结核分枝杆菌MPT64抗原对巨噬细胞的影响及其与Toll样受体-2的相关性

目的观察结核分枝杆菌MPT 64抗原对RAW264．7巨噬细胞凋亡及Toll样受体-2（toll-like receptor2,TLR-2）表达的影响。方法将佛波肉苴蔻醋酸（phorbol myristoyl acetate,PMA）分化的RAW264．7巨噬细胞分为阴性对照组、卡介菌纯蛋白衍化物（purified protein derivative of BCG, BCG-PPD）诱导组、PPD＋MPT64共同作用组,孵育16h后,AnnexinV-FITC染色,用流式细胞技术（flowcytometry,FCM）和Westernblot检测细胞凋亡、细胞膜及细胞内TLR-2的表达情况。结果BCG-PPD可以诱导RAW264．7巨噬细胞凋亡,PPD＋MPT64作用组的细胞凋亡水平明显低于BCG-PPD组,随着MPT64蛋白浓度的逐渐增高,凋亡水平逐渐降低。FCM和Western blot技术检测结果表明,BCG-PPD组的TLR-2表达水平明显高于阴性对照组,在诱导16h达到高峰。而在PPD＋MPT64组,细胞膜及细胞内的TLR-2水平均明显低于BCG-PPD组。结论MPT64抗原能够抑制PPD诱导的巨噬细胞凋亡,可能通过调节TLR-2的表达水平来实现。MtrI＇64抗原可能是一种毒力因子,在结核分枝杆菌感染机体的过程中,通过抑制巨噬细胞凋亡参与宿主与结核分枝杆菌的相互作用。     

聚岩藻多糖对小鼠巨噬细胞分泌炎症因子的影响及其机制

目的：探讨聚岩藻多糖对脂多糖（LPS）诱导的小鼠巨噬细胞RAW264.7分泌炎性因子的影响,并阐明其免疫调节作用。方法：取对数生长期RAW264.7细胞,分为对照组、LPS组和LPS+聚岩藻多糖组,采用CCK-8法检测各组细胞存活率,酶联免疫吸附试验（ELISA）法检测各组细胞培养上清中白细胞介素6 (IL-6)、肿瘤坏死因子α (TNF-α)、单核细胞趋化因子1 (MCP-1)、巨噬细胞炎性蛋白（MIP）-1α和MIP-1β水平。结果：与对照组比较,LPS组和LPS+聚岩藻多糖组细胞存活率明显升高（P<0.01）,细胞培养上清中IL-6、TNF-α、MCP-1、MIP-1α和MIP-1β水平均明显升高（P<0.01）。与LPS组比较,LPS+聚岩藻多糖组细胞存活率明显降低（P<0.01）,细胞培养上清中IL-6、TNF-α、MCP-1、MIP-1α和MIP-1β水平明显降低（P<0.01）。结论：聚岩藻多糖可抑制小鼠巨噬细胞对炎症因子IL-6、TNF-α、MCP-1、MIP-1α和MIP-1β分泌的影响,具有潜在的免疫调节作用。     

Nodosin对脂多糖刺激RAW264.7细胞分泌NO及细胞因子的影响

[目的]观察nodosin对脂多糖(LPS)刺激RAW264.7细胞NO和炎症细胞因子的影响.[方法]采用四甲基偶氮唑盐(MTT)法测定nodosin对体外培养的小鼠巨噬细胞株RAW264.7细胞增殖的影响;采用LPS刺激RAW264.7细胞使细胞分泌细胞因子,以不同浓度(1.25、2.5、5 mmol/L) nodosin干预,Griess法检测培养上清液中NO水平,酶联免疫吸附(ELISA)法检测白细胞介素-6(IL-6)、IL-10、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的含量. [结果]Nodosin在10 mmol/L内对RAW264.7细胞增殖无显著影响;可呈一定剂量依赖关系地抑制LPS刺激RAW264.7细胞后NO、IL-6、TNF-α的表达,促进IL-10的表达.[结论]Nodosin的抗炎作用与其能抑制炎症细胞因子NO、IL-6、TNF-α表达,促进IL-10的表达有关.     

降钙素基因相关肽抑制铜绿假单胞菌外膜囊泡致炎作用

目的探讨降钙素基因相关肽（CGRP）对铜绿假单胞菌外膜囊泡（OMVs）诱导炎症反应的影响。方法培养铜绿假单胞菌并提取OMVs,取1、5、10μg·mL-1 OMVs刺激鼠巨噬细胞RAW264.7,采用ELISA法检测细胞中促炎性细胞因子[包括白细胞介素-1β（IL-1β）、IL-6、肿瘤坏死因子-α（TNF-α）]含量,采用CCK-8法及流式细胞术分别检测细胞增殖及凋亡;采用10μg·mL-1 OMVs与1、5、10 nmol·L-1 CGRP同时处理RAW264.7细胞,并检测细胞中促炎细胞因子水平;采用20μg·mL-1 OMVs与10 nmol·L-1 CGRP同时处理RAW264.7细胞,检测细胞增殖与凋亡;培养人中性粒细胞,采用脱颗粒实验检测CGRP对其分泌中性粒细胞明胶酶脂质运载蛋白（NGAL）及弹性蛋白酶活性的影响。结果不同浓度OMVs均能显著刺激RAW264.7细胞分泌TNF-α、IL-6和IL-1β（P<0.05）,而CGRP则能够抑制RAW264.7细胞分泌促炎细胞因子,且呈剂量依赖性（P<0.05）;20μg·mL-1 OMVs则能够显著降低细胞活性,并促进细胞凋亡（P<0.05）,10 nmol·L-1 CGRP与OMVs共同处理能显著增加RAW264.7细胞活性,抑制凋亡发生（P<0.05）;不同浓度OMVs均能提升NGAL表达水平以及弹性蛋白酶活性（P<0.05）,而10 nmol·L-1 CGRP则能够显著抑制OMVs引起的脱颗粒效应（P<0.05）。结论 CGRP可有效下调铜绿假单胞菌OMVs诱导的鼠巨噬细胞RAW264.7促炎因子分泌水平、减少凋亡率以及特异性中性粒细胞释放,进而抑制炎症反应。     

Notch1信号参与脂多糖诱导的巨噬细胞活化

[目的]探讨Notch1对脂多糖(LPS)介导巨噬细胞活化的影响.[方法]体外培养RAW264.7细胞,给予LPS 100μg/L处理8h后利用RT-PCR方法检测RAW264.7细胞Notch1和Hes1 mRNA表达水平;给予Notch1信号抑制剂DAPT10μmol/L预处理1 h后利用ELISA法检测细胞上清液中肿瘤坏死因子α(TNF-α)及白细胞介素(IL)-6水平,采用Western blot法检测细胞TNF-α和IL-6蛋白表达水平.[结果]给予LPS刺激RAW264.7细胞后可明显提高Notch1和Hes1 mRNA表达(P<0.05),LPS提高RAW264.7细胞TNF-α和IL-6的表达和释放作用可明显被DAPT抑制(P<0.05),但TNF-α和IL-6表达水平仍显著高于对照组(P<0.05).[结论]巨噬细胞中Notch1信号参与LPS诱导细胞因子TNF-α和IL-6的表达和释放过程.     

清感冬饮通过调控NF-κB/iNOS/NO信号通路抑制LPS诱导的RAW264.7巨噬细胞炎症

[目的] 通过构建脂多糖（LPS）诱导的RAW264.7巨噬细胞炎症模型,探讨清感冬饮（QGDY）的抗炎作用及其机制。[方法] 采用CCK-8法和LDH法检测不同浓度的清感冬饮对HEK293T细胞和RAW264.7巨噬细胞的细胞活力及LDH漏出量的影响。分别建立抗氧化反应元件（ARE）和核因子-κB（NF-κB）双荧光素酶报告系统,考察清感冬饮对HEK293T细胞ARE、NF-κB表达情况的影响。建立LPS诱导的RAW264.7巨噬细胞体外炎症模型,将RAW264.7巨噬细胞随机分为空白对照组、LPS模型组、清感冬饮低、中、高剂量组（1、10、100μg/mL）,倒置显微镜下观察各组细胞的形态差异;采用Griess法和ELISA法测定各组细胞上清中一氧化氮（NO）、肿瘤坏死因子-α（TNF-α）、白细胞介素-6（IL-6）和白细胞介素-1β（IL-1β）的含量;采用qRT-PCR法检测各组细胞中TNF-α、IL-6和IL-1β的mRNA表达水平;利用免疫荧光法观察核因子-κBp65（p65）核移位情况;采用Westernblot法检测各组细胞一氧化氮合酶（iNOS）和p65蛋白表达情况。[结果] 0.01~10μg/mL清感冬饮对HEK293T细胞活力无显著影响,1~10μg/mL清感冬饮明显抑制TNF-α诱导的NF-κB启动子的活性,清感冬饮对ARE启动子的活性无显著影响。初步证明清感冬饮具有抗炎作用,而无明显抗氧化作用。0.01~100μg/mL清感冬饮干预24h对RAW264.7巨噬细胞无细胞毒性作用。与模型组相比,1~100μg/mL清感冬饮显著抑制LPS诱导的RAW264.7巨噬细胞中NO及炎症因子TNF-α、IL-6和IL-1β的释放;10~100μg/mL清感冬饮显著下调TNF-α、IL-6和IL-1β的mRNA表达水平,抑制p65核移位;100μg/mL清感冬饮显著抑制总蛋白iNOS、核蛋白p65表达,显著促进浆蛋白p65表达。[结论] 清感冬饮可抑制LPS诱导的RAW264.7巨噬细胞的炎症反应,该抗炎作用可能与调控NF-κB/iNOS/NO信号通路、抑制促炎因子释放有关。     

炎调方对巨噬细胞中HSP70表达及其效应的影响

目的:观察炎调方药物血清对离体巨噬细胞中热休克蛋白70(HSP70)及其他相关细胞因子的调控效应,以验证炎调方治疗脓毒症的作用途径和位点。方法:培养大鼠巨噬细胞RAW 264.7,将培养后的巨噬细胞RAW 264.7分为空白对照组(RAW 264.7+培养液)、正常血清组(RAW 264.7+正常大鼠血清)、炎调方药物血清组(RAW 264.7+炎调方药物血清),每组设4个平行孔。采用MTT比色法测定细胞增殖,确定炎调方药物血清的无毒性剂量范围;采用qRT-PCR方法检测细胞HSP70、核因子-κB(NF-κB)、肿瘤坏死因子(TNF)-α、白介素(IL)-1β、IL-8的mRNA表达;采用Western blot方法检测细胞HSP70、NF-κB蛋白表达,以ELISA方法检测细胞TNF-α、IL-1β、IL-8蛋白表达。结果:炎调方药物血清的无毒性浓度范围包括10%~30%,故后续实验选取20%浓度的炎调方药物血清进行。正常血清组的各项指标与空白对照组比较,其差异均无统计学意义(P0.05);与空白对照组和正常血清组比较,炎调方药物血清组RAW 264.7细胞的HSP70 mRNA和蛋白表达均明显升高(P0.01),NF-κB、TNF-α、IL-1β、IL-8的mRNA和蛋白表达均明显降低(P0.01)。结论:炎调方治疗脓毒症的作用机制可能是上调HSP70的表达,进而抑制NF-κB的活化和相关细胞因子的表达。     

Fractalkine 通过激活 Wnt/β-catenin 信号通路抑制脂多糖诱导的巨噬细胞M1型极化

目的 研究Fractalkine（CX3CL1,FKN）对脂多糖（LPS）诱导的RAW264.7巨噬细胞免疫应答的作用机制。方法 体外培养RAW264.7细胞,使用慢病毒技术构建过表达FKN的稳定细胞珠。细胞分为8组：（1）空白对照组;（2）LPS组,细胞给予脂多糖（1 μg/mL,12 h）;（3）ICG-001组,细胞给与Wnt/β-catenin信号通路抑制剂ICG-001（10 μmol/mL,48 h）;（4）过表达FKN组;（5）ICG-001+LPS组,细胞给与ICG-001（10 μmol/mL预处理36 h）后,加入脂多糖（1 μg/mL,12 h）;（6）过表达FKN+LPS组,过表达 FKN细胞给与脂多糖（1 μg/mL,12 h）;（7）过表达FKN+ICG-001组,过表达FKN细胞给予ICG-001（10 μmol/mL,48 h）;（8）过表达 FKN+ICG-001+LPS 组,过表达 FKN 细胞给与 ICG-001（10 μmol/mL 预处理 36 h）后,加入脂多糖（1 μg/mL,12 h）;应用 CCK-8细胞增殖实验检测ICG-001作用于巨噬细胞中的安全浓度;应用酶联免疫吸附（ELISA）实验检测巨噬细胞上清液中M1型极化因子TNF-α和IL-6的含量;应用蛋白质免疫印记（WB）实验检测巨噬细胞中FKN、Wnt/β-catenin通路关键因子Wnt-4和β-catenin、M1型极化因子iNOS、TNF-α和IL-6的蛋白表达水平;应用免疫荧光（IF）实验检测巨噬细胞中M1型极化因子IL-6蛋白的定位。结果 过表达FKN的RAW264.7细胞中FKN的蛋白水平较空白对照组明显升高（P<0.01）。CCK-8实验显示ICG-001作用于RAW264.7细胞48 h的IC50为10 μmol/mL。与LPS组相比,ICG-001+LPS组上清液中TNF-α和IL-6的分泌量以及细胞内TNF-α、IL-6和iNOS蛋白含量均升高（P<0.05）,而细胞内FKN、Wnt-4和β-catenin蛋白含量均显著降低（P<0.01）;EXFKN+LPS组上清液中TNF-α和IL-6的分泌量以及细胞内TNF-α、IL-6和iNOS蛋白含量均显著降低（P<0.01）,而细胞内FKN、Wnt-4和β-catenin蛋白含量均显著升高（P<0.01）。与LPS组相比,ICG-001+LPS组中IL-6在细胞质中的定位增强,而EXFKN+LPS组中IL-6在细胞质中的定位受到抑制。结论 过表达FKN通过激活Wnt/β-catenin信号通路抑制脂多糖诱导的巨噬细胞M1型极化。     

丙型肝炎病毒高变区1模拟表位7肽对LPS刺激RAW264.7细胞炎症因子影响的研究

目的观察丙型肝炎病毒（HCV）高变区1（HVR1）模拟表位7肽（7P）对内毒素/脂多糖（LPS）诱导的小鼠单核/巨噬细胞株（RAW264.7）细胞释放细胞因子的影响。方法体外培养小鼠RAW264.7细胞,用LPS刺激小鼠RAW264.7细胞分泌TNF-α、IL-6,用不同浓度（5.0、10.0、20.0、40.0、80.0、160.0μg/mL）的7P进行干预,应用单溶液细胞增殖（MTS）法检测7P对细胞活力的影响,应用酶联免疫吸附实验（ELISA）法检测细胞培养上清中促炎细胞因子的含量。结果 7P可抑制LPS刺激小鼠RAW264.7细胞释放TNF-α和IL-6,并呈一定的量效关系,其影响细胞因子释放作用与细胞毒作用无关。结论 7P呈浓度依赖性地抑制LPS刺激小鼠RAW264.7细胞释放TNF-α和IL-6。     

三七皂苷FC通过MAPK/NF-κB途径抑制RAW264.7细胞炎症及凋亡的机制研究

目的:基于丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)/核转录因子-κB(NF-κB)途径探讨三七皂苷FC对RAW264.7巨噬细胞炎症及凋亡的作用机制。方法:(1)采用不同浓度的三七皂苷FC(0、1、10、20、50、100μmol/L)分别干预RAW264.7细胞和脂多糖(LPS)诱导的RAW264.7细胞,CCK8法检测细胞活力,筛选合适的药物浓度。(2)将RAW264.7细胞分为对照组、LPS组、LPS+三七皂苷FC低剂量(20μmol/L)组和LPS+三七皂苷FC高剂量(50μmol/L)组。先给予相应剂量的三七皂苷FC预处理6 h,再加入1μg/ml LPS。干预24 h后,PCR检测肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白介素-6(IL-6)、诱导型一氧化氮合酶(iNOS)、白介素-1β(IL-1β)mRNA表达;Western blot检测TNF-α、iNOS、p38MAPK、磷酸化p38MAPK(p-p38MAPK)、NF-κB p65、磷酸化NF-κB p65(p-NF-κB p65)蛋白表达;流式细胞术检测细胞凋亡;免疫荧光检测NF-κB核转位;Transwell实验检测细胞迁移。结果:(1)20、50μmol/L三七皂苷FC干预24 h后,LPS诱导的RAW264.7细胞活力较对照组无显著差异(P0.05),用于后续实验。(2)与LPS组相比,低、高剂量的三七皂苷FC作用后,TNF-α、IL-6、iNOS、IL-1β的mRNA表达显著降低(P0.05,P0.01);TNF-α、iNOS蛋白表达明显降低(P0.05),p-NF-κB p65/NF-κB p65和p-p38MAPK/p38MAPK蛋白表达比值显著下调(P0.05,P0.01);细胞凋亡率显著降低(P0.05,P0.01);细胞核内NF-κB p65蛋白表达减少,阳性表达细胞数占比显著降低(P0.05);细胞迁移数显著减少(P0.01)。结论:三七皂苷FC能够显著改善LPS诱导的RAW264.7巨噬细胞炎症反应,减少炎症因子的释放,抑制巨噬细胞凋亡和迁移,其作用机制可能与下调MAPK/NF-κB通路磷酸化水平及抑制NF-κB核转位有关。     

麻疹的双相移位研究进展

近年新生儿、婴儿、成人麻疹患者逐年增加,临床表现一般仍较典型,成年人麻疹患者全身中毒症状较重。麻疹抗体检测结果阳性是主要的诊断依据。麻疹发病的双相移位的机理可能是,免疫保护力不足,婴儿出生时麻疹抗体力低。孕期母传胎的麻疹抗体减弱,母经乳汁传给婴儿的抗体减弱,成人麻疹抗体水平逐年下降。预防措施是怀孕前给予育龄妇女麻疹疫苗接种,鼓励母乳喂养,麻疹疫苗计划免疫适当提前,在成人追加麻疹疫苗的免疫,加强病毒变异的研究等。     

妊娠晚期重度妊高征的监测

重度妊高征表现为高血压、蛋白尿、浮肿等症状 ,严重可以导致母婴死亡。对妊娠足月的重度妊高征 ,可以根据其临产与否及宫颈条件 ,立即决定其为阴道分娩或是剖宫产术。对于妊娠晚期的重度妊高征 ,因其胎龄不足月 ,胎儿生长发育及胎肺成熟度情况需通过一定时间的治疗 ,根据其病情变化来决定其治疗方案或终止妊娠的时机[1,2 ] 。这就需要我们对这一阶段的治疗进行监测 ,防止母儿并发症的发生。现将 2 0 0 0年至今我院收治妊娠晚期重度妊高征 30例的监测结果回顾分析如下。1　资料和方法1.1　研究对象　选择孕 31～ 36周重度妊高征 30例 ,其中 …     

80例局限性银屑病误诊原因分析

本文报告80例局限于小腿或手或足的银屑病。均经皮肤组织病理检查确诊。因部位比较特殊。受多种理化因素影响,使皮疹形态发生轻重程度不同的变化,常看不到典型损害,因而误诊为神经性皮炎,湿疹,慢性皮炎及癣等。作者对误诊原因进行了分析后,提出了鉴别诊断方法。     

腰椎间盘突出症再次手术的原因分析

目的解决腰椎间盘突出症手术中神经压迫。方法对1980～1998年再手术资料进行统计分析,讨论分析再手术原因,再次手术前影像学检查,观察病理变化以确定再手术方法。结果对11例随访6个月～1年,优7例(68．4％),良3例(36．8％),差1例(2．8％)。结论初次手术前详细查体和分析X线片,术中用导尿管和神经剥离探查,尽量避免髓核遗留,手术范围不宜太大,尽量减少对软组织和脊柱结构的破坏,避免形成硬膜囊与神经根粘连而致单纯形疤痕。     

人工全髋关节置换术的手术配合

目的：介绍人工全髋关节置换术的手术配合做法;方法：主要在手术配合的六个方面,解决防感染、防栓塞等问题。结果：30例人工全髋关节置换术均获成功,结论：手术配合是护士责任心和基本功的全面体现,对提高手术效果有至关重要的影响。     

降钙素原变化率的测定对细菌性肺炎的评估价值

目的 探讨降钙素原变化率的测定对细菌性肺炎的评估价值.方法 选取住院治疗的细菌性肺炎患者72例,根据治疗效果分为治疗有效组(有效组)47例和治疗无效组(无效组)25例,对治疗有效组和无效组中的降钙素酶原变化及影响肺炎治疗效果的危险因素进行分析.结果 有效组治疗后3天及治疗后7天的降钙素酶原显著低于无效组的患者(P＜0.05);年龄＞65岁、心功能≥3级、COPD、糖尿病、肺部双侧受累(X线示)、菌血症、感染性休克和3天内降钙素酶原变化率＜30％是影响细菌性肺炎治疗效果的危险因素;感染性休克、肺部双侧受累、3天内降钙素酶原变化率＜30％及心功能≥3级是影响细菌性肺炎治疗效果的独立危险因素.结论 测定降钙素原变化率对细菌性肺炎的疗效评估具有重要临床意义,可在临床推广应用.     

正常增殖期子宫内膜细胞增生状态的定量观察

以＾３氢－胸腺嘧啶核苷放射自显影法及ＨＥ染色，观察并分别测定了１８例正常子宫内膜增殖中期，１５例增殖晚期的腺上皮细胞或间质细胞的标记指数、分裂指数。结果显示：子宫内膜增殖晚期腺上皮细胞或间质细胞之ＬＩ均明显高于增殖中期。同时，增殖晚间质细胞之ＭＩ也明显高于增殖中期，即此两种细胞在增殖晚期中增生明显，其增生状态初步获得了定位定量测定的正常值。