免疫球蛋白重链基因重排在浆细胞增殖性疾病中的应用

免疫球蛋白重链基因重排在浆细胞增殖性疾病中的应用陈文明朱嘉芷张鹏朱平孙卫红李淑兰周艳我们用聚合酶链反应（ＰＣＲ）技术探讨Ｂ细胞恶性肿瘤基因标志的克隆性免疫球蛋白重链（ＩｇＨ）基因重排对多发性骨髓瘤（ＭＭ）的诊断、鉴别诊断的价值及其与临床分期的关系。一...     

高龄慢性淋巴细胞白血病伴多发性骨髓瘤细胞的克隆来源

为进一步研究，慢性淋巴细胞白血病（ＣＬＬ）伴多发性骨髓瘤（ＭＭ）细胞的克隆来源。报告１例高龄ＣＬＬ合并ＭＭ的病例，结合临床形态学特征，用单克隆抗体，免疫球蛋白（Ｉｇ）基因和Ｔ－细胞受体（ＴＣＲ）γ做标志，分析其恶性细胞的克隆来源。经过骨髓和外周血ＩｇＨ重排基因的单链构象多态性（ＳＳＣＰ）指纹图谱以及异源双链形成法（ＨＤＦ）分析发现，尽管ＣＬＬ细胞和ＭＭ细胞的形态学特征不同，分泌ＩｇＭ和ＩｇＡ两种不同的免疫球蛋白，但是外周血和骨髓都能够用聚合酶链反应获得同样长度的Ｉｇ重链基因的Ｖ－Ｄ－Ｊ基因重排片段，都没有ＴＣＲγ基因的重排。ＳＳＣＰ指纹图谱和ＨＤＦ法分析Ｉｇ基因序列特征显示ＣＬＬ和ＭＭ细胞的Ｖ－Ｄ－Ｊ重排片段序列是一致的。说明其ＣＬＬ和ＭＭ来源于同一个Ｂ－淋巴系统的祖细胞。     

多发性骨髓瘤克隆起源的研究

为了解外周血中肿瘤克隆细胞的分化阶段，进一步研究ＭＭ（多发性骨髓瘤）发病机理，采用针对Ｂ细胞不同分化阶段抗原ＣＤ１０、ＣＤ１９、ＣＤ２０、ＣＤ４５ＲＡ、ＣＤ４５ＲＯ、ＣＤ３８的单克隆抗体，用ＡＰＡＡＰ法（碱性磷酸酶抗碱性磷酸酶法）同时检测１７例外周血中不含浆细胞的ＭＭ患者骨髓及外周血的免疫表型，其中１０例外周血表达浆细胞抗原增高（Ｐ＜０．００１）且与骨髓一致。９例外周血表达ＣＤ３８和ＣＤ４５ＲＯ，３例表达ＣＤ３８、ＣＤ４５ＲＡ、ＣＤ４５ＲＯ，１例表达ＣＤ３８、ＣＤ４５ＲＡ、ＣＤ４５ＲＡ和ＣＤ１０。此结果显示ＭＭ患者外周血的Ｂ系抗原表达既与骨髓具有一致性，又具多样性，提示ＭＭ的外周血中存在多分化阶段的肿瘤前体细胞，呈现自早期Ｂ细胞，经活化Ｂ细胞及晚期Ｂ细胞向前浆细胞的持续分化过程，并验证了文献关于ＭＭ发病途径的推测。     

多发性骨髓瘤预后因素分析

多发性骨髓瘤（ｍｕｌｔｉｐｌｅｍｙｅｌｏｍａＭＭ）是克隆性浆细胞恶性增殖性疾病，应用马法兰－强的松标准化疗或联合烷化剂治疗，中位生存时间３年。近１０年来大剂量马法兰加（或不加）全身照射，辅以骨髓或外周血干细胞支持，并联用造血细胞生长因子，预后有一定改善，但费用昂贵。对临床医师来说，在诊断与治疗多发性骨髓瘤时，明确患者预后，从而选择合适的治疗方案对延长患者无病生存期（ＥｖｅｎｔＦｒｅｅＳｕｒｖｉｖａｌＥＦＳ），总体生存时间（ＯｖｅｒａｌｌＳｕｒｖｉｖａｌＯＳ），提高生活质量，降低治疗费用非常重要。…     

弥漫大B型非霍奇金淋巴瘤患者外周血TCR Vβ亚家族T细胞分布和克隆性增生特点

目的：了解弥漫大B淋巴瘤（DLBL）患者外周血T细胞的TCRVβ基因谱系及克隆性增殖情况。方法：利用RT-PCR方法扩增6例DLBL患者外周血单个核细胞中24个TCRVβ基因的互补决定区3（CDR3）,PCR产物进一步经荧光标记和基因扫描分析CDR3长度而确定T细胞的克隆性。结果：6例DLBL患者分别表达9-20个TCRVβ亚家族。患者均存在1个或多个Vβ亚家族的克隆增殖T细胞,增殖形式包括寡克隆、寡克隆增殖趋势及双克隆。Vβ13和Vβ15亚家族出现克隆增殖性T细胞的频率较高（66.7%）。结论：DLBL患者外周血TCRVβ亚家族T细胞的分布具有特点,表现为TCRVβ亚家族T细胞呈限制性选用和克隆性增殖,这可能是淋巴瘤患者机体对淋巴瘤相关抗原产生的特异性免疫反应。     

罕见异型输血1例报告

编者按：多发性骨髓瘤细胞大量合成骨髓瘤蛋白（Ｍ蛋白），抑制了正常免疫球蛋白的产生，致使患者血清中免疫球蛋白含量显著降低。高Ｍ蛋白血症干扰了血型鉴定，使Ｂ型血错定为ＡＢ型。抗Ａ抗体的低下使交叉配血过程中受血者血清不凝集献血者异型红细胞。输入ＡＢ型全血４...     

淋巴性肿瘤细胞分化与抗原受体基因重排研究

采用单克隆抗体（ＭｃＡｂｓ）免疫酶法和一外基因扩增聚合边反应（ＰＣＲ）技术研究４２例淋巴恶性肿瘤细胞分化起源及免疫球蛋白重链（ＩｇＨ）和Ｔ细胞受体（ＴＣＲ）γ、δ基因重排。结果表明２３例起源Ｂ细胞不同分化阶段者中２０例发生ＩｇＨ基因重排，１１便伴ＴＣＲｒ基因重排和（或）ＴＣＲδ基因缺失；１１例起源Ｔ细胞不同分化阶段者均发生ＴＣＲ基因重排，仅１例伴ＩｇＨ基因重排；３例表达Ｔ、Ｂ双表型者发生ＩｇＨ基因     

B淋巴细胞恶性肿瘤病人骨髓微小残存病变检测的临床意义

以克隆性免疫球蛋白重链（ＩｇＨ）基因重排为肿瘤细胞基因标志，在聚合酶链反应基础上结合应用ＤＮＡ单链构象多态性分析（ＰＣＲ－ＳＳＣＰ）技术对病人骨髓标本进行微小残存病变（ＭＲＤ）检测。３８例形态学检查正常的Ｂ细胞非何杰金淋巴瘤（Ｒ－ＮＨＬ）病人治疗前骨髓标本，ＭＲＤ检出率为６８．４％（２６／３８），骨髓ＭＲＤ阳性的Ｂ－ＮＨＬ病人生存期明显短于ＭＲＤ阴性病人（Ｐ＜０．０５）。２１例８细胞急性淋巴细胞白血病（Ｂ－ＡＬＬ）完全缓解期采集的骨髓标本，ＭＲＤ检出率为７１．４％（１５／２１）。骨髓中ＭＲＤ阴性的Ｒ－ＡＬＬ病人无病存活期明显长于ＭＲＤ持续阳性病人（Ｐ＜０．０５）。骨髓中ＭＲＤ检测可以协助估价Ｂ淋巴细胞恶性肿瘤病人预后、判断疗效及监测复发。     

多发性骨髓瘤患者T细胞共刺激分子表达和调节性T细胞检测及意义

目的通过检测多发性骨髓瘤患者外周血T细胞共刺激分子CD28表达及CD4^＋CD25^high调节性T细胞（Tregs）水平,探讨其免疫功能状态及临床意义。方法采用流式细胞术检测38例多发性骨髓瘤患者及20例健康志愿者外周血T细胞亚群cD。表达和CD4^＋CD25^high Tregs水平。分别采用透射免疫比浊法、溴甲酚绿法及速率法测定患者血清β2-微球蛋白（β2--MG）、白蛋白（Alb）及乳酸脱氢酶（LDH）水平。结果与正常对照组相比,多发性骨髓瘤患者外周血CD4＋T细胞百分率降低、CD8^＋T细胞百分率升高、CD4／CD8比值降低（P〈0．05或P〈0．01）,进一步研究发现CD4^＋和CD8^＋T细胞CD28表达均较对照组明显下降,而CD4^＋CD25^high Tregs百分率显著升高（P〈0．05,P〈0．01）。CD4^＋和CD8^＋T细胞CD28表达在进展期明显低于稳定期（P均〈0．01）,而CD4^＋CD25^high Tregs在稳定期和进展期间比较差异无统计学意义（P〉0．05）。多发性骨髓瘤患者CD4^＋T细胞CD28表达、CD8^＋T细胞C28表达均与其血清β2-MG水平呈负相关,而与Alb水平呈正相关（P〈0．05,P〈0．01）,CD4^＋CD25^high Tregs与Alb水平呈负相关（P〈0．05）。结论多发性骨髓瘤患者存在T细胞亚群共刺激分子CD28表达缺陷和CD4^＋CD25^high Tregs扩增,并与病情进展及预后存在一定相关性。     

急性淋巴细胞白血病IgH超基因家族及T细胞受体δ、γ基因的研究

急性淋巴细胞白血病（ＡＬＬ）是一组血液系统的恶性克隆性疾病。目前，尽管应用强效化疗方案及骨髓移植等有效手段，使ＡＬＬ的疗效有较大改观。然而，诱导缓解后的复发问题仍是临床实践中的当务之急，而复发的根源是白血病克隆增殖的结果［１］。本研究以ＩｇＨ、Ｔ细胞受体（ＴＣＲ）γ和ＴＣＲδ基因重排为标志分子，用ＰＣＲ方法检测缓解后微小残留病（ＭＲＤ），并探讨ＩｇＨ、ＴＣＲδ、γ基因重排在白血病免疫分型中的价值。 一、资料与方法 １．病例：３８例ＡＬＬ患者为初治的住院及门诊患者。全部患者均经临床、细胞形态学以及细…     

急性白血病受体基因重排的研究

目的：探讨急性白血病微小残留病（ＭＲＤ）与化疗效应差异及受体基因重排,在急性非淋巴细胞白血病（ＡＮＬＬ）中序列交叉现象及意义。方法：应用聚合酶链反应技术对免疫球蛋白（ＩｇＨ）及Ｔ细胞受体（ＴＣＲγ）基因重排进行定量测量。结果：４５例急性淋巴细胞白血病（ＡＬＬ）中阳性率８４．４％（３８／４５）,完全缓解（ＣＲ）后１８０ｄ检测,阳性率仍５５．６％（２５／４５）,２０例ＡＮＬＬ中５例检测到ＩｇＨ受体基因     

乙型病毒性肝炎患者外周血单个核细胞及血清内HBV DNA检测

乙型病毒性肝炎患者外周血单个核细胞及血清内ＨＢＶＤＮＡ检测黄育清白敬羽葛其童周国平乙型病毒性肝炎（乙肝）的发病机制与机体的免疫状态关系密切。乙肝病毒感染外周血单个核细胞（ＰＢＭＣ）会直接影响机体的免疫功能。所以，对ＰＢＭＣ内ＨＢＶＤＮＡ的检测有重要意...     

小鼠病毒性心肌炎与细胞凋亡及氧自由基的关系

采用电镜技术及原位末端标记法（ＴＵＮＥＬ）对柯萨奇病毒Ｂ３（ＣＶＢ３）心肌炎小鼠不同时期心肌组织中细胞凋亡进行检测,并采用硫代巴比妥酸法检测外周血丙二醛（ＭＤＡ）。ＣＶＢ３感染１００只雄性Ｂａｌｂ／ｃ小鼠,ＶＭＣ发病率为８６％。各期病鼠心肌中均见到凋亡细胞,包括心肌细胞、血管内皮细胞及间质细胞。ＴＵＮＥＬ法检出率为７８．９４％,中、重度ＶＭＣ小鼠中阳性检出率明显高于轻度ＶＭＣ小鼠（Ｐ〈０．０５）。     

用RT—PCR和Genescan分析CML急变期人TCRVβT细胞的表达和克隆性

目的：了解ＣＭＬ急变期的ＴＣＲＶβ亚家族Ｔ细胞的表达及其克隆性。方法：采用ＲＴ－ＰＣＲ扩增４例ＣＭＬ急变期病人的外周血单个核细胞的ＴＣＲＶβ２４个亚家族的互补决定区３（ＣＤＲ３），产物进一步经基因扫描分析确定Ｔ细胞的克隆性，结果：病人外周血仅表达４－９个Ｖβ亚家族Ｔ细胞，主要为Ｖβ１，Ｖβ２，Ｖβ３，Ｖβ５和Ｖβ１７；基因扫描分析显示２例ＣＭＬ急粒变的部分产物为寡克隆性，而２例ＣＭＬ急粒变的部分产     

韦格纳肉芽肿病T细胞表达及分泌细胞因子的研究—Th1型免疫反应

目的：通过分析Ｔ细胞细胞因子的表达和分泌，探讨韦格纳肉芽肿病（ＷＧ）的免疫反应类型。方法：用有限稀释法从ＷＧ患者鼻粘膜活检标本（ＮＢＳ）、支气管肺泡灌洗液（ＢＡＬ）及外周血中克隆出Ｔ细胞。用ＲＴＰＣＲ及ＥＬＩＳＡ检测其细胞因子的表达和分泌。结果：所有７株从ＮＢＳ克隆的Ｔ细胞只表达和分泌Ｔｈ１型细胞因子（ＩＦＮγ）。从ＢＡＬ克隆的３株Ｔ细胞，２株为Ｔｈ１型，另１株为Ｔｈ０型（表达和分泌ＩＦＮγ及ＩＬ４）。而从外周血中克隆的２７株Ｔ细胞。Ｔｈ１型（９株）多于Ｔｈ２型（２株），但多数（１６株）为Ｔｈ０型。另外，ＷＧ患者外周血中未分类的多克隆ＣＤ＋４和ＣＤ＋８Ｔ细胞产生ＩＦＮγ的量明显高于正常对照者，而ＩＬ４表达和分泌则与正常无差别。结论：ＷＧ的免疫病理过程主要表现为Ｔｈ１型免疫反应     

聚合酶链反应联合Southern杂交检测急性非淋巴细胞白血病IgH重排基因

免疫球蛋白重链（ＩｇＨ）重排，可作为Ｂ淋巴细胞白血病的基因标志，为进一步了解急性非淋巴细胞白血病（急非淋）ＩｇＨ重排情况，用聚合酶链反应（ＰＣＲ）联合地高辛标记ＪＨ探针Ｓｏｕｔｈｅｒｎ杂交，检测４１例急非淋病人ＩｇＨＣＤＲ－Ⅲ区域。７例（１７．１％）ＰＣＲ扩增阳性，此７例阳性病例均经Ｓｏｕｔｈｅｒｎ杂交证实，本实验的灵敏度为１０－４～１０－５水平。１２例完全缓解病例中３例（２５．０％）重排阳性，此３例均于半年内临床复发。结果表明，ＩｇＨ重排并不局限于Ｂ淋巴系白血病，也可发生于急非淋病人，其机制可能是，部分急非淋起源于较原始的多向造血祖细胞或除髓系白血病克隆外，尚存在亚克隆     

老年肺心病急性发作期外周血T细胞亚群及B细胞的改变

老年肺心病急性发作期外周血Ｔ细胞亚群及Ｂ细胞的改变熊韬张焕景代水田武汉市第三医院内科（４３００６０）图１Ｔ细胞亚群改变与ＰａＯ２的关系图２Ｔ细胞亚群改变与ＰａＣＯ２的关系表Ｔ细胞亚群及Ｂ细胞变化（ｘ±ｓ％）ＣＤ３＋ＣＤ＋４ＣＤ＋８ＣＤ＋４／ＣＤ＋８Ｂ...     

类风湿关节炎患者Th1／Th2细胞平衡的研究

目的 在单个细胞水平上研究类风湿关节炎（ＲＡ）患者滑液及外周血中Ｔｈ１／Ｔｈ２细胞平衡状态及其与疾病活动程度的关系。方法 用酶联免疫斑点法（ＥＬＩＳＰＯＴ）检测ＲＡ患者滑液单个核细胞（ＳＦＭＣ）和外周血单个核细胞（ＰＢＭＣ）的细胞内细胞因子ＩＦＮ－γ和ＩＬ－４的表达情况结果 ＲＡ患者ＳＦＭＣ中Ｔｈ１、Ｔｈ１／Ｔｈ２比值与自身及正常人ＰＢＭＣ相比显著升高（Ｐ〈０．０１），Ｔｂ１／Ｔｈ２比值与患者Ｓｒ     

胃恶性淋巴瘤的单克隆性检测及其与Hp感染的关系探讨

目的探讨胃粘膜相关淋巴组织（ＭＡＬＴ）淋巴瘤与幽门螺杆菌（Ｈｐ）感染的关系和各种不同层次检测方法的诊断价值。方法对３１例ＭＡＬＴ淋巴瘤作Ｇｉｅｍｓａ染色查Ｈｐ、免疫组化染色、半巢式ＰＣＲ扩增进行ＩｇＨ基因重排,检测其单克隆性。以同期胃淋巴细胞性胃炎（ＬＧ）、无关疾病胃粘膜作对照。结果胃ＭＡＬＴ淋巴瘤中Ｈｐ感染率８３．９％,单克隆性重排８７．１％,远高于对照组。但免疫组化染色显示的轻链限制性仅５５．６％。结论ＰＣＲ法检测ＩｇＨ基因重排优于免疫组化染色检测轻链限制性。在ＬＧ中发现２６．９％有单克隆性Ｂ细胞增生,提示ＰＣＲ法敏感性高,可能具有早期诊断价值。     

以甲状腺机能减退症、心功能不全为主要表现的多发性骨髓瘤合并淀粉样变1例

多发性骨髓瘤（ＭＭ）为Ｂ细胞恶性增殖性疾病，临床表现多变，以甲状腺机能减退症（甲减）、心功能不全为主要表现者较少见，现报道如下。患者女性，６０岁，因颜面水肿、声音嘶哑、阵发性心悸、气促、胸闷痛２个月于１９９５年１１月２１日入院。查体：体温、脉搏、血压...