人Muse细胞体外诱导为神经前体细胞的研究

探讨成人骨髓来源的Muse细胞体外诱导为神经前体细胞的技术方法。从健康成人骨髓中分离出骨髓基质细胞（hBMSCs）,利用流式细胞分选技术从中筛选出Muse细胞,采取免疫荧光细胞化学染色和qPCR技术鉴定Muse细胞的多能干细胞特性;通过神经诱导培养基体外诱导Muse细胞分化为神经前体细胞（Muse-NPCs）,采用免疫荧光细胞化学染色和qPCR技术鉴定其神经干细胞标志物表达情况。从hBMSCs中分选出约0.58%的Muse细胞,Muse细胞表达多能干细胞标志物SSEA-3、Nanog和Oct4,其mRNA表达水平均高于hBMSCs（P＜0.01）;诱导后的Muse-NPCs表达神经干细胞标志物Nestin、βIII-tubulin,其mRNA表达水平均高于hBMSCs及Muse 细胞（P＜0.01）。从成人骨髓中成功分离出具有多能干细胞特性的Muse细胞,用体外诱导形成Muse-NPCs,可为今后细胞治疗修复神经损伤提供新的种子细胞。     

大鼠毛囊神经嵴干细胞分离培养及鉴定

目的:采用显微分离+组织块贴壁法培养大鼠毛囊神经嵴干细胞(hf NCSC)。方法:显微分离SD大鼠触须部毛囊膨凸部(bugle),采用组织块贴壁法培养毛囊神经嵴干细胞,倒置显微镜下观察细胞形态。采用免疫荧光多重标记法检测Nestin和神经营养素受体p75(p75NTR)的表达。结果:用显微分离+组织块贴壁法可成功获得毛囊神经嵴干细胞,倒置显微镜下观察细胞活性好,形态多样,以梭形为主,也可见三角形、椭圆形细胞,核大而明显,多居于胞质一侧。免疫荧光鉴定显示细胞Nestin和p75NTR双阳性。结论:从SD大鼠触须部毛囊bugle区成功分离到毛囊神经嵴干细胞。     

荷瘤小鼠脾脏髓源抑制细胞的分选及鉴定

目的研究荷瘤小鼠脾脏中髓源抑制细胞(myeloid derived suppresser-cell,MDSCs)的分选与鉴定方法。方法常规培养小鼠肾癌细胞(Renca细胞),于Balb/c小鼠皮下建立小鼠肾癌模型;分离小鼠脾脏制成单细胞悬液,磁珠分选Gr-1+CD11b+双阳性的MDSCs;台酚蓝染色检测细胞存活率;流式细胞仪(flow cytometry,FCM)测其细胞纯度;显微镜下观察细胞形态;免疫荧光测其表面Gr-1、CD11b荧光表达情况;RT-PCR检测Cox2和Arg-1的m RNA的表达情况;小鼠皮下成瘤实验观察MDSCs促肿瘤生长。结果成功建立小鼠肾癌模型,磁珠分选后经FCM检测Gr-1+CD11b+双阳性的MDSCs细胞可达92.3%,显著高于分选前(P0.01);免疫荧光鉴定结果显示:分选后的细胞形态完整,Gr-1和CD11b的荧光表达于细胞膜且2种荧光可以融合;RT-PCR检测分选后的MDSCs细胞群的Cox2和Arg-1的m RNA相对表达量显著高于分选前(P0.05);小鼠皮下成瘤观察到MDSCs组与实验对照组有显著差异(P0.05)。结论用免疫磁珠从荷瘤小鼠脾脏中成功分选得到MDSCs,具有较高纯度和良好的生物活性,为后续实验提供了理想的细胞来源。     

神经干细胞体外培养鉴定及诱导分化的表型特征

背景：神经干细胞促进受损中枢神经系统结构和功能再修复具有广阔的应用前景,而进行神经干细胞体外培养鉴定及诱导分化表型的研究是实现这一应用的基础。 目的：观察神经干细胞在体外培养条件下的生物学特性和分化表型特点。 方法：从新生小鼠海马、嗅球提取神经干细胞。选取3代后稳定的神经干细胞采用BrdU进行标记,并进行BrdU+巢蛋白+Hochest33258免疫荧光复合染色对神经干细胞进行鉴定。体外诱导促使神经干细胞贴壁分化,对分化产生的子代细胞进行BrdU、β-微管蛋白Ⅲ、胶质纤维酸性蛋白、Hochest33258复合免疫荧光染色确定分化表型。 结果与结论：来源于新生鼠海马及嗅球的细胞连续传代培养后可形成稳定悬浮的类球状细胞团,且BrdU+巢蛋白免疫荧光双染阳性。神经干细胞体外诱导贴壁分化后可产生β-微管蛋白Ⅲ、胶质纤维酸性蛋白阳性的子代细胞。以上结果表明体外培养的神经干细胞具有很强的自我增殖更新的能力,在培养过程中趋向于形成稳定的神经球,经体外诱导通过不对称细胞增殖、分化产生神经元和星形胶质细胞等细胞表型。     

CDDO-me缓解阿霉素诱导肾小球足细胞损伤

目的探究Nrf2激动剂CDDO-me是否能缓解阿霉素诱导肾小球足细胞损伤。方法 30只8～12周雄性Balb/c小鼠随机分5组:对照组、CDDO-me组、阿霉素组(ADR)、阿霉素+CDDO-me组、阿霉素+奥美沙坦阳性对照组。测定小鼠尿蛋白/肌酐比值,PAS染色观察肾脏病理改变,免疫荧光检测足细胞标志蛋白WT-1,Nephrin的表达水平来观察各组间小鼠肾脏足细胞损伤情况以及CDDO-me对肾脏的保护作用,应用免疫印记对肾组织WT-1与Nephrin进行定量分析。结果与正常对照组相比,ADR组尿蛋白/肌酐比值显著升高,PAS染色发现肾小球系膜基质及系膜增生,部分足细胞脱落,球囊黏连,荧光可见足细胞标志蛋白表达下降.与阿霉素组相比,阿霉素+CDDO-me组小鼠尿蛋白/肌酐比值下降,足细胞脱落减少,肾脏损伤减轻。结论 CDDO-me保护阿霉素诱导肾脏损伤。     

小鼠骨髓间充质干细胞与脑胶质细胞及基底膜细胞共培养后向毛细胞样细胞分化

目的探讨体外建立诱导小鼠骨髓间充质干细胞(MSCs)向毛细胞分化的方法。方法分离培养小鼠骨髓间充质干细胞、脑胶质细胞(ASTs)与基底膜细胞(BAMCs)至第3代。取MSCs与ASTs共培养于DMEM/F12/RA+10%FBS培养基中。7 d后免疫荧光法检测Nestin的表达。所得细胞再与BAMCs共培养于DMEM/F12+10%FBS中。14 d后免疫荧光法检测诱导后细胞中毛细胞的标志物(Math1与MyosinVIIa)的表达。RT-PCR检测毛细胞的标志物(Math1与MyosinVIIa)mRNA的表达。结果经ASTs共培养后的MSCs表达Nestin。Nestin阳性细胞与BAMCs共培养后部分细胞表达Math1和MyosinVIIa的蛋白与mRNA。结论 MSCs经与ASTs及BAMCs共培养后,部分细胞被诱导分化为毛细胞样细胞。     

Differentiation of bone marrow mesenchymal stem cells into hair like cells by co-culture with astrocytes and basement membrane cells of mice

目的 探讨体外建立诱导小鼠骨髓间充质干细胞(MSCs)向毛细胞分化的方法.方法 分离培养小鼠骨髓间充质干细胞、脑胶质细胞(ASTs)与基底膜细胞(BAMCs)至第3代.取MSCs与ASTs共培养于DMEM/F12/RA+10％ FBS培养基中.7d后免疫荧光法检测Nestin的表达.所得细胞再与BAMCs共培养于DMEM/F12+10％FBS中.14 d后免疫荧光法检测诱导后细胞中毛细胞的标志物(Math1与MyosinⅦa)的表达.RT-PCR检测毛细胞的标志物(Math1与MyosinⅦa)mRNA的表达.结果 经ASTs共培养后的MSCs表达Nestin.Nestin阳性细胞与BAMCs共培养后部分细胞表达Math1和MyosinⅦa的蛋白与mRNA.结论 MSCs经与ASTs及BAMCs共培养后,部分细胞被诱导分化为毛细胞样细胞.     

嗅黏膜神经干细胞的体外培养和向酪氨酸羟化酶阳性神经元的分化

目的:建立体外培养和诱导嗅黏膜神经干细胞向酪氨酸羟化酶阳性神经元分化的方法,探讨该细胞的干性和分化特性。方法:首先用含10%胎牛血清的DMEM/F-12混合培养基培养成年大鼠嗅黏膜细胞,当细胞贴壁后将培养基更换为含表皮生长因子(epidermal growth factor,EGF)和碱性成纤维细胞生长因子(basic fibroblastgrowth factor,bFGF),不含血清的干细胞培养基,以促进干细胞增殖形成神经球。将神经球取出用干细胞培养基悬浮培养以纯化扩增神经干细胞。应用干细胞相关蛋白Nestin及CD133的抗体对神经干细胞进行免疫荧光染色,观察上述蛋白在细胞的表达。用Neurobasal培养基(含B27、NGF、ATRA及SHH)培养扩增后的神经干细胞,诱导其向神经元分化。用神经丝蛋白(neurofilament-200,NF-200)和酪氨酸羟化酶(tyrosine hydroxylase,TH)抗体对分化的细胞进行免疫荧光染色;用免疫印迹法检测上述细胞裂解样品内的相应标志蛋白的电泳条带。结果:嗅黏膜神经干细胞高表达Nestin及CD133两种神经干细胞标志蛋白;干细胞经诱导分化后其形态具有神经元特征,并且高表达NF和TH两种神经细胞标志蛋白。结论:贴壁/悬浮序贯培养方法可体外纯化扩增嗅黏膜神经干细胞,该细胞可分化为酪氨酸羟化酶阳性神经元。     

脐血来源的CD29~+细胞神经转分化的研究

目的:脐血中分离CD29+细胞并诱导其转化为神经元样细胞,为神经损伤与修复提供种子细胞来源。方法:免疫磁珠法分离出脐血CD29+细胞,体外培养扩增。取2代细胞以BDNF、GDNF、PDGF为诱导因子对其进行神经诱导分化。观察细胞形态、生长情况,流式细胞仪检测细胞周期、表型及HLA相关抗原。诱导后免疫组织化学染色法检测Nestin、NSE、NF、GFAP表达。Western Blot检测β-tubulin、Tau的表达。结果:细胞贴壁生长,呈长梭形,细胞表型为CD29+、CD44+、CD166+。在诱导后,细胞逐渐增大并伸出明显突起。免疫组织化学染色结果显示,Nestin、NSE、NF、GFAP表达阳性。Western Blot显示了相应蛋白的表达。结论:脐血CD29+细胞在体外可以向神经元样细胞转化,有望成为异体修复神经损伤的种子细胞来源。     

成年小鼠神经干细胞体外培养、鉴定及分化

目的:建立一种简便易行的从成年小鼠脑组织分离、培养和鉴定神经干细胞(neural stem cells,NSCs)的方法,为相关研究提供新的研究手段。方法:采用机械分离和酶消化结合方法分离成年昆明种小鼠的脑组织,用无血清培养基悬浮培养;倒置相差显微镜观察细胞形态;MTT法(四甲基偶氮唑盐微量酶反应比色法)观察NSCs的自我增殖能力;免疫荧光细胞化学技术检测NSCs标志物巢蛋白(Nestin)的表达;多聚赖氨酸铺板和撤除培养基中FGF和EGF的条件下,给予5%血清和1μm维甲酸诱导NSCs分化,免疫荧光细胞化学技术检测GFAP(标记胶质细胞),β-tubulin Ⅲ(标记神经元)蛋白的表达来测定NSCs的分化能力。结果:从成年小鼠脑组织分离的细胞,在无血清培养液中可形成神经球,并可在体外扩增和连续传代,免疫荧光细胞化学表明神经球Nestin阳性表达,在给予血清和维甲酸条件下神经球可表达GFAP和β-tubulin Ⅲ。结论:本研究成功建立了体外培养成年小鼠脑组织分离和培养NSCs的方法,培养的NSCs具有自我更新、增殖及多向分化潜能。此方法是一个稳定、简便易行的方法,可广泛用于神经干细胞相关的基础和应用研究。     

大鼠脑的神经干细胞的体外培养、增殖和分化

采用无血清培养基分离和培养大鼠脑的神经干细胞,并通过免疫荧光细胞化学技术进行细胞自我更新能力、巢蛋白表达和多向分化潜能的鉴定。鉴定结果表明,所分离培养的细胞为大鼠神经干细胞,具有神经干细胞的特征,并可在体外大量增殖和较长期培养,可经诱导分化为神经元、星形胶质细胞、少突胶质细胞,是进行诱导分化的良好细胞模型。本文讨论了神经干细胞传代培养中应予以注意的问题和对策。     

Effect of ginsenoside Rg3 on mouse neural stem cell differentiation In vitro北大核心

BACKGROUND: Application of neural stem cells (NSCs) is of great current interest in neuroscience, but NSCs origin is very limited. And they always differentiate into a large percentage of glial cells and small percentage of neurons in natural differentiation process, so researchers should take effective measures to promote NSCs differentiation into certain offsprings. Previous studies have shown that ginseng saponin ingredients, such as Rb1 and Rg1, have certain influence on NSCs differentiation, but it is unclear whether Rg3 plays a role on NSCs differentiation. OBJECTIVE: To preliminarily investigate the effect of ginsenoside Rg3 on mouse NSCs differentiation into neurons and astrocytes in vitro. METHODS: The fetal cortices of embryonic 14 days (E14) C57BL/6 mice were isolated for culturing primary NSCs. Then passaged NSCs were identified by their purity with NSCs specific antibodies, Nestin and Sox2, by immunofluorescence staining. NSCs were induced for 3 days in the differentiation medium containing ginsenoside Rg3 of different concentrations (blank control, 50 and 250 nmol/L). After that, immunofluorescence staining was used to identify differentiated neurons with neuronal specific antibody, Tuj1, and differentiated astrocytes with astrocyte specific antibody, GFAP. Then, we calculated and statistically analyzed Tuj1+/DAPI and GFAP+/DAPI percentages in the three different groups. Besides, real-time PCR assay was used to test Tuj1 and GFAP mRNA expression in the three groups after 3 days of differentiation. RESULTS AND CONCLUSION: Primary and passaged NSCs were successfully cultured and almost of cells were positive for both Nestin and Sox2, so these high-purity NSCs could be used in the following experiments. Immunofluorescence staining and statistical analysis results showed that compared with the blank control and 250 nmol/L groups, 50 nmol/L group had an obviously increased neuronal percentage after 3 days differentiation (P < 0.01), while the blank control and 250 nmol/L groups had no significant difference (P > 0.05); compared with the blank control group, 50 and 250 nmol/L groups had significantly increased astrocyte percentages (P < 0.05), whereas there was no obvious difference between 50 and 250 nmol/L groups (P > 0.05). The results of real-time PCR assay were similar with the above immunofluorescence results. In conclusion, 50 nmol/L ginsenoside Rg3 can enhance mouse NSCs differentiation into neurons and astrocytes, while 250 nmol/L ginsenoside Rg3 can only promote mouse NSCs differentiation into astrocytes. © 2018, Journal of Clinical Rehabilitative Tissue Engineering Research. All rights reserved.     

β(1)-Adrenoceptor stimulation enhances the differentiation of mouse induced pluripotent stem cells into neural progenitor cells

The cyclic AMP/protein kinase A signaling pathway is thought to be involved in neural differentiation of mesenchymal stem cells. In the present study, we examined the involvement of β-adrenoceptor signaling on the differentiation of mouse induced pluripotent stem (iPS) cells into neural progenitor cells. Mouse iPS cells were cultured on ultra-low-attachment dishes to induce embryoid body (EB) formation. All-trans retinoic acid (ATRA, 1μM) and/or the β-adrenoceptor agonist l-isoproterenol (0.3 or 1μM) were added to the EB cultures for 4 days, then EBs were plated on gelatin-coated plates and cultured for 7 or 14 days. Subtype-specific antibody staining revealed that mouse iPS cells express β(1)-adrenoceptors predominantly. Although treatment with l-isoproterenol alone did not affect the expression of Nestin (a specific marker for neural progenitor cells), l-isoproterenol significantly enhanced ATRA-induced Nestin expression. Pretreatment of EBs with either atenolol (a selective β(1)-adrenoceptor antagonist) or H89 (a protein kinase A inhibitor) significantly inhibited the l-isoproterenol-enhancement of ATRA-induced Nestin expression. In addition, the l-isoproterenol treatment significantly enhanced ATRA-induced expression of NeuN (a neuron-specific nuclear protein). These findings suggest that β(1)-adrenoceptor stimulation enhances ATRA-induced neural differentiation of mouse iPS cells.     

无血清悬浮分离培养法分离、培养、鉴定脊髓源性神经干细胞

背景：目前临床上尚未发现完全治愈脊髓损伤,使其达到结构及功能恢复的治疗方法。已有的神经营养因子治疗方法促进神经细胞再生的效果有限,而干细胞移植治疗可能是现阶段修复脊髓损伤的有效方法之一。 目的：无血清悬浮分离培养法培养胎鼠脊髓源性神经干细胞,采用形态学、免疫荧光技术和多向分化能力进行神经干细胞鉴定。 方法：应用悬浮分离培养法,培养纯化孕13.5 d C57BL/6胎鼠的脊髓源性神经干细胞。倒置显微镜观察细胞形态学变化;CCK-8法检测细胞的增殖能力。免疫荧光技术检测Nestin和Sox2表达;使用自然分化法验证第4代脊髓源性神经干细胞多向分化特性,明确其分化能力。 结果与结论：采用无血清悬浮分离培养法可以顺利获取脊髓源性神经干细胞。培养的脊髓源性神经干细胞增殖活性良好,高表达Nestin和Sox2,且两种标记物与DAPI核染高度均匀吻合,说明细胞纯度高。进一步诱导分化显示,细胞可以向GFAP和Tuj1阳性细胞分化,证明脊髓源性神经干细胞分化潜能较好。该实验可建立一套体外培养脊髓源性神经干细胞分离、培养、纯化及鉴定体系,为后续神经干细胞的应用研究奠定基础。 中国组织工程研究杂志出版内容重点：干细胞;骨髓干细胞;造血干细胞;脂肪干细胞;肿瘤干细胞;胚胎干细胞;脐带脐血干细胞;干细胞诱导;干细胞分化;组织工程      

Expression of HNK1 epitope by the cardiomyocytes of the early embryonic chick: in situ and in vitro studies.

Monoclonal antibody HNK1 reacts with a carbohydrate epitope in cell surface glycoproteins and glycolipids. During development, in various species the HNK1 epitopes are expressed in migrating neural crest cells and in the developing conduction cardiomyocytes. The conduction system is generally thought to be developed from cardiomyocytes, but some investigators have hypothesized that it is derived from the neural crest because conduction myocytes express neural antigens, including HNK1. Using immunohistochemistry, we examined the spatiotemporal expression of HNK1 in early chick cardiogenesis (stages 4 to 18) and whether cultured precardiac mesoderm does or does not express HNK1 as well as sarcomeric myosin (MF20). HNK1 was first expressed in the premyocardium at stage 8. At stage 10, HNK1-positive cardiomyocytes were scattered along the straight heart tube. By stage 18, HNK1-positive cardiomyocytes had become restricted to the atrium and sinus venosus. Atrioventricular cushion mesenchyme also expressed an HNK1 epitope. Immunostaining of HNK1 and MF20 in cultured precardiac mesoderm showed that there are at least three types of cells: 1) cardiomyocytes without HNK1 expression, 2) cells possessing both HNK1- and MF20-immunoreactivity, and 3) mesenchymal cells with HNK1. Immunogold electron microscopy showed that cardiomyocytes containing sparsely distributed myofibrils associated with the Z-band react with anti-HNK1 antibody. Our observations showed a direct evidence for the first time that the precardiac mesoderm generates HNK1-positive cardiomyocytes with morphological features similar to those of conduction cardiomyocytes.     

中性粒细胞趋化因子3可影响神经干细胞的存活和增殖

文题释义： 神经干细胞：广泛存在于胚胎及成年中枢神经系统内,具有自我复制和分化为神经元、星形胶质细胞和少突胶质细胞的潜能,对脑损伤有较大的修复作用,为临床治疗神经系统疾病带来了新的希望。 中性粒细胞趋化因子3：是含ELR的CXC类趋化因子,主要由激活的单核细胞、内皮细胞、成纤维细胞产生,其在炎症反应中可以诱导白细胞的趋化作用,与受体CXCR2有高度的亲和力,中性粒细胞趋化因子3与其受体CXCR2结合可能产生抗凋亡、促进少突胶质细胞增殖和抑制其迁移的功能。 背景：课题组前期研究首次发现骨髓基质细胞可以分泌中性粒细胞趋化因子3,且在骨髓基质细胞调控神经干细胞分化为神经元的过程中中性粒细胞趋化因子3的表达上调1.5倍,提示中性粒细胞趋化因子3可能具有促进神经干细胞增殖与分化的作用。 目的：观察中性粒细胞趋化因子3对新生大鼠海马来源神经干细胞存活和增殖的影响。 方法：体外分离培养新生SD大鼠海马神经干细胞,将培养3代的神经干细胞分为对照组和中性粒细胞趋化因子3组,通过MTS法检测细胞存活率,细胞生长曲线及活/死细胞染色观察细胞存活及增殖情况,通过免疫荧光染色法及Real-time PCR检测神经干细胞中Nestin的表达来观察神经干细胞增殖情况。 结果与结论：①随着中性粒细胞趋化因子3质量浓度从1 μg/L增加至20 μg/L,神经干细胞存活率逐渐增加,当质量浓度为10 μg/L时,神经干细胞存活率最高且细胞活力最好,再增至20 μg/L时,神经干细胞存活率无显著增加;②中性粒细胞趋化因子3组Nestin染色阳性率明显高于对照组(P < 0.05);③中性粒细胞趋化因子3组的Nestin mRNA表达量明显高于对照组(P < 0.05);④结果表明,中性粒细胞趋化因子3对海马来源神经干细胞具有促进存活和增殖的作用。 ORCID: 0000-0002-4733-3668(顾平) 中国组织工程研究杂志出版内容重点：干细胞;骨髓干细胞;造血干细胞;脂肪干细胞;肿瘤干细胞;胚胎干细胞;脐带脐血干细胞;干细胞诱导;干细胞分化;组织工程     

新生小鼠海马神经干细胞体外培养条件下的增殖与分化

背景：神经干细胞移植可用于中枢神经损伤的临床治疗。 目的：观察新生小鼠海马神经干细胞在体外培养条件下的增殖和分化。 方法：从新生昆明小鼠海马取材,采用机械分离法对原代细胞进行无血清培养,采用机械法复合酶消化法对原代细胞进行传代,以体积分数为10%胎牛血清诱导分化。免疫荧光行巢蛋白、β-微管蛋白Ⅲ和胶质纤维酸性蛋白染色,对培养的细胞进行鉴定。CCK-8法检测神经干细胞增殖能力。 结果与结论：从新生小鼠海马分离得到的细胞具有连续传代形成克隆球的能力,克隆球呈巢蛋白免疫反应阳性;加入胎牛血清可诱导分化为β-微管蛋白Ⅲ和胶质纤维酸性蛋白阳性细胞。提示实验成功建立了体外培养新生小鼠海马组织分离和培养神经干细胞的方法,培养的神经干细胞在体外培养条件下保持着自我增殖和分化的潜能。     

成纤维细胞生长因子信号调控早期鸡胚胎神经嵴细胞的迁移

目的 利用Sprouty2基因阻断成纤维细胞生长因子（FGF）信号,探讨FGF在早期鸡胚胎发育过程中对神经嵴细胞迁移的影响及其机制。方法 通过体内培养的方法孵育鸡胚至HH9期,通过显微注射的方法将Sprouty2-绿色荧光蛋白（GFP）质粒注射入神经管腔内。实验侧使用电穿孔转染的方法转染胚胎半侧神经管,另一侧正常神经管设为对照侧。采用神经嵴细胞特异标记物HNK1免疫荧光的方法检测Sprouty2基因阻断FGF信号后是否影响胚胎头部和躯干部神经嵴细胞的迁移过程。随后,进一步通过检测神经细胞钙黏分子N-Cadherin的表达来观察细胞之间黏附作用的改变。结果 HNK1免疫荧光检测结果显示,Sprouty2转染侧即阻断FGF信号通路后,HNK1在早期鸡胚胎的头部和躯干部的表达量均比对照侧的表达量增多;而神经细胞钙黏分子N-Cadherin检测结果表明,Sprouty2转染侧和正常对照侧N Cadherin在头部和躯干部神经管上表达量的差异均无显著性。结论 Sprouty2基因阻断FGF信号后,促进了早期鸡胚胎神经嵴细胞的迁移,但是FGF信号对此过程的影响可能不是由神经钙黏分子N-Cadherin介导的。     

序贯培养法诱导小鼠胚胎干细胞向神经细胞分化的研究

目的诱导小鼠胚胎干细胞向神经细胞分化。方法通过"序贯培养法"诱导小鼠胚胎干细胞分化为神经细胞,并应用RT-PCR、免疫荧光、端粒酶活性及基因芯片等对诱导结果进行检测。结果分化细胞表达神经元特异性烯醇化酶(NSE)、低分子量神经微丝蛋白(NF-L)、神经细胞粘附分子1(NCAM1)、微管相关蛋白Tau等多种神经元标志物,免疫荧光显示NSE阳性率为(81±9.2)%,而神经胶质细胞原纤维酸性蛋白(GFAP)几乎不表达。基因芯片分析结果显示,在3张芯片中有8179个基因共表达,另有998个基因的表达完全不同,且有多种神经元基因的标志物表达明显升高。结论通过"序贯培养法"能有效地诱导小鼠胚胎干细胞向神经元分化。