应用FISH技术对肝癌细胞系X染色体畸变的研究

目的 研究人肝细胞肝癌细胞系X染色体畸变规律。方法 制备三株新建人肝细胞肝癌细胞系HCC—9903、EGHC—9901、HCC—9810染色体标本，用X染色体着丝粒特异DNA探针，对其X染色体进行荧光原位杂交(FISH)，检测X染色体拷贝数畸变。结果 三株肝癌细胞系X染色体拷贝数均增多，以4拷贝为主。结论 X染色体拷贝数增多在肝癌细胞系中发生频率很高，证明在肝癌发病及发展过程中起到某种作用，其意义值得进一步探讨。这是以FISH技术对肝癌X染色体拷贝数研究的首次报告。     

人肝细胞癌细胞系HCC-9903的建立及其生物学特性研究

目的 新建1株人体肝细胞肝癌细胞系,为肝癌研究提供新的、理想的实验模型。方法 以手术切除肝癌标本作原代培养,建立细胞系。通过光镜、电镜、倍增时间、生长曲线、双层软琼脂培养、流式细胞仪、染色体分析、刀豆球蛋白凝集试验、裸鼠接种、AFP、HBV及端粒酶检测,对其生物学特性进行分析。结果 第29天完成原代培养。形态学、增殖动力学及浸润性生长结果表明该细胞系符合恶性细胞特征。染色体数目分布在49－135,众数为60－67,1q^(i)和t(6,11)等为其标记染色体;有四射体和核内复制出现。裸鼠接种成瘤,瘤细胞形态与原病人的病理切片相似。端粒酶检测强阳性。结论 该细胞系符合建系标准,是1株新建的人体肝细胞肝癌细胞系,命名为HCC－9903。其生物学特性研究内容及检测手段较国内外已建肝恶性肿瘤细胞系更为全面。     

中华普通外科杂志2003年第18卷主题词索引

说明 :(1)本索引按主题词汉语拼音字母顺序排列。 (2 )缩略词及未译出的原文索引中 ,按英文顺序排在各 (字母 )部之首。 (3)文题、作者后括号内数字为期号 ,最后为起止页。A癌 ,肝细胞　肿瘤睾丸抗原CT10基因mRNA在肝细胞肝癌中的表达及HLA A2限制性CTL表位的预测 (王万祥 ,冷希圣 ,彭吉润 ,等 ) (1) :42 44　应用FISH技术对肝癌细胞系HCC 990 3X染色体变异的研究 (刘军 ,王占民 ,郑淑芳 ,等 ) (2 ) :10 5 10 6　环氧合酶 2在肝癌细胞系中的表达研究 (王昆 ,邢宝才 ,张青云 ,等 ) (2 ) :10 7 10 8　SialylLewis X ,CD44v6和E …     

人肝癌细胞系HCC-9903的染色体分析

目的:运用细胞遗传学和分子细胞遗传学的方法,对人肝癌细胞系HCC-9903进行细胞遗传学分析.方法:采用G显带与荧光原位杂交相结合的方法进行了细胞遗传学检测.结果:染色体为非整倍体,有lq(i),t(6;11),4q-,6q-等,荧光原位杂交显示X染色体有不同数目的增加.结论:提示检出的染色体畸变可能与肝癌的发生、发展有关.     

环氧合酶-2在肝癌细胞系中的表达研究

目的：研究环氧合酶2－（cyclooxygenase-2,COX-2)在肝癌细胞中的表达，方法：采用免疫细胞化学，RT－PCR方法研究人肝癌细胞系中COX－2的表达情况，结果：检测的6种肝癌细胞系中，5种细胞系在mRNA水平表达COX－2，全部6种细胞系均在蛋白水平表达COX－2，结论：环氧化酶2－在肝癌细胞系中确有表达，为肝癌的化学预防提供了理论基础。     

逆转录病毒载体介导TK/GCV与CD/5FC双自杀基因治疗肝细胞肝癌的研究

目的 探讨TK与CD双自杀基因对肝癌细胞的杀伤作用及旁观者效应，并在前药用量、杀伤效力及旁观者效应强弱等方面，与单自杀基因比较。方法 将TK与CD双自杀基因导入肝细胞肝癌细胞系HCC-9903，用不同浓度更昔洛韦(GCV)及5氟胞嘧啶(5FC)、不同混育比例及不同混育时间分别作用于细胞，观察在这些条件下的杀伤效应及旁观者效应。结果 GCV与5FC的有效浓度范围分别是大于10^-2μg/ml及大于2mmol／L，混育96h杀伤作用明显高于24h。HCC-9903／TK CD细胞占5％以上，即可观察到旁观者效应。结论 以脂质体介导成功将双自杀基因TK与CD感染肝细胞肝癌细胞系HCC-9903，双自杀基因具有强大杀伤作用，较单自杀基因更为明显，其前药用量减少，降低了药物的毒副作用，旁观者效应更为强大。其杀伤作用与前药浓度、混育比例及混育时间呈正相关。     

乙型肝炎病毒X蛋白与肝细胞癌

乙型肝炎病毒(HBV)是双股环状DNA病毒,包括S/preS、C/preC、P和X4个编码基因.X基因是HBV四个开放读码框中最小的一个,其编码的HBx蛋白分子量为17kDa,由154个氨基酸组成.HBV持续感染与肝细胞癌(HCC)的发生密切相关,HBV-DNA可能以片断性整合的方式存在于肝癌细胞染色体上,其中以HBV X基因的整合为主[1].转基因小鼠实验证明X基因的转入可使小鼠产生肝癌[2].HBV编码的x蛋白(HBx)在HCC的发生过程中起非常重要的作用.本文综述了近年有关HBx对相关基因转录的反式激活作用,对肝细胞DNA损伤修复及细胞凋亡、细胞周期调控、端粒酶活性的影响,HBx对肝细胞的恶性转化作用及针对HBx基因的基因治疗等研究进展.     

外生型肝癌细胞系的建立及生物学特性研究

目的：介绍外生型肝癌细胞系的建立及对其生物学特性进行研究,方法：将方法切除的肿瘤标本进行体外培养,观察肝癌细胞形态学改变,核型分析,增殖动力学,流式细胞计数,裸鼠成瘤情况及AFP测定。结果：外生型肝癌细胞系（EGHC－9901）无论形态学观察,还是功能学测定,均符合肝癌细胞的特征,染色体众数76－104条,并具有体外高分泌AFP功能,其特有表现为：呈克隆样生长,高密度时细胞呈重迭生长,肝癌细胞之间形成完整毛细胆管,内有明显微绒毛,细胞倍增时间较长,结论：EGHC－9901细胞系符合外生型肝癌细胞系的特征。     

过表达的p27KIP1基因诱导HCC-9204细胞凋亡

目的：研究P27KIP1基因对肝癌细胞凋亡的潜在调节作用。方法：采用一种可诱导性真核表达载体pMD-neo，通过外加Zn离子诱导目的基因的表达，脂质体转染法将p27^KIP1全长cDNA转入肝癌细胞系HCC－9204中，通过免疫组化及RT－PCR检测p27^KIP1基因在蛋白质和mRNA水平的表达，流式细胞仪，TUNEL染色及透射电镜等方法观察目的基因对该细胞凋亡的影响，结果：转染P27KIP1的HCC－9204细胞在mRNA和蛋白质水平均有高水平P27KIP1的表达，P27KIP1的过表达使G1期前出现一个亚二倍体的凋亡峰，占20％，并且其凋亡指数也显著增加（P＜0．01），结论：P27KIP1基因能够诱导HCC－9204细胞凋亡。     

黑色素瘤抗原基因在肝癌细胞系中的表达

目的：研究黑色素瘤抗原（MAGE）基因在肝癌（HCC）细胞系中的表达，为应用MAGE抗原肽作为疫苗治疗肝癌的体外实验筛选靶细胞。方法：分别用逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）和免疫组织化学方法对MAGE-1和MAGE-3mRNA及MAGE-1蛋白在8种HCC细胞系中的表达进行检测，用微量淋巴细胞毒法测定HCC细胞系的主要组织相容性复合物（MHC)I类分子的表达。结果：6种HCC细胞系MAGE-1基因mRNA阳性表达，2种MAGE-3阳性；有5种细胞系MAGE-1基因蛋白阳性。BEL7405HLA-A24阳性，HLE和HpG2HLA-A2阳性。结论：MAGE基因在HCC细胞系中有较高的表达率，HLE和BEL7405可作为阳性靶细胞，其他细胞系可作为相应的对照细胞，应用于用MAGE抗原肽疫苗治疗HCC的体外实验研究中。     

新建肝癌细胞系（HCC—9810）的初步观察

目的 建立山东地区的肝癌细胞系,并研究其生物学特性.方法 将临床获取肝癌标本用组织块法进行体外培养,观察肝癌细胞的形态学、核型、增殖动力学和AFP功能.结果 肝癌细胞系(HCC-9810)具有典型的上皮细胞特征,染色体数目22～116,细胞倍增时间约20.4h.结论提示HCC-9810是一株新建肝癌细胞系,可作为进一步肝癌研究的模型.     

Delayed recurrence of hepatocellular carcinoma after liver transplantation: Detection of origin by chromosomal analysis

We report on a 41-year-old man undergoing liver transplantation for chronic hepatitis C who presented 26 months later with hepatocellular carcinoma. No evidence of hepatocellular carcinoma could be found in the native liver, although features of small cell dysplasia were prominent. Although he had recurrent hepatitis C, the transplanted liver was not cirrhotic. Chromosomal analysis was used to resolve whether this was a de novo tumor or a recurrence of an unsuspected tumor present at the time of transplantation. This male patient had received a liver from a female donor, and in situ hybridization for the Y chromosome showed reactivity in the tumor but not in surrounding nontumorous liver. Thus, this is an example of the use of chromosomal analysis to resolve the origin of a tumor occurring in the transplant setting.     

肝细胞癌增殖细胞核抗原表达的图像定量分析

目的 探讨原发性肝细胞癌(简称肝癌)增殖细胞核抗原(PCNA)的表达情况及其意义.方法 采用免疫组化ABC法极测了PCNA蛋白在41例人肝癌组织和人肝癌细胞系HCC-9204的表达情况,并用图像分析仪定量分析了其表达水平与肝癌病理分级之间的关系.结果 癌旁非肿瘤性肝细胞不表达PCNA或只有微弱的表达,而各级肝癌组织的癌细胞均有不同程度的较强的PCNA表达,并且随着肝癌组织分化程度的下降PCNA表达的平均光密度和积分光密度均呈升高趋势,在不同病理分级的肝癌组织之间具有显著性差异(P<0.05).PCNA在培养的HCC-9204细胞中表达的阳性率为86.4%.结论 PCNA可作为肝癌发生和发展过程中的一个与其恶性程度密切相关的标志物,可能在肝癌细胞的增殖过程中具有重要的作用.     

miR-1246在肝癌组织中的表达及其对人肝癌细胞增殖和凋亡的影响

目的 观察微小RNA-1246（miR-1246）在肝癌组织中的表达及其对人肝癌细胞增殖和凋亡的影响,探讨其在肝癌发生发展中的作用和意义。方法应用实时定量PCR（qRT-PCR）方法检测miR-1246在肝癌以及癌旁组织的表达;对人肝癌细胞株（BEL7402、SMMC7721）转染miR-1246 抑制剂后,采用MTT法观察肝癌细胞的增殖活性,流式细胞仪检测细胞凋亡的变化。结果 miR-1246 在肝癌组织中表达显著高于癌旁组织[（65.39±8.77）vs（10.23±2.58）,P=0.002]。MTT和凋亡实验结果显示,与阴性对照组相比,转染miR-1246抑制剂后,BEL7402细胞增殖能力下降,凋亡增加（P均＜0.05）;SMMC7721细胞也出现增殖能力下降,凋亡增加（P均＜0.05）。结论 miR-1246 在肝癌组织中高表达,并且与肝癌细胞的增殖及凋亡有关,其表达的上调可能与肝癌的发生发展有关。     

黑色素瘤分化相关基因-7和白介素-24选择性杀伤肝癌细胞和诱导增殖阻滞的体外研究

目的探讨黑色素瘤分化相关基因-7／白介素-24基因（mda-7／IL-24）对不同种类肝癌细胞的选择性杀伤作用。方法将携带人mda-7／IL-24基因的复制缺陷型腺病毒（Ad．mda-7）感染人正常肝细胞和各种肝癌细胞,通过逆转录聚合酶链反应（RT—PCR）和酶联免疫吸附（ELISA）实验观察mda-7／IL-24基因的表达,MTT法观察肝癌细胞的生长抑制,Hoeehst染色及Annexin—V和PI双染后流式细胞仪检测细胞的凋亡情况及用流式细胞仪检测细胞周期。结果RT—PCR和ELISA提示Ad．mda-7能介导外源基因mda-7／IL-24在各种肝癌细胞株和正常肝细胞中高效表达。MTT实验结果提示mda-7／IL-24能明显抑制各种肝癌细胞的生长,Hoeehst染色和流式细胞仪检测提示mda-7／IL-24能选择性杀伤肝癌细胞,细胞周期分析提示mda-7／IL-24阻滞肝癌细胞在G2／M期,同时对正常的肝细胞没有促凋亡和增殖阻滞作用。结论mda-7／IL-24基因能选择性杀伤各种肝癌细胞,促进细胞增殖阻滞及诱导细胞凋亡。     

Rho-Associated Kinase Inhibitor Reduces Tumor Recurrence After Liver Transplantation in a Rat Hepatoma Model

Tumor recurrence after liver transplantation still remains a significant problem in patients with hepatocellular carcinoma. The small GTPase Rho/Rho-associated kinase (ROCK) pathway is involved in the motility and invasiveness of cancer cells. We investigated whether tacrolimus activated the Rho/ROCK signal pathway to promote the invasiveness of rat hepatocellular carcinoma cells. We also investigated whether the ROCK inhibitor Y-27632 suppressed tumor recurrence after experimental liver transplantation in a rat hepatocellular carcinoma model. Orthotopic liver transplantation was performed in hepatocellular carcinoma cell line McA-RH7777-bearing rats. Tacrolimus was administered to liver transplant rats and these rats were divided into two groups: the Y-27632-treated (10 mg/kg, for 28 days) group and the Y-27632-untreated group. Tacrolimus enhanced the cancer cell migration and stimulated phosphorylation of the myosin light chain (MLC), a downstream effector of Rho/ROCK signaling. Y-27632 suppressed the cancer cell migration and tacrolimus-induced MLC phosphorylation. Suppression of tumor recurrence after liver transplantation and significant prolongation of survival were observed in the Y-27632-treated rats in comparison with theY-27632-untreated rats. Tacrolimus stimulates the Rho/ROCK signal pathway to enhance the invasiveness of hepatocellular carcinoma, and the ROCK inhibitor Y-27632 can be used as a new antimetastatic agent for the prevention of tumor recurrence after liver transplantation.     

肝癌中Transgelin表达与其预后相关

目的 研究肝癌中Transgelin表达水平与肝癌复发及预后的关系.方法 应用Western-blotting技术检测Transgelin在不同转移潜能肝癌细胞系中的表达,以及在临床肝癌手术标本中肝癌、癌旁组织及正常肝组织中的表达,并用免疫组织化学染色验证上述手术标本中Transgelin的表达水平.以Logrank检验及Kaplan-Meier分析其表达水平与肝癌病人总体生存和无瘤生存的关系.结果 Western-blot法显示Transgelin在肝癌高转移潜能细胞系中的表达明显高于低转移潜能细胞系,其在肝癌组织中的表达也明显高于癌旁及正常肝组织,免疫组化结果 与之相类似.Transgelin强阳性表达的病人术后生存率和无瘤生存率明显低于阴性表达者(P<0.01).结论 Transgelin与肝癌转移能力相关,可作为判断预后的指标.     

携带人mda-7/IL-24基因的溶瘤腺病毒SG600-IL24对肝癌细胞凋亡的影响

目的 观察携带人mda-7/IL-24的溶瘤腺病毒SG600-IL24对各种不同转移潜能肝癌细胞HepG2、SMMC7721、MHCC97L和正常肝细胞LO2的作用.方法将携带人mda-7/IL-24的溶瘤腺病毒SG600-IL24分别感染人肝癌细胞系HepG2、SMMC7721、MHCC97L和正常肝细胞LO2,逆转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)、酶联免疫吸附试验(ELISA)、Western blot检测mda-7/IL-24基因和蛋白的表达,MTT观察肝癌细胞的生长抑制,Hoechst33258和流式细胞仪(FCM)检测细胞的凋亡,流式细胞仪(FCM)检测细胞周期.结果 RT-PCR和Western blot显示mda-7/IL-24在肝癌细胞和正常肝细胞中高表达,ELISA提示细胞培养上清液中mda-7/IL-24蛋白也明显增加.MTT和流式细胞仪提示mda-7/IL-24能明显抑制肝癌细胞的生长(生长抑制率分别为75%±2.5%,86%±3.5%,72%±1.8%,HepG2∶F=5.86,SMMC7721∶F=7.98,MHCC97L∶F=5.13,均P<0.01),促进肝癌细胞的凋亡(凋亡抑制率分别为56.5%±4.0%,34.4%±2.0%,43.3%±2.5%,HepG2∶F=203.4,SMMC7721∶F=130.5,MHCC97L∶F=160.6,均P<0.01),阻滞肝癌细胞在G2/M期(G2/M期阻滞分别为35.4%±4.2%,40.5%±5.0%,42.0%±5.0%,HepG2∶F=112.5,SMMC7721∶F=133.2,MHCC97L∶F=145.5,均P<0.01),而对正常肝细胞没有明显的促进凋亡和增殖阻滞作用.结论 溶瘤腺病毒SG600-IL24能特异性杀伤不同转移潜能人肝癌细胞和诱导凋亡,促进肝癌细胞增殖阻滞,而对正常肝细胞无明显促进凋亡和增殖阻滞作用.

Abstract：

Objective To investigate the effect of oncolytic adenovirus vector SG600-IL24expressing human melanoma differentiation associated gene-7 (mda-7/IL-24) on hepatocellular carcinoma cell lines with different metastatic potential of HepG2, SMMC7721, MHCC97L and normal liver cell line LO2. Methods The oncolytic adenovirus SG600-IL24 which carrying mda-7/IL-24 gene was transfected into hepatocellular carcinoma cell lines and normal liver cell line. The mRNA and protein expression of mda7/IL-24 in HepG2, SMMC7721, MHCC97L and LO2 cell lines was confirmed by RT-PCR,ELISA assay and Western blot respectively. MTT assay and flow cytometry were used to study tumor cell proliferation and cell cycle in vitro. Hoechst33258 and flow cytometry were studied to indicate the apoptosis effects. Results It was confirmed by RT-PCR, ELISA assay and Western-blot that the exogenous mda-7/IL-24 gene was highly expressed in HepG2, SMMC7721, MHCC97L and LO2 cell lines. MTT and apoptosis detection indicated that MDA-7/IL-24 can induce the growth suppression (the inhibition rate was 75% ±2. 5% ,86% ±3. 5% ,and promotes apoptosis ( the apoptosis rate was 56. 5% ± 4. 0% , 34. 4% ± 2. 0% , 43. 3% ± 2. 5%cell lines at G2/M phase ( the blocking rate was 35. 4% ± 4. 2% , 40. 5% ± 5. 0% , 42. 0% ± 5. 0%metastatic potential hepatocellular carcinoma cell lines but not in normal liver cell line.Conclusions Oncolytic adenovirus vector SG600-IL24 can selectively induce growth suppression, promote apoptosis in hepatocellular carcinoma lines in vitro but not in normal liver cell LO2.