CBP/P300介导的组蛋白H3K9乙酰化修饰对GATA4表达的影响

目的 明确GATA4在小鼠胚胎心脏发育过程中的时序表达,并阐明其组蛋白修饰调控机制.方法 选取胎龄11.5 d(E11.5)至新生0.5d胎鼠心脏,RT-PCR检测胎鼠心肌细胞中GATA4mRNA表达水平,CHIP-QPCR检测GATA4启动子区组蛋白H3K9ac水平及与CBP/P300的结合水平.用CBP30干预心肌祖细胞,RT-PCR检测心肌祖细胞在不同浓度CBP30(0.5、1、2、4μmol/L)干预不同时间点(6、12、24、36 h)后GATA4 mRNA表达水平,CHIP-QPCR检测心肌祖细胞中GATA4启动子区组蛋白H3 K9 ac水平及与CBP/P300的结合水平.结果 ①小鼠胚胎心脏发育过程中GATA4表达量,E14.5明显高于E11.5(P ＜0.05);CHIP结果显示E14.5 GATA4启动子区组蛋白H3 K9 ac水平高于E11.5(P ＜0.05);E14.5与CBP/P300的结合水平亦高于E11.5(P ＜0.05).②CBP30干预心肌祖细胞后,GATA4表达量较对照组明显降低(P＜0.05).CHIP结果显示CBP30组GATA4启动子区组蛋白H3K9ac水平及与CBP/P300的结合水平较对照组显著降低(P＜0.05).结论 CBP/P300可通过介导组蛋白H3 K9乙酰化修饰参与调控GATA4在小鼠胚胎心脏发育过程中的时序表达.     

心肌祖细胞中Tbx5启动子区的组蛋白乙酰化调控机制研究

目的 研究心肌祖细胞中Tbx5启动子区p300和CBP介导的组蛋白乙酰化修饰对Tbx5表达的调控及其修饰位点,探讨Tbx5的组蛋白乙酰化修饰调控网络。方法 体外培养胚胎心肌祖细胞,分为对照组、二甲基亚砜(DMSO)组和姜黄素组,对照组不给予额外干预,DMSO组给予DMSO干预,姜黄素组给予30 mmol/L姜黄素干预。同时,采用慢病毒载体转染胚胎心肌细胞48 h,分为对照组、GFP组和p300-RNAi组,对照组不转染,GFP组采用GFP慢病毒载体转染,p300-RNAi组采用p300-RNAi慢病毒载体转染。Western blot方法检测各组的组蛋白H3的乙酰化水平;实时荧光定量逆转录PCR检测各组Tbx5和p300 mRNA水平的表达;染色质免疫共沉淀(CHIP)-实时荧光定量逆转录PCR检测Tbx5启动子区组蛋白H3不同位点H3K4、H3K9和H3K27的乙酰化水平及Tbxt5启动子结合的p300和CBP水平。结果 姜黄素组Tbx5 mRNA相对表达水平及H3ac水平较对照组和DMSO对照组明显降低,差异有统计学意义(P<0.05)。p300-RNAi组p300 mRNA...     

小鼠胚胎心脏发育过程中组蛋白乙酰化酶亚型p300调控心脏特异转录因子的动态表达

目的:观察小鼠胚胎心脏发育过程中GATA4、Nkx2.5、MEF2C、Tbx5基因的动态表达和这些基因的启动子区域组蛋白H3乙酰化修饰状态的变化,以及组蛋白乙酰化酶亚型p300对这些基因启动子的直接调控作用,为进一步研究先天性心脏疾病的发生机制奠定基础.方法:选取胎龄(Embryo day,E)10.5d和16.5d小鼠正常胚胎心脏,用实时荧光定量PCR(Real Time PCR)的方法观察上述基因mRNA的动态表达;采用染色质免疫沉淀技术(Chromatin immunoprecipitation,ChIP),用ChIP级抗乙酰化H3和抗p300抗体免疫沉淀与其所结合的DNA,采用Real Time PCR扩增抗体所富集的上述基因启动子的DNA量,观察胚胎心脏发育过程中乙酰化组蛋白及组蛋白乙酰化酶亚型p300是否参与调控上述四种心脏特异转录因子的表达.结果:①胎龄E10.5d和E16.5d小鼠胚胎心脏的GATA4、Nkx2.5、MEF2C、Tbx5基因的mRNA表达水平都有明显差异(P<0.05),其中GATA4和MEF2C mRNA相对β-actin的表达水平,E10.5明显低于E16.5,而Nkx2.5和Tbx5 mRNA相对表达水平,E10.5明显高于E16.5;并且ChIP结果显示这些基因启动子的乙酰化水平也随着时间而改变,但差异无统计学意义.②E10.5和E16.5胚胎小鼠心脏中,p300抗体均能免疫沉淀GATA4、Nkx2.5、MEF2C、Tbx5基因启动子,其沉淀的基因量在这两个小鼠心脏发育的关键时间点有所不同,但差异无统计学意义.结论:小鼠胚胎心脏发育过程中,心脏发育相关基因GATA4、Nkx2.5、MEF2C、Tbx5呈现动态表达,提示这些基因在心脏发育不同阶段具有重要作用.ChIP结果提示p300介导的组蛋白乙酰化修饰可能为调节这些基因动态表达的机制之一.     

SMYD2蛋白的研究进展

肿瘤抑制基因p53是人类最常见的癌症灭活基因。组蛋白甲基转移酶(SMYD2)在赖氨酸残基370单甲基化p53(p53K370me1)后抑制p53抑制活性,在赖氨酸C末端甲基化p53后增强或抑制p53转录活性;SMYD2在食管肿瘤、视网膜母细胞瘤、乳腺癌上表达具有敏感性和特异性,并具有肿瘤异源性分布趋势。SMYD2与心血管、神经、消化、运动、泌尿和生殖等各个系统的形成、发育密切相关,同时可能是人类致癌基因,对其进一步研究将为癌症的诊断和治疗提供新的思路。     

细胞凋亡及凋亡相关基因bcl-2和bax在胚胎停止发育绒毛组织中的表达

目的研究细胞凋亡及凋亡相关基因bcl-2、bax在胚胎停止发育绒毛组织中的表达。方法采用TUNEL技术和免疫组织化学SP法对40例正常早孕绒毛组织和40例胚胎停止发育绒毛组织进行凋亡细胞和bcl-2、bax表达测定。结果胚胎停止发育绒毛组织中凋亡细胞显著增加，与正常早孕绒毛组织比较有显著性差异（P〈0．05）；胚胎停止发育绒毛组织中bcl-2表达低于正常早孕绒毛组织，而bax表达高于正常早孕绒毛组织，两者均有显著性差异（P〈0．05）。结论胚胎停止发育绒毛组织细胞凋亡指数显著增加，且与bcl-2的表达呈负相关，与bax的表达呈正相关。     

组蛋白乙酰化抑制哮喘易感基因ADRB2的表达

目的 研究组蛋白去乙酰化酶抑制剂(histone deacetylase inhibitors,HDACi)及组蛋白乙酰化转移酶(histone acetyltransferase,HAT)调控的组蛋白乙酰化修饰对β₂肾上腺素受体(β₂-drenergic receptor,ADRB2)基因的影响。方法 将ADRB2启动子质粒(pADRB2-1918)转染到人正常支气管上皮细胞(BEAS-2B)细胞后,分别加入丁酸钠(sodium butyrate,SoB)和曲古抑菌素A(trichostatin A,TSA),将pADRB2-1918质粒和腺病毒 E1A相关的 300kDa 蛋白(p300)质粒共转染到BEAS-2B细胞,使BEAS-2B细胞中组蛋白乙酰化,利用双荧光素酶报告基因检测经SoB、TSA及p300处理后BEAS-2B细胞中ADRB2启动子活性。向BEAS-2B细胞中分别加入SoB和TSA,或向BEAS-2B细胞中转染p300质粒,使BEAS-2B细胞中组蛋白乙酰化,利用实时荧光定量PCR(quantitative real-time PCR, qRT-PCR)检测BEAS-2B细胞中ADRB2mRNA的相对表达,利用Western blot法检测BEAS-2B细胞中ADRB2蛋白的表达。结果 在BEAS-2B细胞中分别加入SoB、TSA和转染p300质粒,参与BEAS-2B细胞中组蛋白乙酰化,发现BEAS-2B细胞中ADRB2启动子活性、mRNA和蛋白的表达均较对照组下降(P<0.05),差异均有统计学意义。结论 组蛋白乙酰化可下调哮喘易感基因ADRB2的表达。     

胚胎停止发育患者绒毛中细胞凋亡的表达意义

目的研究胚胎停止发育患者绒毛及蜕膜组织中细胞凋亡与细胞增殖的表达和临床意义。方法收集孕3个月以内胚胎停止发育患者绒毛、蜕膜组织和正常早孕绒毛、蜕膜组织各30例。用DNA末端缺口标记技术检测绒毛和蜕膜组织中的凋亡细胞,用免疫组织化学SP法检测增殖细胞核抗原。结果①胚胎停止发育患者的绒毛及蜕膜组织中PCNA的阳性表达显著减少,与正常早孕对照组比较有显著性差异（P〈0．01）。②胚胎停止发育患者的绒毛及蜕膜组织内细胞凋亡指数显著增加,与正常早孕对照组比较差异有显著性（P〈0．05）。结论正常早孕和胚胎停止发育患者绒毛、蜕膜组织内均可见到PCNA阳性表达与凋亡细胞,细胞的增殖和凋亡的平衡与维持妊娠密切相关,平衡失调可能是引起胚胎停止发育的主要病理过程。     

p300特异性siRNA载体的构建及其对心肌细胞GATA4表达的影响

目的 构建并筛选小鼠p300特异性siRNA载体,并观察p300表达降低对心脏特异性转录因子的调控作用,为进一步研究p300介导的组蛋白乙酰化失衡对心脏发育的影响奠定基础.方法 针对小鼠p300基因的保守序列区域设计并构建3个重组质粒p300 RNAi1,p300 RNAi2和p300 RNAi3.利用阳离子脂质体将其分别转染入体外培养的乳鼠心肌细胞,分别利用RT-PCR和免疫荧光从mRNA和蛋白水平检测p300表达,判断抑制效率,并检测心脏特异性转录因子GATA4的表达水平.结果 pSOS-HUS组和p300 RNAi2组中p300 mRNA水平表达较正常对照组无明显降低,而p300 RNAi1组和p300 RNAi3组中p300 mRNA表达量较正常组有明显降低(分别为0.220 8±0.020 0,0.170 8±0.040 0,vs 0.509 5±0.030 0),且差别有统计学意义(P<0.05),抑制率分别为56.7%和66.5%.转染p300RNAi1组和转染p300RNAi3组的GATA4 mRNA表达水平(分别为0.423 1±0.110 0,0.262 7±0.080 0)明显低于正常组(0.856 4±0.070 0)和阴性对照组(0.841 5±0.040 0),差别有统计学意义(P<0.05).结论 p300特异性siRNA 质粒载体构建成功,p300 RNAi1和p300 RNAi3具有确切阻断p300蛋白表达的作用,并下调GATA4的表达.     

P300-PPAR-γ通路在孕期胎儿酒精综合征小鼠子代神经细胞糖代谢紊乱中的作用

【摘要】 目的 探讨P300-PPAR-γ通路在孕期胎儿酒精综合征(FAS)小鼠子代神经细胞糖代谢紊乱中的机制。方法 选取雌性c57小鼠妊娠期给予酒精灌胃（5 μL/g·d 50%乙醇）建立孕期酒精综合征模型为酒精组,另设对照组（予生理盐水灌胃）。分娩后子代饲养至8周,进行Morris水迷宫、跳台实验评估小鼠神经行为。利用二氧化碳窒息处死子代实验小鼠,剖开颅腔后分离大脑组织,用于后续实验。qPCR检测p300、GCN5的表达水平,qPCR及Western blot检测PPAR-γ、GLUT-1的表达水平,ChIP结合qPCR检测p300与PPAR-γ启动子结合水平。结果 酒精组子代小鼠学习记忆能力较对照组下降（P＜0.05）,酒精组子代小鼠脑组织中p300、PPAR-γ及GLUT-1表达较对照组降低（P＜0.05）,GCN5表达两组间比较差异无统计学意义（P＞0.05）。酒精组子代p300与PPAR-γ启动子结合水平较对照组明显下降（P＜0.05）。 结论 FAS子代小鼠中p300介导组蛋白乙酰化修饰下调PPAR-γ表达,引起脑组织糖代谢异常。     

乙肝病毒X蛋白对肝癌细胞组蛋白H3K4甲基化修饰的影响及机制

【目的】 探讨乙肝病毒X蛋白(HBx)与肝癌细胞组蛋白H3K4位点甲基化修饰的关系及其可能的机制?【方法】构建稳定表达HBx基因的HepG2-hbx及载体对照细胞系HepG2-vc,同时培养用于阳性对照的肝癌细胞系HepG2.2.15及阴性对照细胞系HepG2;用酶标法检测各组细胞组蛋白H3K4位点甲基转移酶活性,比较HBx对H3K4位点甲基转移酶活性的影响;qRT-PCR检测各组细胞中H3K4位点特异性甲基转移酶SMYD3 ( SET and MYND domain containing3 )基因转录水平变化;Western-blot 检测SMYD3蛋白表达水平变化;免疫组化方法检测84例肝癌组织(包含:HbsAg(+)58例,HbsAg(-)26例)中SMYD3与组蛋白H3K4me3表达情况并对结果进行统计分析?【结果】稳定表达HBx基因的肝癌细胞系其组蛋白H3K4位点甲基化活性显著高于对照组细胞(P < 0.05),且SMYD3表达上调(P < 0.05);肝癌组织组蛋白SMYD3表达与患者是否存在HBV感染有关,并且促进H3K4甲基化修饰?【结论】 HBx上调肝癌细胞组蛋白H3K4位点甲基转移酶活性,这可能与其介导的SMYD3表达上调有关,并且在肝癌组织中由HBx介导的SMYD3上调也增强了组蛋白H3K4甲基化修饰?     

缺氧对星形胶质细胞 DNA甲基化及组蛋白乙酰化相关酶的表达影响

目的研究缺氧对原代培养星形胶质细胞DNA甲基化相关酶及组蛋白乙酰化相关酶水平的影响。方法原代培养的星形胶质细胞经氧糖剥夺处理后,Westernblot方法检测细胞DNA甲基转移酶,DNA去甲基转移酶,组蛋白乙酰化酶及组蛋白去乙酰化酶的表达。结果原代培养的星形胶质细胞缺氧处理48h后,DNA甲基转移酶的表达升高,DNMT3A和DNMTl与对照组相比分别升高了49％和83％,DNA去甲基转移酶的表达降低了36％;组蛋白去乙酰化酶的表达升高到对照组的2．1倍,而组蛋白乙酰化酶的表达则升高得更为明显,为对照组的20倍。结论缺氧可以改变星形胶质细胞DNA甲基化和组蛋白乙酰化相关酶的表达,从而影响基因的表达。     

米非司酮对早孕绒毛、蜕膜组织中胰岛素样生长因子-Ⅱ mRNA表达的影响

目的 :探讨米非司酮对早孕绒毛、蜕膜组织中胰岛素样生长因子_Ⅱ (IGF_Ⅱ )mRNA表达的影响及IGF Ⅱ与早期妊娠及流产的关系。方法 :采用逆转录聚合酶链式反应 (RT PCR) ,对 2 0例人工流产妇女 (对照组 ) ,2 0例服用米非司酮药物流产的早孕妇女 (药物组 )绒毛、蜕膜组织中IGF_ⅡmRNA的表达进行检测。苏木精 伊红染色 ,PAS染色分别观测其绒毛及蜕膜组织中组织形态学改变及其糖原储存量变化。结果 :药物组绒毛、蜕膜组织中IGF_ⅡmRNA的表达与对照组相比明显降低(P <0 0 5 ,P <0 0 1)。对照组绒毛、蜕膜组织中糖原含量丰富 ,药物组均较低 (P <0 0 5 ,P <0 .0 1)。结论 :米非司酮可能通过下调绒毛、蜕膜组织中IGF_ⅡmRNA的表达 ,影响胎盘功能 ,阻碍胚胎发育     

FSCN1、eIF-4A、hMOF在卵巢癌中的表达及意义

目的分析Fascin-1(FSCN1)蛋白、真核起始因子4A(eIF-4A)、组蛋白乙酰转移酶(hMOF)在卵巢癌中的表达及意义。方法选择2006年1月-2012年1月南方医科大学附属东莞人民医院妇产科手术切除的卵巢癌85例、卵巢交界性肿瘤25例、卵巢良性肿瘤25例、正常卵巢组织25例患者作为研究对象,采用显色原位杂交和免疫组化染色技术检测各组间FSCN1、eIF-4A、MOF的表达情况,并进行Pearson相关性分析。结果与正常对照组、卵巢良性肿瘤组及卵巢交界性肿瘤组比较,卵巢癌组中FSCN1和eIF-4A的表达均显著增高,而hMOF的表达显著降低(χ^2/P=10.097/0.004、12.469/0.009、6.586/0.017)。卵巢癌中FSCN1和eIF4A的表达与组织学分级、FIGO分期、淋巴结转移有关(FSCN1:χ^2/P=4.371/0.033、5.673/0.017、6.377/0.025;eIF-A4:χ^2/P=4.399/0.031、6.582/0.008、6.352/0.021);hMOF的表达与FIGO分期有关(χ^2/P=4.302/0.038)。Pearson相关性分析显示,卵巢癌中FSCN1表达与eIF-4A呈正相关(r=0.251,P=0.021),与hMOF呈负相关(r=-0.277,P=0.010)。FSCN1阳性、eIF-4A阳性、hMOF阴性表达者中位无瘤生存期(DFS)均显著低于FSCN1阴性、eIF4A阴性、hMOF阳性表达者(χ^2/P=5.473/0.000、5.267/0.000、5.018/0.000)。经过Logistic回归分析,FSCN1阳性、eIF-4A阳性、hMOF阴性、组织学分级高、FIGO分期晚、淋巴结转移是卵巢癌患者DFS的危险因素。结论 FSCN1、eIF-4A、hMOF在卵巢癌中存在异常表达的情况,可能与肿瘤的恶性演进密切相关。     

胰岛素样生长因子在植入前胚胎细胞中的表达

目的 :研究胰岛素样生长因子 1,2 (IGF 1,IGF 2 )在植入前胚胎的表达及其生物学意义。方法 :采用原位杂交法 ,检测人植入前胚胎细胞IGF 1,IGF 2mRNA的表达情况。结果 :IGF 1及IGF 2mRNA于不同阶段的植入前胚胎细胞中表达不同 ,各表达量有差异。结论 :不同阶段的植入前胚胎细胞分泌IGF 1、IGF 2 ,参与早期人类胚胎的生长、发育。     

多氯联苯暴露对着床期子宫内膜组织中组蛋白甲基化转移酶的影响

目的:探讨多氯联苯(PCB118)慢性暴露对胚胎着床期子宫内膜组织中组蛋白甲基化转移酶的表达影响。方法:将40只CD-1小鼠随机分为4组:空白对照组,1μg/kg PCB118剂量组,10μg/kg PCB118剂量组,100μg/kg PCB118剂量组。灌胃1个月后,促排卵,行雌雄2∶1合笼,次日清晨检查到阴栓记为妊娠第0.5天。于妊娠第4.5天清晨行麻醉,台盼蓝染色观察着床点数量,子宫内膜组织行实时定量RT-qPCR及Western blot检测组蛋白EZH2及MLL1表达量。结果:PCB118慢性暴露后小剂量组和大剂量组小鼠着床个数明显下降(F=32.7,P<0.05)。实时定量PCR结果显示MLL1mRNA表达量在小剂量组及大剂量组明显上调,EZH2的mRNA表达水平未见明显变化。Western blot结果显示,MLL1蛋白表达水平与mRNA水平一致,以小剂量组表达上调最明显。其蛋白表达灰度值依次为120.45±9.87,98.66±6.32,92.33±4.56(F=150.48,P<0.01)。EZH2的蛋白表达水平未见明显变化。蛋白表达灰度值依次为92.73±5.98,96.32±7.34,90.92±5.76(F=1.32,P>0.05)。结论:孕前PCB118慢性暴露可干扰早期妊娠进行,影响胚胎着床,着床期组蛋白甲基化转移酶MLL1的表达也受到影响。     

KMT2D在前列腺癌患者中的表达及其与临床病理特征和预后的关系

目的 探讨组蛋白赖氨酸甲基转移酶2D(KMT2D)在前列腺癌患者中的表达,以及其与临床病理特征和预后的关系。方法 选取2015年7月—2017年7月山西省大同市第五人民医院泌尿外科行前列腺癌根治术治疗的患者126例为观察组,并根据随访3年预后情况分为预后良好亚组(n=88)、预后不良亚组(n=38),另外选择同期医院健康体检志愿者120例作为健康对照组。收集受试者临床资料,采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测受试者血清KMT2D表达水平,Cox回归分析影响前列腺癌患者预后的因素,采用受试者工作特征曲线(ROC)分析血清KMT2D对前列腺癌不良预后的预测价值。结果 观察组血清KMT2D水平高于健康对照组(t/P=8.504/<0.001);预后不良亚组血清KMT2D水平高于预后良好亚组(t/P=6.601/<0.001);Gleason评分>7分、有微血管侵犯、TNMⅢ期、有淋巴结转移的前列腺癌患者血清KMT2D相对表达量分别高于Gleason评分≤7分、无微血管侵犯、TNMⅠ～Ⅱ期、无淋巴结转移的患者,差异均有统计学意义(t/P=3.958/<0.001...     

P300/CBP相关因子在肝细胞癌中的表达及临床意义

目的：检测P300/CBP相关因子（P300/CBP-associated factor,PCAF）在肝细胞癌（hepatocellular carcinoma,HCC）中的表达情况,分析其与肝癌临床病理特征之间的相关性。方法：收集40例HCC及对应癌旁组织,运用RT-PCR、免疫组化技术检测PCAF在肝癌及对应癌旁组织中的表达情况,研究PCAF蛋白表达与肝癌临床病理特征之间的相关性;应用Western blot技术检测人正常肝细胞LO2和肝癌细胞HepG2和SMMC-7721中PCAF蛋白的表达。结果：PCAF mRNA及蛋白在肝癌组织中的表达低于对应的癌旁组织（P=0.000）;PCAF蛋白低表达与肿瘤肝内转移（rs=0.413,P=0.037）、门脉侵犯（rs=0.589,P=0.011）和高TNM分期（rs=0.513,P=0.029）相关;人肝癌细胞株HepG2和SMMC-7721中PCAF 蛋白的表达较正常肝细胞株LO2降低（P=0.000）。结论：肝癌细胞系及肝癌组织中PCAF表达下调,且PCAF的表达下调与肝癌的恶性病理特征相关。     

QPRT、miR-26b-5p在乳腺癌中表达及其与患者预后的关系

目的分析喹啉酸磷酸核糖基转移酶(QPRT)、微小RNA-26b-5p(miR-26b-5p)在乳腺癌中表达及其与患者预后的关系。方法选取2015年3月—2017年10月于广州市中西医结合医院行乳腺癌(经病理组织检查均为乳腺浸润性导管癌)改良根治术女性患者89例为研究对象,获取乳腺癌组织(观察组)和癌旁正常乳腺组织(对照组),免疫组化法检测QPRT表达,原位杂交技术检测miR-26b-5p表达水平,分析QPRT、miR-26b-5p水平与患者术后复发转移的关系,COX多因素分析乳腺癌患者发生复发转移的影响因素。结果观察组QPRT的阳性表达率明显高于对照组,miR-26b-5p的阳性表达率明显低于对照组(χ^(2)/P=54.395/0.000、23.448/0.000);QPRT与miR-26b-5p在乳腺癌组织中表达呈负相关(r/P=-0.343/0.000);QPRT、miR-26b-5p表达水平与患者TNM分期、肿瘤分化程度、淋巴结转移有关(QPRT:χ^(2)/P=5.326/0.021、4.991/0.025、6.740/0.009,miR-26b-5p:χ^(2)/P=5.902/0.015、4.946/0.026、7.949/0.005);QPRT高表达患者术后复发转移率明显高于QPRT低表达患者(65.38%vs.29.73%,χ^(2)/P=13.260/0.000),miR-26b-5p低表达患者术后复发转移率明显高于miR-26b-5p高表达患者(63.79%vs.25.81%,χ^(2)/P=12.550/0.000);分化程度低、TNM分期Ⅲ~Ⅳ期、淋巴结发生转移、QPRT高表达、miR-26b-5p低表达是影响乳腺癌患者术后复发转移的危险因素[OR(95%CI)=2.381(1.394~4.066)、2.317(1.272~4.221)、2.449(1.243~4.825)、2.604(1.501~4.517)、3.007(1.625~5.564)]。结论乳腺癌组织中QPRT表达上调,miR-26b-5p表达下调,是影响乳腺癌患者术后发生复发转移的危险因素,可能为临床治疗乳腺癌提供潜在靶点。     

胰岛素样生长因子家族成员在早期自然流产中作用的研究

 目的 研究胰岛素样生长因子（IGF）家族成员在早期自然流产中的作用。方法 采用荧光定量PCR方法检测正常早孕及自然流产绒毛组织中IGF2基因,胰岛素样生长因子受体1（IGF1R）基因和胰岛素样生长因子结合蛋白1（IGFBP-3）基因mRNA表达。比较各指标间的相关性。结果 自然流产绒毛组织中IGF2、IGFIR mRNA表达明显低于正常绒毛组织（P0.05）。正常绒毛组织中IGF2 mRNA表达量与IGF1R mRNA表达量呈正相关（r=0.345, P0.05）。 结论 IGF家族成员IGF2和IGF1R mRNA表达的降低可能与早期自然流产发生有关。     

组蛋白精氨酸甲基化酶在人体外受精发育阻滞胚胎中的功能研究

探究组蛋白精氨酸甲基化酶(PRMT)在体外受精的人类胚胎发育阻滞中的作用。方法 收集丢弃的70枚体外受精人类胚胎，选取12枚正常发育的胚胎为正常组，12枚发育阻滞胚胎为阻滞组。蛋白印迹和免疫荧光检测2组组蛋白精氨酸甲基化酶6(PRMT6)蛋白质水平，蛋白印迹检测组蛋白H3在精氨酸2的二甲基化(H3R2me2)和组蛋白H3在赖氨酸4的三甲基化(H3K4me3)水平。敲除46枚发育阻滞胚胎中的PRMT6(PRMT6敲除组，n=46),qPCR和蛋白印迹检测阻滞组和PRMT6敲除组的PRMT6 RNA、PRMT6蛋白、H3R2me2和H3K4me3水平，多能性标记Oct4、Nanog和Sox2,观察阻滞组和PRMT6q敲除组胚胎培养7 d的情况。结果 与正常组相比，阻滞组的PRMT6蛋白质水平显著增加[(1.160±0.054)比(1.530±0.13)],H3R2me2升高[(1.340±0.019)比(1.710±0.011)],H3K4me3水平下降[(1.650±0.030)比(1.220±0.015)],差异有统计学意义(P<0.05)。与阻滞组比较，PRMT6敲除组PRMT6 RNA[(1.660±0.029)比(1.230±0.017)]、PRMT6蛋白[(1.400±0.030)比(1.050±0.058)]及H3R2me2蛋白水平显著下调[(1.410±0.011)比(1.340±0.019)],而H3K4me3水平升高[(1.710±0.011)比(1.340±0.019)];多能性标记Oct4[(1.710±0.016)比(1.160±0.049)]、Nanog[(1.690±0.089)比(1.260±0.051)]和Sox2[(1.680±0.091)比(1.310±0.057)]的水平被下调，差异有统计学意义(P<0.05)。结论 敲除PRMT6可以挽救部分发育阻滞的胚胎，甚至单个发育受阻的胚胎也可以发育成融合胚胎。敲除PRMT6可促进人体外受精发育阻滞胚胎的发育。