硫化氢对大鼠实验性肝硬化门静脉压力的影响

目的应用内源性硫化氢（H2S）供体硫氢化钠（NaHS）探讨内源性H2S/胱硫醚-γ-裂解酶（CSE）体系对大鼠肝硬化门静脉压力的影响。方法将32只健康雌性SD大鼠随机分为4组：C组和C＋S组采用复合因素法复制肝硬化模型。模型制备52 d后,N＋S组和C＋S组大鼠腹腔注射NaHS 56μmol/（kg.d）,N组和C组腹腔注射同等剂量的生理盐水。1周后分别测定各组大鼠门静脉压力（PVP）及门静脉血浆中H2S含量;采用免疫组织化学方法检测大鼠肝门区门静脉平滑肌细胞中CSE蛋白表达。结果与N组和N＋S组相比,C组和C＋S组PVP均升高,H2S含量及CSE蛋白表达均降低;与C组相比,C＋S组PVP降低,H2S含量及CSE蛋白表达均升高。结论 NaHS作为H2S供体可能具有改善肝硬化大鼠门脉高压的作用,其机制可能与H2S含量及CSE蛋白表达升高有关。     

内源性硫化氢在不同时期大鼠肝硬化中的作用

目的: 观察内源性胱硫醚- γ - 裂解酶(cystathionine gamma-lyase, CSE)/硫化氢(hydrogen sulfide, H2S)(CSE/H2S)体系在不同时期肝硬化大鼠模型上的变化, 以探讨内源性H2S在肝硬化发生发展过程中的作用.方法: 制备四氯化碳诱导的肝硬化大鼠模型,在第15、30、52天取大鼠门静脉血检测H2S浓度, 用免疫组化和RT-PCR方法观察肝组织CSE mRNA的表达.结果: 肝硬化早、中、晚期大鼠门静脉血中H2S的含量均显著低于正常对照组( F =126.208, P = 0.000), 且H2S浓度随着肝脏病变的加重而逐渐降低( r = -0.777, P<0.05). 肝硬化不同时期肝组织CSE蛋白的灰阶值均低于正常对照组( F = 156.04, P = 0.000), 表明CSE表达增强. 各组CSE mRNA的表达均分别显著高于正常对照组( F = 23.927, P = 0.000), 且随着肝脏病变的加重表达逐渐增加.结论: H2S体系在肝硬化发生发展中起着保持血管舒张状态的重要作用.     

内源性硫化氢对肝硬化大鼠肝细胞凋亡的影响

目的:探讨硫化氢(hydrogen sulfide,H2S)代谢酶抑制剂对肝硬化大鼠肝细胞凋亡的影响,进一步了解内源性H2S在大鼠肝硬化过程中发挥保护性作用的机制.方法:将40只♀SD大鼠分为4组,正常对照组(N组),正常对照组+炔丙基甘氨酸(PPG)组(P组),肝硬化组(H组),肝硬化+PPG组(PH组).H组、PH组利用CCL4复合因素法复制肝硬化大鼠模型,P组和PH组给予腹腔注射PPG(30mg/kg·d)减少大鼠体内H2S含量;N组和H组腹腔注射同等剂量的生理盐水.免疫组织化学法检测大鼠肝组织中细胞胱硫醚γ裂解酶(CSE)的表达,Tunel法检测大鼠肝组织中肝细胞的凋亡,Western-blot法检测大鼠肝组织中凋亡相关蛋白Bax、Bcl-2的表达.结果:H组与N组相比,凋亡指数(AI)明显升高(P=0.000),凋亡促进蛋白Bax表达升高(P=0.001);PH组与H组相比,CSE表达降低(P=0.029),AI明显升高(P=0.000),Bax表达增高(P=0.021),差异均具有统计学意义.Bcl-2在各组间的表达无显著性差异(P=0.742).结论:H2S代谢酶抑制剂可促进肝硬化大鼠肝细胞的凋亡,其作用机制可能与其调节Bax的表达有关.     

烟草烟雾对大鼠胸主动脉硫化氢/胱硫醚-γ-裂解酶体系的影响

目的探讨烟草烟雾对大鼠胸主动脉硫化氢(H2S)/胱硫醚-γ-裂解酶(CSE)体系的影响。方法以10周龄SD大鼠为研究对象,随机分为对照组、短期吸烟组、中期吸烟组和长期吸烟组。采用烟草烟雾熏吸方法建立被动吸烟大鼠模型,采用敏感硫电极法测定血清中H2S浓度,采用免疫组织化学染色和显微图像定量分析法观察胸主动脉平滑肌CSE的表达。结果短期吸烟组血清H2S浓度与对照组比较无统计学差异(P>0.05),长期吸烟组、中期吸烟组血清H2S浓度明显低于对照组和短期吸烟组(P<0.01),长期吸烟组血清H2S浓度明显低于中期吸烟组(P<0.05),H2S浓度随着烟草烟雾熏吸时间的延长而降低,并呈时间依赖性。短期吸烟组胸主动脉CSE面积密度和光密度与对照组比较无统计学差异(P>0.05),长期吸烟组、中期吸烟组胸主动脉CSE面积密度和光密度明显低于对照组和短期吸烟组(P<0.05),长期吸烟组胸主动脉CSE面积密度和光密度明显低于中期吸烟组(P<0.05),CSE的表达随着烟草烟雾熏吸时间的延长而降低,并呈时间依赖性。结论烟草烟雾可显著下调大鼠血清H2S的浓度及胸主动脉中CSE的表达。     

硫化氢对肝硬化大鼠肝脏survivin表达的影响

目的:探讨抗凋亡因子存活素(survivin)在硫化氢(hydrogen sulfide,H2S)干扰的肝硬化大鼠肝脏中的表达量,了解H2S在肝硬化过程中可能的作用机制.方法:♀SD大鼠经复合因素法复制肝硬化模型,造模结束后随机分为S组、P组、C组,分别腹腔注射硫氢化钠(sodium hydrogen sulfide,NaSH)56mg/(kgd)、炔丙基甘氨酸(Propargylglycine,PPG)30mg/(kgd)及等量生理盐水,用敏感硫电极法检测肝硬化大鼠门静脉中H2S的量,用免疫组织化学及realtime-PCR检测大鼠肝脏survivin蛋白及mRNA表达.结果:S组、P组与C组相比,门静脉血浆内H2S浓度显著改变(51.19mol/L±8.75mol/L,68.97mol/L±2.69mol/Lvs134.49mol/L±12.25mol/L,P<0.05),肝硬化H2S增加组大鼠survivin蛋白及mRNA表达显著增加(P<0.05),肝硬化大鼠体内H2S与survivin表达有相关性.结论:在大鼠肝硬化模型中,随着体内H2S浓度的变化,survivin蛋白及mRNA表达发生变化,这可能是H2S调节肝硬化作用过程中的机制之一.     

气体信号分子硫化氢在油酸致大鼠急性肺损伤中的作用

目的:探讨胱硫脒-γ-裂解酶(cystathionine-γ-lyase,CSE)/硫化氢(hydrogen sulfide,H2S)系统在急性肺损伤(acute lunginjury,ALI)中的作用。方法:尾静脉注射油酸(oleic acid,OA)制备大鼠ALI模型为OA组,对照组注射等量生理盐水,注射OA前给予硫氢化钠(NaHS)(14μmol/kg)作为NaHS+OA组,单纯给予NaHS(14μmol/kg)作为NaHS组,分别测定血浆及肺组织H2S生成量、CSE活性、3-巯基丙酮酸转硫酶(3-mercaptopyruvate sulfurtransferase,MPST)活性、肺组织及血浆中丙二醛(MDA)、共轭二烯(Diene)键含量;并对肺部病变进行评定。结果:与对照组比较,OA组肺组织CSE、MPST活性及H2S浓度呈现下降趋势(P<0.01),血浆H2S浓度升高(P<0.01),血浆及肺组织MDA及Diene键含量升高(P<0.01);与OA组比较,NaHS+OA组血浆及肺组织MDA和Diene键含量明显下降(P<0.01)。结论:内源性CSE/H2S系统参与了OA致大鼠ALI的病理生理过程;给予外源性H2S可以减轻ALI时肺脏脂质过氧化损害。     

硫化氢对糖尿病大鼠心肌纤维化及CX40和CX45表达的影响

目的探讨气体信号分子硫化氢(H2S)对链脲佐菌素(STZ)诱导的糖尿病大鼠心肌纤维化及缝隙连接蛋白C×40和C×45的影响。方法 SD大鼠随机分为对照组、糖尿病大鼠组(STZ组)、硫化氢干预糖尿病大鼠组(STZ+H2S组)及硫化氢干预正常大鼠组(H2S组)。腹腔注射STZ(40 mg/kg)建立糖尿病模型;糖尿病模型建立后,STZ组与H2S组每天腹腔注射浓度为100μmol/kg硫氢化钠溶液(H2S供体);8 w后处死大鼠。碱水解法检测羟脯氨酸表达水平;Western印迹检测CX40和CX45蛋白的表达。结果与对照组相比,STZ组大鼠心肌组织羟脯氨酸表达明显增加(P0.01),CX40表达明显下降(P0.001),而CX45表达明显增多(P0.01)。与STZ组相比,硫化氢干预后的STZ+H2S组大鼠心肌组织羟脯氨酸明显下降(P0.01),CX40表达明显升高(P0.01),CX45表达有下调趋势,但结果未显示出统计学意义。结论 H2S可改善糖尿病大鼠心肌纤维化,同时上调CX40蛋白的表达,可能参与糖尿病大鼠的心肌纤维化和缝隙连接重构的调控。     

硫化氢对糖尿病大鼠心脏MMP-2与MMP-12的影响

目的探讨气体信号分子硫化氢(H2S)对链脲佐菌素(STZ)诱导的糖尿病大鼠基质金属蛋白酶(MMP)-2及MMP-12的影响。方法SD大鼠随机分为对照组、糖尿病大鼠组(STZ组)、H2S干预糖尿病大鼠组(STZ+H2S组)及H2S干预正常大鼠组(H2S组)。腹腔注射STZ40 mg/kg建立糖尿病模型;糖尿病模型建立后,STZ组与H2S组每天腹腔注射浓度为100μmol/kg的硫氢化钠溶液(H2S供体);8 w后处死大鼠,Western印迹检测各组大鼠心脏MMP-2和MMP-12蛋白的表达。结果糖尿病大鼠心脏MMP-2与MMP-12表达水平明显减低(P0.01,P0.05),H2S可以明显上调糖尿病大鼠心脏MMP-2与MMP-12的表达(P0.01);结论 H2S可通过上调MMP-2及MMP-12的表达,改善心肌纤维化。     

内源性硫化氢对柯萨奇病毒B3性心肌炎小鼠心肌内病毒复制的影响

目的 观察内源性硫化氢(H2S)对柯萨奇病毒B3(CVB3)所致病毒性心肌炎(VMC)小鼠心肌内病毒复制的影响,探讨内源性H2S在VMC发病机理中的作用.方法 雄性Balb/c小鼠通过腹腔接种CVB3复制VMC模型.75只雄性Balb/c小鼠随机分为5组(每组15只):正常对照组、VMC组及胱硫醚-γ-裂解酶(CSE)不可逆抑制剂-炔丙基甘氨酸(PAG)低、中、高剂量干预组(PAG给药采用皮下注射,PAG低、中、高剂量干预组的PAG剂量分别为:20.0、40.0、80.0 mg·kg-1,1次/d,共6次.PAG的首次给药为腹腔接种CVB3的同时皮下注射PAG).于腹腔接种CVB3后第7天处死小鼠.用光镜观察心肌组织的病理变化;用分光光度法测定心肌组织的H2S含量;用酶免疫吸附法测定心肌组织的CSE活性及血清的心肌肌钙蛋白Ⅰ(cTnⅠ)含量;用逆转录-聚合酶链反应方法检测心肌组织CVB3mRNA表达.结果 VMC组心肌组织的CSE活性、H2S含量明显低于正常对照组(P﹤0.01),心肌组织的病理积分、CVB3mRNA表达水平及血清的cTnⅠ含量明显高于正常对照组(P﹤0.01);PAG低、中、高剂量3个干预组心肌组织的CSE活性、H2S含量明显低于VMC组(P﹤0.01),心肌组织的病理积分、CVB3mRNA表达水平及血清的cTnⅠ含量明显高于VMC组(P﹤0.01).结论 心肌内源性H2S能抑制CVB3在心肌内复制.     

气体信号分子硫化氢对冠心病的保护作用机制及相关性研究

目的探讨冠心病患者血浆中硫化氢(H2s)浓度与冠心病相关性及保护作用、相关代谢酶活性机制。方法入选2012年1月—2014年6月在广东医学院附属医院心内科住院患者200例,分为两组:冠脉正常组(a组,n=99)、冠心病组(b组,n=101),再亚组分为稳定型心绞痛组(b1组,n=34)、不稳定型心绞痛组(b2组,n=35)及心肌梗死组(b3组,n=32)。各组常规抽取临床指标、检测血小板聚集率,检测胱硫醚-γ-裂解酶(CSE)及胱硫醚-β-合成酶(CBS)活性,检测H2S含量,评估患者血浆中H2S的浓度与冠心病的相关性,作H2S与血小板聚集功能的相关性分析。结果冠心病组血浆CSE及CBS活性明显低于冠脉正常组(P0.01),且稳定型心绞痛组、不稳定型心绞痛组及心肌梗死组血浆CSE、CBS活性存在统计学意义(P0.01);冠心病患者组血浆H2S含量明显低于冠脉正常组(P0.01),且稳定型心绞痛组、不稳定型心绞痛组及心肌梗死组血浆H2S含量存在统计学意义(P0.01);血浆H2S浓度与血小板聚集率呈负相关(r=-0.85,P0.01)。结论 H2S气体浓度的改变与代谢通路中CSE及CBS活性的降低有关,血浆H2S含量的减少可能与冠心病的病情严重程度相关,且与冠心病危险因素吸烟、高血压、高血糖密切相关。H2S作为一种新型的气体信号分子具有心脏保护作用。     

The third gas: H2S regulates perfusion pressure in both the isolated and perfused normal rat liver and in cirrhosis

The regulation of sinusoidal resistance is dependent on the contraction of hepatic stellate cells (HSC) around sinusoidal endothelial cell (SEC) through paracrine cross-talk of vasoconstrictor and vasodilator agents. Hydrogen sulfide (H2S), a recently discovered gas neurotransmitter, is a putative vasodilator whose role in hepatic vascular regulation and portal hypertension is unexplored. Four-week bile duct-ligated (BDL) rats with cirrhosis and control rats were treated daily with NaHS (56 micromol/kg) for 5 days. Isolated livers were perfused first with NaHS for 20 minutes and then with norepinephrine (NE) and the intrahepatic resistance studied. In normal rats and animals with cirrhosis, administration of NE resulted in a dose-dependent increase of portal pressure. This effect was attenuated by H2S treatment (P < .05). The H2S-induced relaxation of hepatic microcirculation was attenuated by glibenclamide, an adenosine triphosphate (ATP)-sensitive K+ channel inhibitor. L-Cysteine, a substrate of cystathionine-gamma-lyase (CSE), decreased vasoconstriction in normal rat livers (P < .05) but failed to do so in livers with cirrhosis. BDL resulted in a downregulation of CSE mRNA/protein levels and activity (P < .05). Our in vitro data demonstrate that CSE is expressed in hepatocytes, HSCs, but not in sinusoidal endothelial cells (SEC). HSC activation downregulates CSE mRNA expression, resulting in a defective production of H2S and abrogation of relaxation induced by L-cysteine. In conclusion, CSE-derived H2S is involved in the maintenance of portal venous pressure. The reduction of CSE expression in the liver with cirrhosis contributes to the development of increased intrahepatic resistance and portal hypertension.     

ⅢA-N2期肺癌新辅助化疗前后Ki-67表达水平与预后关系

目的探讨ⅢA-N2期非小细胞肺癌(NSCLC)新辅助化疗(NCT)前后Ki-67表达水平与预后的关系。方法收集60例ⅢA-N2期NSCLC患者,首先进行新辅助化疗(NCT),再行手术。观察NCT疗效,比较Ki-67表达与临床疗效和预后的关系。结果NCT客观缓解率(ORR)是53.3%。NCT前后癌组织中Ki-67表达阳性率分别为63.2%和43.9%(P<0.05)。临床疗效显著组与疗效不显效组比较,Ki-67表达阳性率较低(31.3%vs 60.0%)(P<0.05)。生存分析显示:Ki-67表达阴性者具有更好的OS和PFS(P<0.01)。单因素分析示:Ki-67表达阴性者有更高的2年PFS和OS。多因素分析示:Ki-67阴性表达是预后的独立危险因素。结论Ki-67表达水平影响临床疗效和预后,Ki-67可作为NSCLC新辅助化疗疗效预测指标。     

Ki-67表达及幽门螺杆菌感染在阿司匹林相关性胃黏膜病变中的作用

目的探讨Ki-67表达及幽门螺杆菌(Helicobacter pylori,H.pylori)在阿司匹林相关性胃黏膜病变中的作用。方法本组阿司匹林相关性胃黏膜病变患者共136例,根据胃镜下表现分为出血组、溃疡组和胃炎组;所有患者均应用快速尿素酶试验检测、病理组织学Giemsa染色及13C尿素呼气试验将136例阿司匹林相关性胃黏膜病变患者分为H.pylori感染阳性组和阴性组,应用免疫组织化学染色对各组病变的增殖细胞核抗原Ki-67表达进行检测。结果在正常胃黏膜上皮组织Ki-67无表达或呈弱阳性表达,平均染色积分为0.125±0.354。在阿司匹林相关性胃黏膜病变中,出血组胃黏膜上皮组织Ki-67平均染色积分为3.916±1.676;溃疡组胃黏膜上皮组织Ki-67平均染色积分为2.174±1.527;胃炎组胃黏膜上皮组织Ki-67平均染色积分为1.394±0.899。出血组胃黏膜上皮组织Ki-67平均染色积分显著高于溃疡组及胃炎组(P<0.05)。H.pylori感染阳性组胃黏膜上皮组织Ki-67平均染色积分为2.275±1.511,H.pylori感染阴性组胃黏膜上皮组织Ki-67平均染色积分为1.588±1.698。H.pylori感染阳性组胃黏膜上皮组织Ki-67染色积分明显高于H.pylori感染阴性组(P<0.05)。结论阿司匹林相关性胃黏膜病变组织中,阿司匹林和H.py-lori均可导致胃黏膜的损伤,促进胃黏膜上皮细胞增殖。     

Ki-67核抗原在良、恶性胃粘膜病变中的表达及临床意义

目的　研究Ki 6 7核抗原在良、恶性胃粘膜病变中的表达及与胃癌生物学行为的关系。方法　采用免疫组化技术检测 36例正常胃粘膜和 6 4例胃癌Ki 6 7核抗原的蛋白表达。结果　正常胃粘膜中Ki 6 7核抗原的表达率为 5 6 %,胃癌中Ki 6 7核抗原的表达率为 43 8%,二者相比具有显著性差异 (P <0 0 1) ;侵犯肌层或浆膜层胃癌的Ki 6 7核抗原表达率 ( 5 4 5 %)显著高于局限于粘膜层和粘膜下层者 ( 2 0 0 %) (P <0 0 5 ) ;低分化胃癌的Ki 6 7核抗原表达率 ( 5 6 8%)显著高于高、中分化胃癌 ( 2 5 0 %) (P <0 0 5 ) ;淋巴结转移阳性组胃癌Ki 6 7核抗原表达率 ( 6 7 7%)显著高于淋巴结转移阴性组 ( 2 1 2 %) (P <0 0 5 )。结论　Ki 6 7核抗原的表达与胃癌的侵袭、低分化、淋巴结转移显著相关 ,是判断胃癌患者预后的一项有价值的参考指标。     

大鼠急性胰腺炎相关肺损伤肺脏内源性H2S/CSE体系的变化

目的 观察急性胰腺炎相关肺损伤肺组织中内源性硫化氢(H2S)/胱硫醚γ裂解酶(CSE)体系的变化以及CSE抑制剂炔丙基甘氨酸(PAG)对急性胰腺炎相关肺损伤的影响.方法 54只SD大鼠被随机分为3组.①胰腺炎组:向胆总管中注射5％牛黄胆酸钠建立大鼠急性胰腺炎相关肺损伤模型；②药物干预组:在胰腺炎组的基础上,造模后lh腹...