肺炎支原体P1重组蛋白的免疫活性研究

提取纯化肺炎支原体（Mycoplasmapneumoniae,Mp）P1重组蛋白,对其免疫活性进行鉴定。将重组质粒pQE30-P1转入M15菌株,用IPTG诱导目的基因表达,用SDS-PAGE分析重组蛋白的相对分子量,免疫印迹实验鉴定其免疫反应性,并用ELISA实验测定重组蛋白抗原的特异性。经SDS-PAGE分析,重组蛋白的相对分子量约为58kD,免疫印迹实验和ELISA实验证实,Mp免疫血清和Mp感染患者血清都能与重组蛋白发生特异反应。重组蛋白具有特异的免疫反应性,可用于临床标本检测。     

遗传工程抑制素疫苗的生产

抑制素(inhibin)是由性腺分泌的一种31～32kDa的糖蛋白激素,由一个α亚单位和二个β亚单位(βA、βB)中的一个组成,用纯化抑制素免疫动物可促进动物排卵及精子产生.作者采用分子重组技术合成一种嵌合卵清蛋白/抑制素抗原,免疫动物后观察其在动物中是否能诱生可与天然抑制素结合的抗血清.作者采用计算机模型技术对卵清蛋白cDNA翻译产物的抗原表位进行分析,通过检测卵清蛋白的相应核苷酸序列来选择唯一的限制性位点,以便插入编码抑制素α亚单位前26个氨基酸的合成的牛抑制素α基因片段.     

吗啡与蛋白质结合物的合成

目的:利用蛋白质连接法合成吗啡人工全抗原。方法:混合酸酐法和碳二亚胺连接法,用BSA及OVA蛋白做载体蛋白,利用紫外光谱扫描及蛋白质电泳两种方法判断连接是否成功。结果:连接成功,连接产物分子量增加,且每分子牛血清白蛋白连接的吗啡分子数为40-48个,每分子卵清白蛋白(OVA)连接的吗啡分子数为13-16个。结论:此两种方法能成功合成吗啡人工抗原,且该抗原可作为吗啡免疫用抗原以及吗啡免疫检测方法建立所用包被抗原。     

甲基苯丙胺与蛋白质结合物的合成

目的:利用蛋白质连接法合成甲基苯丙胺人工全抗原。方法:以BSA蛋白做载体蛋白,用碳二亚胺法偶联合成甲基苯丙胺抗原,并用紫外扫描、蛋白电泳以及胶体金免疫层析等方法进行检测。结果:甲基苯丙胺与BSA连接成功,连接产物分子量增加,且每分子牛血清白蛋白连接的甲基苯丙胺分子数为21个;胶体金免疫层析检测结果显示,合成抗原与抗体有特异性反应,具有活性,交叉反应良好。结论:此抗原可作为甲基苯丙胺免疫用抗原。     

以MontanideISA720为佐剂的三种重组无性期疟原虫抗原疫苗的Ⅰ期人体试验

本文报道了由三种重组无性期恶性疟原虫抗原组成的疫苗的免疫原性和安全性试验。疫苗含有大肠杆菌表达的三种重组疟原虫抗原 :Ag1 6 2 4相当于全长的裂殖子表面蛋白 2 (MSP2 ) ;1 90 LCS.T3为 MSP1相对保守区的 1 75个氨基酸片段与 CS蛋白上 T细胞表位的融合物 ;Ag1 5 0 5 H为裂殖子侵入红细胞时释放的蛋白质 RESA C末端的 70 %部分。每一种抗原分别与 Montanide ISA72 0佐剂乳化 ,乳化物中三种蛋白质的浓度分别为1 76 μg/ml(1 90 LCS.T3)、1 74μg/ml(MSP2 )和 1 38μg/ml(RESA)。　　作者进行了两项人体 期临床试验。第…     

羊胎提取液的实验研究

目的对羊胎提取液的理化性质及生物学活性进行初步研究。方法理化性质检测采用光谱法、液相色谱法、氨基酸分析法等 ,活性测定采用活性E花环试验法和淋巴细胞转化实验法。结果羊胎提取液是多肽和核酸的混合成分 ,pH 6 .8～ 7.5 ,在 2 5 1nm波长处有一特征吸收 ,含 17种氨基酸。多肽、核酸、总氮含量和分子量依据不同工艺而定 ,蛋白质反应阴性 ,具有明显的细胞免疫调节功能。结论羊胎提取液可作为一种新型的免疫调节剂     

昆虫细胞表达的重组流感血凝素疫苗的免疫效果评价

应用DNA重组技术可以快速克隆流感病毒血凝素(HA)基因并使其在真核系统中有效地表达.应用重组杆状病毒在昆虫细胞中表达的HA蛋白,对青年人接种后,可诱生抗体并预防感染.本文作者对这一重组蛋白在老年人中的免疫效果进行了评价.用表达流感病毒A/北京/32/92(H3N2)HA基因cDNA全序列的重组杆状病毒感染昆虫细胞产生的HA抗原纯度在99%以上,该重组抗原称为rHAO.将rHAO疫苗溶于PBS使接种量分别为15、45或135μg/0.5ml,同时设立三价亚病毒疫苗和安慰剂对照.     

丹参果糖磷酸酶基因的克隆和功能研究

丹参是著名的药用植物,在中国、日本、美国和欧洲国家被广泛地用于心脑血管系统疾病的治疗.笔者首次从丹参中克隆出了一个新的果糖磷酸酶基因,并将其命名为SmFBA,GenBank编号为FJ540907.SmFBA的cDNA全长含有1 390个核苷酸,包含一个完整的1 065 bp的开放阅读框,编码355个氨基酸残基.SmFBA基因全长含有3个外显子和2个内含子.生物信息学分析显示SmFBA蛋白预测的等电点为5.60,预测的分子量为37.78 ku,和其他植物物种中果糖磷酸酶具有很高的序列同源性.用Southern杂交技术显示SmFBA在丹参基因组中呈低拷贝.该基因在丹参根、茎、叶等器官都表达,根中表达量最高.体外重组表达的SmFBA在大肠杆菌中具有酶活性,并且能够提高大肠杆菌的耐盐性.这项研究进一步拓展了人们对高等植物糖酵解途径的认识.     

重组八价A群链球菌M蛋白菌苗

为了研制一种安全有效的、能预防A群链球菌引起的急性风湿热的菌苗,作者采用聚合酶链反应(PCR)技术分别扩增24、5、6、19、1、3、18和2型A群链球菌的emm基因,分别纯化8个扩增片段后,通过限制酶切位点连接扩增产物,将构建的八价基因与载体pkk223-3联接,转染大肠杆菌JM105株,利用聚丙烯酰胺凝胶电泳从大肠杆菌周质提取液中提取重组八价蛋白.用免疫印迹法检测纯化八价蛋白的性质,用ELISA法测定重组蛋白免疫家兔后诱生的抗体滴度,用体外调理试验和间接杀菌试验检测抗体的调理作用,用间接免疫荧光法检测免疫血清与人是否存在交叉反应.结果显示,八价M蛋白的分子量约为     

细胞毒素Gelonin的亚克隆、表达与纯化

将分别含有细胞毒素gelonin基因片段的重组子pUC-gell和pUC-gelⅡ，按照预先设计的酶切位点，通过亚克隆得到含有gelonin全基因的重组子pUC-gel。然后将pUC-gel与pET28a同时用NdeI/EcoRI双酶切，相关片段构建成表达重组子pET-gel，并进行DNA序列测定。工程菌E.coli BL21/pET-gel表达产物经两步SP－Sepharose柱层析，可得电泳纯的重组gelonin，分子质量为28000u。无细胞体系蛋白质合成实验表明，其IC50（使蛋白质合成抑制50％所需浓度）为35μg/L。酶联免疫实验为阳性。     

大鼠脑一氧化氮合酶抗肽抗体的制备(英文)

目的:用大鼠脑一氧化氮合酶(bNOS)的一个片段免疫家兔,产生可识别该酶本身的抗体.方法:根据亲水性、抗原性及产生α-螺旋、β-折叠、和β-转角的可能性,预测肽277-287位于该酶的抗原决定簇中.肽277-287经化学合成,与血蓝蛋白交联,免疫家兔,获得抗体.特异性用ELISA.免疫组织化学和蛋白印迹分析法鉴定.结果:抗体与大鼠小脑提取液可特异性结合;免疫组织化学染色结果与NADPH-黄递酶组织化学染色结果一致.它可结合分子量约150 kDa的蛋白。结论:该抗肽抗体可专一性识别大鼠脑组织中的bNOS.     

用重组麻疹病毒血凝素蛋白检测疫苗免疫状况的简化免疫试验[英]

用重组抗原进行简化试验,对监测抗麻疹病毒（MV）免疫力很重要。抗血凝素（H）蛋白抗体具有中和保护能力,作者在含有西门利克森林病毒复制子的哺乳动物表达系统中高效表达了重组MV-H。用单克隆抗体对该重组蛋白的抗原进行了研究,并通过ELISA（H-ELISA）对大样本人群检测了用该蛋白测定疫苗免疫状况的可行性。用中和（NT）试验、血凝抑制（HI）试验检测抗体水平及用市售全病毒ELISA（MV-ELISA）试剂盒检测MV特异性IgG,并与H-ELISA检测结果进行比较。     

利用RTS500系统进行抗菌肽葛佬素蛋白的体外表达

目的:构建含目的基因葛佬素(gloverin)的重组子并通过体外快速翻译系统RTS500(rapid translation system)对其进行表达.方法:采用PCR方法扩增葛佬素cDNA,将其与表达载体pIVEX2.3连接;采用PCR及双酶切方法鉴定连接产物.将含目的基因片段的阳性重组质粒通过体外表达翻译系统RTS500,使其蛋白能在大肠杆菌(E.coli)裂解产物中进行表达.应用蛋白免疫印迹方法对表达产物进行鉴定.结果:pIVEX2.3-G重组表达质粒通过体外表达翻译系统RTS500可表达出分子量约为14.4的蛋白;蛋白免疫印迹证实该蛋白为带有多聚组氨酸标签的融合蛋白.结论:抗菌肽葛佬素可在体外大肠杆菌裂解产物中进行表达.     

用由变形链球菌纯化的蛋白质免疫恒河猴预防龋齿

变形链球菌(以下简称变链)全细胞菌苗含有40种以上的抗原,仅1～2种抗原有防御龋齿的作用,而其他抗原可产生副作用。作者从变链分离到一种称为链球菌Ⅰ/Ⅱ抗原的蛋白质,用于免疫恒河猴以预防龋齿。蛋白质抗原的制备是用 C 型 Guy 株变链在半综合培养基上培养,取其上清液用硫酸铵提取蛋白质,然后分别经 DEAE 纤维素和 Sepharose 6B 柱纯化,提取Ⅰ/Ⅱ抗原。     

ISCOMS——粘膜免疫的新策略?

含有纯化或重组抗原的口服活性疫苗非常需要,特別是在抗粘膜表面疾病的免疫方面。但其发展至今仍受一些困难因素的限制。作者认为亲脂性免疫刺激复合物(lipophilic immunestimulating complexes ISCOMB)可能为诱发多种对蛋白抗原的免疫应答提供一种口服免疫载体。     

亚洲带绦虫RNA聚合酶亚单位Ⅱ基因的生物信息学分析

目的 分析和预测亚洲带绦虫成虫RNA聚合酶亚单位Ⅱ基因及其编码的蛋白的结构和功能.方法 利用一系列的生物信息学软件分析了亚洲带绦虫RNA聚合酶亚单位Ⅱ蛋白的氨基酸组成、等电点、亚细胞定位、跨膜区、二级结构等蛋白质性质,并同日本血吸虫、秀丽隐杆线虫、果蝇、人等的蛋白作了对比.结果 Blastx分析该基因为全长基因,该基因全长645bp,编码区为45～517,编码157个氨基酸;无跨膜区;具有较稳定的理化性质.结论 应用生物信息学方法从亚洲带绦虫成虫cDNA文库中筛选出聚合酶亚单位Ⅱ基因.     

浙产片姜黄抗早孕有效成分的初步研究

为了阐明片姜黄中抗早孕的有效成分,我们进行了初步研究。片姜黄水箭液经乙醇沉淀,分别对溶液和沉淀进行分离和分析。溶液部分含有两种未知氨基酸和十四种已知氨基酸。经纸层析分得结晶性物质,其理化性质确认为门冬氨酸和苏氨酸。沉淀物经凝胶电泳测定蛋白质,约在八万分子量处显示二条蛋白帝。沉淀物经透析膜透析,分析该膜内物,系由门冬氨酸、苏氨酸、丝氨酸、谷氨酸等十六种氨基酸组成的蛋白质。     

重组人PD-L1在大肠杆菌BL-21中的表达、纯化和鉴定

目的 分离纯化人程序死亡蛋白-1(PD-LI)基因,制备重组人PD-L1蛋白,为进一步研究PD-L1在肿瘤免疫逃逸中的作用和机制建立基础.方法 通过RT-PCR分离纯化人PD-L1基因,并将其克隆到原核表达质粒pGEX-4T一1中,经酶切,测序鉴定分析后,转化大肠杆菌BL21(DE3),经IPTG诱导表达.产物经GST蛋白纯化系统进行纯化后,用10%SDS-PAGE及Western Blot分析鉴定.结果 经RT-PCR分离纯化的PD-L1 cDNA分子由645 bp构成,编码相对分子量约25 KD的蛋白,并与GST形成融合蛋白.GST-PD-L1融合蛋白相对分子量约46 KD.Western Blot结果显示,该蛋白能被兔抗GST和抗PD-L1抗体识别.结论 成功构建了PD-L1原核表达载体,并在大肠杆菌BL21中获得高效表达.     

Roferon-A(基因重组α-2α干扰素)

<正> 本品由瑞士罗歇公司生产,采用重组DNA技术使大肠杆菌含有人用蛋白质密码,α—2α干扰素是高纯度含165个氨基酸序列的蛋白质,分子量约为19000μ。药理作用 本品直接抑制肿瘤细胞的繁殖,在抗肿瘤活性中调整宿主的免疫反应。在建康人本品肃清半衰期为3.7～8.5h,在7.3h的血药峰浓度为1250～2320Pg/ml。     

肺炎支原体P1黏附蛋白的表达及初步应用研究

目的对肺炎支原体（Mycoplasma pneumoniae,Mp）3’端的P1黏附蛋白基因片段进行密码子优化与重组表达、蛋白纯化、表达产物的免疫性分析及临床诊断初步应用研究。方法选择MpFH株P1蛋白序列优化并合成933bp的3’端p1反义基因片段（p1’）,将此基因片段插入表达载体pET—GST后,转入大肠杆菌BL21。诱导阳性克隆株表达重组蛋白后,纯化该蛋白质,用肺炎支原体感染阳性患者,血清通过免疫印迹实验鉴定其免疫反应性。结果诱导表达的重组蛋白经SDS—PAGE分析,重组蛋白的相对分子量约为59kDa。免疫印迹实验证实重组蛋白P1可与阳性肺炎支原体感染患儿血清发生特异性反应,用P1蛋白建立的间接ELISA法,其敏感性和特异性分别为95．5％和95．45％。结论已成功地在大肠杆菌中表达了P1蛋白,为MP感染的快速诊断提供了一种新的方法,也为进一步探讨P1蛋白的功能及其在MP感染发病机制中的作用奠定了基础。