缺氧海马神经元中KATP对基因Bax表达的影响

目的研究缺氧海马神经元中KATP对基因Box表达的影响。方法对原代海马神经元进行缺氧和药物处理,倒置显微镜和NF免疫组织化学法观察细胞生长和形态,MTT法检测细胞凋亡率,RT—PCR检测Bax基因mRNA表达水平。结果与单纯缺氧组比较,缺氧＋二氮嗪组和缺氧＋甲苯磺丁脲组的多级神经元百分率和细胞存活率差异有显著性（P〈0．01）。缺氧＋二氮嗪组中基因Bax的mRNA表达水平与单纯缺氧组相比下降（P〈0．01）,缺氧＋甲苯磺丁脲组中基因Bax的mRNA表达水平相对于单纯缺氧组也有提高（P〈0．05）。结论缺氧时KATP的开放对细胞具有保护作用,它通过降低Bax的表达抑制缺氧海马神经元的凋亡。     

Akt信号途径参与二氮嗪预处理抑制缺氧复氧损伤大鼠海马神经元的凋亡

目的 探讨二氮嗪(DZ)预处理能否通过上调Akt信号增强Bcl-2表达、抑制Bax表达发挥抗凋亡作用.方法 离体培养9～10 d SD大鼠海马神经元分为正常对照组(A组)、缺氧组(B组)、缺氧+DZ 100 μmol/L组(c组)、缺氧+DZ 100 μmol/L+5-羟癸酸100 μmol/L组(D组)、缺氧+DZ 100 μmol/L+LY294002 50 μmol/L组(E组),自缺氧前2 d开始,神经元接受DZ预处理,每天1次,每次1 h.每次实验,每组16孔或2皿细胞,实验重复3次.比较缺氧4 h复氧48 h各组海马神经元的活力、凋亡率、Akt、Bcl-2和Bax蛋白的表达程度.结果 缺氧复氧后C组吸光度值较B、D、E组显著增高(P＜0.05);其他缺氧各组间比较,差异无统计学意义(P＞0.05).C组凋亡率较B、D、E组显著减低(P＜0.05).C组Akt、Bcl-2表达较B、D、E组强烈(P＜0.05),Bax表达则减弱(P＜0.05).B、D、E组问比较,差异无统计学意义(P＞0.05).结论 DZ可经Akt信号通路上调Bcl-2/Bax蛋白比值而抑制缺氧复氧损伤大鼠海马神经元的凋亡.     

脑神康胶囊对缺氧复氧损伤大鼠海马神经元凋亡的影响

目的观察脑神康胶囊对缺氧复氧损伤大鼠海马神经元凋亡及其Bcl 2、Bax mRNA表达的影响。方法随机将原代培养大鼠海马神经元分为对照组、损伤组、中药低、中、高浓度组。对照组正常培养,损伤组及中药组建立缺氧复氧损伤模型,中药各浓度组于复氧时换以不同浓度含药血清的培养液,采用MTT法测各组细胞存活率,采用流式细胞仪检测凋亡率,采用RT PCR法检测Bcl 2和Bax mRNA的表达并计算两者比值。结果损伤组细胞存活率及Bcl 2 mRNA表达明显下降(P均＜0.01),凋亡率及Bax mRNA表达显著升高(P均＜0.01),Bcl 2/Bax降低(P＜0.01);中药各浓度组较损伤组细胞存活率及Bcl 2 mRNA表达均升高(P均＜0.01),凋亡率及Bax mRNA表达降低(P＜0.01,P＜0.05),Bcl 2/Bax增加(P＜0.01),且呈明显的剂量依赖性。结论脑神康胶囊对海马神经元缺氧复氧损伤有明显的保护作用,其作用机制可能与其调节凋亡相关蛋白、减少凋亡密切相关。     

二氮嗪预处理对缺氧复氧大鼠心肌微血管内皮细胞HIF-1α mRNA表达及增殖的影响

目的:观察二氮嗪(DZ)预处理对缺氧复氧大鼠心肌微血管内皮细胞(MMECs)增殖和HIF-1α mRNA表达的影响.方法:培养SD大鼠MMECs,随机分为4组(n=24):正常对照组(N组)、缺氧/复氧组(H/R组)、二氮嗪组(DZ组)、DZ+Mito KATP特异性阻断剂5-羟葵酸(5-HD)预处理组(DZ+5-HD组).DZ组加入100 μmol/L DZ,DZ+5-HD组加入100 μmol/L DZ前2 h加入100 μmol/L 5-HD预处理2 h,然后和缺氧复氧组同样进行缺氧2 h复氧2 h.Hoechst染色观察凋亡细胞形态,MTT法测定细胞活力,RT-PCR检测HIF-1α mRNA转录水平.结果与N 组比较,细胞增殖率H/R组显著降低(P<0.01),HIF-1α显著升高(P<0.01);与H/R组比较,DZ组细胞增殖率显著升高(P<0.05),HIF-1α显著升高(P<0.01);DZ+5-HD组与H/R组比较差异无统计学意义.结论:DZ可上调HIF-1α mRNA的表达,促使细胞增殖,从而实现促进心肌微血管的新生.     

二氮嗪、环孢菌素A拮抗Aβ1 42致胆碱能神经元凋亡的研究

目的研究ATP敏感性钾离子通道开放剂二氮嗪、环孢菌素A及两者协同对β 淀粉样蛋白（Aβ1 42）致原代培养基底前脑胆碱能神经元凋亡的影响。方法采用2?μmol/L的Aβ1 42对原代培养大鼠胆碱能神经元进行干预,建立阿尔茨海默病（AD）细胞凋亡模型;采用500?μmol/L二氮嗪(预处理1?h)、20?μmol/L环孢菌素A以及两者协同对其干预,作用不同时间（24、72?h）后置于倒置显微镜下观察细胞形态;采用噻唑蓝（MTT）比色法检测细胞存活率,Wes tern blot法检测细胞内凋亡相关蛋白表达水平的变化。结果① Aβ1 42作用胆碱能神经元72?h后,Bcl 2表达量降低（P＜0.01）,细胞色素C、Caspase 3、Cleaved caspase 3的表达量增加（P＜0.01,P＜0.001,P＜0.01）,Bax未见明显变化,Bcl 2/Bax比值降低（P＜0.01）,细胞形态发生明显损伤性变化,细胞存活率明显降低（P＜0.001）;② 二氮嗪、环孢菌素A以及两者协同作用24?h后Bcl 2的表达增加（P＜0.05, P＜0.01,P＜0.01）,作用72h能明显增加Bcl 2的表达(P＜0.05,P＜0.01,P＜0.01),并提升Bc 2/Bax比率而抑制细胞色素C、Caspase 3、Cleaved caspase 3表达量(P＜0.05,P＜0.01,P＜0.001),细胞存活率均增高(P＜0.01,P＜0.001)。结论Aβ1 42作用胆碱能神经元72?h能促使细胞凋亡,二氮嗪与环孢菌素A及两者协同可以明显拮抗Aβ1 42致细胞凋亡作用。     

川芎嗪对过氧化氢诱导星形胶质细胞氧化应激损伤的保护作用

目的 探讨川芎嗪(tetramethylpyrazine,TMP)对过氧化氢(H202)所致大鼠星形胶质细胞凋亡的保护作用.方法 利用SD新生鼠(24～48h)分离、培养星形胶质细胞,按随机数字表法分为空白对照组(以正常培养液培养)、模型组(100 μmol/L的H202作用24 h)、TMP剂量组(25、50、100 μmol/L TMP预处理48 h后,加入H202作用24 h).采用CCK-8检测各组细胞存活率;GFAP染色观察细胞形态;流式细胞术检测各组细胞凋亡率;特定试剂盒检测乳酸脱氢酶(LDH)、超氧化物歧化酶(SOD)活力;Real-time PCR 检测各组细胞中PI3K、AKT、Bcl-2、Bax、Caspase-3 mRNA 的表达;Western blot检测各组细胞PI3K、AKT、p-AKT、Bcl-2、Bax、Caspase-3的蛋白表达.结果 与空白对照组比较,模型组细胞存活率明显降低(P＜0.05),细胞凋亡率升高(P＜0.05),LDH含量增加(P＜0.05),SOD活性降低(P＜0.05),PI3K、AKT、Bcl-2 mRNA 表达下调,Bax、Caspase-3 mRNA 表达上调(P＜0.05),PI3K、p-AKT、Bcl-2蛋白表达明显降低,Bax、Caspase-3蛋白表达明显升高(P＜0.05);与模型组比较,TMP预处理后细胞存活率明显升高(P＜0.05),其中50 μmol/L组的细胞存活率最高(P＜0.05),细胞凋亡率明显降低(P＜0.05),LDH含量降低(P＜0.05),SOD活性升高(P＜0.05),PI3K、AKT、Bcl-2 mRNA表达上调,Bax、Caspase-3 mRNA 表达下调(P＜0.05),PI3K、p-AKT、Bcl-2蛋白表达明显升高,Bax、Caspase-3蛋白表达明显降低(P＜0.05).结论 TMP对H202所致的大鼠星形胶质细胞氧化应激损伤具有保护作用,可改善损伤后细胞形态并抑制凋亡,该作用可能与PI3K、p-AKT蛋白活化有关.     

二氮嗪预处理对Aβ1-42作用神经元KATP各亚基表达的影响

目的探讨ATP敏感的钾离子(KATP)通道开放药物二氮嗪防治A1-42细胞毒性作用的分子机制。方法采用细胞原代培养的方法,培养大鼠皮层神经元并进行鉴定。将原代培养的细胞随机分为对照组、单纯Aβ1-42干预组、二氮嗪预处理1 h后Aβ1-42干预组、单纯二氮嗪预处理组和单纯Aβ42-1干预组(Aβ1-42反序列对照),各组又分为24、72 h两个亚组。采用免疫荧光双染及免疫印迹法,观察干预后不同培养时间(24、72 h)细胞KATP通道各亚基Kir6.1、Kir6.2、SUR1、SUR2蛋白表达水平的变化。结果与对照组比较,单纯A1-42处理24 h组Kir6.1、SUR2显著升高(P<0.05),二氮嗪预处理后Aβ1-42作用细胞24 h组各亚基表达均无明显变化;二氮嗪预处理后Aβ1-42作用细胞72 h组与单纯A1-42处理72 h组KATP通道各亚基表达均明显升高(P<0.05),而二氮嗪预处理后Aβ1-42作用细胞72 h组与单纯A1-42处理72 h组相比Kir6.1、Kir6.2、SUR2表达显著下调(P<0.05)。结论二氮嗪预处理可完全逆转A1-42作用神经元24 h所引起的Kir6.2及SUR1的表达上调,只能部分逆转A1-42作用神经元72 h所引起的Kir6.1、Kir6.2、SUR2的表达增加,可能会维持神经细胞正常生理功能,起到防治A1-42细胞毒性作用。     

TRPM7在七氟烷预处理抑制大鼠氧糖剥夺海马神经元凋亡和炎症反应中的作用

目的 探讨瞬时受体电位通道M7 (TRPM7)在七氟烷(Sev)预处理抑制大鼠氧糖剥夺(OGD)海马神经元凋亡和炎症反应中的作用.方法选择出生1d的SD大鼠50只,提取海马神经元,将其分为5组,包括对照组、Sev预处理组(Sev组)、OGD组、Sev预处理+OGD组(Sev+OGD组)和Sev预处理十缓激肽+OGD组(联合组).缺糖缺氧1.5h后复糖复氧,再正常培养24 h后制备OGD模型.对照组海马神经元仅做正常培养;Sev组海马神经元行2％ Sev预处理1 h;OGD组海马神经元仅制备OGD模型;Sev+OGD组神经元行2％ Sev预处理1h,24 h后制备OGD模型;联合组神经元Sev预处理同时在培养基中加入缓激肽(终浓度200 μmol/L),其余处理同Sev+OGD组.正常培养24 h时后,检测海马神经元TRPM7 mRNA和蛋白表达水平、存活率和凋亡率、IL-1β、TNF-α的mRNA及上清蛋白表达水平.结果 与对照组比较,OGD组海马神经元TRPM7 mRNA及蛋白表达水平、凋亡率、IL-1β、TNF-α mRNA及上清蛋白表达水平明显升高(P＜0.05),而存活率明显降低(P＜0.05).与OGD组比较,Sev组海马神经元TRPM7 mRNA及蛋白表达水平、凋亡率、IL-1β、TNF-α mRNA及上清蛋白表达水平明显降低(P＜0.05),而存活率明显升高(P＜0.05).与Sev组比较,联合组海马神经元TRPM7 mRNA及蛋白表达水平、凋亡率、IL-1β、TNF-α mRNA及上清蛋白表达水平明显升高(P＜0.05),而存活率显著降低(P＜0.05).结论 Sev预处理可通过缓解神经元TRPM7过度表达,减轻OGD后海马神经元凋亡和炎症反应.     

银杏叶提取物注射液对NMDA诱导的视网膜神经节细胞损伤的保护作用

目的探讨银杏叶提取物注射液对N-甲基-D-天冬氨酸(NMDA)诱导的转基因的视网膜神经节细胞系RGC-5损伤的保护作用。方法体外培养RGC-5,以终浓度分别为0.025、0.25、2.5%的银杏叶提取物注射液预保护12h后,用NMDA(100μmol/L)诱导损伤,并设正常对照组,单纯损伤组和地卓西平(MK-801)对照组。倒置显微镜下观察细胞形态;MTT比色法测定细胞存活率;流式细胞仪检测细胞凋亡,半定量RT-PCR测定Bcl-2和Bax mRNA的变化。结果 NMDA可诱导RGC-5细胞损伤,与单纯损伤组比较,0.25、2.5%银杏叶提取物注射液可提高RGC-5细胞存活率,减少细胞凋亡(P0.05),另外0.25%银杏叶提取物注射液预保护后Bcl-2mRNA表达水平增加,Bax mRNA的表达水平降低(P0.05)。结论银杏叶可抑制NMDA诱导的视网膜神经节细胞凋亡,保护视网膜神经元,其机制可能与上调Bcl-2mRNA的表达,下调Bax mRNA的表达有关。     

异丙酚对缺氧复氧后培养海马神经元nNOS的影响

目的 观察异丙酚对培养海马神经元缺氧复氧后损伤反应的影响.方法 培养12d海马神经元,随机分为正常对照再培养24h组(Nor组)、缺氧4h后复氧24h组(Ano组)、加异丙酚500μmol/L缺氧4h后复氧24h组(Pro组).采用MTT法测定细胞存活率,免疫组化方法 测定nNOS蛋白含量,应用流式细胞仪测定神经元凋亡率.结果 缺氧后Ano组nNOS蛋白表达及细胞凋亡率明显增加(P＜0.01),加入异丙酚后能减少nNOS蛋白含量(P＜0.01)和细胞凋亡率(P＜0.05),Pro组细胞存活率较Ano组增加(P＜0.05),但与Nor组比仍下降(P＜0.05).结论 异丙酚能提高体外海马神经元的抗缺氧能力,减少nNOS蛋白过度表达和细胞的凋亡.     

红景天苷对体外培养大鼠海马神经元化学缺氧损伤ATP敏感性钾通道亚基表达的影响

目的研究红景天苷对大鼠海马神经元化学缺氧损伤的保护作用及机制。方法体外原代培养新生SD大鼠海马神经元并鉴定。以二氮嗪为阳性对照药,通过苏木精-伊红染色观察各实验组神经元形态,通过实时定量聚合酶链反应检测各实验组内向整流性钾通道受体6.2(Kir 6.2)、磺酰脲类受体1(SUR1)mRNA的表达差异,免疫细胞化学染色法检测各实验组Kir 6.2、SUR1蛋白质的表达差异。结果化学缺氧1 h,红景天苷各剂量组均可提高缺氧神经元存活率。与模型组比较,红景天苷各剂量组神经元Kir 6.2与SUR1 mRNA的表达量显著升高(P<0.01或P<0.05),Kir 6.2与SUR1蛋白表达也显著升高(P<0.01或P<0.05)。结论红景天苷通过上调化学缺氧神经元ATP敏感性钾通道亚基Kir 6.2、SUR1的表达对神经元起保护作用。     

尼氟灭酸对氯化钴诱导海马神经元凋亡的抑制作用

目的:探讨尼氟灭酸(NFA)对氯化钴(CoCl₂)诱导的海马神经元凋亡的抑制作用,阐明其可能的机制。方法:原代培养乳鼠海马细胞,并在倒置显微镜下观察海马细胞的形态变化。将海马神经元随机分为对照组(含1%血清培养液)、CoCl₂损伤组(含200 μmol·L^-1NFA等体积培养液)和不同浓度NFA组(在CoCl₂损伤组基础上加入20、40、80 μmol·L^-1 NFA)。MTT法检测各组海马神经元的存活率,流式细胞术分析海马神经元调亡率, ELISA法检测神经元培养液上清中相关凋亡蛋白Bcl-2、Bax、caspase-3和缺氧相关蛋白低氧诱导因子(HIF-1α)的表达水平。结果:海马神经元在培养7 d后形态规则,突触相互交织形成网络。MTT检测,与对照组比较,CoCl₂损伤组神经元存活率明显降低(P<0.01);与CoCl₂损伤组比较,20、40和80 μmol·L^-1NFA组神经元存活率升高(P<0.05或P<0.01)。流式细胞术检测,与对照组比较,CoCl₂损伤组神经元早期凋亡率、晚期凋亡率和总凋亡率升高(P<0.05或P<0.01);与CoCl₂损伤组比较,20、40和80 μmol·L^-1NFA组神经元早期凋亡率、晚期凋亡率及总凋亡率下降 (P<0.05或P<0.01)。ELISA法检测,与对照组比较,CoCl₂损伤组神经元培养液上清中HIF-1α、caspase-3 和Bax表达水平升高(P<0.01);与CoCl₂损伤组比较,20和40 μmol·L^-1 NFA组神经元培养上清中HIF-1α、caspace-3 和Bax表达水平下降,Bcl-2表达水平升高(P<0.05或P<0.01)。结论:NFA可以降低CoCl₂对海马神经元的缺氧损伤作用,其机制与抑制HIF-1α的表达、下调Bax/Bcl-2及抑制神经元凋亡有关联。     

凝血酶预处理对海马神经元的保护作用

目的:研究凝血酶预处理(TPC)对大剂量凝血酶(TM)诱导海马神经元凋亡的影响,阐明TPC的保护作用。方法:海马神经元分别经生理盐水(Sham组)、小剂量TM(TPC组)及凝血酶受体激活肽(TRAP组)预处理48h后再加大剂量TM作用24 h。TUNEL法及流式细胞术检测凋亡细胞数和凋亡百分率,应用免疫细胞化学方法检测神经元Bc l-2及Bax蛋白表达。结果:与Sham组比较,TPC组TUNEL阳性细胞数和凋亡百分率明显降低(P<0.01),Bc l-2表达上调,Bax表达明显下调(P<0.01)。与Sham组比较,TRAP预处理组TUNEL阳性细胞数和凋亡百分率明显降低(P<0.01),Bc l-2表达上调,Bax表达明显下调(P<0.01)。TRAP预处理组与TPC组相比差异无显著性(P>0.05)。结论:TPC可抑制TM导致的神经细胞凋亡,激活PAR-1,促进Bc l-2的表达和降低Bax的表达,可能是TPC抑制细胞凋亡的机制之一。     

Effect of mitochondrial KATP channel on voltage-gated K+ channel in 24 hour-hypoxic human pulmonary artery smooth muscle cells

Background Hypoxic pulmonary hypertension (HPH) is initiated by inhibition of O2-sensitive, voltage-gated (Kv) channels in pulmonary arterial smooth muscle cells (PASMCs). The mechanism of hypoxic pulmonary hypertension has not yet been fully elucidated. The mitochondrial ATP-sensitive K+ channel (MitoKATP) is extremely sensitive to hypoxia, and is a decisive factor in the control of mitochondrial membrane potential (ΔΨm). This study investigated the changes of cell membrane potential and Kv channel in cultured human pulmonary artery smooth muscle cell (hPASMC) exposed to 24 hour-hypoxia, and explored the role of MitoKATP and ΔΨm in this condition. Methods Fresh human lung tissues were obtained from the patients undergoing a chest operation. hPASMCs were isolated, cultured, and divided into 6 groups: ① control group, cultured under normoxia; ② diazoxide group, cultured in normoxia with diazoxide, an opener of MitoKATP; ③ 5-HD group, cultured in normoxia with sodium 5-hydroxydecanoate (5-HD), an antagonist of MitoKATP; ④ 24 hour-hypoxia group; ⑤ 24 hour-hypoxia + diazoxide group; and ⑥ 24 hour-hypoxia + 5HD group. Whole-cell patch-clamp technique was used to trace the cell membrane K+ currents. The expressions of cell membrane Kv1.5 mRNA and protein were determined by RT-PCR and Western blot technique, respectively. The relative changes in mitochondrial potential were tested with rhodamine fluorescence (R-123) technique. Results After exposure to diazoxide for 24 hours, the intensity of R-123 fluorescence in normoxic hPASMCs was significantly increased compared with control group (P&lt;0.05), but there were no significant changes in these tests after the hPASMCs had been exposed to 5-HD for 24 hours. Twenty-four hour-hypoxia or 24 hour-hypoxia + diazoxide could markedly increase the intensity of R-123 fluorescence in hPASMC and the changes were more significant in 24 hour-hypoxia +diazoxide group than in 24 hour-hypoxia group (P&lt;0.05) although 5-HD could partly weaken the effect of 24 hour-hypoxia on the intensity of R-123 fluorescence. After exposure to diazoxide for 24 hours, the cell membrane K+ currents and the expression of cell membrane Kv1.5 mRNA and protein in normoxic hPASMCs were significantly decreased compared with control group (P&lt;0.05), but there were no significant changes in these tests after the hPASMCs had been exposed to 5-HD for 24 hours. Also, 24 hour-hypoxia or 24 hour-hypoxia + diazoxide decreased the cell membrane K+ currents and the expression of Kv1.5 mRNA and protein (P&lt;0.05) but the changes were more significant in 24 hour-hypoxia + diazoxide group than in 24 hour-hypoxia group (P&lt;0.05). Again, 5-HD could partly weaken the inhibitory effect of 24 hour-hypoxia on the cell membrane K+ currents and the expression of Kv1.5 mRNA or protein (P&lt;0.05). Conclusions The opening of MitoKATP followed by a depolarization of ΔΨm in hypoxia might contribute to the alterations in the expression of cell membrane Kv1.5 mRNA and protein leading to change in the cell membrane potential of hypoxic hPASMCs. This might be a mechanism of the development of hypoxic pulmonary hypertension.     

Ⅱ型谷氨酰胺转氨酶对骨肉瘤MG-63细胞凋亡的抑制作用及其机制

目的：研究骨肉瘤MG-63细胞中Ⅱ型谷氨酰胺转氨酶（TG2）的抗凋亡作用,探讨其抑制肿瘤细胞凋亡的机制。方法：设计针对TG2的siRNA,建立骨肉瘤MG-63细胞体外缺氧培养模型,分为常氧组（细胞在常氧下培养）、单纯缺氧组（细胞在缺氧培养箱里培养）、对照siRNA缺氧组（转染对照siRNA后在缺氧培养箱里培养）和TG2 siRNA缺氧组（转染TG2 siRNA后在缺氧培养箱里培养）。观察各组骨肉瘤MG-63细胞在缺氧培养不同时间(6、12、24、48和72 h) 后Bax和Cyt C的表达及细胞凋亡率。微量滴定法检测TG2活性,RT-PCR法检测TG2和Bax mRNA表达水平,免疫组织化学法检测TG2和Bax蛋白在细胞内的分布,Western blotting法检测TG2、Bax和Cyt C蛋白表达水平,流式细胞术检测细胞凋亡率。结果：与常氧组比较,单纯缺氧组和对照siRNA缺氧组细胞TG2活性、TG2 mRNA和蛋白表达水平明显增强(P<0.01),并随缺氧时间延长逐渐升高（P<0.01）;Bax mRNA表达水平变化不明显(P>0.05),但Bax蛋白表达水平明显下降(P<0.01),细胞胞浆和线粒体内Cyt C蛋白水平及细胞凋亡率无明显变化（P>0.05）。与单纯缺氧组和对照siRNA缺氧组比较,TG2 siRNA缺氧组细胞各时间点TG2 mRNA和蛋白表达水平明显降低(P<0.01),Bax mRNA表达水平无明显变化（P>0.05）,Bax蛋白表达明显增加(P<0.01),胞浆内Cyt C蛋白水平明显增加(P<0.01),线粒体内Cyt C蛋白水平明显降低（P<0.01）,细胞凋亡率显著增加(P<0.01)。结论： TG2通过与Bax形成混合物而消耗Bax,阻止Cyt C释放至胞浆,从而抑制肿瘤细胞凋亡。     

产前应激对子代大鼠海马CA3区神经元高电压激活Ca2+通道动力学特征的影响

目的探讨产前应激对子代大鼠海马CA3神经元高电压激活(HVA)钙通道动力学特征的影响。方法给予孕鼠束缚应激,急性分离子代海马CA3神经元,应用全细胞膜片钳技术,研究产前应激对子代大鼠海马CA3区神经元高电压激活Ca2 通道的影响。结果产前应激增加了子代海马CA3神经元高电压激活钙电流幅值、电流面积,而未改变其电导-电压关系、稳态失活动力学、时间到峰等指标。对照组和产前应激组子代海马CA3神经元高电压激活最大钙电流幅值分别为(-40.89±0.31)pA/pF和(-49.44±0.37)pA/pF(P<0.01)。最大电流面积分别为(106.81±4.20)nA*ms和(133.49±2.59)nA*ms(P<0.01)。结论在胎儿发育的关键时期,给予母体应激,对子代海马神经元离子通道产生持续的影响。     

石菖蒲挥发油微乳减轻低氧诱导的人神经母细胞瘤SH-SY5 Y细胞线粒体损伤的机制研究

目的 观察石菖蒲挥发油微乳对低氧诱导SH-SY5Y细胞线粒体损伤的影响,并探讨其作用机制.方法 低氧处理SH-SY5Y细胞24 h后分别加入不同浓度的石菖蒲挥发油微乳含药血清,采用MTT法检测细胞存活率,JC-1荧光探针测定法和共聚焦显微镜观察线粒体膜电位,通过实时逆转录聚合酶链反应(real-time RT-PCR)测定细胞中Bcl-2和Bax mRNA的表达.结果 石菖蒲挥发油微乳可以显著提高低氧环境下SH-SY5Y细胞的存活率(P<0.01),逆转线粒体跨膜电位的下降,并显著降低细胞中Bax mRNA表达(P<0.01).结论 石菖蒲神经保护的机制可能与线粒体保护、减少细胞凋亡相关.     

血管内皮生长因子干扰RNA对人鼻咽癌CNE一2Z细胞VEGF表达调控的实验研究

目的：研究血管内皮生长因子（VEGF）的特异性小片段干扰RNA（siRNA）对低分化人鼻咽癌CNE-2Z细胞VEGF表达的抑制作用，为鼻咽癌的治疗提供新的途径。方法：体外培养人鼻咽癌细胞CNE-2Z，并分成正常氧状态培养组（20％）和低氧（1％）培养组。采用脂质体（LF2000）将VEGF siRNA转染两组细胞，并采用RT—PCR、ELISA检测鼻咽癌细胞在正常氧状态和低氧状态下VEGF mRNA和蛋白质表达的差异。结果：与未转染组和转染空载体组相比，在正常氧和低氧状态下，VEGFsiRNA均能明显抑制VEGFmRNA的表达（P〈0．01）；正常氧状态下VEGFsiRNA的抑制效率比低氧状态高。正常氧状态下：未转染组、转染空载体组、转染VEGFsiRNA组CNE-2Z细胞培养上清液中VEGF165的含量分别为：423．92、419．68和328．86pg／mL；低氧状态下VEGF165的含量分别为：813．62、799．89和500．96pg／mL，转染VEGF siRNA组VEGF的表达下调。结论：VEGF siRNA能有效地、特异地抑制人鼻咽癌CNE-2Z细胞VEGF mRNA和蛋白质的表达，因而有望成为治疗鼻咽癌的一种有效方法。     

血管内皮生长因子干扰RNA对人鼻咽癌CNE-2Z细胞VEGF表达调控的实验研究

目的研究血管内皮生长因子(VEGF)的特异性小片段干扰RNA(siRNA)对低分化人鼻咽癌CNE-2Z细胞VEGF表达的抑制作用,为鼻咽癌的治疗提供新的途径。方法体外培养人鼻咽癌细胞CNE-2Z,并分成正常氧状态培养组(20%)和低氧(1%)培养组。采用脂质体(LF2000)将VEGFsiRNA转染两组细胞,并采用RT-PCR、ELISA检测鼻咽癌细胞在正常氧状态和低氧状态下VEGFmRNA和蛋白质表达的差异。结果与未转染组和转染空载体组相比,在正常氧和低氧状态下,VEGFsiRNA均能明显抑制VEGFmRNA的表达(P<0.01);正常氧状态下VEGFsiRNA的抑制效率比低氧状态高。正常氧状态下:未转染组、转染空载体组、转染VEGFsiRNA组CNE-2Z细胞培养上清液中VEGF165的含量分别为:423.92、419.68和328.86pg/mL;低氧状态下VEGF165的含量分别为:813.62、799.89和500.96pg/mL,转染VEGFsiRNA组VEGF的表达下调。结论VEGFsiRNA能有效地、特异地抑制人鼻咽癌CNE-2Z细胞VEGFmRNA和蛋白质的表达,因而有望成为治疗鼻咽癌的一种有效方法。