重组人血管内皮抑素联合顺铂治疗鼠B16恶性黑色素瘤移植模型的实验研究

目的 探讨重组人内皮抑素(恩度)联合顺铂化疗对恶性黑色素瘤的作用.方法 建立B16恶性黑色素瘤的裸鼠移植模型20只,随机分为恩度组、顺铂组、恩度联合顺铂组(联合组)和对照组.治疗后处死裸鼠,计算肿瘤体积抑瘤率,用免疫组化法测微血管密度(MVD)及瘤体血管内皮生长因子(VEGF)的表达.结果 恩度组、顺铂组和恩度联合顺铂组(联合组)的肿瘤抑制率分别为17.52%、45.72%和59.40%,联合组的肿瘤生长明显受到抑制(P＜0.05).免疫组化结果显示,联合组MVD低于其他组(P＜0.05);恩度组、顺铂组和联合组的VEGF表达均明显低于对照组(P＜0.05).结论 恩度联合顺铂有协同抗肿瘤作用,能有效抑制恶性黑色素瘤的生长.     

异甘草素对人鼻咽癌CNE2细胞裸鼠移植瘤模型的放疗增敏作用

目的：观察异甘草素对鼻咽癌裸鼠移植瘤放疗的增敏效应,并探讨其与乏氧诱导因子－1α（ HIF－1α）、血管内皮生长因子（ VEGF）表达水平之间的关系。方法取低分化鼻咽癌CNE2细胞接种于雌性裸鼠皮下（共接种20只）,待肿瘤结节4～6 mm时,将裸鼠随机分为4组,分别为对照组、异甘草素组（50 mg? kg－1?周－1）、放疗组、异甘草素（50 mg? kg－1?周－1）联合放疗组。依照各组不同治疗措施处理,定期测量瘤体体积,20 d后处死裸鼠,剥离瘤体称重。分别计算4组抑瘤率。采用荧光定量PCR检测瘤体组织中HIF－1α及VEGF mRNA的表达水平。结果异甘草素联合放疗组移植瘤的体积和重量显著下降,与对照组、单纯异甘草素及单纯放疗组比较差异均有统计学意义（ P ＜0．05）;异甘草素联合放疗组HIF－1α、VEGF mRNA表达水平明显下降,与对照组及放疗组相比,差异有统计学意义（ P ＜0．05）。结论异甘草素能增强鼻咽癌裸鼠移植瘤对放疗的敏感性,其作用机制可能与抑制HIF－1α、VEGF表达水平,从而抑制肿瘤血管生成作用有关。     

P53和VEGF在SKOV3荷瘤裸鼠不良心理应激模型血清及移植瘤中的表达及意义

目的:探讨不良心理应激对SKOV3荷瘤裸鼠血清及移植瘤中P53、血管内皮生长因子(VEGF)蛋白水平的影响.方法:建立荷卵巢癌裸鼠不良心理应激模型,采用ELISA检测正常对照组(A)、单纯应激组(B)、单纯荷瘤组(C)和荷瘤应激组(D)各10只小鼠的血清P53和VEGF浓度,用Western blot方法分析C组和D组移植瘤中P53、VEGF蛋白表达情况;另取32例荷瘤应激和24例单纯荷瘤的裸鼠移植瘤标本,免疫组化检测P53和VEGF的蛋白表达水平.结果:A组与B组血清P53和VEGF含量比较差异无统计学意义(P＞0.05),C组的P53、VEGF含量均明显高于A组(P＜0.01),D组的血清P53、VEGF与B、C组相比差异均有统计学意义(P＜0.05或P＜0.01);D组P53、VEGF的蛋白灰度值明显高于C组(P＜0.05);免疫组化结果示P53蛋白在荷瘤应激组和单纯荷瘤组的阳性表达率分别为87.5%和62.5%,VEGF蛋白在2组的阳性表达率分别为93.8%和70.8%,差异均有统计学意义(P＜0.05).结论:不良心理应激明显促进荷瘤鼠SKOV3移植瘤生长,可能与P53和VEGF有关;P53及VEGF有望成为心理肿瘤学的分子靶标.     

PI3K/Akt抑制剂对肺癌裸鼠移植瘤MMP9、VEGF表达的影响

目的探讨PI3K抑制剂LY294002对肺癌裸鼠移植瘤的基质金属蛋白酶9(MMP9)及血管内皮生长因子(VEGF)表达的影响及意义。方法人肺癌A549细胞接种于裸鼠皮下,建立肺癌裸鼠移植瘤模型并予LY294002治疗,计算LY294002的抑瘤率,western b lot法测定裸鼠移植瘤组织MMP9、VEGF蛋白的表达。结果 LY294002可有效抑制裸鼠移植瘤的生长,其抑瘤率为40.30%。LY294002治疗组裸鼠移植瘤组织MMP9及VEGF蛋白水平均显著低于对照组(P均<0.01)。结论 PI3K抑制剂LY294002通过下调MMP9及VEGF蛋白的表达,从而抑制肿瘤的侵润转移。     

三氧化二砷及顺铂对乳腺癌裸鼠移植瘤生长的抑制作用

目的 了解三氧化二砷(As2O3)、顺铂(DDP)单独及联合应用对人乳腺癌裸鼠移植瘤生长的抑制作用. 方法 建立裸鼠人乳腺癌MCF-7细胞移植瘤动物模型,成瘤后动物随机分为4组,每组4只:(1)阴性对照组,(2)As2O3组,(3)DDP组,(4)As2O3 DDP组.疗程结束后,观察3 d,处死裸鼠.治疗期间观察并记录各组裸鼠移植瘤的生长情况及肿瘤体积和裸鼠体重的变化,计算肿瘤生长抑制率,用流式细胞仪法、透射电镜观察体内瘤体的细胞凋亡情况. 结果 As2O3组、DDP组和As2O3 DDP组治疗后肿瘤体积减少,与对照组相比,差异均有显著性(P＜0.01);与As2O3及DDP组单独用药组比较,As2O3 DDP联合用药组肿瘤体积明显减少(P＜0.01),抑瘤率明显增高(P＜0.01);而阴性对照组肿瘤体积增加.各组裸鼠体重无明显变化.As2O3 DDP联合用药组细胞凋亡率为36.9%,明显高于其他2组,差异有显著性(P＜0.01). 结论 As2O3与DDP联合用药比2药单独应用抑制肿瘤生长的作用更强,二者具有协同抗癌作用.     

苦参碱对人肝癌细胞HepG2荷瘤裸鼠的抑瘤作用研究

目的研究苦参碱对人肝癌细胞HepG2荷瘤裸鼠的抑瘤作用及其作用机制。方法 BALB/C裸鼠随机分为对照组和苦参碱25、50、75 mg/kg组,每组各10只。建立裸鼠肝癌细胞HepG2移植瘤模型。对照组ip生理盐水1 mL,1次/d;苦参碱25、50、75 mg/kg组分别ip 0.5、1.0、1.5 mg/mL苦参碱溶液1 mL,1次/d。连续给药35 d。计算瘤体体积和肿瘤体积抑制率。观察裸鼠瘤体HE染色病理改变和免疫组化染色,测定各组裸鼠瘤体Survivin蛋白表达量,并采用RT-PCR法检测裸鼠瘤体Survivin mRNA相对表达量。结果与对照组比较,苦参碱50、75 mg/kg组裸鼠瘤体体积显著减小(P0.01);苦参碱组裸鼠瘤体生长速度较对照组减慢,肝癌细胞分布较对照组稀疏,且剂量越大越明显。苦参碱50、75 mg/kg组仅有少量Survivin表达于细胞质。与对照组比较,苦参碱50、75 mg/kg组裸鼠Survivin蛋白表达量和Survivin mRNA相对表达量显著减小(P0.01)。结论苦参碱对人肝癌细胞HepG2荷瘤裸鼠具有抑瘤作用,有效剂量为50 mg/kg,其机制可能与下调Survivin表达、诱导肝癌细胞凋亡有关。     

诺斯卡品逆转人卵巢癌裸鼠移植瘤对顺铂耐药的作用及机制

目的：探讨微管抑制剂诺斯卡品（ NOS ）逆转人卵巢癌细胞株 SKOV3/DDP 裸鼠皮下移植瘤对顺铂（ DDP）耐药的作用及其机制。方法建立人卵巢癌裸鼠移植瘤模型,分为对照组、DDP组、NOS组、NOS与DDP联合组,每组6只。观察各组裸鼠饮食和精神状态,测量裸鼠的体重及移植瘤的体积,并绘制肿瘤生长曲线。用网搓法制备单细胞悬液,采用流式细胞术检测移植瘤细胞周期和细胞凋亡率的变化,细胞中X链锁凋亡抑制蛋白（ XIAP ）、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶（Caspase-3）、B细胞淋巴瘤/白血病-2（Bcl-2）和生存素（Survivin）蛋白表达。结果联合组裸鼠移植瘤体积明显小于对照组和其他用药组（ P ＜0ⅱ．05）。与对照组和DDP组比较,联合组皮下移植瘤细胞凋亡率显著增加（ P ＜0．05）,G2/M期细胞比例增多（ P ＜0．05）,细胞中XIAP、Bcl-2和Survivin蛋白表达降低（ P ＜0．05）, Caspase-3蛋白表达升高（ P ＜0．05）。结论 NOS增加了移植瘤细胞对DDP的敏感性,逆转其对DDP的多药耐药,其机制可能与XIAP、Bcl-2和Survivin蛋白表达的下调,Caspase-3蛋白表达的上调有关。     

重组人血管内皮抑素联合放疗对小鼠肾癌移植瘤的协同抗瘤效应研究

目的研究重组人血管内皮抑素（恩度）联合放疗在小鼠肾癌上的协同作用。方法 48只接种有Renca肾癌的雌性BALB/c小鼠随机分为空白对照组,单用恩度组,单纯放疗组,恩度联合放疗组。观察小鼠的一般状况,隔日测量肿瘤的大小绘制肿瘤生长曲线,处死小鼠后取肿瘤组织免疫组化测各组VEGF,MVD表达。结果联合治疗组较其他各组肿瘤生长明显减慢,各组免疫组化结果 VEGF,MVD差异有统计学意义,联合治疗组阳性表达明显减少,具有统计学意义（P〈0.05）。结论重组人血管内皮抑素联合放疗显著提高小鼠Renca肾癌的治疗效果。     

超声靶向微泡破裂增强恩度凝胶抑制裸鼠乳腺癌移植瘤血管生成作用

目的:探讨超声靶向微泡破裂对恩度凝胶瘤体内注射抑制裸鼠乳腺癌移植瘤血管生成作用的影响。方法:制备载恩度的PLGA-PEG-PLGA温度敏感型凝胶,检测恩度凝胶体外释放及超声辐照对药物释放的影响;建立荷人乳腺癌裸鼠移植瘤模型,分为模型组、恩度凝胶瘤体内注射组、恩度凝胶联合超声靶向微泡破裂组,每周治疗1次,连续3次后行肿瘤超声造影,测定肿瘤组织微血管密度,评价各种处理对肿瘤血管生成的抑制作用。结果:恩度凝胶在体外平稳释放约1周时间,超声辐照可提高恩度凝胶的释放速率;恩度凝胶瘤体内注射联合超声靶向微泡破裂处理具有明显的抑制肿瘤血管生成作用,肿瘤超声造影峰值强度及微血管密度均明显低于对照组及单纯恩度凝胶治疗组(P0.05)。结论:恩度凝胶联合超声靶向微泡破裂可阻断肿瘤微循环,并有效控制缓释载体的药物释放速率,使更多释放药物作用于血管内皮细胞,具有明显的抑制肿瘤血管生成作用。     

阿拉瑞林对子宫内膜癌裸鼠移植瘤作用的实验研究

目的观察阿拉瑞林对HEC-1B裸鼠移植瘤的抑制作用及对血管内皮生长因子（VEGF）表达的影响。方法将HEC-1B荷瘤鼠随机分为5组：阴性对照组、阿拉瑞林低、中、高剂量组和阳性对照（5-Fu）组。30d后处死裸鼠,称取移植瘤质量,并观察抑瘤率及用免疫组化SABC法检测移植瘤VEGF的表达。结果阿拉瑞林组和5-Fu组平均瘤质量和抑瘤率与阴性对照组比较,差异均有统计学意义（P〈0.05或P〈0.01）。低、中剂量阿拉瑞林组VEGF阳性率与阴性对照组比较,差异有统计学意义（P〈0.05）;高剂量阿拉瑞林组、5-Fu组VEGF阳性率与阴性对照组比较,差异有统计学意义（P〈0.01）。结论阿拉瑞林有一定的抑制子宫内膜癌生长的作用,且不良反应轻微,可能通过对VEGF的表达调控来实现。     

肿瘤易感基因101的裸鼠荷瘤实验

目的探讨胃癌细胞SGC7901中高表达的肿瘤易感基因101（TSG101）对肿瘤增殖的作用及机制。方法将不同TSG101表达水平的胃癌细胞亚系接种于裸鼠体内,观察移植瘤生长状况及相关因子的表达。结果 TSG101转染组裸鼠的移植瘤体积明显高于空质粒组与未转染组（P〈0.05）。TSG101转染组瘤组织切片中血管内皮细胞生长因子（VEGF）表达明显高于空质粒组和未转染组（P〈0.05）。结论 SGC7901细胞中高表达的TSG101可能通过上调VEGF的表达增强胃癌细胞增殖。     

黄芪注射液对人鼻咽癌CNE2裸鼠移植瘤组织p53 mRNA表达的影响

目的探讨黄芪注射液对人鼻咽癌CNE2荷瘤裸鼠的抑瘤作用及其作用机制。方法建立人鼻咽癌CNE2荷瘤裸鼠移植性肿瘤模型,随机分为3组,分别给予生理盐水、顺铂30 mg.m-2、黄芪注射液10.40 mg.(g.d)-1,经腹腔注射给药4 wk后处死CNE2荷瘤裸鼠,测量瘤体积,取瘤体称重,计算抑瘤率和相对肿瘤增值率;采用实时荧光定量PCR法的相对定量法检测黄芪注射液对各组裸鼠移植瘤组织中p53 mRNA表达的影响。结果生理盐水组、顺铂组、黄芪注射液组的移植瘤瘤体积分别为(1.51±0.25)cm3、(0.91±0.35)cm3、(1.04±0.51)cm3,与生理盐水组相比,顺铂组和黄芪注射液组的瘤体积小(P<0.01,P<0.05);顺铂组、黄芪注射液组对人鼻咽癌CNE2荷瘤裸鼠的抑瘤率分别为72.12%、39.90%;相对肿瘤增殖率分别为50%、60%。经实时荧光定量PCR法测定,与生理盐水组相比,各组裸鼠移植瘤组织中p53 mRNA的表达量差异无统计学意义(P>0.05)。结论黄芪注射液对人鼻咽癌CNE2荷瘤裸鼠移植瘤具有抑制作用,但尚不能认为黄芪注射液可影响移植瘤组织中p53 mRNA的表达。     

重组人血管内皮抑素联合化疗不同用药时序对肺癌移植瘤生长和凋亡的影响

目的观察恩度与化疗联合应用的不同时序对裸鼠A549移植瘤生长和凋亡的影响。方法60只荷A549人肺癌细胞株移植瘤裸鼠随机分为实验组和对照组,实验组分为D1、D3、195、D7组,给予恩度治疗并分别在恩度治疗后第1、3、5、7天进行化疗,比较各组裸鼠移植瘤的生长情况和凋亡指数。结果治疗后第40天各治疗组移植瘤体积均明显小于对照组且差异有极显著性垆〈0．01）,D3、D5、D7组肿瘤体积小于D1组（P〈0．05）D1、193、D5、D7组凋亡指数分别为（14．28±1．93）、（15．76±1．96）、（15．44±1．91）、（16．55±2．07）,与对照组（2．45±0．68）相比差异有极显著性伊〈0．01）,D3、D5、D7组凋亡指数均高于D1组但仅D7组与D1组比较差异有显著性（P〈0．05kD1、D3、D5、D7组抑瘤率分别为47．97％、46．78％、46．91％、53．52％。结论在恩度治疗后第3、5、7天给予化疗较恩度与化疗同时给药,有助于促进裸鼠移植瘤细胞凋亡及抑制其生长,恩度治疗后第7天可能是给予化疗的最佳时点。     

Effect of methylation-associated silencing of the death-associated protein kinase gene on nasopharyngeal carcinoma

Death-associated protein kinase (DAPK) is a Ca/calmodulin-regulated serine/threonine kinase and a positive mediator of apoptosis. Loss of expression of the DAPK gene by aberrant promoter methylation may play an important role in cancer development and progression. The aim of this study was to investigate the frequency of gene promoter methylation of DAPK in nasopharyngeal carcinoma (NPC) and the effect of 5-Aza-2'-deoxycytidine (5-Aza-CdR), a demethylating agent, on CNE cells, a human nasopharyngeal carcinoma cell line, and on xenografts of CNE cells. Methylation-specific PCR and RT-PCR were used to determine the promoter methylation status and mRNA expression of the DAPK gene in NPC. Furthermore, CNE cells were treated in vitro and in vivo with 5-Aza-CdR to explore the effect of demethylating agents on DAPK mRNA expression and tumor growth. Hypermethylation of the DAPK gene promoter was found in 35 (76.1%) of 46 NPC samples. There was no significant difference in the promoter hypermethylation rate among samples from patients with different TNM stages. No promoter hypermethylation of the DAPK gene was found in all six chronic inflammatory nasopharyngeal tissue specimens. DAPK mRNA expression was not detected in NPC tumor specimens with promoter hypermethylation. However, DAPK mRNA expression was observed in unmethylated NPC tumors and in the chronic inflammatory nasopharyngeal tissue specimens. Promoter hypermethylation of the DAPK gene was found and no DAPK mRNA expression was detected in CNE cells. DAPK mRNA expression in CNE cells and xenografts could be restored by treatment with 5-Aza-CdR. The CNE cell xenografts of nude mice treated with 5-Aza-CdR were obviously smaller in tumor volume than those of nude mice treated with PBS. These results demonstrate that loss of DAPK expression could be associated with promoter region methylation in NPC. 5-Aza-CdR may slow the growth of CNE cells in vitro and in vivo by reactivating the DAPK gene silenced by de novo methylation.     

5-氮杂-2′-脱氧胞苷对人甲状腺癌裸鼠移植瘤的抑制作用及其机制的研究#br#

目的　观察去甲基化制剂5-氮杂-2′-脱氧胞苷（5-Aza-CdR）对人甲状腺乳头状癌TPC-1细胞裸鼠移植瘤的生长抑制作用。方法　将人甲状腺乳头状癌TPC-1细胞接种于16只BALB/c雌性裸鼠右前肢腋下。移植瘤模型建立后,用随机数字表法将裸鼠分为2组,实验组按照1 μg/g腹腔注射5-Aza-CdR 200 μL,每2 d给药1次,给药4周。对照组腹腔注射等体积生理盐水。末次给药后处死荷瘤鼠,观察2组裸鼠移植瘤的生长情况,HE染色观察移植瘤的病理形态学改变,采用甲基化特异性PCR检测死亡相关蛋白激酶（DAPK）基因甲基化程度,采用免疫组化染色与Western blot检测DAPK和DNA甲基转移酶（DNMTs）的蛋白表达水平。结果　经药物干预4周后,实验组移植瘤体积和质量均较对照组明显减少（P＜0.05）,相比对照组,实验组抑瘤率为45.38%。HE染色结果显示,实验组肿瘤细胞数量减少,部分区域肿瘤细胞核淡染、缩小,局部出现核固缩、核溶解。实验组DAPK基因甲基化程度低于对照组。免疫组化染色和Western blot结果显示,实验组DAPK蛋白表达量明显高于对照组,DNMT1、DNMT3A蛋白表达量低于对照组,差异有统计学意义（均P＜0.05）,2组DNMT3B的表达差异无统计学意义（P＞0.05）。结论　5-Aza-CdR可通过调节裸鼠移植瘤内DNMTs来提高DAPK的表达,从而抑制甲状腺乳头状癌生长。     

基于AMPK/ULK1介导的自噬探讨牡荆素对鼻咽癌CNE-2细胞裸鼠移植瘤生长抑制作用及其机制

目的 探究牡荆素对鼻咽癌CNE-2细胞裸鼠移植瘤生长的抑制作用及其可能的调控机制。方法 将BALB/c裸鼠通过左侧前肢腋窝下接种CNE-2细胞构建鼻咽癌裸鼠成瘤模型,待模型构建成功后随机分为模型组、牡荆素组（5、10 mg/kg）、腺苷酸活化蛋白激酶（AMPK）激动剂组（AICAR,200 mg/kg）、牡荆素+AMPK抑制剂组（Compound C,20 mg/kg）,每组各10只。牡荆素组分别按照相应剂量ig;AICAR组ip 200 mg/kg AICAR;牡荆素+Compound C组采取ig 10 mg/kg牡荆素的同时ip 20 mg/kg Compound C,以上各组连续给药21 d。给药结束后测定裸鼠移植瘤体积和质量;苏木素–伊红（HE）染色观察移植瘤组织病理学改变;TUNEL染色检测肿瘤组织细胞凋亡情况;免疫组织化学检测肿瘤组织微管相关蛋白轻链3(LC3)-II、泛素结合蛋白（p62）蛋白表达;免疫荧光检测肿瘤组织LC3-II和半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3(Caspase-3)表达;Western blotting检测肿瘤组织Bcl-2相关X蛋白（Bax）、B淋巴细胞...