hPTTG1基因沉默下调bFGF表达并抑制A2780细胞侵袭的研究

目的：探讨RNAi技术沉默卵巢癌细胞A2780细胞内hPTFG1表达对其侵袭性的影响及调控机制。方法：利用阳离子转染试剂将hPTTG1siRNA转染A2780细胞．荧光实时定量PCR检测hPTTG1及bFGF表达水平;MTT基质黏附实验检测细胞黏附能力;细胞侵袭重建基底膜实验测定细胞体外侵袭能力;划痕实验检测细胞迁移能力;Western blot检测bFGF蛋白表达水平。结果：hPTTG1siRNA转染组hPTTG1mRNA表达下降,抑制率为（76．8±4．1）％;转染hPTTG1siRNA后细胞黏附、侵袭和迁移能力降低;hPTTG1干扰后bFGFmRNA及蛋白表达下降。结论：hPTTG1siRNA能够抑制A2780细胞侵袭,可能是通过下调bFGF表达实现的。     

抑癌基因OVCA1体外对卵巢癌细胞A2780迁移和侵袭的抑制作用

目的:探讨卵巢癌基因1[ovarian cancer gene 1,OVCA1;也称为DPH2L( diphthamide synthesis protein 2-like)基因]体外对卵巢癌细胞系A2780迁移和侵袭能力的抑制作用.方法:采用脂质体法将GFP标记的携带OVCA1的重组质粒pEGFP-OVCA1或GFP空白质粒分别转染A2780细胞后,G418筛选稳定转染细胞,有限稀释法筛选稳定转染细胞的单克隆细胞株,荧光显微镜检查绿色荧光蛋白的表达及RT-PCR方法检测A2780细胞OVCA1基因mRNA的表达.A2780-OVCA1细胞为实验组, A2780-GFP细胞和A2780细胞为对照组,采用划痕实验、Transwell体外迁移实验和Matrigel体外侵袭实验检测OVCA1对A2780细胞迁移和侵袭能力的影响.结果:重组质粒pEGFP-OVCA1转染后获得了稳定表达GFP标记OVCA1蛋白的A2780细胞株.A2780-OVCA1组划痕后的细胞迁移速度明显小于两对照组(P<0.05);A2780-OVCA1组穿过Transwell滤膜的迁移细胞数明显少于两对照组(P<0.05);A2780-OVCA1组穿过Matrigel滤膜的侵袭细胞数明显少于两对照组(P<0.05).结论:OVCA1在体外具有显著抑制卵巢癌A2780细胞迁移和侵袭的作用.     

hPTTG1基因沉默下调bFGF表达并抑制A2780细胞侵袭的研究

目的:探讨RNAi技术沉默卵巢癌细胞A2780细胞内hPTTG1表达对其侵袭性的影响及调控机制。方法:利用阳离子转染试剂将hPTTG1 siRNA转染A2780细胞,荧光实时定量PCR检测hPTTG1及bFGF表达水平;MTT基质黏附实验检测细胞黏附能力;细胞侵袭重建基底膜实验测定细胞体外侵袭能力;划痕实验检测细胞迁移能力;Western blot检测bFGF蛋白表达水平。结果:hPTTG1siRNA转染组hPTTG1mRNA表达下降,抑制率为(76.8±4.1)%;转染hPTTG1siRNA后细胞黏附、侵袭和迁移能力降低;hPTTG1干扰后bFGFmRNA及蛋白表达下降。结论:hPTTG1siRNA能够抑制A2780细胞侵袭,可能是通过下调bFGF表达实现的。     

RNA干扰CTSL表达抑制卵巢癌细胞的侵袭和转移

目的：构建组织蛋白酶L基因(cathepsin L, CTSL)RNAi的真核表达载体,探讨干扰CTSL基因表达对卵巢癌细胞侵袭和转移的影响。方法：设计并合成4对CTSL小干扰RNA(small interfering RNA,siRNA),转染卵巢癌A2780细胞,RT-PCR检测各转染细胞CTSL的表达,筛选沉默效果最好的siRNA序列。设计并合成CTSL-shRNA序列,与psilence4.1-CMV-neo载体连接,构建psilence4.1-CTSL表达载体。psilence4.1-CTSL转染A2780细胞,获得稳定转染克隆A2780-CTSL。RT-PCR和Western blotting验证CTSL基因干扰效果,MTT法和集落形成实验检测A2780细胞的增殖,流式细胞术检测A2780细胞周期,Transwell侵袭小室实验检测A2780细胞体外侵袭和迁移能力。结果：筛选出干扰效果最好的siRNA-CTSL-1202序列,并成功构建相应的CTSL-shRNA表达载体psilence4.1-CTSL。稳定转染psilence4.1-CTSL能沉默A2780细胞中CTSL的表达。沉默CTSL基因后可抑制A2780细胞的侵袭和转移,但不影响A2780细胞的增殖、细胞周期和黏附活性。结论：成功构建CTSL基因siRNA的真核表达载体,RNA干扰CTSL基因表达可抑制卵巢癌细胞的侵袭和转移。     

乙酰肝素酶对卵巢癌细胞侵袭和黏附的影响

目的： 探讨乙酰肝素酶（heparanase,HPSE）在卵巢癌A2780细胞侵袭、转移中的作用。 方法： 构建携HPSE基因真核表达载体pcDNA3.1-HPSE,脂质体法将pcDNA3.1-HPSE和对照pcDNA3.1质粒转染至A2780细胞,G418筛选得稳定细胞株pcDNA3.1-HPSE-A2780和pcDNA3.1-A2780。MTT法和集落形成实验检测转染后A2780细胞的增殖;Matrigel侵袭、Transwell小室和黏附实验检测转染后A2780细胞的侵袭、迁移和黏附能力。 结果： 成功构建pcDNA3.1-HPSE载体,并转染入A2780细胞。pcDNA3.1-HPSE转染不影响A2780细胞的增殖（P＞0.05）,也不影响A2780细胞的迁移能力（P>0.05）。pcDNA3.1-HPSE转染促进A2780细胞的侵袭(0.477±0.024 vs 0.250±0.081,P=0.003),降低其黏附能力（0.728±0.089 vs 0518±0.080,P=0.002)。 结论： HPSE通过促进肿瘤细胞的侵袭和降低黏附,在卵巢上皮癌浸润、转移中发挥重要作用     

miR -542-5p 在浆液性卵巢癌中的表达及意义

目的：检测 miR -542-5p 在浆液性卵巢癌中的表达，并分析 miR -542-5p 的表达与浆液性卵巢癌临床病理特征之间的关系，探讨其意义。方法：采用实时荧光定量 PCR 技术分析100例浆液性卵巢癌组织及50例正常输卵管伞端组织中 miR -542-5p 的表达。结果：浆液性卵巢癌组织中 miR -542-5p 的表达显著低于正常输卵管伞端组织（P ﹤0.05）。miR -542-5p 的表达与浆液性卵巢癌各临床病理特征之间差异均无统计学意义（P ﹥0.05）。结论：miR -542-5p 可能作为抑癌基因参与了浆液性卵巢癌的发生，对于卵巢癌的早期诊断及治疗具有潜在意义。     

Rac1蛋白在人卵巢浆液性腺癌组织中的表达及其对卵巢癌细胞SKOV3迁移能力的影响

目的探讨Rac 1蛋白在人卵巢浆液性腺癌组织中的表达情况及其对卵巢癌细胞SKOV3迁移能力的影响。方法采用蛋白质印迹法(Western blot)检测59例卵巢浆液性腺癌组织、31例卵巢良性浆液性囊腺瘤组织和3 5例卵巢正常组织中Rac 1蛋白的相对表达量。筛选出抑制Rac 1蛋白表达效果最佳的载体,构建稳定转染细胞株SKOV3-Racli;采用细胞划痕实验检测SKOV3-Racli细胞的迁移能力。结果卵巢浆液性腺癌组织中Racl蛋白的相对表达量高于卵巢良性浆液性囊腺瘤组织和卵巢正常组织(P<0.05)。与阴性质粒比较,1号片段质粒的抑制率为12.59%,2号片段质粒的抑制率为56.48%,3号片段质粒的抑制率为73.68%。与野生型SKOV3组相比,SKOV3-Racli细胞组SKOV3-Racli细胞的迁移能力下降(P <0.05)。结论 Rac1蛋白对卵巢浆液性腺癌细胞迁移能力的影响可能与下调卵巢浆液性腺癌组织中Rac 1蛋白的表达有关。     

LINC01503通过miR-342-3p/IGF2R轴促进上皮性卵巢癌的进展

目的：探讨LINC01503 在上皮性卵巢癌（EOC）中的表达水平和生物学功能及其可能的作用机制。方法：收集2015年5月至2016 年5月间在河北医科大学第四医院妇瘤科手术切除并经病理学确诊的85 例EOC患者的肿瘤组织和输卵管组织。常规培养人EOC 细胞A2780、SKOV3、OVCAR3 和OV90 及正常人卵巢上皮细胞IOSE80，将si-LINC01503、si-NC 及miR-342-3p mimic、miR mimic NC分别转染至SKOV3和A2780 细胞，分别作为si-LINC01503 组、si-NC 组、miR-342-3p mimic 组和miR mimic NC组。qPCR 法检测EOC组织和细胞中LINC01503 的表达水平，Kaplan-Meier 法分析LINC01503 表达水平与患者生存的关系。双荧光素酶报告基因实验验证LINC01503/miR-342-3p/IGF2R轴相关分子间的靶向关系。平板克隆、划痕愈合和Transwell 实验分别检测敲低LINC01503 及转染miR-342-3p mimic 对A2780 和SKOV3细胞增殖、迁移和侵袭能力的影响。WB法检测EOC细胞中LINC01503/miR-342-3p 通路对IGF2R蛋白表达的影响。构建A2780 细胞裸鼠移植瘤模型，观察敲低LINC01503 对移植瘤生长的影响。结果：EOC组织和细胞中LINC01503 表达水平分别显著高于输卵管组织和IOSE80 细胞（均P<0.01），LINC01503高表达组患者术后PFS 和OS 均显著短于LINC01503 低表达组患者（均P<0.01）。敲低LINC01503、转染miR-342-3p mimic 均可抑制EOC 细胞的增殖、迁移和侵袭能力（均P<0.01）。敲低LINC01503 可下调IGF2R的表达（P<0.01），这一现象可通过转染miR-342-3p inhibitor 挽救。敲低LINC01503 可抑制A2780 细胞裸鼠移植瘤的生长（P<0.01）。结论：在EOC 组织和细胞中呈高表达的LINC01503，与患者的不良预后密切相关，LINC01503可能通过吸附miR-342-3p影响IGF2R表达进而促进EOC的进展。     

piR-hsa-130912促进上皮性卵巢癌细胞增殖、侵袭与迁移及其作用机制

目的 探讨piR-hsa-130912对上皮性卵巢癌（epithelial ovarian cancer, EOC）细胞增殖、侵袭及迁移的调控作用及其分子机制。方法 通过对EOC组织进行BGISEQ UMI Small RNA测序以及RT-qPCR检测,鉴定出piR-hsa-130912。用LV-piR-hsa-130912-up、piR-hsa-130912-inhibitor及相应阴性对照慢病毒感染EOC细胞A2780和SKOV3以干扰piR-hsa-130912表达水平,采用CCK-8、平板克隆实验检测细胞的增殖能力,Transwell侵袭、迁移实验及划痕实验检测细胞的侵袭及迁移能力,Western blot检测肿瘤转移相关蛋白zeb-1、E-cadherin以及vimentin的表达水平。结合RNA测序、GSEA分析、KEGG及GO分析初步探索piR-hsa-130912调控EOC细胞增殖、侵袭及迁移的作用机制。结果 BGISEQ UMI Small RNA测序和RT-qPCR验证结果显示,piR-hsa-130912在EOC组织中高表达。与相应阴性对照组比较,过表达piR-h...     

外源性AKT1增强上皮性卵巢癌细胞侵袭和迁移能力的机制

探讨AKT1基因对上皮性卵巢癌SKOV3细胞迁移和侵袭能力的影响及相关分子机制。方法 针对AKT1基因,设计并构建shRNA质粒和真核表达质粒,双向调节SKOV3细胞中AKT1的表达,运用RT-PCR和western blot检测转染效率。运用Wound healing和Transwell-Matrigel方法检测转染前后细胞迁移和侵袭能力的变化。RT-PCR法检测与细胞运动侵袭相关分子CXCR4、VEGF、MMP-2、MMP-9和uPA在mRNA水平的表达变化。结果 成功构建AKT1基因的真核表达质粒pEF-1α-AKT1和靶向抑制AKT1基因的shRNA表达质粒pRNAT-AKT1。转染上皮性卵巢癌SKOV3细胞后,能有效调控p-AKT表达。参照未转染组和空载体转染组,外源性AKT1促进细胞迁移和侵袭,CXCR4、VEGF、MMP-2和uPA的mRNA表达水平升高。shRNA靶向抑制AKT1基因的表达可抑制细胞迁移和侵袭,CXCR4、VEGF、MMP-2和uPA的mRNA表达水平下降。结论 AKT1可能通过调控CXCR4、VEGF、MMP-2和uPA的转录水平来影响细胞侵袭和运动能力。     

DUSP10和 BZW1在卵巢浆液性肿瘤中的表达及临床意义

目的：检测双特异性磷酸酶10（dual specificity phosphatase 10,DUSP10）和碱性亮氨酸拉链蛋白BZW1抗体（basic leucine zipper and W2 domain containing protein 1,BZW1）分子在卵巢浆液性肿瘤中的表达情况,结合临床分期和病理分化结果,初步探讨它们在卵巢浆液性腺癌发生、发展中可能起到的作用。方法：采用免疫组化（EnVision 法）检测卵巢上皮性肿瘤（良、恶性肿瘤）和人正常输卵管组织中 DUSP10和 BZW1分子的表达以及定位情况。结果：检测结果表明 DUSP10和 BZW1分子在人卵巢上皮性良、恶性肿瘤和人正常输卵管组织中均有表达,DUSP10在卵巢浆液性腺癌、卵巢浆液性腺瘤和正常输卵管组织中的阳性表达率分别为94.5%、86.9%和100%（P <0.01）。在卵巢浆液性腺癌中,DUSP10阳性表达率临床晚期高于早期（97.1% vs 92.1%,P <0.01）;在高分化、中分化和低分化中的阳性率分别为100%、85.7%和96.9%（P<0.01）。而 BZW1在这三种组织中的阳性表达率分别为57.5%、47.8%和77.7%（P <0.01）。在腺癌组织中,BZW1阳性表达率临床晚期低于早期（48.6% vs 65.8%,P <0.01）;在高分化、中分化和低分化中的阳性率分别为47.4%、52.4%和66.7%（P <0.01）。结论：DUSP10在卵巢浆液性腺癌临床分期的早期阳性表达率低于晚期,表达差异显著,说明 DUSP10在卵巢癌的发生过程中起到了一定作用;同样,BZW1在卵巢浆液性腺癌病理分级中的阳性表达率随着组织恶性程度的增加而增高,说明 BZW1在卵巢浆液性腺癌中起到了类似癌基因的作用。     

桥接整合因子1在上皮性卵巢癌组织和细胞中的表达及其临床意义

目的:探讨桥接整合因子1 (BIN1)在上皮性卵巢癌(EOC)组织中的表达及其临床意义,以及BIN1对EOC细胞A2780增殖、迁移和侵袭的影响.方法:收集2017年7月至2018年1月河北医科大学第四医院手术切除的67例EOC患者的肿瘤组织及同期因其他妇科疾病手术切除的30例非肿瘤患者的卵巢组织(正常对照组)标本.用...     

C17orf76-AS1在卵巢上皮癌中的表达及其对卵巢上皮癌细胞SKOV3生物学功能的影响

目的 检测C17orf76-AS1在正常卵巢上皮细胞与卵巢上皮癌细胞系中的表达情况并探讨C17orf76-AS1过表达对卵巢上皮癌细胞系SKOV3生物学功能的影响。方法 通过定量PCR（QPCR）方法检测C17orf76-AS1在在卵巢上皮细胞IOSE80及不同卵巢上皮癌细胞系（A2780、SKOV3、OVCAR3、HO-8910和HO-8910PM）中的表达。在pcDNA3.1基础上构建C17orf76-AS1过表达质粒并采用Lipo2000瞬时转染SKOV3细胞,QPCR检测SKOV3细胞中C17orf76-AS1的过表达效率;CCK-8实验检测C17orf76-AS1过表达对SKOV3细胞增殖的影响;Transwell法和划痕实验检测C17orf76-AS1过表达对SKOV3细胞侵袭迁移能力的影响。结果 与正常卵巢上皮细胞IOSE80比较,C17orf76-AS1在A2780、SKOV3、 OVCAR3、HO-8910及HO-8910PM细胞中均呈低表达,分别下降了0.36、0.30、0.46、0.32、0.31倍（P＜0.05）。在SKOV3细胞中过表达C17orf76-AS1,CCK-8结果显示C17orf76-AS1过表达48 h后,SKOV3的增殖能力显著下降了约1.5倍;Transwell结果显示SKOV3细胞迁移能力下降约1.3倍,划痕实验也同样证实过表达C17orf76-AS1后,SKOV3细胞愈合能力显著低于对照组（P＜0.05）。结论 C17orf76-AS1在卵巢上皮癌细胞中异常低表达,其过表达显著降低了卵巢癌细胞增殖和迁移能力。     

角鲨烯环氧化酶对卵巢癌细胞生物学行为的影响及其机制探讨

目的:观察角鲨烯环氧化酶（squalene epoxidase,SQLE）对卵巢癌细胞增殖、迁移、侵袭和凋亡的影响,并从上皮间质转化(epithelial mesenchymal transformation,EMT)方向探究其可能的机制。方法:通过搜索GEPIA和Western blotting、qRT-PCR确定SQLE是否存在差异表达;Kaplan-Meier Plotter在线网站评估SQLE与卵巢癌预后的关系;构建稳定敲减SQLE的A2780细胞株和稳定过表达SQLE的ES-2细胞株,Western blotting、qRT-PCR检测敲减和过表达效率;MTT和集落克隆实验、划痕实验及Transwell小室分别用于检测细胞增殖、迁移及侵袭能力的变化;流式细胞术检测凋亡变化;Western blotting检测Ki67、EMT、凋亡、Wnt/β-catenin信号通路相关蛋白的表达。结果:SQLE在卵巢癌组织和细胞中表达水平明显高于正常卵巢组织和细胞(P＜0.05);SQLE表达水平与卵巢癌预后明显相关(P＜0.05);敲减SQLE后细胞增殖、迁移及侵袭能力减弱(P＜0.05)、细胞凋亡增加(P＜0.05),并导致Ki67、EMT、凋亡以及Wnt/β-catenin信号通路相关蛋白的变化(P＜0.05),过表达SQLE时趋势则相反;XAV-939可逆转过表达SQLE的ES-2细胞中相关蛋白表达水平的变化。结论:SQLE可能通过激活Wnt/β-catenin信号通路增强卵巢癌细胞的增殖、迁移及侵袭能力,抑制其凋亡,并促进上皮间质转化。     

盆腔浆液性腺癌输卵管伞端的病理特征

目的 研究盆腔浆液性腺癌合并的输卵管伞端病变病理特点,探讨其在浆液性腺癌发生中的意义.方法 观察43例盆腔浆液性腺癌(31例卵巢癌,12例腹膜癌)的输卵管伞端病理形态,对其中40例(69条输卵管)进行p53免疫组化染色.结果 43例盆腔浆液性腺癌中,31例(44条输卵管)合并伞端癌,14条癌灶≤5 mm,癌累及黏膜达68.3%;20例(28条输卵管)有伞端黏膜上皮内癌.44条伴有伞端癌的输卵管中,23条大体表现为伞端粘连与伞不清.伞端早期病变镜下表现为局部分泌细胞增多,上皮细胞具有一致性,黏膜皱襞走行变直,71.4%伞端上皮内癌黏膜皱襞间散落有明显异型的肿瘤性上皮蕾或单个腺体.伞端癌的p53阳性表达率为86.4%,上皮内癌为60.7%.结论 输卵管伞端癌是盆腔浆液性腺癌的重要组成部分,伞端上皮内癌在盆腔浆液性腺癌中十分常见,伞端是盆腔浆液性腺癌的重要起源地.

Abstract：

Objective To study the serous lesions of the fimbria of the fallopian tube in patients with pelvic serous adenocarcinoma and investigate its significance in the serous carcinogenesis.Methods To observe the morphological features of the fimbria of the fallopian tube in 43 cases of pelvic serous adenocarcinoma (31 cases of ovarian carcinoma and 12 cases of peritoneal carcinoma).Immunohistochemical examination of p53 expression was performed on samples of 69 fallopian robes of 40 cases.Results Fimbria carcinoma was identified in 44 tubes in 31 of 43 cases.Fourteen of the carcinoma foci were ≤5 mm.In 68.3% of the fimbria carcinomas demonstrated involvement of the mucosa.Twenty eight tubes of 20 cases exhibited intraepithelial carcinoma.Twenty three of 44 tubes of the fibria carcinomas showed fimbria adherence and unclear appearance.The early histological changes of the fimbria epithelium included proliferation of local secretory cells, homogeneity, and straightening of the mucous folds.Clusters of tumor epithelial cells or single gland with atypical features floated between mucosal folds were found in 71.4% of the fimbria with intraepithelial carcinoma.The positive expression rate of p53 in the fimbria carcinomas and the fimbria intraepithelial carcinomas were 86.4% and 60.7%, respectively.Conclusions Fimbria carcinomas is an important component in pelvic serous adenocarcinomas.The fimbria intraepithelial carcinoma is also very common among the cases of pelvic serous adenocarcinoma.The fimbria may be an important primary site of pelvic serous adenocarcinomas.     

miR-19b对卵巢癌细胞侵袭和迁移的作用探讨

目的:探讨微小RNA-19b（microRNA-19b,miR-19b）在卵巢癌细胞侵袭和迁移中的作用机制。方法:应用qRT-PCR方法检测正常卵巢组织、卵巢癌组织及卵巢癌细胞系(SKOV-3、OVCAR-3)中miR-19b的表达情况。将miR-19b抑制剂或阴性对照寡核苷酸转染到OVCAR-3细胞中,Transwell实验检测miR-19b的表达对卵巢癌细胞侵袭和迁移能力的影响。免疫印迹分析（Western blot）技术检测miR-19b对第10号染色体缺失的磷酸酶和张力蛋白基因（phosphatase and tensin homolog deleted on chromosome ten,PTEN）的表达及对PTEN/AKT信号通路相关蛋白表达水平的影响。双报告基因实验用于检测miR-19b与PTEN的 3’-UTR区之间的相互作用。结果:与正常卵巢组织比较,卵巢癌组织及卵巢癌细胞系 SKOV-3和OVCAR-3中miR-19b高表达,其相对表达水平分别为3.56±0.68、3.01±0.02、3.78±0.04（P均<0.05）。Transwell 实验表明,抑制miR-19b 的表达可降低OVCAR-3细胞的侵袭和迁移能力。上调miR-19b的表达可抑制OVCAR-3细胞中PTEN蛋白的表达水平,并使磷酸化的AKT蛋白的表达水平显著升高。双报告基因检测结果显示,与对照组相比,miR-19b可与PTEN的3’-UTR区结合使其重组载体的荧光素酶活性下降。结论:miR-19b在卵巢癌细胞中存在异常高表达,可促进卵巢癌细胞的侵袭和迁移能力,有望作为卵巢癌患者潜在的生物标志物和治疗靶点。     

第10号染色体上磷酸酶和张力蛋白同源缺失的基因对人卵巢癌A2780细胞侵袭和迁移能力的影响及相关机制

目的 探讨第10号染色体上磷酸酶和张力蛋白同源缺失的基因(PTEN)对人卵巢癌A2780细胞侵袭和迁移能力的影响及相关机制.方法 将携带外源性人PTEN基因的野生型质粒(WT-PTEN)和磷酸酶域突变型质粒(C124A-PTEN)转入人卵巢癌细胞株A2780中,利用Transwell小室法和划痕愈合实验检测转染前后细胞侵袭和迁移能力的变化,应用Western blot检测各组细胞PTEN及其下游相关蛋白表达的变化.以空载体质粒和未转染细胞作为对照.结果 细胞侵袭实验显示,WT-PTEN/A2780、C124A-PTEN/A2780、GFP/A2780和A2780细胞穿透Matrigel胶的细胞数,分别为(24.3±2.5)个、(43.7±3.8)个、(44.7±2.1)个和(45.0±3.0)个,WT-PTEN/A2780细胞的穿膜数明显少于其他各组(P＜0.05).划痕愈合实验显示,WT-PTEN/A2780、C124A-PTEN/A2780、GFP/A2780和A2780细胞的迁移距离分别为(54.1±3.7)μm、(78.7±3.4)μm、(78.1±3.1)μm和(76.8±3.5)μm,WT-PTEN/A2780细胞的迁移速度明显慢于C124A-PTEN/A2780、GFP/A2780和A2780细胞(P＜0.05).WT-PTEN/A2780细胞中基质金属蛋白酶9(MMP-9)蛋白的表达明显低于C124A-PTEN/A2780、GFP/A2780和A2780细胞(P＜0.05).结论 野生型PTEN可有效抑制A2780细胞的侵袭和迁移,该抑制作用与A2780细胞中MMP-9表达下调有关.

Abstract：

Objectiye To evaluate the effects of PTEN on invasive and migration ability of human ovarian cancer cell line A2780 and related mechanisms. Methods The plasmid including WT-PTEN and mutant PTEN were transferred into A2780 cells. The invasive and migration ability were measured before and after transfection by transwell chamber and wound-healing assays. The expression of PTEN protein and related proteins in the cells were detected by Western blot analysis. Empty plasmid-transfected A2780 and normal A2780 cells were used as control (the different four groups were named as WT-PTEN/A2780,C124A-PTEN/A2780, GFP/A2780 and A2780 ). Results The number of penetrating cells was significantly less in WT-PTEN/A2780 cells(24.3 ± 2.5 ) than those in C124A-PTEN/A2780, GFP/A2780 and A2780 cells (43.7 ± 3.8, 44.7 ± 2. 1 and 45.0 ± 3.0 ) ( P ＜ 0.05 ). The migration distance was markedly shorter in WT-PTEN/A2780 cells (54.1 ± 3.7) than those in C124A-PTEN/A2780, GFP/A2780 and A2780 cells (78.7 ± 3.4, 78.1 ± 3.1 and 76.8 ± 3.5 ) ( P ＜ 0. 05 ). Conclusions Transfection with PTEN may suppress the invasive and migration ability of ovarian cancer cell line A2780 depending on its phosphatase activity, and the suppressive effect may be due to the down-regulation of MMP-9 in the cancer cells.     

RIP1蛋白在卵巢癌中的表达及其对卵巢癌细胞增殖和化疗敏感性的影响

目的:探讨RIP1对卵巢癌细胞增殖和化疗敏感性的影响。方法:通过实时定量PCR法检测RIP1在卵巢癌组织和癌旁组织中的表达;免疫组化方法分析卵巢癌组织和癌旁组织中RIP1蛋白的表达;实时定量PCR法以及Western blot法检测卵巢上皮细胞及卵巢癌细胞中RIP1的表达;通过在SKOV3卵巢癌细胞中敲除RIP1蛋白及在A2780卵巢癌细胞中过表达RIP1蛋白,采用MTT法检测其增殖能力的改变,并联合克隆形成法考察细胞对顺铂敏感性的变化。结果:相比于癌旁组织以及卵巢上皮细胞,RIP1在人卵巢癌组织和卵巢癌细胞中表达有不同程度升高,其中在SKOV3细胞中升高最为显著（P＜0.01）,在A2780细胞中不显著（P＞0.05）;在SKOV3细胞中敲除RIP1,96 h后细胞增殖能力明显降低（P＜0.01）;同时,在A2780细胞株中过表达RIP1,72 h后细胞增殖能力明显升高（P＜0.05）。RIP1敲除后,顺铂对SKOV3细胞的杀伤作用明显升高（P＜0.05）,同时顺铂的IC50降低;RIP1过表达后,顺铂对A2780细胞的杀伤作用明显降低（P＜0.05）,同时顺铂的IC50升高。结论:RIP1作为一种癌基因,能够促进肿瘤细胞的增殖,并降低肿瘤细胞对化疗药物的敏感性。