内皮型一氧化氮合酶运输介导物在子痫前期患者脐血管中的表达

目的研究内皮型一氧化氮合酶运输介导物(endothelial n itric oxide synthase traffic inducer,NOSTR IN)在子痫前期(pre-ec lampsia,PE)患者脐血管中的表达,探讨其在子痫前期发病中的作用。方法免疫组织化学法检测脐血管中NOSTR IN的表达,并通过高清晰度彩色病理图文分析系统对其定量分析;RT-PCR检测子痫前期患者脐血管组织中NOS-TR IN mRNA的表达。结果免疫组织化学显示正常妊娠和子痫前期患者脐血管中都有NOSTR IN的表达,但子痫前期患者脐血管内皮细胞胞浆染色为深棕色,而正常妊娠者脐血管内皮细胞胞浆染色为浅棕色;RT-PCR显示子痫前期患者脐血管组织中NOSTR IN mRNA的表达水平显著高于正常妊娠(P<0.01)。结论子痫前期患者脐血管组织中NOSTR IN表达增加,这可能是子痫前期发病机制的重要因素之一。     

妊高征患者胎盘组织中胎盘异铁蛋白表达的研究

目的观察胎盘异铁蛋白(p lacental isoferritin,PLF)在妊高征(pregnancy induced hypertension syndrom e,PIH)患者胎盘组织中的表达,探讨其在血管病变中的作用。方法HE染色观察胎盘绒毛血管病变;免疫组化染色法检测妊高征胎盘组织(妊高征组)和正常妊娠胎盘组织(正常组)中PLF的表达,通过高清晰度彩色病理图文分析系统对其定量分析;W estern b lot检测胎盘血管组织中PLF蛋白质的表达。结果HE染色可见妊高征组胎盘绒毛细小血管壁增厚,管壁纤维素样坏死发生率显著高于正常组(P<0.01);免疫组化染色定量分析发现,PLF在中、重度妊高征胎盘组织中的表达明显低于轻度妊高征组和正常组(P<0.01);W estern b lot显示两组胎盘组织中均有34kDa的PLF蛋白质表达,但PIH组表达量明显降低(P<0.01)。结论妊高征患者胎盘组织中PLF表达水平降低参与了妊高征患者胎盘绒毛血管的病变过程。     

核因子kB在妊高征患者胎盘组织的定位及定量研究

目的 探讨核因子kB(NF-kB)在妊高征患者胎盘血管平滑肌及内皮细胞中表达的变化及其在妊高征发病过程中的作用。方法 HE染色后镜下观察胎盘组织及血管的病理变化．免疫组织化学方法及Westem blot检测妊高征患者胎盘组织I-kB、NF-kB的表达。结果 HE染色显示妊高征胎盘绒毛血管变细、数目减少、血管合体膜增厚、胎盘细小血管平滑肌细胞增生、纤维素样坏死明显多于正常妊娠；免疫组织化学显示妊高征患者胎盘血管平滑肌细胞及内皮细胞NF-kB胞浆、胞核染色较正常妊娠明显增强；Westem blot显示妊高征患者胎盘组织胞浆、胞核NF-kB含量、胞核／总NF-kB含量比值明显高于正常妊娠；妊高征患者胎盘组织胞浆I-kB含量明显低于正常妊娠。结论 NF—kB的激活及增加可能为妊高征发病机制的重要信息途径之一。     

核因子κB在妊高征患者胎盘组织的定位及定量研究

目的探讨核因子κB(NF-κB)在妊高征患者胎盘血管平滑肌及内皮细胞中表达的变化及其在妊高征发病过程中的作用.方法 HE染色后镜下观察胎盘组织及血管的病理变化,免疫组织化学方法及Western blot检测妊高征患者胎盘组织I-κB、NF- κB的表达.结果 HE染色显示妊高征胎盘绒毛血管变细、数目减少、血管合体膜增厚、胎盘细小血管平滑肌细胞增生、纤维素样坏死明显多于正常妊娠;免疫组织化学显示妊高征患者胎盘血管平滑肌细胞及内皮细胞NF-κB胞浆、胞核染色较正常妊娠明显增强;Western bl ot显示妊高征患者胎盘组织胞浆、胞核NF-κB含量、胞核/总NF-κB含量比值明显高于正常妊娠;妊高征患者胎盘组织胞浆I-κB含量明显低于正常妊娠.结论 NF-κB的激活及增加可能为妊高征发病机制的重要信息途径之一.     

子痫前期患者胎盘上HO-2及TNF-α表达的研究

目的探讨妊娠高血压疾病子痫前期患者胎盘中HO-2及TNF-α表达及其与妊高病发病机制之间的关系。方法采用免疫组织化学方法测定24例子痫患者和24例正常妊娠妇女(对照组)胎盘中HO-2、TNF-α表达水平,并分析两者相关性。结果 1.HO-2主要表达于血管内皮细胞、平滑肌细胞胞浆及胞膜上、而滋养细胞及间质细胞中表达较少。且HO-2在轻度及重度子痫前期患者表达均低于正常妊娠妇女,两者分别与正常晚孕组比较,轻度子痫前期与正常对照组相比差别无显著性,而重度子痫前期与正常对照组比较,差别有显著性。2.TNF-α主要表达于滋养细胞、血管内皮细胞胞膜中,而间质细胞内表达最少。且TNF-α在轻度及重度子痫前期患者表达均低于正常妊娠妇女,两者分别与正常晚孕组比较,差别均有显著性。3.正常组、PIH组HO-2及TNF-α存在负相关关系(r=-0.536、-0.574)。结论 HO-2可能是胎盘血管内皮细胞的保护性因素,而TNF-α可能引起胎盘血管内皮细胞损伤,可导致血管调节因子失衡,两者存在负相关关系,在妊高病发病过程中起一定作用。     

子痫前期胎盘、脐血管中神经激肽B表达及组织病理变化的研究

目的研究子痫前期患者胎盘、脐血管中神经激肽B（neurok in in B,NKB）的表达及组织的病理变化情况。方法采用SP法对轻、重度子痫前期组共40例和正常妊娠组20例的胎盘和脐血管组织进行NKB的免疫组化染色,观察各组NKB的定位、分布和表达量的差异。同时常规HE染色观察各组胎盘、脐血管的病理变化。结果NKB在各组胎盘合体滋养细胞、毛细血管内皮细胞、脐静脉内皮细胞中均有不同程度的表达。轻、重度子痫前期胎盘组织中,其NKB含量明显高于正常组（P〈0.05,P〈0.01）,HE染色可见子痫前期组细胞滋养细胞增生,合体细胞结节、纤维素样坏死显著增多等病理变化,与正常组相比有显著性差异。结论胎盘可能是NKB的重要产生释放部位。且NKB可能通过某些直接或间接的途径,参与了子痫前期损伤和代偿并存的复杂变化,在子痫前期的发生发展中起着重要作用。     

RECK、基质金属蛋白酶-9和血管内皮生长因子在子痫前期患者胎盘组织中的表达

目的检测子痫前期患者胎盘组织中RECK、基质金属蛋白酶-9(MMP-9)、血管内皮生长因子(VEGF)的基因表达,探讨它们与胎盘滋养细胞浸润过程的调控关系。方法采用RT-PCR、Western blotting、免疫组织化学检测120例妊娠足月剖宫产(正常妊娠、轻度子痫前期、中度子痫前期、重度子痫前期各30例)胎盘组织中RECK、MMP-9、VEGF的基因表达。结果 3组子痫前期患者胎盘组织中MMP-9及VEGF的mRNA表达水平均显著低于正常妊娠组(P0.05);重度子痫前期组中RECK mRNA的表达显著高于正常妊娠组(P0.05);3组子痫前期患者胎盘组织中MMP-9及VEGF蛋白表达均显著低于正常妊娠组(P0.05),中度和重度子痫前期组中RECK蛋白表达显著高于正常妊娠组(P0.05)。结论子痫前期患者胎盘中RECK与MMP-9、VEGF之间存在负相关性,它们可能参与了胎盘滋养细胞浅浸润过程的调控。     

基质金属蛋白酶-9和血管内皮生长因子在子痫前期患者胎盘组织中的表达

目的 检测子痫前期患者胎盘组织中RECK、基质金属蛋白酶-9（MMP-9）、血管内皮生长因子（VEGF）的基因表达,探讨它们与胎盘滋养细胞浸润过程的调控关系。 方法 采用RT-PCR、Western blotting、免疫组织化学检测120例妊娠足月剖宫产（正常妊娠、轻度子痫前期、中度子痫前期、重度子痫前期各30例）胎盘组织中RECK、MMP-9、VEGF的基因表达。结果 3组子痫前期患者胎盘组织中MMP-9及VEGF的mRNA表达水平均显著低于正常妊娠组（P<0.05）;重度子痫前期组中RECK mRNA的表达显著高于正常妊娠组（P<0.05）;3组子痫前期患者胎盘组织中MMP-9及VEGF蛋白表达均显著低于正常妊娠组（P<0.05）,中度和重度子痫前期组中RECK蛋白表达显著高于正常妊娠组（P<0.05）。结论 子痫前期患者胎盘中RECK与MMP-9、VEGF之间存在负相关性,它们可能参与了胎盘滋养细胞浅浸润过程的调控。     

抵抗素蛋白在妊娠糖尿病孕妇与正常孕妇胎盘的表达

目的了解抵抗素蛋白在妊娠糖尿病孕妇与正常孕妇胎盘的表达情况,探讨抵抗素与妊娠生理性胰岛素抵抗(insu lin resistance,IR)及妊娠糖尿病(gestational d iabetes m ellitus,GDM)的关系。方法W estern b lot法检测妊娠糖尿病孕妇与正常孕妇胎盘抵抗素蛋白表达情况;葡萄糖氧化酶法测定血糖,测量收缩压(SBP)及舒张压(DBP)。结果W estern b lot结果以OD值表示,GDM孕妇胎盘抵抗素蛋白的表达(79305±7645.12)显著高于正常孕妇胎盘的表达(50718±3818.20)(P<0.01)。结论妊娠糖尿病孕妇胎盘抵抗素蛋白的表达显著高于正常孕妇胎盘的抵抗素蛋白的表达;表明胎盘可分泌抵抗素;抵抗素是引起妊娠生理性胰岛素抵抗和妊娠糖尿病的一个细胞因子。     

E-钙粘蛋白在胎盘组织中的表达与子痫前期的关系

目的检测E-钙粘蛋白（E-cadherin,E-cad）在正常妊娠和子痫前期妊娠胎盘中的表达情况,探讨E-cad表达水平与子痫前期的关系。方法取临床标本,14例子痫前期患者（子痫前期组）与10例正常妊娠妇女（正常妊娠组）的胎盘组织,用免疫组织化学方法检测胎盘中E-cad的表达。结果子痫前期组孕妇胎盘中,E-cad表达水平明显高于正常妊娠组,两组差异有统计学意义（P〈0.05）。结论胎盘滋养细胞中E-cad表达的水平与子痫前期的发生密切相关。     

miR-150在胎盘表达与复发性流产的关系研究

目的探讨miR-150通过靶向血管内皮生长因子(VEGF)表达调控胎盘血管生成参与复发性流产的关系。方法选择华中科技大学同济医学院附属梨园医院妇产科单胎晚期妊娠分娩的产妇40例为对照组(年龄23~29岁,平均年龄26.72岁),同期选择于该院妇产科3次或更多次自然流产的妇女40例为病例组(年龄23~29岁,平均年龄26.18岁)。测定两组胎盘组织miR-150 mRNA表达水平及VEGF表达水平。设立HTR-8/SVNEO细胞组、miR-150mimics组、miR-150 inhibitor组,测定3组细胞活力、凋亡水平、血管形成水平、miR-150 mRNA表达水平及VEGF表达水平。建立正常小鼠组、miR-150 mimics小鼠组、miR-150 inhibitor小鼠组模型,测定3组小鼠平均流产数、胎鼠质量、胎盘质量、胎盘毛细血管数目、miR-150 mRNA及VEGF表达水平。结果病例组胎盘组织miR-150 mRNA表达水平高于对照组胎盘组织,VEGF表达水平低于对照组胎盘组织(P <0.05)。miR-150 mimics组光密度(OD)值、细胞存活率、相对总血管长度、相对总血管数目、VEGF表达水平低于HTR-8/SVNEO细胞组(P <0.05);miR-150 inhibitor组OD值、细胞存活率、相对总血管长度、相对总血管数目、VEGF表达水平高于HTR-8/SVNEO细胞组和miR-150 mimics组(P <0.05)。miR-150 mimics组细胞凋亡率、miR-150 mRNA表达水平高于HTR-8/SVNEO细胞组(P <0.05),miR-150 inhibitor组细胞凋亡率、miR-150 mRNA表达水平低于HTR-8/SVNEO细胞组和miR-150 mimics组(P <0.05)。miR-150 mimics小鼠组平均流产数、miR-150 mRNA水平高于正常小鼠组(P <0.05),胎鼠质量、胎盘质量低于正常小鼠组(P <0.05)。miR-150inhibitor小鼠组平均流产数、miR-150 mRNA水平低于正常小鼠组和miR-150 mimics小鼠组(P <0.05),胎鼠质量、胎盘质量高于正常小鼠组和miR-150 mimics小鼠组(P <0.05)。miR-150 mimics小鼠组平均胎盘毛细血管数目水平、VEGF表达水平低于正常小鼠组(P <0.05),miR-150 inhibitor小鼠组平均胎盘毛细血管数目、VEGF表达水平高于正常小鼠组和miR-150 mimics小鼠组(P <0.05)。结论复发性流产患者胎盘组织中miR-150表达水平升高,VEGF表达水平降低;miR-150靶向抑制胎盘中VEGF表达水平进而抑制胎盘中血管的生成可能是复发性流产的发病机制之一。     

胎盘粘连植入组织和人胎盘滋养层细胞中VCAM-1的表达及其与侵入性胎盘疾病的相关性

目的探讨胎盘粘连植入组织和人胎盘滋养层细胞中血管细胞黏附分子-1(vascular cell adhesion molecule-1,VCAM-1)的表达及其与侵入性胎盘疾病的相关性。方法采用酶联免疫吸附试验检测2017年9月至2018年9月期间我院收治的20例产妇静脉血中可溶性VCAM-1(sVCAM-1)的表达水平,根据sVCAM-1的平均值将另外随机选取的200例产妇分为高表达组和低表达组,计算两组侵入性胎盘发生率。采用免疫组化染色、实时定量PCR和Western blot检测40例侵入性胎盘组织和40例正常胎盘组织中的VCAM-1、TNF-α、NF-κB p65和IκBα表达。应用20 ng/mL的TNF-α处理人胎盘滋养层HTR8/SVneo细胞系后检测细胞中VCAM-1、TNF-α、NF-κB p65和IκBα的表达。结果20例健康产妇静脉血中的VCAM-1平均水平为36.32±3.25 ng/mL。高表达组的侵入性胎盘发生率(6.98%)显著高于低表达组(0.64%)(χ^2=0.922,P=0.009)。实时定量RT-PCR和Western blot结果表明,与对照组相比,侵入性胎盘组VCAM-1的mRNA和蛋白表达水平显著升高。免疫染色显示VCAM-1蛋白主要在滋养细胞的细胞质和膜中表达,侵入性胎盘组的VCAM-1阳性率(72.50%)显著高于对照组(17.50%)(Z=-5.063,P<0.001)。与对照组相比,侵入性胎盘组的TNF-α和NF-κB p65表达水平显著升高,而IκBα表达水平显著降低(P<0.05)。与未用TNF-α处理(0 ng/mL)的HTR8/SVneo细胞相比,应用20 ng/mL浓度的TNF-α处理细胞1周后,细胞中的NF-κB p65和VCAM-1表达水平显著升高,而IκBα表达水平显著降低(P<0.05)。结论VCAM-1在侵入性胎盘产妇血液和胎盘组织中均为高表达模式。VCAM-1的活化至少部分依赖于TNF-α、NF-κB信号通路的激活,从而诱导其在滋养细胞中高表达并引起过度侵袭,导致侵入性胎盘的发生。     

血管内皮生长因子及其可溶性血管内皮生长因子受体-1水平与胎儿出生体重

目的本研究通过对比血管内皮生长因子(VEGF)、可溶性血管内皮生长因子受体-1(sFlt-1)水平差异与新生儿出生体重的关系,以探讨其在胎儿出生体重发生中的作用。方法采用免疫组织化学法检测40例分娩正常出生体重儿组(AGA组)、30例高出生体重儿组(LGA组)及30例低出生体重儿组(SGA组)胎盘组织中VEGF、sFlt-1的表达水平。结果①LGA组胎盘组织中VEGF的表达高于AGA组,sFlt-1的表达水平低于AGA组,差异有统计学意义(χ2=21.17,P<0.01)。SGA组胎盘组织中VEGF的表达低于AGA组,sFlt-1的表达水平高于AGA组,差异有统计学意义(χ2=8.44,P=0.04)。②胎盘组织中VEGF的表达水平与胎儿出生体重呈正相关(r=0.427,P<0.01),胎盘组织中sFlt-1的表达水平与胎儿出生体重呈负相关(r=-0.569,P<0.01)。结论孕妇胎盘组织中VEGF及sFlt-1表达水平的变化可能与胎儿出生体重有关。     

生长分化因子15在子痫前期胎盘滋养细胞中的表达及意义

目的探讨生长分化因子-15（GDF-15）在子痫前期患者胎盘滋养细胞中的表达,探讨其在子痫前期发病机制中的作用。方法选择2009年12月至2010年10月在青岛市市立医院住院分娩的子痫前期孕妇140例,其中早发型轻度子痫前期孕妇35例（早发轻度组）,晚发型轻度子痫前期孕妇35例（晚发轻度组）,早发型重度子痫前期孕妇35例（早发重度组）,晚发型重度子痫前期孕妇35例（晚发重度组）;另选同期健康孕妇35例为对照组。采用RT—PCR检测胎盘滋养细胞中GDF-15mRNA的表达量;采用免疫组化方法检测胎盘滋养细胞中GDF-15蛋白的表达。结果RT—PCR显示子痫前期各组胎盘滋养细胞中GDF-15mRNA表达水平均高于对照组,差异有统计学意义（P〈0．05）;但子痫前期各组间分别比较,差异无统计学意义（P〉0．05）。免疫组化显示GDF-15表达于胎盘滋养细胞的细胞浆和细胞外基质中,并在各组胎盘滋养细胞中均表达。子痫前期各组胎盘滋养细胞中GDF-15蛋白表达水平均高于对照组组,差异有统计学意义（P〈0．05）;但子痫前期各组间分别比较,差异无统计学意义（P〉0．05）。结论GDF-15在子痫前期胎盘滋养细胞中表达升高,GDF-15的表达水平变化可能与子痫前期发病有关。     

细胞命运决定因子numb在先兆子痫胎盘组织中的表达及作用

目的探讨先兆子痫胎盘组织中细胞命运决定因子numbs表达情况及意义。方法获取正常妊娠胎盘组织以及先兆子痫胎盘组织,分别运用实时荧光定量PCR法、免疫印迹法、免疫组织化学法检测numbmRNA、蛋白分布及其表达水平。结果numb在以上两种胎盘组织中均有表达,且主要集中在细胞膜上表达。numb在先兆子痫组（实验组）的表达水平明显高于正常胎盘组（对照组）（P〈0．05）。结论numb参与的滋养细胞凋亡失调可能是先兆子痫的发病机制之一。     

Syncytin在子痫前期胎盘组织中表达水平的检测及其临床意义

目的探讨子痫前期（preeclampsiaic,PE）胎盘组织中syncytin的表达情况。方法选择确诊PE孕妇19例及孕周相匹配的正常妊娠孕妇21例,入组病人共40例。获取胎盘组织后,RT—PCR法检测syncytin mRNA转录水平,比较两组检测结果。结果PE组和正常妊娠组病例胎盘组织均检测到syncytin mRNA,与正常对照组（5．81±1．96）比较,PE病例胎盘组织syncytin mRNA水平明显降低（1．34±0．89,P〈0．01）。结论胎盘syncytin表达下调与PE发病密切相关。     

sEPCR、VEGF、MVD、KDR在早发型子痫前期胎盘中的表达

目的 研究sEPCR、VEGF、MVD、KDR在早发型子痫前期胎盘中的表达情况.方法 选取2016年3月至2017年4月我院收治的早发型子痫前期患者50例为研究对象,以同期入院体检的50例健康产妇为对照组,测定入组对象胎盘组织中可溶性血管内皮细胞蛋白C受体(sEPCR)、血管内皮生长因子(VEGF)、胎盘微血管密度(MVD)、含有激酶插入区的受体(KDR)及可溶性血管内皮生长因子受体(sFlt-1)水平,同时比较子痫前期病情轻度、中重度患者上述指标,分析PE患者sEPCR、VEGF、MVD、KDR及sFlt-1的相关性,评价上述指标联合诊断PE的效能.结果 早发型组胎盘组织VEGF(30.25 ±1.87)％、MVD(37.11 ±1.54)条低于对照组(P＜0.05),而其sEPCR(156.34±1.25) ng/mL、KDR(70.34±1.38)％、sFlt-1 (80.32±1.67)％较对照组升高(P＜0.05);重度子痫前期患者VEGF(30.18±1.30)％、MVD(36.20±1.31)条与轻度组比较明显降低,而sEPCR(154.22±1.05)％、KDR(71.20±1.66)％、sFlt-1 (81.11±1.56)升高(P＜0.05);sEPCR、VEGF、MVD、KDR联合诊断早发型PE患者灵敏度为98.05％,特异性为93.11％,准确度为96.20％,均高于上述指标单项诊断;相关分析显示子痫前期患者胎盘组织中VEGF、MVD与sFlt-1呈负相关(P＜0.05).结论 sEPCR、VEGF、MVD、KDR在早发型子痫前期胎盘中呈异常表达,随病情加重VEGF、MVD表达降低,sEPCR、KDR表达增多,其中VEGF、MVD表达水平与sFlt-1高表达有关.     

Decreased expression of the angiogenic regulators CYR61 (CCN1) and NOV (CCN3) in human placenta is associated with pre-eclampsia

The pregnancy disorder pre-eclampsia (PE) is thought to be caused in part by shallow invasion of the extravillous trophoblast (EVT) leading to uteroplacental insufficiency and hypoxia. Here, we focused on the expressions of cysteine-rich 61 (CYR61, CCN1) and nephroblastoma overexpressed (NOV, CCN3), members of the CCN family of angiogenic regulators, in human placenta during normal pregnancy compared with pre-eclamptic and HELLP placentae using quantitative RT-PCR, western blotting and immunocytochemistry. During normal pregnancy, both proteins showed increasing expression levels and were strongly coexpressed in endothelial cells of vessels, stromal cells and interstitial EVT giant cells. However, NOV showed an earlier onset of expression in villous endothelial cells during gestation compared with CYR61, which may signify distinct roles of these proteins in placental angiogenesis. In early-onset pre-eclamptic placentae, both CYR61 and NOV were expressed at a significantly lower level compared with normal matched controls. This decrease of CYR61 and NOV in pre-eclamptic placentae is not associated with a decrease of the endothelial marker CD34 or vimentin. No obvious changes in the localization of CYR61 and NOV in pre-eclamptic placentae were detected but a change in the intracellular distribution in trophoblast giant cells. Our data point to a potential role of both molecules in the pathogenesis of early-onset PE.