-2(c-erbB-2)基因的mRNA水平和蛋白水平.方法:采用RT-PCR测定肺腺癌(CALU-3和A549)和鳞癌NCL-H520细胞株c-erbB-2 mRNA水平;采用流式细胞术检测CALU-3、A549和NCL-H520细胞株c-erbB-2蛋白水平.结果:肺腺癌CALU-3细胞株c-erbB-2 mRNA水平均高于腺癌A549和鳞癌NCL-H520细胞株,差异有统计学意义(P＜0.05),而A549和NCL-H520细胞株之间差异无统计学意义(P＞0.05);CALU-3细胞株c-erbB-2蛋白的阳性率均高于A549和NCL-H520细胞株,差异有统计学意义(P＜0.05),而A549和NCL-H520细胞株之间差异无统计学意义(P＞0.05).结论:c-erbB-2基因在肺腺癌CALU-3细胞株中的表达均高于腺癌A549和鳞癌NCL-H520细胞株.     

肺癌细胞株c-erbB-2基因与放疗抵抗的相关关系

目的:探讨人类表皮生长因子受体-2(c-erbB-2)基因与非小细胞肺癌细胞株放疗抵抗的关系.方法:采用RT-PCR测定肺腺癌(CALU-3和A549)和鳞癌NCL-H520细胞株的c-erbB-2 mRNA水平;采用流式细胞术检测CALU-3、A549和NCL-H520细胞株的c-erbB-2蛋白水平;绘制CALU-3、A549和NCL-H520细胞株的存活曲线.结果:肺腺癌CALU-3细胞株的c-erbB-2 mRNA水平均高于腺癌A549和鳞癌NCL-H520细胞株,差异有统计学意义(均P<0.05),而A549和NCL-H520细胞株之间差异无统计学意义(P0.05);CALU-3细胞株c-erbB-2蛋白的阳性率均高于A549和NCL-H520细胞株,差异有统计学意义(均P<0.05),而A549和NCL-H520细胞株之间差异无统计学意义(P0.05).存活曲线显示,CALU-3、A549和NCL-H520细胞株D0值依次为1.18 Gy±0.05 Gy、1.67 Gy±0.13Gy和1.50 Gy±0.26Gy,细胞株间差异无统计学意义(F=0.287,P0.05),Dq值分别为3.98 Gy±0.03Gy、2.43 Gy±0.47Gy和1.32 Gy±0.08 Gy(F=61.670,P<0.05),其中CALU-3和A549、A549和NCL-H520、CALU-3和NCL-H520细胞株之间差异有统计学意义(P分别为<0.05、<0.05、<0.01).结论:肺腺癌CALU-3细胞株的c-erbB-2基因在mRNA和蛋白水平均高于腺癌A549和鳞癌NCL-H520细胞株;三种细胞株中,CALU-3对?射线最不敏感,NCL-H520最敏感;推测c-erbB-2基因高表达可能与肺腺癌CALU-3细胞株放疗抵抗有关.     

PHF1基因在不同类型非小细胞肺癌中的表达水平及其生物学功能

目的分析人植物同源结构域指蛋白1(PHF1)基因在不同类型非小细胞肺癌中的表达水平及其生物学功能,为非小细胞肺癌诊治提供更好方案。方法采用实时荧光定量PCR检测非小细胞鳞癌/腺癌组织及鳞癌细胞株(NCI-H520)/腺癌细胞株(A549)中PHF1 mRNA表达水平。设计并构建PHF1低表达和PHF1过表达重组慢病毒载体,将其分别转染NCI-H520细胞和A549细胞,同时验证其转染效果。采用CCK8法、Transwell实验和流式细胞仪分别检测各组细胞增殖、侵袭及凋亡情况。结果与癌旁正常组织比较,PHF1 mRNA在非小细胞鳞癌组织中明显增高,在非小细胞腺癌组织中明显降低,差异均有统计学意义(P0.05);与腺癌细胞A549比较,鳞癌细胞NCIH520 PHF1 mRNA表达水平明显升高,差异有统计学意义(P0.05)。第1天,鳞癌细胞NCI-H520和腺癌细胞A549四组细胞增殖、侵袭及凋亡率比较差异均无统计学意义(P0.05);从第3天开始,鳞癌细胞NCI-H520和腺癌细胞A549四组细胞增殖、侵袭及凋亡率比较差异有统计学意义(P0.05),其中在增殖和侵袭方面:NCI-H520表现为PHF1过表达组阴性对照组≈空白对照组PHF1低表达组,而在A549表现为PHF1低表达组阴性对照组≈空白对照组PHF1过表达组;在凋亡率方面:NCI-H520表现为PHF1低表达组阴性对照组≈空白对照组PHF1过表达组,而在A549表现为PHF1过表达组阴性对照组≈空白对照组PHF1低表达组。结论 PHF1在非小细胞鳞癌中高表达,靶向抑制其可阻碍癌细胞增殖、侵袭及凋亡,过表达则反之;而在非小细胞腺癌中PHF1低表达,与鳞癌结果截然相反,有望成为鉴别非小细胞鳞癌与腺癌及个体化治疗的重要指标。     

STAT3、MRP、LRP在肺腺癌A549及A549/CARP耐卡铂细胞株中的表达及关系的研究

目的:探明STAT3与肺腺癌细胞多药耐药之间的关系.方法:采用免疫组化法测定A549及A549/CARP耐卡铂细胞株中STAT3、LRP、MRP蛋白表达情况.结果:STAT3在A549组、A549/CARP组中阳性细胞数无显著性差异(t=1.519,P＞0.05);LRP、MRP在A549组、A549/CARP组中阳性细胞数有显著性差异(t=3.350,P＜0.01)(t=3.747,P＜0.01);STAT3、LRP、MRP之间表达均无相关性(r=0.061,P＞0.05).结论:STAT3并未直接参与介导肺腺癌的多药耐药性;LRP、MRP均参与了诱导肺腺癌的耐药,但二者之间无相关性;STAT3信号传导途径与LRP、MRP蛋白的激活机制可能无关.     

新型鬼臼毒素衍生物LGN体外诱导人肺腺癌细胞A549凋亡

目的研究新型鬼臼毒素衍生物LGN体外诱导人肺腺癌细胞A549凋亡的作用机制。方法四甲基偶氮唑蓝法检测LGN抑制人肺腺癌细胞株A549增殖的情况,利用Giemsa染色、Hoechst染色、流式细胞仪、DNA ladder检测LGN诱导人肺腺癌细胞株A549凋亡的情况,利用反转录-聚合酶链反应检测凋亡相关基因半胱氨酸蛋白酶-3(caspase-3)、原癌基因bcl-2、促凋亡基因bax、p53等。结果 LGN对A549细胞有良好的抑制活性,半数抑制率明显优于阳性对照药依托泊苷,差异有统计学意义(P<0.05)。LGN可诱导A549细胞产生显著凋亡,并可增加A549细胞中p53、caspase-3及bax的mRNA表达,同时降低bcl-2的mRNA表达,并有良好的量效关系。结论鬼臼毒素新衍生物LGN可以诱导A549细胞发生凋亡,其机制可能与调节凋亡相关基因表达有关。     

干扰素对肺腺癌A549细胞B7-H4分子表达的影响

目的:探讨IFN-α和IFN-γ对人肺腺癌细胞株A549 B7-H4 mRNA和蛋白表达的影响。方法:用不同浓度(100、500、1 000、2 000 U.ml-1)IFN-α和IFN-γ分别处理A549细胞,未经药物处理细胞作对照(对照组)。用MTT法观察细胞增殖活性的差异,RT-PCR观察B7-H4 mRNA表达水平的变化,蛋白质印迹法观察B7-H4蛋白表达水平的变化。结果:IFN-α和IFN-γ对人肺腺癌细胞株A549增殖有抑制作用,其抑制效应具有时间和剂量依赖性(P<0.05)。随着IFN-α浓度的增加,B7-H4分子mRNA和蛋白表达增强(P<0.05),而IFN-γ对B7-H4分子mRNA和蛋白表达影响不明显(P>0.05)。结论:IFN-α和IFN-γ均可抑制人肺腺癌A549细胞株的增殖;IFN-α可增强B7-H4mRNA和蛋白水平的表达,而IFN-γ对B7-H4分子mRNA和蛋白表达影响不明显。     

利用RNAi技术抑制Bcl 2基因表达增强肺腺癌A549细胞放射敏感性

目的利用RNAi技术抑制Bcl 2基因的表达,观察其对肺腺癌A549细胞凋亡和放射敏感性变化的影响。方法构建Bcl 2基因的干扰质粒pBcl 2 siRNA,稳定转染人肺腺癌A549细胞,同时设立转染无意义链组、空载体组和未转染组。采用Real time RT PCR和Western blot方法, 观察Bcl 2基因在mRNA和蛋白水平表达的变化。采用流式细胞术和克隆形成方法,检测RNA干扰对A549细胞放射敏感性的影响。结果成功构建bcl 2 siRNA质粒,转染A549细胞,获得稳定转染细胞株A549/Bcl2 Ins;Bcl 2mRNA、 Bcl 2蛋白表达明显降低;A549/Bcl2 Ins凋亡率［（10.11±0.92）%］明显高于对照组,6Gy X线照射后凋亡率［（28.81±1.10）%］明显高于对照组及未照射组;A549/Bcl2 Ins的D0和Dq值分别为1.399和1.298,明显低于转染无意义序列细胞株A549/Bcl2 Neg(1.695和2.480)、转染空载体细胞株A549/SD (1.706和2.227)和空白对照细胞A549(1.816和2.777)。结论RNAi技术可以有效抑制肺腺癌A549细胞Bcl 2基因的表达,增强A549细胞对X线的放射敏感性。     

肺腺癌细胞的STAT3信号传导途径的研究

目的:探明STAT3在肺腺癌细胞中增殖分化、抗凋亡作用与耐药之间的关系.方法:采用浓度梯度递增法诱导A549细胞株形成耐药细胞系,免疫组化及蛋白印迹法联合检测A549及耐药株中STAT3、LRP、MRP蛋白表达情况.结果:成功诱导了A549/CARP耐药细胞株.免疫组化:A549组、A549/CARP组STAT3阳性细胞数无显著性差异(P＞0.05);LRP、MRP阳性细胞数有显著性差异(P＜0.01);STAT3、LRP、MRP之间表达均无相关性(P＞0.05).蛋白印迹:A549组、A549/CARP组均存在STAT3蛋白的表达,二者无差异性(P＞0.05);STAT3、LRP、MRP之间表达均无相关性(P＞0.05).结论:STAT3参与了肺腺癌细胞的增殖分化和抗凋亡作用.并未参与介导肺腺癌的耐药;LRP、MRP均参与了诱导肺腺癌的耐药,但二者之间无相关性;LRP、MRP介导的耐药机制与STAT3信号传导途径无关;可通过破坏STAT3信号传导来控制肿瘤细胞的生长和增殖,为肺癌的治疗提供了以STAT3为靶向的基因治疗.     

X线对肺癌细胞株A549 XRCC2和XRCC3表达水平的影响

目的:研究X线对肺癌细胞X线修复交叉互补基因2((X-ray repair cross complementing gene 2,XRCC2))与XRCC3表达水平的影响,探讨DNA同源重组修复机制在肺癌放疗过程中的作用?方法:以噻唑蓝还原法(MTT)检测X线对肺腺癌细胞株A549抑制率的影响,实时荧光定量RT-PCR技术检测 X线处理肺癌细胞(人肺腺癌细胞株 A549)后XRCC2和XRCC3 mRNA的表达水平?结果:肺癌细胞抑制率多数情况下随X线照射时间的延长及照射剂量的增大,细胞增殖抑制率增加,呈照射时间依赖性(P < 0.05)和剂量依赖性(P < 0.05),除了16 Gy组与32 Gy组比较无统计学意义(P=0.211)?X线照射后肺癌细胞XRCC2与XRCC3 mRNA的表达水平均先增高后降低,在照射后48 h表达水平达高峰(P < 0.05),且随着照射剂量的增大,XRCC2与XRCC3 mRNA的表达水平也随之增加(P < 0.05)?结论:X线照射可引起肺癌细胞XRCC2与XRCC3 mRNA表达水平的明显改变,表明DNA同源重组修复机制可能在肺癌放疗耐受中起了重要的作用?     

低氧条件下RNA干扰阻断Notch3通路对人肺腺癌A549细胞增殖的影响

目的 观察低氧条件下RNA干扰阻断Notch3对人肺腺癌A549细胞增殖的影响.方法 低氧条件下(1％O2)培养人肺腺癌A549细胞,以Notch3 siRNA转染A549细胞(Notch3 siRNA组),RT-PCR和Western blotting法分别检测A549细胞内Notch3及其信号通路下游基因HES1 mRNA和蛋白表达,MTT法检测转染24、48、72 h A549细胞的细胞活力;另设阴性对照组和空白对照组.结果 Notch3 siRNA转染A549细胞后,Notch3、HES1 mRNA和蛋白表达均显著降低(P＜0.05);Notch3 siRNA转染后时间依赖性抑制A549细胞生长,Notch3 siRNA组转染48、72 h细胞活力与阴性对照组和空白对照组比较,差异有统计学意义(P＜0.05).结论 低氧条件下Notch3 siRNA转染人肺腺癌A549细胞可有效抑制Notch3及其下游靶基因HES1的表达,并抑制A549细胞生长.