咪达唑仑对人肺脏液体清除的作用机制研究

目的探讨咪达唑仑对人肺上皮细胞短路电流的影响,并探讨可能的机制。方法应用尤斯灌流室装置测定H441单层细胞的短路电流。由总电流减去阿米洛利可抑制的电流算得阿米洛利敏感性电流,以用药前H441单层细胞的阿米洛利敏感性电流初始值为100%对照。用100μmol/L咪达唑仑处理H441细胞,在0,15,30,60min 4个时间点提取蛋白用于蛋白印迹法,研究咪达唑仑对细胞外调节蛋白酶(ERK)1/2蛋白磷酸化的影响。结果咪达唑仑能够剂量依赖性抑制H441单层细胞的短路电流,此电流可被阿米洛利抑制;蛋白印迹法结果显示咪达唑仑能够促进ERK1/2蛋白磷酸化。结论咪达唑仑通过抑制人肺上皮细胞阿米洛利敏感性电流而降低肺泡上皮离子转运,其机制可能与其促进ERK1/2蛋白磷酸化有关。临床上对伴有肺水肿的患者应用咪达唑仑时应考虑其可能对肺泡上皮液体清除的影响。     

羧甲基壳聚糖对人肺上皮细胞短路电流影响的研究

目的探讨羧甲基壳聚糖对人肺上皮细胞短路电流的影响及其在肺上皮液体转运中的作用。方法应用尤斯灌流室装置测定H441单层细胞的短路电流。由总电流减去阿米洛利可抑制的电流算得阿米洛利敏感性电流,以用药前H441单层细胞的阿米洛利敏感性电流初始值为100%对照。结果羧甲基壳聚糖能够剂量依赖性增加H441单层细胞的短路电流,此电流可被阿米洛利明显抑制;0.1%、0.2%、0.3%羧甲基壳聚糖处理的人H441单层细胞阿米洛利敏感性电流分别增加至(151±16)%、(192±27)%、(222±34)%,与对照值相比P均<0.05。结论羧甲基壳聚糖通过增加人肺上皮细胞阿米洛利敏感性电流而增加肺泡上皮离子转运,可能参与肺水肿液的吸收。     

巴豆醛对肺泡液体清除率的影响及相关机制的研究

目的探讨巴豆醛对肺泡液体清除率的影响,并探讨其潜在的作用机制。方法应用考马斯亮蓝测定小牛血清白蛋白浓度的方法,评估小鼠在体肺泡液体清除率;采用蛋白质印迹法实验研究巴豆醛对细胞外信号调节蛋白激酶(ERK)1/2蛋白磷酸化的影响以及其对肺泡上皮钠通道表达的影响;用活性氧检测试剂盒检测巴豆醛对细胞内活性氧含量的影响。结果巴豆醛能够降低小鼠肺泡液体清除率,蛋白质印迹法结果显示其能够促进ERK1/2的磷酸化,抑制上皮钠通道亚基的表达,并且呈剂量依赖性提高细胞内的活性氧水平。结论巴豆醛能够抑制肺上皮细胞的液体清除,该抑制作用可能与其增加ERK1/2蛋白磷酸化,抑制上皮钠通道蛋白表达以及增加细胞内的活性氧水平有关。     

巴豆醛对小鼠气管短路电流的影响及相关机制研究

目的探讨巴豆醛对小鼠气管上皮及原代培养单层气管上皮细胞短路电流的影响及其与PKG2之间的关系,明确巴豆醛在呼吸系统液体转运中可能的作用机制。方法应用尤斯灌流装置记录小鼠气管上皮及原代培养单层气管上皮细胞短路电流,采用Elisa实验明确巴豆醛对ENa C活性的影响。结果巴豆醛能够抑制小鼠气管上皮和原代培养的单层气管上皮细胞的阿米洛利敏感性短路电流,而此阿米洛利敏感性肺液清除主要是由ENa C介导的液体转运。Elisa实验进一步明确了巴豆醛通过抑制PKG2而参与ENa C活性的调控作用。结论巴豆醛可能通过抑制呼吸系统ENa C的功能,阻碍Na+的重吸收,通过抑制PKG2而参与ENa C活性的调控作用,进而诱导产生肺水肿或急性呼吸窘迫综合征。     

钾通道在维拉帕米抑制上皮钠通道中的作用

目的探讨钾通道在维拉帕米引起的肺水肿中的作用。方法应用尤斯灌流室技术检测钾通道阻滞剂对维拉帕米抑制上皮钠通道的作用。Clofilium,clotrimazole以及glibenclamide(分别为KvLQT1,KCa和KATP通道的阻滞剂)加入H441单层细胞基底侧后,记录短路电流。同时,在穿孔细胞层中观察了维拉帕米对Na+/K+泵的作用。结果在穿孔H441细胞层中观察到维拉帕米对上皮钠通道和Na+/K+泵均有抑制作用。Clofilium,clotri mazole以及glibenclamide分别抑制短路电流至54.4±4.6%,32.1±5.2%,和20.5±1.1%(n=5)。用上述三种钾通道阻滞剂预处理后,维拉帕米对短路电流的作用由对照组的45.9±4.8%分别降低至23.7±4.3%,34.2±2.6%和36.0±2.8%(n=4)。Clofilium显示了对短路电流的最大抑制,与其它两种抑制剂相比具有统计学差异。应用clofilium后加入维拉帕米与对照组相比,其抑制率具有明显统计学差异(P<0.05)。结论这些结果表明KCa,KATP,尤其是KvLQT1通道在肺上皮细胞维拉帕米引起的非心源性肺水肿的Na+和Cl-转运的病理生理过程中发挥重要作用。     

厄贝沙坦抑制大鼠平滑肌细胞AT1R及其下游信号通路

目的本研究目的是利用厄贝沙坦、血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)干预平滑肌细胞,阐明血管紧张素Ⅱ受体阻滞剂(ARB)对血管紧张素Ⅱ1型受体(AT1R)表达及其下游信号通路的影响。方法利用Western Blot技术,研究厄贝沙坦、血管紧张素Ⅱ干预平滑肌细胞后对细胞AT1受体蛋白表达及其下游信号通路-细胞外信号调节激酶1/2(ERK1/2)和信号转导子和转录激活子3(STAT3)蛋白磷酸化水平的影响。结果研究发现厄贝沙坦能显著地抑制AngⅡ诱导的AT1受体蛋白表达(0.208±0.022 vs 0.997±0.131,P<0.01)及下游信号通路中的ERK1/2蛋白磷酸化(0.055±0.007 vs 0.103±0.020,P<0.01)、STAT3蛋白磷酸化(0.162±0.010 vs 0.758±0.054,P<0.01)。结论这些研究结果表明厄贝沙坦抑制AT1R和下游的ERK1/2及STAT3信号通路,从而抑制AngⅡ诱导的平滑肌细胞增殖等,发挥控制血压、防治心脑血管疾病作用。     

ERK1/2通路在4-AP诱导大鼠肺动脉收缩中的作用

目的探讨细胞外信号调节激酶-1/2(ERK1/2)通路在4-氨基吡啶(4-aminopyridione,4-AP)阻断正常大鼠肺动脉平滑肌细胞(PASMCs)膜上电压依赖性钾通道(KV)所引起的肺动脉收缩中的作用。方法取正常鼠肺动脉制作肺动脉环,分别加入4-AP(KV通道阻断剂),PD98059/U0126+4-AP,比较肺动脉收缩的变化。同时培养肺动脉平滑肌细胞进行Western blot分析4-AP对ERK1/2的影响。结果①在血管环试验中,4-AP引起的肺动脉收缩有浓度依赖性;加入20mmol.L-1PD98059或2μmol.L-1U0126可以抑制4-AP引起的肺动脉收缩。②4-AP可刺激PASMCs ERK1/2蛋白磷酸化;③U0126可抑制4-AP引起的ERK1/2蛋白磷酸化。结论ERK1/2通路参与4-AP阻断正常大鼠肺动脉平滑肌细胞膜上电压依赖性钾通道(KV)引起肺动脉收缩。     

粉防己碱对增生性瘢痕成纤维细胞增殖的影响

［摘要］目的观察粉防己碱（tetrandrine, Tet）对增生性瘢痕成纤维细胞增殖及MEK/ERK、MKP 1信号通路的影响。方法培养增生性瘢痕成纤维细胞，四甲基偶氮唑蓝（MTT）比色法、［3H］ TdR掺入率测定不同浓度Tet对细胞增殖的抑制作用；免疫沉淀法纯化蛋白并细胞外信号调节激酶（ERK）试剂盒测定ERK活性；Western blot测定p MEK1/2、p ERK1/2及蛋白激酶磷酸酶 1（MKP 1）表达。结果MTT实验、［3H］ TdR掺入率均显示Tet明显抑制细胞增殖，同时Tet明显抑制ERK活性，Western blot显示Tet明显抑制p MEK1/2及p ERK1/2表达，同时提高MKP 1表达。结论粉防己碱明显抑制增生性瘢痕成纤维细胞增殖，机制与下调ERK活性，抑制MEK/ERK通路及上调MKP 1表达有关。     

布比卡因调控LncRNA LBX2-AS1对宫颈癌细胞SiHa增殖及凋亡的影响

摘要：目的:探讨布比卡因对宫颈癌细胞SiHa增殖、凋亡的影响及其对LncRNA LBX2-AS1的调控作用。方法:体外培养人宫颈癌细胞SiHa,分别加入不同剂量的布比卡因处理细胞,分别将si-NC、si-LBX2-AS1转染至SiHa细胞,分别将pcDNA、pcDNA-LBX2-AS1转染至SiHa细胞后使用布比卡因处理;采用MTT实验检测细胞增殖;应用流式细胞仪检测细胞周期及细胞凋亡率;采用qRT-PCR法检测LBX2-AS1的表达量;Western blot法检测Cleaved-caspase3、pro-caspase3蛋白表达量。结果:布比卡因可明显降低光密度（OD）值、S期细胞比例、LBX2-AS1的表达水平及pro-caspase3蛋白水平（P<0.05）,提高凋亡率、G0-G1期细胞比例及Cleaved-caspase3蛋白水平（P<0.05）;转染si-LBX2-AS1可明显降低OD值、S期细胞比例及pro-caspase3蛋白水平（P<0.05）,提高凋亡率、G0-G1期细胞比例及Cleaved-caspase3蛋白水平（P<0.05）;转染pcDNA-LBX2-AS1可明显逆转布比卡因对SiHa细胞增殖、细胞周期及凋亡的作用（P<0.05）。结论:布比卡因可通过下调LBX2-AS1的表达从而抑制宫颈癌细胞增殖、诱导细胞周期阻滞于G0-G1期细胞比例及促进细胞凋亡。     

蛋白酪氨酸磷酸酶Shp2调节香烟提取物诱导的肺上皮间质转化

目的探索蛋白酪氨酸磷酸酶Shp2对香烟烟雾提取物(cigarette smoke extract,CSE)诱导肺上皮间质转化(epithelial-mesenchymal transition,EMT)的调节作用。方法采用Q-PCR法和ELISA法探究Shp2抑制剂PHPS1对CSE诱导的肺上皮细胞转化生长因子β1(TGF-β1)表达的影响;免疫荧光染色法检测EMT相关因子的表达;Western blot法检测p-Shp2/Shp2、p-Smad2/Smad2的蛋白水平。结果 CSE诱导肺上皮细胞Shp2的激活,导致TGF-β1分泌释放增加,进而引起E-钙黏蛋白表达下调,以及波纹蛋白和α-肌动蛋白表达上调,这些变化可被Shp2抑制剂PHPS1抑制。抑制Shp2活性或表达可抑制CSE诱导的Smad2的磷酸化。结论Shp2调节CSE诱导的肺上皮间质转化可能通过Shp2/Smad2信号途径,提示Shp2可能是治疗肺癌和慢性阻塞性肺病新靶点。