促胰素对大鼠胰岛细胞增殖及功能的影响

背景：有研究报道,促进胰岛β细胞增殖分化和再生是2型糖尿病患者一种潜在的治疗方案。 目的：观察促胰素对体外培养大鼠胰岛细胞增殖及功能的影响。 方法：采用胶原酶消化和组织培养法分离纯化大鼠胰岛细胞,检测其纯度和活性,将胰岛细胞分为空白对照组和实验组,空白对照组加入普通培养基,实验组培养基中加入不同质量浓度(100,200,300,400 mg/L)促胰素,培养1,3,5 d后CCK-8法检测细胞增殖活性;培养5 d后行低糖和高糖刺激胰岛素释放实验。 结果与结论：随着促胰素质量浓度的增高,胰岛细胞增殖活性呈剂量依赖性增加(P < 0.05),但无明显时间依赖性。除100,200 mg/L组外,300,400 mg/L两组胰岛素分泌量均显著高于空白对照组(P < 0.05)。表明300,400 mg/L促胰素不仅可促进胰岛细胞增殖,而且可显著增强胰岛细胞分泌胰岛素的功能。 关键词：促胰素;胰岛细胞;增殖;胰岛功能;胰岛分离;纯化 doi:10.3969/j.issn.1673-8225.2012.05.027     

Exendin-4对不同热缺血时间心死亡供体大鼠胰岛功能的影响

背景：心死亡供体大鼠供胰的利用不可避免地经过热缺血损伤,因此热缺血时间的长短对获得的胰岛数量及功能有重要影响。 目的：观察Exendin-4对不同热缺血时间心死亡供体大鼠胰岛功能的影响。 方法：大鼠胰岛细胞体外培养,根据实验条件随机分为3大组：热缺血0,30和45 min组,每组又分为2亚组,其中对照组为胰岛细胞培养24 h;实验组为10 nmol/L Exendin-4与胰岛细胞培养24 h。应用双硫踪染色来计算分离胰岛数目并判断所提胰岛的纯度;丫啶橙/溴乙啶染色检测胰岛存活,胰岛素释放实验检测胰岛功能。 结果与结论：随着热缺血时间的延长各组获得胰岛细胞的数量、纯度、存活率及功能逐渐降低。热缺血0 min组、30 min组、45 min组加入10 nmol/L Exendin-4培养24 h后分离、纯化的胰岛数量及纯度、活性均比未加入Exendin-4培养的对照组有所提高,热缺血30 min及热缺血45 min组中的实验组与对照组相比差异均有显著性意义(P < 0.05)。提示Exendin-4对不同热缺血时间心死亡供体大鼠胰岛细胞具有保护作用,能减少胰岛细胞凋亡,改善胰岛的存活与功能;Exendin-4的使用可能成为胰岛移植早期缺血的边缘供体预处理的有效方法。 中国组织工程研究杂志出版内容重点：肾移植;肝移植;移植;心脏移植;组织移植;皮肤移植;皮瓣移植;血管移植;器官移植;组织工程全文链接：     

成年大鼠胰岛细胞的体外培养

目的： 建立一种高效、实用的成年大鼠胰岛细胞分离、纯化和体外培养的方法。方法：采用胰管内逆行灌注胶原酶溶液消化,密度梯度离心纯化胰岛,显微镜下手挑法捡出全部胰岛。分离后胰岛置胶原中培养，利用RT-PCR检测胰岛细胞特异基因的表达。结果：分离的胰岛细胞呈圆形或椭圆形，双硫腙染色呈猩红色，在胶原中培养能保持形态完整，表达胰岛细胞特异性基因PDX-1和insulin。 结论：本胰岛分离技术已趋于完善,获得的胰岛纯度高，培养效果好。     

诱导型一氧化氮合酶对大鼠胰岛细胞凋亡的影响

目的:探讨细胞因子和诱导型一氧化氮合酶(iN-OS)对体外培养的大鼠胰岛细胞凋亡和功能的影响及其机制。方法:大鼠胰岛细胞体外培养,随机分组,培养液中分别加入细胞因子IL-1β、TNF-α和/或iNOS抑制剂氨基胍,分为空白对照组、细胞因子组、氨基胍组、氨基胍+细胞因子组。检测指标包括:培养液NO水平和组织iNOS、结构型NOS活性,RT-PCR检测胰岛组织中iNOS基因和凋亡相关基因Bax、Bcl-2的表达情况,AO/EB染色检测胰岛存活,胰岛素释放实验检测胰岛功能。结果:与细胞因子IL-1β和TNF-α共同培养后,大鼠胰岛组织中iNOS的表达增强,活性显著提高(38.93±4.72)U/mL,NO水平上升(313.0±35.4)mol/L,而结构型NOS没有变化;同时胰岛促凋亡基因表达上调,抗凋亡基因表达下降,细胞的存活率下降,胰岛素分泌大大减少。加入氨基胍后,随着胰岛组织中iNOS的活性明显受到抑制,胰岛的凋亡程度减轻,存活和胰岛素分泌情况都明显改善。结论:iNOS在细胞因子诱导的胰岛细胞凋亡中起到十分关键的作用,而氨基胍通过抑制iNOS活性,减轻了细胞因子的损害,降低了胰岛凋亡水平,改善胰岛的存活与功能。     

比伐卢定对大鼠胰岛细胞凋亡的影响

目的探讨比伐卢定（直接凝血酶抑制剂）在大鼠胰岛分离过程中保护胰岛细胞的作用。方法将SD大鼠分为比伐卢定处理组和对照组,处理组在胰岛分离全过程中加用比伐卢定进行干预,对照组则不加比伐卢定处理,采用Ficoll非连续密度离心纯化后对两组胰岛细胞的凋亡（采用原位末端核苷酸标记法及流式细胞仪检测）、胰岛产量及活力方面进行比较性研究。结果比伐卢定5000U处理组的胰岛细胞凋亡计数（5±4）个/HPF、凋亡率（16.5±3.6）%、Fas-l基因表达水平（4.6±1.9）%均显著低于对照组（P〈0.01）,胰岛产量（315.3±6.1）IEQ、胰岛素释放水平（179.11±2.18）mIU/L和Bcl-2基因表达水平（10.5±1.2）%均显著高于对照组（P〈0.01）,差异有统计学意义。结论胰岛分离过程中加用比伐卢定对胰岛具有抑制凋亡、提高胰岛产量和保护胰岛活力的作用。     

成骨细胞旁分泌影响软骨细胞中MMPs与TIMPs的表达

背景：细胞之间体外共培养能最大限度的模拟体内真实的微环境,细胞划痕实验及炎症因子白细胞介素1β刺激后基质金属蛋白酶及基质金属蛋白酶抑制剂之间的平衡可能破坏,从而导致关节软骨细胞外基质的降解,软骨细胞功能的失调,关节软骨的退变。目的：在成骨细胞上清液与软骨细胞体外共培养下,观察炎症因子白细胞介素1β对体外培养的软骨细胞的迁移、基质金属蛋白酶及组织金属蛋白酶抑制剂表达的影响。方法：实验分为软骨细胞单培养组﹑软骨细胞与成骨细胞上清液共培养组和软骨细胞与成骨细胞上清液共培养+白细胞介素1β组,划痕实验观察3组24 h软骨细胞的迁移变化;半定量PCR实验分析以上3组24 h软骨细胞中基质金属蛋白酶1,2,3,9及组织金属蛋白酶抑制剂1,2,3,4的变化情况。结果与结论：与单培养组比较,共培养组和共培养+白细胞介素1β组细胞迁移率显著增加(P < 0.01);与单培养组比较,共培养组中基质金属蛋白酶1,2,3,9基因表达明显增高(P < 0.05),共培养+白细胞介素1β组基质金属蛋白酶1,3,9基因表达明显增高(P < 0.01);与单培养组比较,共培养组和共培养+白细胞介素1β组中组织金属蛋白酶抑制剂1基因表达明显升高(P < 0.01),组织金属蛋白酶抑制剂3,4基因表达明显下降(P < 0.05)。提示成骨细胞上清液与软骨细胞共培养促进软骨细胞的迁移,增强软骨细胞中基质金属蛋白酶1,2,3,9的基因表达且调节组织金属蛋白酶抑制剂家族的基因表达。白细胞介素1β抑制共培养的软骨细胞迁移及组织金属蛋白酶抑制剂家族的基因表达。        中国组织工程研究杂志出版内容重点：组织构建;骨细胞;软骨细胞;细胞培养;成纤维细胞;血管内皮细胞;骨质疏松;组织工程     

Caspase抑制剂研究进展

细胞凋亡与许多疾病密切相关.半胱氨酸酶-Caspase家族是细胞凋亡过程能够有效地抑制Caspase的活性,阻止细胞凋亡.来源于病毒的CrmA,p35以及内源性的IAP分子能够抑制多种Caspase的活性,但缺乏特异性;而人工合成的针对不同Caspase底物结合区的多肽抑制剂则可特异地抑制相应的Caspase.这些新抑制剂的发现及研制将对攻克凋亡相关疾病起重要作用.     

Wistar大鼠胰岛细胞体外分离、纯化及鉴定

目的 探索Wistar大鼠胰岛分离纯化的最佳条件.方法 采用肝胰管内灌注胶原酶消化分离胰岛及Ficoll 400密度梯度离心纯化.纯化后的胰岛经组织学染色、电镜及放射免疫法鉴定其特异性和活力.结果 组织学染色显示纯化后胰岛的活力和纯度分别在95%和85%以上.电镜显示纯化后的胰岛形态完整,包膜清晰,分泌颗粒丰富.放射免疫结果表明,低糖组和高糖组分泌胰岛素的浓度有显著差异,证明胰岛功能良好.结论 肝胰管内灌注胶原酶消化法是一种好的消化方法.影响胰岛收获量的因素很多,例如胰腺的充分扩张,胶原酶的浓度和活性以及消化的时间等.     

微囊化大鼠胰岛细胞移植治疗糖尿病小鼠的实验研究

观察微囊化和未囊化大鼠胰岛细胞移植治疗糖尿病小鼠的疗效。选用SD大鼠经胆总管原位灌注胶原酶液,分离消化胰腺组织,用淋巴细胞分离液(Histopaque-1077)纯化胰岛细胞,将微囊化和未囊化大鼠胰岛细胞移植于糖尿病小鼠腹腔。分离的胰岛细胞对刺激反应良好,微囊化和未囊化胰岛细胞移植后均可纠正糖尿病小鼠的高血糖状态,但未囊化胰岛细胞移植组只能维持血糖正常2~3d,而微囊化胰岛细胞移植组可持续降低血糖30d以上。微囊化胰岛细胞移植治疗糖尿病小鼠具有良好的效果,微囊具有较好的免疫隔离作用。     

成人睾丸支持细胞分离方法的建立及在胰岛移植中的应用

目的:建立成人睾丸支持细胞简便高效分离方法,并应用于胰岛移植。方法:A组采用胰蛋白酶、DNA酶、胶原酶、透明质酸酶一步消化法;B组采用胰蛋白酶和DNA酶第一步消化,胶原酶和透明质酸酶第二步消化;C组采用胰蛋白酶和DNA酶第一步消化,透明质酸酶第二步消化,胶原酶第三步消化。采用形态学观察和免疫组化鉴定支持细胞;MTT法和流式细胞术(FCM)测定3组支持细胞的活性和纯度;Western blot检测3组支持细胞Fas-L的表达;比较3组支持细胞与胰岛共移植至糖尿病鼠的效果。结果:经鉴定,分离的细胞具有支持细胞的特征;方法A和B分离的支持细胞数量较多,方法B和C分离的支持细胞杂质较少;MTT法检测结果显示,B组支持细胞活性显著高于A组和C组(P0.05);Western blot结果显示,B组支持细胞Fas-L的表达水平显著高于A组和C组(P0.05);FCM检测3种方法分离的S支持细胞纯度分别为(85.2±1.8)%、(92.3±2.5)%、(93.1±2.6)%,B组和C组的支持细胞纯度显著高于A组(P0.05);将3组支持细胞与胰岛共移植至糖尿病鼠模型肾包膜下,B组胰岛移植物存活时间显著高于单独胰岛移植组和A、C两组(P0.05)。结论:采用两步消化法能够获得纯度和活性较高的支持细胞,其与胰岛共移植能够显著延长移植物存活。     

酶消化法和组织块法培养心肌干细胞的比较

BACKGROUND:At present, various methods of extracting cardiac stem cells have been reported in China, but the processes of isolation, culture and purification are not yet standardized. OBJECTIVE: To explore the difference in the culture of rat cardiac stem cells using enzyme digestion method and tissue block method. METHODS:Cardiac stem cells from Sprague-Dawley rats, clean grade, 1 day of age, were extracted and cultured in vitro using the enzyme digestion method (control group) or tissue block method (experimental group). RESULTS AND CONCLUSION: Both of the two methods could produce cardiac stem cells, but the proportion of cultured cells in the experimental group was significantly higher than that in the control group, indicating the tissue block method is superior to the enzyme digestion method in the culture of cardiac stem cells.     

Prevention of oxidative stress in porcine islet isolation

High yields of pure and viable porcine islet cells (PICs) to be used for microencapsulation are crucial for successful xenotransplantation. Mechanical disruption of the pancreas, enzymes used for digestion, digestion temperature and time are among the factors known to cause oxidative stress and to impact on the yield, purity and viability of PICs. The aim of our study was to optimize conventional procedures in order to minimize the oxidative stress that occurs during the isolation and purification of PICs. Porcine pancreatic tissue was harvested at a local slaughterhouse, and 15 consecutive isolations of PICs were performed with a modified automated Ricordi method (Graz method) using a shorter digestion time, a lower digestion temperature and minimal mechanical stress. PICs were purified with the Lymphoprep density gradient medium. Purity and viability were assessed immediately after the isolation process and after overnight culture. PIC function was tested in glucose stimulation experiments and insulin concentration was determined by ELISA. Oxidative stress was assessed by measuring isoprostanes (IP), malondialdehyde (MDA) and lipase levels using a HPLC-based, colorimetric liquid assay or ELISA, respectively. The mean yield of PICs was 3479 ± 542 IEQs/g pancreas, with 96.4% viability and 97.7% purity. There was no significant loss in PIC viability after overnight culture. Insulin secretion in response to glucose was not impaired after isolation and purification. IP, MDA and lipase levels did not change significantly during the isolation procedure. With our new Graz method we seem to have succeeded in preventing oxidative stress and achieving high yields of pure and viable PICs.     

骨形态发生蛋白7通过PI3K/Akt通路可抑制人髓核细胞的凋亡

背景：骨形态发生蛋白7可促进人髓核细胞的细胞外基质合成,减缓椎间盘退变。近年来,有学者提出其可能通过对抗髓核细胞凋亡从而发挥上述作用,但其进一步的分子机制一直未被详细阐明。 目的：观察骨形态发生蛋白7对无血清诱导下发生凋亡的人髓核细胞产生的作用及其对PI3K/Akt通路的影响,分析并探讨骨形态发生蛋白7抑制人髓核细胞凋亡的分子机制。 方法：通过改良Pfirrmann分级及相关条件选取12例患者获取椎间盘组织,采用酶消化法获取人髓核细胞后分组实验,以含体积分数15%胎牛血清的培养基正常培养的髓核细胞设为空白组;使用无血清培养基培养   48 h诱导凋亡作为阳性对照组;在无血清条件下,通过加入不同剂量的骨形态发生蛋白7以及同时添加PI3K/Akt通路拮抗剂LY294002形成处理组和拮抗组。使用流式细胞术检测各组细胞凋亡率;免疫荧光观察p-Akt表达;蛋白印迹法检测Akt,p-Akt,BAD和Caspase 9等通路蛋白的表达变化。 结果与结论：无血清凋亡诱导下,流式细胞术结果显示,随着骨形态发生蛋白7处理浓度上升,髓核细胞凋亡率明显下降,加入LY294002共同作用后细胞凋亡率再次升高(P < 0.05)。p-Akt免疫荧光和蛋白印迹法检测结果进一步表明,与凋亡阳性对照组相比,加入骨形态发生蛋白7的实验组中,p-Akt表达明显增加,其下游凋亡相关蛋白BAD、Caspase 9蛋白表达减少(P < 0.05),而在同时加入Akt通路拮抗剂LY294002后,p-Akt蛋白表达下降而凋亡相关蛋白的表达又恢复到相对较高的水平(P < 0.05)。结果证明,骨形态发生蛋白7在无血清诱导的人类髓核细胞凋亡中通过激活PI3K/Akt通路,拮抗了BAD-Caspase 9相关的细胞凋亡过程,抑制了髓核细胞的退变。 中国组织工程研究杂志出版内容重点：组织构建;骨细胞;软骨细胞;细胞培养;成纤维细胞;血管内皮细胞;骨质疏松;组织工程全文链接：     

克隆筛选纯化在大鼠脂肪源性干细胞原代培养中的作用

背景：研究中发现从成体的脂肪组织中可以分离出一种间质干细胞,即脂肪源性干细胞,但传统的分离方法仍存在一些问题需要改进。 目的：在脂肪源性干细胞传统的分离方法的基础上进行改进,克隆筛选纯化脂肪源性干细胞。 方法：消化离心法分离Lewis大鼠脂肪源性干细胞,有限密度稀释法克隆化及条件培养基筛选,进行原代培养,以克隆筛选的脂肪源性干细胞为实验组,未克隆筛选的脂肪源性干细胞为对照组,观察细胞形态,对比生长曲线、倍增时间,流式细胞仪鉴定脂肪源性干细胞表面标记CD49d、CD29、CD44。 结果与结论：经克隆筛选的脂肪源性干细胞与未经克隆筛选的脂肪源性干细胞相比,前者形态均一,生长力旺盛,倍增时间短,多代培养后生长曲线无明显改变,通过流式细胞仪鉴定,实验组与对照组在3~6代之间均表达表面标记CD49d、CD29、CD44。结果证实克隆筛选的纯化方法是脂肪源性干细胞原代培养的有效、经济的纯化方法。     

SARI基因促进急性髓性白血病细胞凋亡机制的探讨

目的：通过慢病毒载体过表达SARI（Suppressor of AP-1,regulated by IFN）基因,探讨SARI基因促进急性髓性白血病（Acute myeloid leukemia,AML）细胞凋亡的分子机制。方法：构建SARI基因过表达的慢病毒载体,感染AML细胞HL-60和NB4,应用实时荧光定量PCR和Western blot对感染后细胞进行过表达的鉴定。两株AML细胞均设空白对照组（CON组）、空载体对照组（NC组）及SARI组,应用Western blot检测SARI过表达后两株AML细胞组凋亡相关蛋白Bcl-2、Bcl-xl、Bax和凋亡途径相关蛋白CytoC、Caspase8、Caspase9、Caspase3、Actived-Caspase3、PARP的表达变化。结果：SARI组细胞的SARI mRNA和蛋白表达水平均显著高于CON组和NC组（P＜0.05）,表明SARI过表达成功。SARI过表达的HL-60和NB4细胞中抗凋亡蛋白Bcl-2、Bcl-xl表达均下调,促凋亡蛋白Bax表达上调。CytoC表达增加,Caspase8、Caspase9、Caspase3剪切激活,Actived-Caspase3上调,PARP下调,PARP剪切体上调。结论：SARI基因促进AML细胞凋亡可能是通过激活外源性凋亡途径及与外源性凋亡途径交叉的内源性凋亡途径。     

抗人DR5单克隆抗体诱导HL-60细胞凋亡机制

探讨抗人DR5单克隆抗体(mDRA-6)诱导白血病细胞系HL-60细胞凋亡的可能机制。MTT法检测mDRA-6对HL-60细胞的生长增殖的影响,以及Caspase 8、10、3抑制剂对mDRA-6抑制HL-60细胞生长增殖的影响;琼脂糖凝胶电泳检测HL-60细胞DNA片断化降解;Western blot检测mDRA-6对HL-60细胞Caspase 8、10、3的激活改变。结果发现,mDRA-6呈时间、浓度依赖性地抑制HL-60细胞的生长增殖,10 mg/L的mDRA-6作用HL-60细胞6 h、8 h和10h,细胞增殖抑制率分别为23.96%、44.10%和50.28%;琼脂糖凝胶电泳显示,10 mg/L的mDRA-6作用6 h,HL-60细胞呈现凋亡细胞特有的DNA梯形条带;Western blot检测结果发现,mDRA-6作用HL 60细胞不同时间,Caspase 8均只有酶原条带出现,无激活片段产生,而Caspase 10和Caspase 3显示明显裂解片段产生,并随mDRA-6作用时间延长而增多;预先使用15μmol/L的Caspase 10及Caspase 3抑制剂孵育细胞1 h,能够使mDRA-6对HL-60细胞的生长抑制率分别降低64.15%(t=10.13、P<0.01)和53.69(t=8.93、P<0.01)%,而预先使用15μmol/L的Caspase 8抑制剂孵育细胞1 h,mDRA-6对HL-60细胞的生长抑制率仅降低4.40%(t=0.52、P>0.05)。以上实验结果提示,mDRA-6通过激活Caspase 10启动凋亡信号分子,诱导白血病HL-60细胞凋亡。     

ORP-150基因沉默对SKOV-3细胞增殖、迁移及侵袭的影响

目的:探讨沉默ORP-150基因对体外培养卵巢癌细胞SKOV-3的增殖、转移及侵袭的影响并初步探讨其可能作用机制.方法:运用慢病毒包装shRNA方法沉默SKOV-3细胞的ORP-150基因;研究分为3组:实验组(ORP-150 shRNA)、阴性对照组(NC shRNA)和空白对照组(CON);采用qRT-PCR和Western印迹法检测基因敲减效率,CCK8法、克隆形成试验检测ORP-150沉默对细胞增殖能力的影响,划痕试验、Transwell试验检测SKOV-3细胞侵袭迁移能力的变化,流式细胞仪检测细胞的凋亡情况,Western印迹法探讨ORP-150基因敲减后影响细胞表型改变的作用机制.结果:沉默ORP-150基因可以抑制卵巢癌细胞的增殖能力、克隆形成能力以及跨膜转移扩散能力(P<0.05),但对细胞的侵袭能力无明显影响(P>0.05);敲减ORP-150基因后卵巢癌细胞凋亡明显增加(P<0.05);敲减ORP-150基因后的卵巢癌细胞可能通过Wnt信号通路及Caspase级联反应影响细胞的修复,最终抑制细胞增殖,促进凋亡发生.结论:沉默ORP-150基因可以抑制卵巢癌细胞SKOV-3的增殖和转移,同时促进凋亡发生.这种细胞表型的改变可能是通过下调Wnt信号通路中β-catenin,同时的表达,以及抑制Caspase级联反应从而下调c-myc,cyclin D1和caspase-3蛋白的表达来实现,ORP-150基因沉默可能是卵巢癌治疗的新靶点.     

贴壁和缩短胰酶消化时间培养大鼠骨髓间充质干细胞

背景：对于骨髓间充质干细胞的分离纯化、培养扩增目前已有几种方法,各自均有不同的优劣性。 目的：观察贴壁法和缩短胰酶消化时间的方法体外分离和培养大鼠骨髓间充质干细胞的特点。 方法：培养初期频繁换液,去除混杂细胞;传代后加入不同诱导剂定向诱导分化,使之分别向脂肪细胞,成骨细胞和软骨细胞方向分化。 结果与结论：该分离培养方法在第3代可以得到纯化的骨髓间充质干细胞。分离培养的细胞纯度高,有良好的增殖和分化潜能。定向诱导培养的细胞能向成脂细胞、成骨细胞和成软骨细胞方向分化。     

Inhibition of caspase-mediated PARP-1 cleavage results in increased necrosis in isolated islets of Langerhans

The current procedure for isolation of islet cells from the pancreas for transplantation by enzymatic digestion is accompanied by significant islet cell loss. Therapeutic strategies aimed at the inhibition of islet cell damage could be expected to increase islet yield and improve cell viability, thereby making more efficient use of available donor tissue. The aim of the present work was to examine the effects of caspase and PARP-1 inhibition on islet survival. We demonstrate that following isolation, islets become increasingly necrotic and display a PARP-1 cleavage pattern typical of necrotic cells, characterized by the appearance of a 50 kDa cleavage product. Caspase inhibition using Z-VAD-fmk resulted in increased necrosis in both human and canine islets by a nicotinamide-sensitive mechanism. Necrosis was also induced by DEVD-fmk, but not by YVAD-cmk, indicating that only inhibitors of caspase-3 were able to cause necrosis. Moreover, increased mitochondrial depolarization was observed in islets following 72 h in culture, which correlated with increased expression of Bax. Mitochondrial depolarization was also visible in islets treated with both Z-VAD-fmk and nicotinamide, indicating that mitochondrial dysfunction may account for the necrotic-like death observed in the absence of PARP-1 and caspase activity. Our results demonstrate that inhibition of PARP-1 cleavage results in increased levels of PARP-1-mediated necrotic cell death, highlighting the importance of PARP-1 cleavage in assuring the execution of the apoptotic program. Taken together, these findings reveal the interdependence of necrosis and apoptosis in isolated islets, suggesting therapeutic strategies which target early events in cell death signaling in order to prevent multiple forms of islet cell death.Abbreviations DMSO Dimethyl sulfoxide - FBS Fetal bovine serum - FDA Fluorescein diacetate - IEQ Islet equivalent - IL-1 Interleukin 1-beta - INF- Interferon gamma - MTT 3-(4,5-Dimethylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyltetrazolium bromide - NG Newport green - PARP Poly (ADP-ribose) polymerase - PI Propidium iodide - TNF- Tumor necrosis factor alpha