不同运动强度对去势大鼠骨质疏松软骨形态的影响

目的探讨不同运动强度在去势SD大鼠骨质疏松中的应用效果及对软骨形态的影响。方法 2017年9月至2018年11月在中山大学附属第三医院中心实验室取40只SD大鼠作为研究对象,采用切断输卵管及切除卵巢方法建立大鼠骨质疏松模型。取同期实验的SD健康大鼠10只作为假体手术组。根据大鼠处理方法不同分为模型对照组、低强度组、中等强度组及高强度组,每组10只。模型对照组常规饲养,低强度组跑台训练10 m/min,中等强度组进行20 m/min跑台训练,高强度组进行25 m/min跑台训练,每天1 h,连续训练6周。比较不同组大鼠训练6周后关节软骨mankin score评分、关节软骨厚度、血清钙、磷及MMP-3水平、HE及番红染色情况。结果①中等强度组简易精神状态评价(MMS)评分低于低强度组、高强度组及模型对照组(P0.05);低强度组MMS评分低于高强度组及模型组(P0.05);中等强度组关节软骨厚度高于低强度组、高强度组及模型对照组(P0.05);②中等强度组血清钙、血清磷水平低于低强度组、高强度组及模型对照组(P0.05);③模型对照组软骨表面光滑,呈圆形或椭圆形;低强度组大鼠人软骨表面相对光滑,细胞数量相对较多,排列规则,染色加深;中载荷运动组软骨表面光滑,染色明显增粗,基质染色较深,染色均匀;高强度组潮线不规则,染色相对较浅。结论中等运动强度用于去势大鼠骨质疏松中效果理想。     

参地补肾胶囊对肾小球硬化大鼠MMP-9、TIMP-1及其受体mRNA表达的影响

目的:观察参地补肾胶囊对肾小球硬化大鼠基质金属蛋白酶(MMP-9)、基质金属蛋白酶抑制物(TIMP-1)及其受体mRNA表达的影响,探讨其抗肾小球硬化的机制。方法:采用单侧肾脏切除同时尾静脉注射阿霉素的方法建立肾小球硬化大鼠模型,SD大鼠随机分为空白对照组、模型组、参地补肾胶囊组、贝那普利组、苏黄泄浊丸组,检测血肌酐(Scr)、尿素氮(BUN)、血浆蛋白(Alb);免疫组化法检测MMP-9、TIMP-1的表达,计算MMP-9/TIMP-1比值,RT-PCR检测受体TIMP-1mRNA的表达水平。结果:与模型组比较,参地补肾胶囊组能抑制TIMP-1及其受体mRNA的表达(P<0.01),上调MMP-9表达(P<0.01),提高MMP-9/TIMP-1的比值。结论:参地补肾胶囊可抑制TIMP-1及其受体mRNA的表达,改善肾脏病理形态,进而延缓肾小球硬化进展。     

半乳糖凝集素3抑制剂对大鼠椎间盘软骨终板细胞基质金属蛋白酶-3、趋化因子（C-C基元）配体3及聚蛋白多糖表达的影响

目的 探讨半乳糖凝集素3对大鼠椎间盘软骨终板细胞基质金属蛋白酶-3(MMP-3)、趋化因子(C-C基元)配体3(CCL3)、聚蛋白多糖表达的影响.方法 将P2代大鼠软骨终板细胞分为2组,一组加入含25μmol/L GB1107半乳糖凝集素3抑制剂(抑制剂组),另一组加入等体积空白溶剂(对照组),采用MTT法检测2组12 h、24 h及48 h细胞的增殖情况;于加入溶剂后24 h收集2组细胞,采用实时荧光定量PCR法检测细胞中MMP-3、CCL3及聚蛋白多糖的mRNA表达水平,采用蛋白质印迹法检测细胞中MMP-3、CCL3及聚蛋白多糖的蛋白表达水平.结果 抑制剂组大鼠软骨终板细胞的细胞增殖活性加入抑制剂后12 h开始随时间延长不断降低,加入抑制剂后12 h、24 h、48 h各时间点的细胞增殖活性均低于对照组,差异有统计学意义(P<0.05).抑制剂组大鼠软骨终板细胞中MMP-3、CCL3及聚蛋白多糖的mRNA和蛋白表达水平均低于对照组,差异有统计学意义(P<0.05).结论 抑制半乳糖凝集素3可降低大鼠终板细胞中MMP-3、CCL3及聚蛋白多糖的表达,提示半乳糖凝集素3可能通过调节细胞外基质的降解、炎性细胞浸润和合成代谢共同影响椎间盘退行性变进程.     

通脉口服液对实验性DN模型大鼠肾组织Col-Ⅳ及MMP-9/TIMP-1的影响

目的：观察通脉口服液对实验性DN模型大鼠肾组织Col-Ⅳ蛋白表达及MMP-9/TIMP-1作用的影响。方法：SD雄性大鼠,予STZ单次腹腔注射及高脂饲料造模,筛选DN成模大鼠,随机分组,药物干预;6周后处死大鼠取肾组织,以免疫组化方法测定Col-Ⅳ、MMP-9及TIMP-1的蛋白表达,计算积分光密度及面密度比值。结果：Col-Ⅳ表达主要定位于肾小球;MMP-9表达主要定位于肾小球,肾间质内有少量表达;TIMP-1表达主要定位于肾小球,肾小管及间质区内有少量表达。通脉组Col-Ⅳ免疫组化染色面密度及积分光密度较模型组降低,MMP-9免疫组化染色面密度及积分光密度较模型组升高,差异有统计学意义（P〈0.01或P〈0.05）;MMP-9/TIMP-1比值与Col-Ⅳ免疫组化染色面积存在负相关（r=-0.919,P〈0.01）。结论：益气活血中药复方通脉口服液可能通过调节肾组织MMP-9/TIMP-1蛋白表达,改善Col-Ⅳ代谢,发挥DN肾脏保护作用。     

大鼠肝星状细胞TGF-β3/TGF-β1mRNA比值与TGF-β1、MMP-9、TIMP-1表达的关系

目的 探讨大鼠肝星状细胞(HSC-T6)中转化生长因子-β3(TGF-β3)和转化生长因子-β1(TGF-β1)mRNA比值变化与TGF-β1、MMP-9、TIMP-1表达的关系.方法 构建质粒pcDNA 3.1(+)-TGF-β3和pcDNA 3.1(+)-TGF-β1.将pcDNA 3.1(+)-TGF-1β1转染HSC-T6细胞株,经筛选建立高表达TGF-β1的HSC-T6细胞阳性克隆.pcDNA 3.1(+)-TGF-β3转染该阳性克隆,48 h后荧光定量PCR法和Western blot法分别检测TGF-β3、TGF-β1、MMP-9和TIMP-1 mRNA和蛋白的变化.结果 空白组、对照组、阳性克隆组及TGF-β3干预组中,TGF-β3/TGF-β1mRNA比值分别为0.286±0.070、0.874±0.141、0.448±0.327和1.277±0.244;阳性克隆组与空白组和对照组相比,TGF-β1和TIMP-1的mRNA及蛋白表达明显增高(P<0.05),MMP-9的mRNA及蛋白表达明显减少(P<0.05);TGF-β3干预组与阳性克隆组相比,TGF-β1蛋白和TIMP-1 mRNA及蛋白表达明显下降(P<0.05),MMP-9 mRNA及蛋白表达明显增加(P<0.05).结论 TGF-β3能下调TGF-β1蛋白表达;当TGF-β3/TGF-β1mRNA比值>1时,TGF-β1和TIMP-1表达减少,MMP-9表达增加;当TGF-β3/TGF-β1mRNA比值<1时,TGF-β1表达减少,TIMP-1和MMP-9表达无变化.     

降钙素在体内和体外实验中对兔关节炎关节软骨的保护作用

[目的]研究降钙素(calcitonin,CT)对骨性关节炎关节软骨的保护作用.[方法]32只6个月龄新西兰大白兔,雌雄各半,行右膝关节前交叉韧带切断术.术后1周将动物随机分为实验组和对照组.实验组皮下注射鲑鱼降钙素5 IU/(kg·d),连续6周;对照组则给予等剂量盐水.术后7周处死动物.取股骨内髁制成切片行HE、番红-固绿和MMP-3免疫组化染色.取膝关节软骨行胶原酶消化法提取软骨细胞进行体外培养,于第Ⅱ代融合90%后提取mRNA,采用实时荧光定量PCR方法检测MMP-3,aggrecan的表达.HE切片Mankin评分.番红-固绿和MMP-3免疫组化染色切片用图像分析仪测量平均灰度值.PCR结果记录Ct值.[结果]实验组关节软骨的组织学Mankin评分结果,番红-固绿和MMP-3免疫组化染色平均灰度值测量结果低于对照组(P＜0.05);实验组体外培养软骨细胞的MMP-3的RNA含量低于对照组(P＜0.05),aggrecan的RNA含量高于对照组(P＜0.05).[结论]降钙素5 IU/(kg·d)皮下注射能够增加体外培养软骨细胞分泌的aggrecan的含量以及下调MMP-3的表达;可能通过体内明显减轻兔膝关节软骨基质的降解,减少MMP-3的表达而保护软骨.     

MMP-3／TIMP-1在大鼠肢体再灌注后关节软骨损伤的作用

目的 探讨缺血再灌注后关节软骨中MMP-3／TIMP-1比例变化与软骨损伤的关系。方法 采用大鼠后肢股动脉夹闭的方法模拟缺血再灌注的动物模型，用Wistar大鼠40只，随机分成正常对照组(NG)、肢体单纯缺血组(IG)和缺血再灌注组(IR)。运用免疫组化技术，分别测定TIMP-1和MMP-3在关节软骨中不同时相的表达变化并进行半定量分析，观察关节软骨病理改变及蛋白多糖(PG)的变化。结果 缺血再灌注后，关节软骨中的MMP-3和TIMP-1表达均有增加，但MMP-3增加的幅度大于TIMP，导致MMP-3／TIMP-1比值增大，与再灌注后引起的关节软骨损伤相关。结论 MMP／TIMP的失平衡表达是导致缺血再灌注后关节软骨损伤的重要因素。     

创伤弧菌脓毒症大鼠肝脏基质金属蛋白酶及其抑制基因的表达

目的观察创伤弧菌脓毒症大鼠肝脏组织基质金属蛋白酶（MMP-2、MMP-9）及其抑制基因（TIMP-2、RECK）表达水平的变化,探讨它们在创伤弧菌脓毒症中的作用。方法清洁级Sprague-Dawley雄性大鼠60只,随机分为6组,每组10只。第1组为健康对照组,第2—6组为创伤弧菌脓毒症模型组。观察大鼠行为学改变,提取各组大鼠肝脏组织总RNA,半定量RT-PCR法检测MMP-2、MMP-9以及TIMP-2、RECK基因mRNA水平表达的变化。结果染菌4h后,大鼠出现呼吸急促,皮温升高,下肢肿胀,且症状进行性加重;染菌12h后,大鼠出现紫绀、间断抽搐等症状。染菌2、6和9h后,大鼠肝脏组织中MMP-2及MMP-9基因mRNA水平表达明显上调,TIMP-2和RECK表达水平下调。结论MMP-2和MMP-9表达上调,以及TIMP-2和RECK表达水平下调提示它们可能参与了创伤弧菌脓毒症的病理生理过程。     

积雪草对TGF-β1诱导的体外培养的肾小管上皮细胞MMP-2、TIMP-2表达的实验研究

也页目的：积雪草颗粒对TGF-β1诱导的体外培养的肾小管上皮细胞MMP-2、TIMP-2 mRNA及蛋白表达的影响。方法：将体外培养的大鼠近端肾小管上皮细胞（NRK52E）随机分为6组：正常对照组（DZ组）、TGF-β1诱导组（T组）、积雪草小（ JX组）、中（ JZ组）、大剂量（ JD组）组及蒙诺组（ M组）。培养48 h后取出,应用实时荧光定量PCR（ RTFQ PCR）技术和western-blot技术检测细胞MMP-2、TIMP-2的mRNA及蛋白表达。结果：与DZ相比,T、JX、JZ、JD、M组细胞MMP-2、TIMP-2的mRNA及蛋白表达明显升高（P0.05）。结论：积雪草抗TIF作用可能通过抑制MMP-2、TIMP-2的高表达,调节MMP-2/TIMP-2的平衡而实现,且与其剂量呈正相关。     

MMP-2、MMP-9及其抑制因子TIMP-2、TIMP-1在非黑色素性皮肤癌中的表达及意义

目的：分析MMP-2、MMP-9及其抑制因子TIMP-2、TIMP-1在非黑色素性皮肤癌中的表达情况及临床意义。方法：选取病理证实的SCC患者26例（SCC组）,BCC患者22例（BCC组）。手术切除病变组织,采用SABC法行免疫组化检测,记录各因子表达阳性率、染色强度和表达强度。同时,取20例正常皮肤为对照组。比较SCC组、BCC组患者及对照组各因子表达情况差异。结果：SCC组和BCC组与对照组MMP-2、MMP-9相比,表达阳性率、染色强度和表达强度显著增高,SCC组和BCC组与对照组TIMP-2、TIMP-1的表达阳性率、染色强度和表达强度明显降低（P〈0.05）。SCC组MMP-2、MMP-9的表达强度显著高于和BCC组,而TIMP-1、TIMP-2表达强度显著低于BCC组（P〈0.05）。结论：MMP-2、MMP-9及其抑制因子TIMP-2、TIMP-1与NMSC发生发展密切相关,其可能在NMSC侵袭与转移中发挥重要作用。     

17-β雌二醇对去卵巢大鼠成骨细胞间质胶原酶MMP-8，MMP-13及其抑制因子TIMP-1表达的作用

目的 研究17-β雌二醇(E2)对成骨细胞间质胶原酶MMP-8、MMP-13和组织基质金属蛋白酶抑制剂TIMP-1的调控作用，探讨绝经后骨质疏松的发病机制。方法 利用去卵巢大鼠骨质疏松(OVX)模型，观察B治疗对骨组织形态计量学参数的影响；采用免疫组化和原位杂交的方法，检测其胫骨近端成骨细胞中MMP-8、MMP-13、TIMP-1 mRNA和蛋白表达水平的改变。结果 OVX组大鼠与E2治疗组相比，骨量丢失明显，成骨细胞中MMP-13 mRNA和蛋白的表达水平显著升高，而MMP-8、TIMP-1 mRNA与蛋白的表达无明显改变。相关分析表明MMP-13蛋白表达水平与骨小梁间隔(Tb．Sp)、骨小梁类骨质表面积(OS／TBA)呈正相关，与骨小梁数目(Tb．N)、骨小梁占全部骨组织体积比(TBV／TTV)呈负相关。结论 MMP-13在雌激素缺乏性骨量丢失中起重要作用。雌激素可通过下调成骨细胞中MMP-13的表达，抑制骨吸收，降低骨转化率，防治绝经后骨质疏松症的发生。     

关节腔注射羧甲基壳聚糖预防膝骨关节炎软骨退变

目的观察羧甲基壳聚糖（CMCTS）关节腔注射对骨关节炎（OA）模型关节软骨退变及软骨基质金属蛋白酶（MMP-1，-3）及其组织抑制物（TIMP-1）mRNA表达的影响。方法32只大耳白兔行单膝前交叉韧带切断术，随机分为A～D组，A、B组分别于术后立即关节腔注射高、低分子量2％CMCTS0．3ml，每2周1次；C组术后立即关节腔注射1％透明质酸钠（SH）0．3ml，每周1次；D组术后不注射任何药物。术后6周处死动物，比较各组股骨内髁关节软骨的大体变化，采用逆转录聚合酶链反应（R-PCR）方法检测软骨MMP-1，-3及TIMP-1 mRNA的表达水平。结果大体评分显示不注射组软骨退变明显重于CMCTS和SH注射组MMP-1，-3在CMCTS注射组软骨中的表达明显低于SH注射组和不注射组，不同分子量CMCTS注射组MMP-1，-3的表达没有显著差异，SH注射组软骨中MMP-1，-3的表达与不注射组比较差异无统计学意义（P〉0．05），TIMP-1在各组中的表达没差异有统计学意义（P〉0．05）。结论CMCTS能明显下调软骨MMP-1，-3的mRNA表达．明显减轻软骨退变的程度。软骨具有保护作用。     

基质金属蛋白酶家族在骨关节炎软骨组织中表达的研究

[目的]观察骨关节炎关节软骨中MMP-7、MMP-9、MMP-13和TIMP-1的表达,探讨其与软骨退变的关系及可能的作用机制。[方法]选取20例因骨关节炎行关节置换的软骨组织,常规HE染色观察其组织学形态,ABC免疫组化法观察关节软骨MMP-7、MMP-9、MMP-13和TIMP-1的表达,2例因意外受伤截肢患者的正常膝关节软骨标本作为对照。统计采用Mann-Whitney U非参数检验及相关分析。[结果]骨关节炎关节软骨出现裂隙、纤维化,软骨细胞增多、排列紊乱,并出现大量簇聚软骨细胞和肥大软骨细胞。MMP-7和MMP-13在正常软骨全层均呈低表达,但在退变软骨中的表达则明显增多,光密度值行U检验,两组差异有显著性(P<0.01)。在正常与OA软骨的浅层,MMP-9和TIMP-1的表达无显著性差异(P>0.05);但在深层软骨中,OA软骨MMP-9和TIMP-1的表达较正常软骨明显增多,两组差异有显著性(P<0.01)。[结论]MMP-7,13在OA软骨全层表达均多于正常软骨;MMP-9,13仅在OA软骨深层出现过多表达。MMPs与TIMPs的失衡是导致关节软骨发生组织学退变的原因之一。     

AMD3100体外阻断基质细胞衍生因子1/趋化因子受体4信号通路对人关节软骨细胞分泌基质金属蛋白酶3、9、13水平的影响

目的探讨趋化因子受体4(chemokine receptor 4,CXCR4)特异性拮抗剂AMD3100体外阻断基质细胞衍生因子1(stromal cell derived factor 1,SDF-1)/CXCR4信号通路对人关节软骨细胞分泌基质金属蛋白酶(matrixmetalloproteinase,MMP)3、9、13水平的影响,明确AMD3100的作用机制。方法取12例骨关节炎(osteoarthritis,OA)患者144块软骨组织(OA软骨组)和12例创伤性截肢患者144块正常软骨组织(正常软骨组)(Mankin评分均为0或1),根据添加培养液不同,每组再分为A、B、C 3个亚组。A亚组含1 000 nmol/L AMD3100及100 ng/mL SDF-1的DMEM液,B亚组含1 000 nmol/L MAB310及100 ng/mL SDF-1的DMEM液,C亚组含100 ng/mL SDF-1的DMEM液。体外培养2、4 d后,ELISA法测定培养液内MMP-3、9、13含量,RT-PCR检测软骨组织中MMP-3、9、13 mRNA表达。结果 ELISA法及RT-PCR检测示:同组相同时间点A亚组MMP-3、9、13含量及mRNA表达均显著低于B、C亚组(P<0.05)。同一时间点相同亚组OA软骨组MMP-3、9、13含量及mRNA表达均显著高于正常软骨组(P<0.05)。结论 SDF-1通过SDF-1/CXCR4信号通路可诱导人关节软骨中MMP-3、9、13的表达和释放;AMD3100可阻断SDF-1/CXCR4信号通路,使软骨细胞MMP-3、9、13 mRNA表达水平及分泌量降低,但AMD3100不能使退变的OA软骨分泌MMP-3、9、13恢复至正常软骨水平。     

医用臭氧对膝骨关节炎兔软骨基质金属蛋白酶-1的影响

目的 探讨医用臭氧对膝骨关节炎兔软骨基质金属蛋白酶-1(MMP-1)的影响.方法 新西兰大白兔30只,体重2.2～2.8 kg,雌雄不拘,并以左膝关节作为对比,随机分为3组,每组10只,建立右膝骨关节炎(OA)模型,分别于造模成功后第3天和第5天向右膝关节腔内注入空气(A组)、40μg/L(B组)和80 μg/L(C组)医用臭氧3 ml.造模成功后第7天处死动物,取两膝关节,光镜下观察关节软骨一般形态,甲苯胺蓝染色行Mankin评分;免疫组化法检测软骨基质金属蛋白酶-1(MMP-1)的表达水平;分别于造模成功时和处死前即刻测定兔两膝关节活动度.结果 与左膝关节比较,各组造模成功时右膝关节活动度降低,软骨组织Mankin评分、软骨细胞MMP-1表达升高(P＜0.05);B组和C组处死前即刻右膝关节活动度较造模成功时升高(P＜0.05).与A组比较,B组软骨组织Mankin评分、软骨细胞MMp-1表达降低(P＜0.05);与B组比较,C组上述指标升高(P＜0.05).A组和C组软骨明显退变,程度重于B组.结论 关节腔内注射40 μg/L医用臭氧3ml治疗兔膝骨关节炎的机制可能与下调软骨MMP-1有关.     

MMP-3和TIMP-2在UUO大鼠肾间质的表达

目的:研究基质金属蛋白酶-3(MMP-3)/金属蛋白酶组织抑制物-2(TIMP-2)在单侧输尿管梗阻幼年大鼠肾脏组织的分布、表达及变化。方法:72只Wistar雌性幼年大鼠单侧输尿管结扎制成UUO模型,并随机分为对照组及UUO模型组,于模型成功后第1、2、3、4周末为实验时间点,检测各组大鼠24h尿蛋白、血BUN、Scr,用免疫组化法研究MMP-3及TIMP-2在肾组织的分布、表达及变化。结果:光镜下MMP-3在对照组肾小管上皮细胞胞浆、肾小球的脏层上皮细胞有少量表达。在UUO组1周MMP-3表达增强,主要位于各级肾小管上皮细胞胞浆区及肾间质,2周后表达有所减弱,4周表达最弱。TIMP-2在对照组肾小管上皮细胞胞浆有少量表达,在肾小球无表达。在UUO组TIMP-2随疾病进展而表达逐渐增强(P<0.05),主要位于肾小管上皮细胞、肾间质细胞。结论:MMP-3与TIMP-2蛋白在UUO模型大鼠肾脏组织的表达失衡可能参与了肾组织纤维化的发生发展过程。     

长期低温环境对大鼠膝骨关节炎进展的影响

目的探索低温环境对大鼠膝骨关节炎进展的影响。 方法2019年7月至2019年10月将20只8周龄雄性SD-大鼠根据体重大小编号,将所得编号通过随机数字表法随机分为对照组[n ＝10,饲养温度(25±2)℃]和低温组[n ＝10,饲养温度(15±2)℃],定期剪除两组大鼠双侧膝关节表面毛发。分别在饲养4周和12周后拍摄左膝关节侧位片观察大鼠膝关节影像学情况。饲养12周后,采用颈椎脱臼法处死大鼠,使用酶联免疫吸附(ELISA)法检测大鼠膝关节关节液中白细胞介素-1β(IL-1β)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、血管内皮生长因子(VEGF)与基质金属蛋白酶-13(MMP-13)蛋白表达;苏木精-伊红(HE)染色观察软骨组织情况,并结合Mankin’s评分进行对比;免疫组化检测软骨细胞MMP-13蛋白表达情况。IL-1β、TNF-α、VEGF、MMP-13蛋白表达与Mankin’s评分比较均采用独立样本t检验分析。 结果在低温环境下饲养4周后,SD-大鼠的膝关节影像学表现与对照组并无明显差异。在低温环境下饲养12周后,相对于对照组,膝关节侧位片显示低温组大鼠膝关节间隙明显变窄,关节面欠光滑,可见部分关节软骨面塌陷、关节周围骨赘形成;HE染色显示低温组大鼠膝关节软骨面塌陷,小血管侵入软骨层,表层和深层软骨细胞坏死,软骨细胞排列紊乱,两组大鼠的软骨Mankin’s评分差异具有统计学意义(t＝8.01,P<0.01);ELISA与免疫组化结果显示,低温组大鼠膝关节关节液中IL-1β、TNF-α、VEGF、MMP-13蛋白表达增加,差异具有统计学意义(t＝3.70、3.57、4.47、16.11,均为P<0.01)。 结论长期低温环境能够促进IL-1β、TNF-α、VEGF、MMP-13蛋白的表达增加,并最终造成关节软骨的丢失,促进骨关节炎的发生。     

硝苯地平对糖尿病肾病大鼠肾脏保护作用机制的探讨

探讨血管内皮生长因子（VEGF）、基质金属蛋白酶9（MMP-9）及金属蛋白酶1组织抑制剂（TIMP-1）在糖尿病肾病（DN）发病中的作用以及钙离子拮抗剂硝苯地平对肾脏保护作用的机制。 方法 大鼠随机分为3组：健康对照（N）组、DN组和硝苯地平治疗（T）组，每组10只。采用链脲菌素诱发DN大鼠模型，治疗组以硝苯地平控释片15 mg•kg-1•d-1干预治疗，治疗第2周和4周，检测大鼠平均动脉压（MAP）、尿蛋白量（24 h）、Scr水平；用免疫组化和Western印迹方法检测大鼠肾脏VEGF、MMP-9、TIMP-1的蛋白表达水平；RT-PCR法检测VEGF、MMP-9、TIMP-1 mRNA的表达。 结果 与N组比较，DN组大鼠尿蛋白量、Scr水平和MAP均显著上升[分别为(78.87±17.62)比(6.30±1.91) mg/24 h、(203.88±18.08)比(84.98±10.09) μmol/L、(141.1±8.7)比(99.8±3.8) mm Hg， P均 < 0.05]；肾组织VEGF、MMP-9、TIMP-1 mRNA和蛋白表达增强（P < 0.05），且MMP-9/TIMP-1比值明显下降（P < 0.05）。与DN组比较，T组尿蛋白量（24 h）[（58.35±10.48） mg]、Scr水平[（165.81±15.86） μmol/L]和MAP[（102.6±4.4） mm Hg]均显著下降（P均 < 0.05）；肾组织VEGF表达下调（P < 0.05），MMP-9、TIMP-1 mRNA和其蛋白表达水平显著增高（分别P < 0.05和P < 0.01），MMP-9/TIMP-1比值显著升高（P < 0.05）。DN大鼠肾组织VEGF mRNA水平与尿蛋白量（24 h）呈正相关（r = 0.748，P < 0.05），与MMP-9/TIMP-1的比值呈负相关（r = -0.711, P < 0.05）。 结论 VEGF、MMP-9和TIMP-1可能参与了DN的发病过程，硝苯地平可能通过影响VEGF、MMP-9及TIMP-1的表达而实现对肾脏的保护作用。     

MMP-2、MMP-9、TIMP-1在血管成形术后再狭窄中的表达及其意义的实验研究

目的观察PTA后MMP-2、MMP-9和TIMP-1在血管壁各层随时间的演变规律,探讨其在血管再狭窄过程中的表达及意义。方法48只大鼠制作成颈动脉再狭窄动物模型,选取30只内膜增生满意的标本,分别代表动脉损伤后1、3、7、14、28、42天6个观察时间点,对胶原纤维进行Masson染色。MMP-2、TIMP-1、PCNA进行免疫组织化学染色,MMP-9进行免疫组织化学和原位杂交两种染色。分析它们的表达与内膜增生和血管重塑的关系。结果正常血管不表达MMP-9mRNA及蛋白,损伤后第3天中膜、外膜mRNA表达达高峰,第7天内膜表达达高峰。MMP-9蛋白第7天内膜表达达高峰,且阳性细胞率高于中膜和外膜。第14、28天,血管壁各层表达逐渐下降至基线水平,内膜的阳性细胞主要集中在新生内膜靠近管腔的一侧。内膜MMP-2表达高峰出现晚至第14天,且近内弹力板处MMP-2也有明显的表达。正常血管壁不表达TIMP-1,损伤后第3天,中膜和外膜表达达高峰。第7天,新生内膜表达达高峰,中膜和外膜仍有较高水平表达。结论MMP-9、MMP-2、TIMP-1参与再狭窄,内膜MMP-9表达与早期增殖的细胞向内膜迁移形成新生内膜有关。MMP-2表达与晚期内膜形成、内膜重塑有关。TIMP-1的表达对内膜增生和重塑没有直接作用,其表达升高是机体为适应MMPs升高做出的代偿反应,在维持自身平衡中起作用。     

不同运动强度对大鼠骨骼肌中低氧诱导因子-1αmRNA表达的影响

目的探讨不同运动强度和持续时间对大鼠腓肠肌中低氧诱导因子-1α(HIF-1α)mRNA表达的影响。方法80只大鼠随机分为对照组、低强度运动组、中强度运动组和高强度运动组,各组又按时间(1、3、7、14d)分为四个亚组,运用透射电镜观察大鼠骨骼肌细胞和RT-PCR法测定大鼠腓肠肌中HIF-1αmR-NA的表达。结果对照组HIF-1αmRNA存在基础性表达。与对照组HIF-1αmRNA的表达相比:低强度运动组第7天差异有显著性意义(P<0.05);中强度运动组和高强度运用组与对照组比较第3天和第7天差异均有显著性意义(P<0.05);但在第3天和第7天各不同强度运动组之间差异无显著性意义(P>0.05);各组第14天后HIF-1αmRNA表达与对照组相比差异均无显著性意义(P>0.05)。电镜结果提示:高强度运动组肌丝排列紊乱,线粒体肿胀明显,部分空泡化。结论运动会在一定时间内造成大鼠骨骼肌HIF-1αmRNA表达增加,是其适应机制之一;但不同运动强度诱导HIF-1αmRNA表达无显著性差异;长时间高强度运动会对骨骼肌细胞造成损害。