套式聚合酶链反应加限制酶分析检测母婴巨细胞病毒感染

为评价套式聚合酶链反应（套式ＰＣＲ）加限制酶分析在孕妇巨细胞病毒感染及其母婴宫内传播检测中的应用，采用套式ＰＣＲ加限制酶分析，病毒分离、电镜观察和特异性抗体测定，对各孕期孕妇外周血，脐血及死胎组织进行人巨细胞病毒（ＨＣＭＶ）检测。结果：３６７名孕妇ＨＣＭＶ阳性检出率为５．５％，其中，套式ＰＣＲ检出率（４．９％）高于病毒分离（３．０％，Ｐ＜０．０５）。６份ＨＣＭＶＤＮＡ阳性母血中，３份配对脐血ＨＣＭＶＤＮＡ也阳性，母－脐传播率为３／６。３对被证实为母－婴宫内传播ＨＣＭＶ的标本中，２对套式ＰＣＲ，病毒分离及特异性ＩｇＭ、ＩｇＡ均阳性，１对套式ＰＣＲ、病毒分离、特异性ＩｇＡ阳性，ＩｇＭ阴性。提示：套式ＰＣＲ能提高诊断ＨＣＭＶ的特异性与敏感性，对孕妇及胎儿／新生儿ＨＣＭＶ感染的研究有重要意义。     

新生儿室管膜下囊肿的病因研究

为了探讨新生儿室管膜下囊肿（ＳＥＣ）与先天性感染的关系，采用ＥＬＩＳＡ酶标法检测母婴双方囊肿组与对照组各７０例血巨细胞病毒（ＣＭＶ）、风疹病毒、弓形虫的抗体，并应用聚合酶链反应（ＰＣＲ）技术直接检测病原ＤＮＡ（风疹病毒除外），同时作尿ＣＭＶ的ＰＣＲ检测。结果：囊肿组新生儿血ＣＭＶ－ＩｇＭ抗体和ＣＭＶ－ＰＣＲ阳性率显著高于对照组（分别为１７．１％、５．７％和１２．９％、２．９％）；且尿ＣＭＶ－ＰＣＲ的阳性率达４０．０％（２８／７０），高于对照组的１７．１％（１２／７０）；分别进行两组自身对照，尿ＣＭＶ－ＰＣＲ的阳性率显著高于血ＣＭＶ－ＰＣＲ阳性率（Ｐ＜０．０５）。囊肿组母亲的尿ＣＭＶ－ＰＣＲ阳性率亦显著高于对照组（３０％、１０％、Ｐ＜０．０１）。提示新生儿ＳＥＣ是宫内感染损害中枢神经系统的表现之一，与先天性ＣＭＶ感染有关，尿ＣＭＶ－ＰＣＲ检查可作为宫内ＣＭＶ感染的首选实验室诊断方法。     

先天性胆道闭锁与巨细胞病毒感染的临床研究

为了探讨先天性胆道闭锁（ＣＢＡ）的原因，分析肝脏病理变化、临床预后与巨细胞病毒（ＣＭＶ）感染的关系。取１４例ＣＢＡ患儿术中肝脏及肝门淋巴结标本，一份进行多聚酶链反应巨细胞病毒基因（ＰＣＲ－ＣＭＶ－ＤＮＡ）检测，另一份肝脏标本做ＨＥ染色光镜检查。结果：１４例中ＣＭＶ阳性占８例。肝脏病理检查表明随手术时日龄增加，胆管增生明显。比较ＣＭＶ阳性组与ＣＭＶ阴性组肝细胞病变、淤胆无差异，肝纤维化ＣＭＶ阴性组重于阳性组；肝细胞坏死ＣＭＶ阳性组重于阴性组。随访８～２０个月，生存６例，其中ＣＭＶ阳性５例，死亡８例。ＣＭＶ感染可能是ＣＢＡ的病因之一，肝纤维化程度、术后胆管炎发生的频率和程度与预后关系密切。从临床归转看ＣＭＶ感染阳性组预后较好。     

PCR管单法快速检测单纯疱疹病毒性脑炎的临床价值

为了确立ＰＣＲ单管法快速检测单纯疱疹病毒（ＨＳＶ－１）的临床价值，本文对１８例经临床、ＥＥＧ，ＭＲＩ或ＣＴ诊断的单疱病毒脑炎（ＨＳＥ）患者２４份ＳＣＦ标本，先经解偶联裂解吸附预处理，抽提模板ＤＮＡ，然后进行ＰＣＲ一次性扩增研究。首次扩增１８份ＣＳＦ标本，其中１７份ＰＣＲ阳性，１份阳性，但６天后复查转为阳性。５例ＰＣＲ阳性患儿经正规抗病毒治疗后均转为阴性。对照组３０例其他中枢神经系统疾病均为阴性。结     

急性白血病患儿骨髓巨细胞病毒感染的检测

为探讨急性白血病（ＡＬ）患儿骨髓巨细胞病毒（ＨＣＭＶ）感染情况，采用多聚酶链反应（ＰＣ）法检测骨髓细胞ＨＣＭＶ－ＤＮＡ及间接发免疫荧光法检测骨髓细胞ＨＣＭＶ早期抗原（ＥＡ）。７１例ＡＬ患儿，其中初诊组３９例，阳性４例，感染率１０．２５％；化疗后完全缓解组３２例，阳性１２例，感染率３７．５％，后者与对照组及初诊组比较，差异有显著意义（Ｐ〈０．０１）。阴性的１７例随访观察２～１４个月后，１０例转为阳性     

应用聚合酶反应技术检测婴儿肝炎综合征巨细胞病毒和乙型肝炎病…

用聚合酶以应技术（ＰＣＲ）检测６０例婴儿肝炎综合征患儿尿人巨细胞病毒（ＨＣＭＶ０ＤＮＡ在清乙型肝炎病毒（ＨＢＶ）ＤＮＡ，同时做尿ＨＣＭＶ病毒分离。结果表明：ＨＣＭＶ ＤＮＡ阳性４７例，阳性率７８．３％，而ＨＣＭＶ分离阳性３０例，阳性率５０．０％。ＨＢＶ ＤＮＡ阳性１２例，阳性一率２０％。提示婴儿肝炎综合征与ＨＣＭＶ和ＨＢＶ感染有关。ＰＣＲ技术特异，敏感，快速及简便，可协助临床医生对婴儿肝炎综合征做     

逆转录多聚酶链反应对肠道病毒性脑膜炎、脑炎诊断价值探讨

目的探讨中枢神经系统感染的病原体及其检测方法。方法应用逆转录多聚酶链反应（ＲＴ－ＰＣＲ）检测６４例无菌性脑膜炎及２７例无菌性脑炎患儿脑脊液（ＣＳＦ）中肠道病毒（ＥＶ）ＲＮＡ。结果急性期ＣＳＦ中ＥＶＲＮＡ阳性检出率为：无菌性脑膜炎６０９％,脑炎４８１％;阳性患儿恢复期ＣＳＦ仅个别阳性;对照组全部阴性。起病５天以内阳性率明显高于５天以后（Ｐ＜００５）;５～１０月份较１１～４月份发病率高（Ｐ＜００５）。２５例病毒分离阳性者中２４例ＲＴ－ＰＣＲ阳性,５３例病毒分离阴性者中１９例ＲＴ－ＰＣＲ阳性,ＲＴ－ＰＣＲ敏感性显著高于病毒分离的敏感性（Ｐ＜００１）。结论ＥＶ是引起中枢神经系统感染的重要病原体,ＲＴ－ＰＣＲ技术是诊断ＥＶ感染的有效方法。     

婴儿先天性巨结肠与巨细胞病毒感染

为了解婴儿先天性巨结肠（ＨＤ）与巨细胞病毒（ＣＭＶ）感染的关系，对１９例２～１８个月的ＨＤ患儿（经病理证实）的血清、尿和组织块用病毒分离和ＤＮＡ探针杂交方法进行ＣＭＶ检测。结果：１９例ＨＤ患儿分离ＣＭＶ的１９份尿标本中２份污染，在１７份尿标本中７份阳性，阳性率为４１．２％；正常儿尿标本阳性率为１４．４％（Ｐ＜０．０５）。１９例ＨＤ血清中，ＣＭＶＩｇＭ抗体２例阳性，阳性率为１０．５％；正常儿阳性率为８．０％（Ｐ＞０．０５）。１９例ＨＤ痉挛段组织块中无一例ＣＭＶ阳性，但６例ＨＤ痉挛段组织块ＣＭＶ－ＤＮＡ探针杂交全部阳性，其中２例强阳性，阳性率为１００％。说明婴儿ＨＤ与ＣＭＶ感染关系密切，ＣＭＶ感染可能是包括ＨＤ在内的一些先天性畸形的重要致畸因素。     

巨细胞包涵体病的临床及早期诊断

本文观察１９９２年９月至１９９４年３月我科收治的人类巨细胞病毒（ＨＣＭＶ）感染患儿３４例。部分阳性患儿同时检测母亲ＰＣＲ－ＨＣＭＶ－ＤＮＡ阳性率为８０％，说明患儿ＨＣＭＶ感染与母亲有明显关系。本文采用了聚合链式反应（ＰＣＲ）检测患儿血ＨＣＭＶ－ＤＮＡ的方法，并与血清免疫学方法比较，结果表明，该方法具有高度的特异性和敏感性，操作简便，反应周期短，不存在交叉反应，是目前临床检测ＨＣＭＶ感染较好的方法。     

应用PCR技术诊断CMV孕期及先天性感染的研究

为了解本地区巨细胞病毒孕期先天性感染的现状,用ＰＣＲ技术对１５６例孕妇及其所生新生儿１１４例分别进行了ＣＭＶ－ＤＮＡ检测。结果显示孕妇ＣＭＶ－ＤＮＡ检出率为７．０５％,有异常妊娠史的孕妇,ＣＭＶ－ＤＮＡ的检出率明显增高,孕妇ＣＭＶ－ＤＮＡ阳性者,其新生儿检出率为４４．４％。因此我们认为,该地区ＣＭＶ孕妇及新生儿感染仍然常见。     

新生儿高胆红素血症与人巨细胞病毒感染的关系

为了解高胆红素血症（简称高胆）新生儿中人巨细胞病毒（ＨＣＭＶ）感染状况。方法：用聚合酶链反应（ＰＣＲ）技术对１２０例１２～２８天高胆新生儿的血、尿进行ＨＣＭＶ－ＤＮＡ序列测定。结果：因出生有窒息史、感染致高胆的新生儿中ＨＣＭＶ－ＤＮＡ阳性率分别为３．１％（１／３２）,８．１％（３／３７）。因高胆入院而找不到任何原因的数生儿占１２０例高胆新生儿的１９．２％,与高胆低出生体重儿的ＨＣＭＹ－ＤＮＡ阳性率     

应用半重叠TCRγ特异性引物的PCR方法检测淋巴细胞白血病

彩更加敏感的半重叠式ＴＣＲγ特异性引物的ＰＣＲ方法，对２８例ＡＬＬ初治、ＣＲ及ＢＭＴ患儿进行检测，并用消化煮沸及酚抽提法分别对所有骨髓标本进行ＤＮＡ提取，将ＰＣＲ结果进行比较。结果表明：消化煮沸法用于微量标本的ＤＮＡ提取优于酚抽提法，２８例ＡＬＬ患儿中１６例检出ＴＣＲγ特异性条带，ＭＲＤ组１８例，阳性检出１２例，其中免疫分型标记为Ｂ细胞型的４例，占２５％，免疫标记为Ｔ细胞型者全部出现ＴＣＲγ阳性条     

特发性血小板减少性紫癜患儿巨细胞病毒感染的初步研究

为探讨特发性血小板减少性紫癜（ＩＴＰ）与人巨细胞病毒（ＨＣＭＶ）活动性感染的关系，用聚合酶链反应（ＰＣＲ）技术检测了４４例临床确诊为特发性血小板减少性紫癜患儿外周血白细胞中ＨＣＭＶ－ＤＮＡ，同时作病毒分离及ＨＣＭＶ－ＩｇＧ、ＩｇＭ测定。结果表明：ＨＣＭＶ－ＤＮＡ阳性者１４例，阳性率为３２％；而病毒分离阳性者８例，阳性率为１８％；ＨＣＭＶ－ＩｇＧ、ＩｇＭ阳性率分别为３９％和２３％。提示：（１）部分ＩＴＰ患儿发病时有ＨＣＭＶ活动性感染；（２）ＰＣＲ技术特异、敏感、快速，对ＩＴＰ患儿的ＨＣＭＶ活动性感染的早期快速诊断有重要作用。     

幼年类风湿性关节炎与人细小病毒B19感染的关系及其临床特征

目的 探讨幼年类风湿性关节炎（ＪＲＡ）与人细小病毒Ｂ１９（Ｂ１９）感染的关系及其临床特征。方法 采用巢式ＰＣＲ方法对３０例ＪＢＡ患儿血清、２６例ＪＲＡ患儿骨髓、４例ＪＲＡ患儿关节液标本进行Ｂ１９－ＤＮＡ检测。结果 ⑴３０例ＪＲＡ患儿血清Ｂ１９－ＤＮＡ阳性１２例（４０％）,１０例对照组阳性１例（１／１０）,两组差异无显著性（Ｐ〉０．０１）。⑵２６例骨髓Ｂ１９－ＤＮＡ阳性１２例（４６％）,２５例对照组     

弓形体,人巨细胞病毒和人微小病毒B19感染对新生儿畸形和生长发 …

探讨弓形体（ＴＯＸＯ）人巨细胞病毒（ＨＣＭＶ）及人微小病毒Ｂ１９（ＨＰ－ＶＢ１９）对新生儿畸形及生长发育的影响。采取聚合酶链反应技术对４２例畸形新生儿进行了ＴＯＸＯ－ＤＮＡ，ＨＣＭＶ－ＤＮＡ和ＨＰＶＢ１９－ＤＮＡ的检测，并对检测阳性与阴性畸形新生儿，用标准差记分法（ＳＤＳ）衡量生长发育。ＰＣＲ检测阳性率为１８／４２（４２．８８％），中枢及心血管系统畸形阳性率为１２／１８（６６．６７％），其他系统畸     

下呼吸道感染患儿外周血单个核细胞呼吸道合胞病毒感染的研究

为探讨呼吸道合胞病毒（ＲＳＶ）对外周血单个核细胞（ＰＢＭＣ）的感染情况及感染后细胞免疫的变化，采用免疫组化法对１８例ＲＳＶ性急性下呼吸道感染患儿ＰＢＭＣ内ＲＳＶ及其Ａ、Ｂ亚型抗原进行了检测；采用ＡＰＡＡＰ法、ＭＴＴ比色法和ＥＬＩＳＡ法对Ｔ细胞亚群及Ｔ细胞表面白细胞介素２受体表达、ＰＢＭＣ培养上清液白细胞介素２（ＩＬ－２）活性和可溶性ＩＬ－２受体水平进行了测定。结果显示：１８例ＲＳＶ感染患儿中７例ＰＢＭＣ内可检测到ＲＳＶ抗原；１１例ＲＳＶＡ亚型感染者５例ＰＢＭＣ内均为ＲＳＶＡ亚型阳性，７例ＲＳＶＢ型感染者２例Ｂ亚型阳性；７例恢复期和１０例对照组患儿均为阴性；发病３天以内ＰＢＭＣ中ＲＳＶ抗原阳性者多于３天以后（Ｐ＜０．０５）。ＲＳＶ感染组ＰＢＭＣ内ＲＳＶ抗原阳性者，ＣＤ４细胞比率和ＩＬ－２水平均低于阴性者（ｔ＝２．３８，２．４０，Ｐ值均＜０．０５）。提示：ＲＳＶ性急性下呼吸道感染患儿ＰＢＭＣ可被ＲＳＶ感染，可能由此加重免疫活性细胞损害，导致细胞免疫功能紊乱。     

核糖体DNA聚合酶链反应诊断新生儿败血症

目的比较１６ＳｒＤＮＡ高度保守区引物聚合酶链反应（ＰＣＲ）与血培养及非特异性诊断指标对新生儿败血症的诊断价值。方法对１３１例拟诊为败血症的新生儿血标本进行细菌ＤＮＡ检测。结果１３１例中，ＰＣＲ检测阳性５６例，阳性率为４３％，明显高于血培养的阳性率（血培养阳性２３例，阳性率１８％）。１３１例拟诊败血症中，发现２３例确诊败血症及３１例临床败血症，对这５４例败血症（血培养阳性２３例＋临床败血症３１例）作ＰＣＲ检查，结果阳性４８例，阴性６例；对１３１例中的７７例“非败血症”病例，ＰＣＲ检测阴性６９例，阳性８例。对血培养阳性的２３例进行ＰＣＲ，结果阳性２２例。以血培养作为确诊标准，ＰＣＲ检测的敏感性为９６％，并不受抗生素治疗的影响。３０例阴性对照组ＤＮＡ的ＰＣＲ分析均为阴性。结论在严格控制污染的条件下，细菌共同引物ＰＣＲ技术能为新生儿败血症提供可靠的病原菌诊断依据     

逆转录—多聚酶链反应检测柯萨奇B组病毒

研究目的用分子生物学方法对柯萨奇Ｂ组病毒（ＣＢＶ）进行检测并探讨与临床症病的关系。研究方法对我院２９８例疑似ＣＢＶ感染的患儿，采用特异性引物进行逆转录－多聚酶链反应（ＲＴ－ＰＣＲ）检测ＣＢＶ。结果检出ＣＢＶ阳性１２７人，阳性率４２．６％。感染与年龄有关，夏秋季多见。８０例健康儿童中，阳性５人，占６．２５％。２０例ＲＴ－ＰＣＲ检测阳性标本用ＥＬＩＳＡ法检测，１７例阳性。结论ＲＴ－ＰＣＲ可快速、敏感、准确地检出标本中的ＣＢＶ。此病毒可侵犯多种器官，引起各种临床症病，有较强的传染性。     

乙型肝炎疫苗免疫失败儿童S基因变异株研究

目的 探讨乙型肝炎（乙肝）疫苗免疫失败与Ｓ－基因变异的关系。方法 １０６名乙肝疫苗免疫失败儿童血清为研究标本,从中提取ＤＮＡ,经ＰＣＲ扩增乙肝病毒（ＨＢＶ）Ｓ区基因片段,Ｓｏｕｔｈｅｒｎｂｌｏｔ转移至尼龙膜,与Ｓ区标准序列探针杂交,选择ＰＣＲ阳性与寡核苷酸探针不杂交的标本作序列分析。结果 免疫失败儿童中ＨＢＶＤＮＡ阳性率为９３．４％（９９／１０６）,９９份样本中有２０份与与探针不杂交,占３０．３％     

血液病患儿细小病毒B19感染的检测及临床意义

人细小病毒Ｂ１９（Ｈｕｍａｎ Ｐａｒｖｏｖｉｒｕｓ，Ｂ１９，ＨＰＶＢ１９）与人类多种疾病密切相关，可通过接触和使用血液制品等在人群中传播＾［１］，本文采用聚合酰链反应（ＰＣＲ）技术检测４５例血液病患儿血清ＨＰＶＢ１９－ＤＮＡ，结果总阳性率为２６．６％，其中急性白血病占３８．８％（７／１８），ＩＴＰ占４０．０％（４／１０），过敏性紫瘢占８．３％（１／１２），再障５例均为阴性；同时检测对照组１０名正常