PureSperm离心法在宫腔内人工授精周期中优选精子的应用

目的 :探讨PureSperm离心法在宫腔内人工授精 (IUI)周期中优选精子的效果。　方法 :采用PureSperm单、双梯度离心法及Percoll双梯度离心法分别处理精液 ,比较 3种方法的处理效果 ,并将处理后的精子悬液施行夫精IUI。　结果 :单梯度PureSperm较双梯度的PureSperm及Percoll洗涤后精子密度显著增加 (P <0 .0 1) ,双梯度PureS perm及Percoll离心法两者差异无显著性 (P >0 .0 5 ) ,3种方法在洗涤后精子活率、畸形率及妊娠率比较差异均无显著性 (P >0 .0 5 )。洗涤后正常形态的精子数量明显增加 ,白细胞、上皮细胞及细胞碎片等非精子成分明显减少。　结论 :PureSperm离心法是一种高效、简便、安全的IUI精液处理方法。     

三种精子分离方法的比较评价

精液体外处理的目的是要提高精子的密度和活力，适当控制精子总数，减少或去除精浆内前列腺素、炎症细胞、抗精子抗体等不良成分，促进精子获能，改善精子受精能力，它是人工授精、试管婴儿等辅助生育技术的重要环节。常用的精液体外处理方法有上游法、密度梯度离心法、洗涤法及玻璃纤维过滤法。     

精液体外处理对精子核DNA链完整性影响的研究

目的 研究3种不同精子优选技术对精子运动参数及DNA链完整性的影响。方法 通过计算机辅助精液分析及彗星试验从精子运动参数及DNA链完整性两个方面评价精液体外处理对精子的影响。结果 上游法与Percoll密度梯度离心法相比,除前者精子回收率(15.499.39)%明显低于后者(42.807.17)%外,P<0.05,其他差别无显著性,PureSperm密度梯度离心法与Percoll密度梯度离心法比较,各运动参数差别无显著性(P>0.05)。精液经Percoll法及PureSperm法密度梯度离心和上游法处理后,总彗星细胞率较处理前降低(P<0.05)。结论 上游法、密度梯度离心法和Puresperm 均可以不同程度优化精液质量;对精子DNA链的损伤程度不同。     

不孕症患者宫腔内人工授精精子优选方法分析

目的:比较分析精子不同优选方法与宫腔内人工授精(IUI)成功率的相关性,以提高IUI妊娠率。方法:回顾性分析本院生殖中心门诊不孕症患者452例671个IUI周期,按精子优选方法分为3组:含5%人血清白蛋白(HSA)的Earle's液上游法、SpermR inse上游法、SupraSperm密度梯度离心法。比较各组患者的处理前后精子密度与活动率及临床妊娠结局。结果:3种精子优选方法处理后精子活动率及a+b级精子百分率显著增加(P<0.01)。含5%HSA的Earle's液上游法221个IUI周期,妊娠21个周期,周期临床妊娠率9.5%;SpermR inse上游法215个IUI周期,妊娠34个周期,周期临床妊娠率15.8%,与含5%HSA的Earle's液上游法比较有显著性差异(P<0.05);SupraSperm密度梯度离心法235个IUI周期,妊娠34个周期,周期临床妊娠率14.5%,与含5%HSA的Earle's液上游法比较无统计学差异(P>0.05)。结论:SpermR inse上游法的IUI临床妊娠率明显高于含5%HSA的Earle's液上游法,适用于各类不孕症患者。SupraSperm密度梯度离心法也具有较高的周期临床妊娠率,洗涤效果好,操作便捷高效,尤其适用于含炎症细胞、死精子和畸形精子等不良成分较多的精液。     

两种精子优选方法效果比较

目的　探讨精子经王氏管和密度梯度离心法处理后精子参数的变化 ,比较两者在宫内人工授精 (IUI)的临床效果。　方法　选择不育男性精液 15 7份 ,采用两种方法进行配对处理 ,比较两种分离方法前后精子活力、正常形态率、精子顶体形态和精子染色质等变化 ;分离后的精子用于IUI的临床妊娠率。　结果　两种方法处理后的精子活力 (a +b级 )、正常精子形态率、精子顶体完整率、正常染色质率与处理前比较有显著差异 (P <0 .0 1) ;但两种方法分离的精子用于IUI的临床妊娠率无显著差异 (P >0 .0 5 )。　结论　王氏管法和密度梯度离心法处理精子后均获得质量较好的精子 ,但用于IUI后临床妊娠率无明显差异     

两种精子处理方法的卵细胞胞质内单精子显微注射结局的比较

目的:评价密度梯度离心和改良上游法两种处理活动精子的分离方法在卵细胞胞质内单精子显微注射(ICSI)中的效果,从而指导临床应用。方法:选取2004年10月~2005年4月在本中心完成的42例患者42个周期为研究对象,前瞻性比较了两种精子分离方法的受精率、卵裂率、优质胚胎率、临床妊娠率、精子畸形率、精子回吸收率等。结果:两种方法分离精子所获得的ICSI胚胎移植(ICSI-ET)中,受精率、卵裂率、优胚率、临床妊娠率均无明显差异,但是改良上游法所获得的精子畸形率明显高于密度梯度离心法(P<0.01);重度少精子症密度梯度离心法回吸收精子优于改良上游法(P<0.01)。结论:在辅助生育技术ICSI-ET中,密度梯度离心法分离活动精子临床妊娠结局与改良上游法无明显差异;除对重度少精子症者外,均可以采用改良上游法。     

精液保存和优化处理方法对精子DNA完整性的影响

目的:探讨不同精液保存和处理方法对精子DNA完整性的影响。方法:筛选2015年1~12月就诊的100例精液正常志愿者,将每例志愿者的精液混匀后分别对其进行不同的保存和优化处理;保存方法包括直接冷冻法、试剂冷冻法、室温保存4 h和24 h等,优化处理方法包括简单洗涤法、直接上游法和非连续密度梯度离心法。保存和处理后均采用精子染色体扩散实验(SCD)分析其精子DNA碎片指数(DFI);优化处理各组继续培养24 h,培养后再分析其精子活动率和DFI。结果:精液保存条件两两组间分析显示,直接冷冻法、试剂冷冻法和室温保存4 h的精子DFI分别为(27.3±6.4)%、(26.9±6.1)%和(24.7±6.8)%,结果无显著性差异(P0.05),而室温保存24 h则显著增加精子DFI[(35.6±9.0)%](P0.05)。与简单洗涤法的精子DFI[(13.7±2.0)%]相比,直接上游法的精子DFI[(9.1±1.3)%]和非连续密度梯度离心法的精子DFI[(8.0±2.5)%]均显著降低(P0.05);再培养24 h后,非连续密度梯度离心法处理的精子DFI[(11.5±4.2)%]最低(P0.05)。结论:保存条件和优化处理方法对精子DNA完整性有影响,临床工作中需选取最合适的精液处理方法。     

三种精液处理方法所得精子的体外观察分析

精液处理是人工授精和试管婴儿过程中重要的一环,优化处理精液是为了提高精子的密度和活力,并去除精浆内的前列腺素、抗精子抗体、炎症细胞等不良成分。为寻求简便、高效、快速的精液处理方法,本研究对三种精液处理方法(Earle’s上游法、双层Percoll梯度离心法和单层Percoll高速离心法)进行对比研究,现报道如下:     

Isolate液处理异常精液行宫腔内人工授精的应用评价

为寻求简便、高效的精液处理方法,2002年7月～2003年12月,我院通过对不同程度少弱精子症患者精液采用Earle液上游法和双层Isolate液梯度离心法进行对比研究,现报道如下.     

不同处理方法优选精子效果的比较

目的 比较上游法、三种密度梯度离心法和洗涤离心法优选精子的效果. 方法 门诊收集浓度与活力正常的精液标本44份,每份精液各取0.5 ml×5,分别采用上游法、密度梯度离心法和洗涤离心法进行处理,比较各组的精子浓度、活力、畸形率、精子畸形指数（SDI）和DNA碎片指数（DFI）,再按试剂来源将密度梯度离心法分为Sperm Grad梯度离心组（A组）、Pure Sperm梯度离心组（B组）和Pure Ception梯度离心组（C组）,进行上述参数比较. 结果与上游法和梯度离心法相比,洗涤离心法精子浓度、DFI值、畸形率、SDI值及头部、中段、尾部畸形率均显著增高（P＜0.05）,活力显著降低（P＜0.05）;与梯度离心法相比,上游法精子浓度、DFI值均显著降低（P＜0.05）,活力显著升高（P＜0.05）,两组间总畸形率、SDI值及头部、中段、尾部畸形率均无显著性差异（P＞0.05）.A、B、C组间精子浓度、活力、畸形率、SDI及DFI等参数均无显著性差异（P＞0.05）,但C组中段畸形率显著高于A组和B组（P＜0.05）,B组尾部畸形率显著高于A组和C组（P＜0.05）; 结论对于精子浓度和活力正常的精液标本,上游法精子活力最高、畸形率和DFI值最低,且精子浓度能够满足临床需要,是较为理想的精子优选技术;三种不同梯度离心法优选精子效果无显著性差异,适用于严重少精子症精液标本的处理.     

辅助生殖技术中的精液优选处理

精液处理是辅助生殖技术的重要环节。选择精液处理方法时,不仅要考虑到精液的质量问题,还要考虑处理过程可能对精液产生的影响。本文介绍了上游法、密度梯度离心法、泳动沉淀法及玻璃纤维过滤法等几种常用的精子优选方法,并分析它们对精液的处理效果,同时讨论某些特殊精液的处理方法。     

1层和2层梯度离心法分离精子的效果评价

目的:评价1层和2层Percoll密度梯度离心法分离精子的效果。方法:20份精液标本分别行50%1层,90%和45%Percoll2层密度梯度离心分离,处理前后应用SCA(sperm class analyzer)精子质量分析仪分析精子密度、活力和圆形细胞密度。结果:1层法分离后精子回收率为(65.5±12.8)%,明显高于2层法(P<0.01);1层和2层法分离后a级精子百分率明显高于处理前(P<0.05,P<0.01),而1层法分离后a级精子百分率明显低于2层法(P<0.05);1层法分离精子后c级精子百分率明显高于2层法(P<0.05),与处理前相比没有明显差异(P>0.05);2层法分离后a+b级精子百分率明显高于处理前(P<0.05),1层法分离后a+b级精子百分率与处理前相比没有明显差异(P>0.05);1层和2层法分离后圆形细胞密度明显低于处理前(P<0.05,P<0.01),两种方法之间没有差异(P>0.05)。结论:1层法分离后精子回收率较高,精子的活力改变不大;2层法分离后精子回收率较低,精子的活力明显改善;1层和2层法都可以较好地把精子与圆形细胞分开。两种方法各有优势,在精子体外处理中都有着重要的应用价值。     

少、弱、畸精子症的体外疗法—密度梯度离心法分离高活力精子

为治疗少、弱、畸精子症引致的男性不育,用不连续密度梯度离心技术,从质量较差的精液中将活力好的成熟精子分离出来,用于配偶间人工授精(AIH)并已在临床应用中获得成功。处理后的精液中大部分未成熟生殖细胞和其它细胞成分停留于50～60％等渗Percoll界面,90％等渗Percoll层中回收的精子中几乎不含有其它细胞成分,存活率达95％,形态正常的成熟精子占80％以上,并呈现非常活跃的前向直线运动。本法精子平均总回收率28.4±15.1％,其中活动很好的a级和b级精子平均回收率达59.1±28.1％。非成熟精子细胞成分的清除率则达90％以上。本技术结合利用了活动精子的主动泳动能力和离心力的被动分配作用,优于常用的精子上游法和白蛋白层滤过法。     

成人骨髓基质干细胞体外定向诱导分化为软骨细胞的实验研究

目的 建立临床成人骨髓基质干细胞(MSCs)体外培养、定向诱导分化为软骨细胞的途径。方法抽取成人骨髓，Percol密度梯度离心法进行体外培养，贴壁细胞传代，取第3代细胞在培养基中添加软骨分化诱导剂地塞米松、维生素C和不同剂量转化生长因子-β(TGF-β)，培养16d后,在倒置显微镜观察细胞形态，甲苯胺蓝染色蛋白多糖，逆转录一聚合酶链反应(RT-PCR)、免疫细胞化学(SABC法)检测Ⅱ型胶原表达，诱导后MSCs与新型材料聚乳酸和羟基乙醇共聚物(PL-GA)复合。结果 Percoll密度梯度离心法培养可获得均一的。MSCs；5、10ng TGF-β诱导分化的MSCs生长迅速。呈典型的软骨细胞形态，甲苯胺蓝染色阳性，Ⅱ型胶原表达阳性，MSCs对材料PL-GA黏附力强。结论 可以从成人骨髓中培养出MSCs，并可定向诱导分化为软骨细胞，5～10ng TGF-β为最佳诱导剂量，成人MSCs可用作临床自体软骨组织工程种子细胞。     

Percoll梯度离心前后精子功能指标分析

目的 :通过分析Percoll梯度离心法处理前后精子相关功能指标 ,评价该法在精子体外处理中的作用。　方法 :采用多次曝光摄影技术、瑞 姬氏染色法、低渗肿胀实验 ,观察处理前后精子运动速度、顶体完整率和低渗肿胀率的变化。　结果 :2 5例不育病人精液标本经Percoll梯度离心法处理前后 ,精子运动速度 (2 0 .5 6± 8.13μm/s和 2 5 .18± 8.30 μm/s ,P <0 .0 5 )、顶体完整率 (6 1.2 0 %± 2 1.11%和 70 .36 %± 17.70 % ,P <0 .0 1)和低渗肿胀率 (6 8.2 8%±17.33%和 76 .76 %± 17.10 % ,P <0 .0 5 )均有显著差异。　结论 :精液标本经Percoll梯度离心法处理后 ,各项精子功能指标均较处理前有明显改善 ,该法可广泛应用于辅助生殖医学中。     

精液不同体外处理技术对宫腔内人工授精的临床疗效分析

目的　探讨精液的不同体外处理技术对宫腔内人工授精 (IUI)的疗效。　方法　A组为因女方因素引起的不育 ,采用上游法优选精子。B组为因男性性交和射精障碍 ,精液液化不良 ,免疫学异常 ,精液中有核细胞数目 >5× 10 9/L ,单纯精浆异常等引起的不育 ,采用高速离心法处理精子。C组为少、弱、畸精子症等引起的不育 ,采用双层梯度法处理精子。　结果　妊娠成功率A组 5 0 .5 % ,B组为 4 1.4 % ,C组为 32 .4 %。　结论　对不同的病因采用不同的精液体外处理技术 ,能提高IUI的成功率。     

回收精子活动率和静置时间的关系

近年来,国内外在实施体外授精和人工授精时,为改善精液质量,从精液中分离并回收优质精子,常常采用精液静置法(Layering method)。用此方法从正常或接近正常的精液中,分离回收优质精子是极其有效的。但对粘稠性高,液化时间延长或精子活动无力的精液,回收精子的效果较差。1984年Leung改用搅拌离心法,获得较好的效果。1988年吉野和男用精子上游(swin up)洗涤浓缩法、使回收精子活动率提高2倍,授孕指数提高1.3倍。妊娠率亦有显著上升。1989年我们就精子上游洗涤浓缩法中的回收精子活动率与精液     

优选技术对人精子染色体及超微结构的影响

目的 :了解优选技术对人精子染色体及超微结构的影响。　方法 :分别应用上游法、Percoll密度梯度离心法及双曲管优选法处理精液 ,观察优选前后精子染色体畸变率、精子性染色体比例及超微结构相对正常的精子百分率。　结果 :精子染色体畸变率、精子性染色体比例及超微结构相对正常的精子百分率在 3种优选方法优选前后均无显著改变 (P >0 .0 5 )。　结论 :3种优选方法不会增加精子超微结构的损害 ,对精子染色体没有产生影响     

两种样品制备方法对人精子蛋白质双向电泳分离效果的比较

<正>双向凝胶电泳(2-DE)是蛋白质组学研究的关键技术之一,目前在人精子蛋白质方面已经有较为广泛的应用。由于精液成分复杂,通常采用Per-coll密度梯度离心法去除精浆和非精子成分,但是一些盐类和其他小分子杂质等难以清除干净,加之     

四种精液处理方法优选冷冻精子的比较

目的探讨洗涤法(SW)、密度梯度离心法(DGC)、上游法(SU)、磁性活性细胞分选法(MACS)对冷冻精液的优选效果,为供精人工授精(AID)和供精体外受精(IVF-D)提供可靠的数据。方法门诊收集健康男性精液,制备冷冻精液。冷冻精液复苏后,根据优选处理方法不同分为4组:SW组、DGC组、SU组和MACS组,每组样本各20例。比较分析各组优选前后精子浓度、前向运动精子活率、膜完整性、正常形态率及DNA碎片率等的差异。结果 SW组,处理前后前向运动精子活率、精子膜完整性、正常形态率及DNA完整率,均无显著性差异(P0.05);DGC和SU组中,优选后前向运动精子活率[分别为(78.19±12.13)vs.(34.17±8.61)、(82.20±7.17)vs.(42.86±16.38)]、精子膜完整率[分别为(84.62±5.84)vs.(68.17±6.74)、(81.44±4.47)vs.(65.19±6.15)]、正常形态率[(20.42±4.63)vs.(12.16±5.75)、(25.02±4.61)vs.(10.24±5.37)]及DNA完整率[(86.73±7.07)vs.(67.98±6.45)、(88.49±3.09)vs.(67.44±5.89)]均显著高于同组优选前(P0.05);MACS组中,优选后冷冻精子的膜完整性[(84.00±5.33)vs.(69.21±7.79)]、正常形态率[(13.72±4.58)vs.(7.90±3.80)]及DNA完整率[(91.95±2.82)vs.(69.79±3.90)]亦显著高于优选前(P0.05),但前向运动精子活率没有显著改善(P0.05)。结论四种方法在处理冷冻精子方面各有优缺点,临床可以根据精液标本的质量或者对于精液制备液的要求来选择不同的精子优化方法。MACS可以较好地优化DNA完整率,其在辅助生殖领域的应用具有一定前景。