A型肉毒毒素对兔耳增生性瘢痕组织中P物质、β1转移生长因子、α平滑肌肌动蛋白的影响

目的探讨A型肉毒毒素（botuliniumtoxintypeA,BTA）对兔耳增生性瘢痕组织中P物质（substanceP,SP）、β1转移生长因子（transforminggrowthfactorbeta一1,TGF—β1）和α平滑肌肌动蛋白（alphasmoothmusleactinA,αSMA）的影响及意义。方法12只日本大耳白兔,体重3kg,建立兔耳增生性瘢痕模型。将兔耳创面分为BTA注射组（I组）和瘢痕组（S组）,每组72个创面。大体观察创面愈合时间和瘢痕增生情况,统计术后14d时的创面愈合率。术后28d时,同法另取6只兔子的兔耳腹面正常皮肤为空白对照组（C组）,收集3组标本。实时定量PCR检测各组标本中SP、TGF-β1和α—SMA的mRNA含量,Western印迹法检测α—SMA的蛋白表达。结果（1）术后14d,Ⅰ组与S组的创面愈合率的差异无统计学意义;（2）1组SP和TGF一β1、α—SMA的mRNA含量较S组显著降低,但仍高于C组（P〈0．05）;（3）蛋白水平上,3组的α—sMA表达两组间比较差异均有统计学意义（P〈0．05）,且S组〉Ⅰ组〉C组。结论BTA注射不延迟创面愈合,并减少了兔耳增生瘢痕中SP、TGF-β1和α—SMA的mRNA表达,为其治疗增生性瘢痕的临床应用提供了一定的理论依据。     

二氢青蒿素抑制兔耳瘢痕增生的实验研究

目的：观察二氢青蒿素对兔耳增生性瘢痕增生的影响。方法：选取成年新西兰大耳白兔16只，建立兔耳增生性瘢痕动物模型，待上皮化后，对实验组、对照组分别给予二氢青蒿素（180mg／kg）和生理盐水（乙醇终浓度为0．1％）各10ml灌胃，术后28天和56天时观察药物对瘢痕增生指数（HI）的影响及光镜下瘢痕变化情况。结果：二氢青蒿素组与生理盐水组之间HI差异均有显著性意义（P〈0．01）；光镜下见二氢青蒿素组成纤维细胞凋亡增加及胶原纤维的含量降低。结论：二氢青蒿素可明显抑制兔耳增生性瘢痕的形成及瘢痕组织增生。     

ALA-PDT对兔耳增生性瘢痕抑制效应及作用机制的初步研究

目的：观察ALA-PDT（5-氨基酮戊酸光动力疗法）对兔耳增生性瘢痕形成的抑制作用及对转化生长因子β1（TGF-β1）表达的影响。方法：在兔耳腹侧面做直径1cm大小全层皮肤缺损创面3个/侧,共60个。随机分为以下三组：高浓度ALA-PDT组（n=20）：20%ALA介导PDT治疗;低浓度ALA-PDT组（n=20）：10%ALA介导PDT治疗;对照组（n=20）：不做治疗,待创面自然愈合。在创面形成术后的第6天、第13天分别进行ALA-PDT治疗,观察治疗组与对照组之间的瘢痕形成率、瘢痕增生指数、胶原纤维含量及TGF-β1表达情况的差异。结果：ALA-PDT治疗降低了瘢痕形成率,其中药物高浓度ALA-PDT组与对照组的差异有统计学意义（P〈0.01）;药物高浓度ALA-PDT组和药物低浓度ALA-PDT组的瘢痕增生指数、胶原纤维含量与对照组的差异有统计学意义（P〈0.05）;药物高浓度ALA-PDT组与对照组之间的TGF-β1的表达差异具有统计学显著性（P〈0.05）。结论：ALA-PDT对兔耳增生性瘢痕的形成有抑制作用,从而预防创伤后增生性瘢痕形成,该作用可能通过减少TGF-β1的产生而实现。     

傣药咪多领(云南琵琶甲)抑制兔耳瘢痕增生的实验研究

目的:观察傣药咪多领(云南琵琶甲)提取物制剂对兔耳增生性瘢痕组织的影响。方法:建立兔耳增生性瘢痕动物模型,术后28天将模型随机分为实验组、阳性药物(康瑞保)对照组和空白对照组,分别外用琵琶甲制剂、康瑞保或生理盐水,4周后观察各组瘢痕形态、瘢痕增生指数(HI)、成纤维细胞数量、胶原密度及转化生长因子TGF-β1的表达。结果:实验组、康瑞保对照组瘢痕增生指数(HI)均较空白对照组低,差异有显著性意义(P0.05)。实验组、康瑞保对照组成纤维细胞数量和胶原密度与空白对照组比较均减少或降低,差异有统计学意义(P0.05)。实验组、康瑞保对照组转化生长因子TGF-β1表达与空白对照组比较均减少(P0.05)。结论:傣药咪多领(云南琵琶甲)可抑制兔耳瘢痕增生。     

反义结缔组织生长因子抑制兔耳增生性瘢痕的作用

目的探讨反义结缔组织生长因子（connective tissue grouth factro,CTGF）对兔耳增生性瘢痕的抑制作用。方法选择20只大耳白兔建立增生性瘢痕动物模型,随机分成5组,对照组为A组,注射转化生长因子β1（TGF-β1）为B组,注射CTGF为C组,先后注射TGF-β1和CTGF为D组,注射反义CTGF为E组,每个治疗组又分为治疗7、14、20d3组;通过逆转录-聚合酶链式反应（RT-PCR）方法检测增生性瘢痕中CTGF mRNA的表达,免疫组织化学检测CTGF蛋白表达,HE、Masson染色观察切片内成纤维细胞数密度,计算机辅助图像分析测算切片内胶原纤维面密度。结果E组中CTGF mRNA、蛋白表达、成纤维细胞数密度和胶原纤维面密度均降低,与A、B组比较,差异有统计学意义（P〈0.05）。结论反义CTGF可以抑制兔耳增生性瘢痕的增殖过程,使瘢痕组织纤维化程度明显减轻。     

"黑布膏药"治疗增生性瘢痕的实验研究

目的 探讨"黑布膏药"防治增生性瘢痕的作用机制,为该药临床推广研发提供理论依据.方法 黑布膏药是一种外用中药制剂,其药物组成为黑醋、五倍子、蜈蚣、蜂蜜、冰片.利用兔耳腹侧面建立增生性瘢痕模型,将瘢痕随机分为实验组、康瑞宝埘照组和空白对照组3组,将药膏作用在兔耳瘢痕表面,分别于用药14 d和28 d取材,进行局部标本形态比较,应用HE染色进行瘢痕指数比较,应用免疫组化ABC法对比研究TGF-β1、aFGF细胞因子的变化.结果 空白对照组瘢痕彤成较厚,实验组和康瑞保组较薄,实验组和康瑞保对照组瘢痕增生发生率明显低于空白对照组;实验组和康瑞保对照组的瘢痕增生指数均明显低于空白对照组;兔耳瘢痕组织中转化生长因子-β1(TGF-β1)表达明显降低;酸性成纤维细胞生长因子aFGF表达增高.结论 "黑布膏药"有明显抑制兔耳增生性瘢痕的作用.     

他克莫司抑制兔耳瘢痕增生的作用及其机制研究

目的：他克莫司是临床广泛应用的一种药物,其对增生性瘢痕是否产生作用并无相关报道,为此提出并证实了他克莫司可以抑制兔耳瘢痕增生。方法：建立兔耳增生性瘢痕模型,选10只新西兰大耳白兔双耳腹侧用打孔器制作直径1cm圆形创面,伤后14天创面上皮化后给药,每只兔左耳为空白对照组涂等剂量凡士林软膏,右耳为他克莫司治疗组。分别在伤后14天、21天2、8天3、5天和49天采集标本,行HE染色,观察形态学差异;Real-t i me PCR检测纤维化相关因子TGF-β1、TGF-β2、Col l agen-α1等的表达。结果：HE染色可见他克莫司组成纤维细胞数量及胶原纤维较对照组明显减少,PCR结果可见TGF-β1、TGF-β2及Col l agen-α1表达较对照组在各时间点均减少。结论：实验组较对照组瘢痕明显减轻,证明他克莫司显著抑制兔耳瘢痕增生,可作为临床上治疗及预防瘢痕增生的全新疗法。     

兔耳增生性瘢痕中Th1、Th2细胞相关趋化因子的表达及意义

目的研究辅助性T淋巴（Yh）细胞亚群Th1、Th2细胞相关趋化因子CXCL0／IP-10、CXCL12／SDF-1,CC12／MCP-1、CC1-3／MIP-1d、CCL5／RANTES、CCLT／MCP-3在兔耳增生性瘢痕形成过程中的表达变化及意义。方法选取14只新西兰大耳白兔,制作兔耳增生性瘢痕模型及兔背部正常性瘢痕模型。于术后第21,28、35,42,49、56、63天空气栓塞法分别随机处死2只兔子,采集瘢痕标本,行HE染色,测量并计算瘢痕增生指数;行Real—timePCR检测CXCL10、CXCL12、CC12、CCL3、CC15、CCL7的表达。结果HE染色可见兔耳增生性瘢痕组、兔背部正常性瘢痕组类似人增生性瘢痕、正常性瘢痕的镜下表现。瘢痕增生指数显示,THS组于术后第28天增生程度达到高峰（P〈0．05）。Real-timePCR结果示,Th2细胞相关趋化因子CC12、CCL-3、CCL5、CCL7、CCL13在兔背部正常性瘢痕组基本无表达,而在兔耳增生性瘢痕组存在长时间高表达（P〈0．05）,Th1细胞相关趋化因子CXCL10、CXCL12在兔耳增生性瘢痕组长时间高表达,而在兔耳增生性瘢痕组处于低表达或不表达（P〈0．05）。结论在兔耳瘢痕增生过程中Th2细胞相关趋化因子cc也、CCL3、CCL5、CCL7存在长时间的高表达,Th1细胞相关趋化因子CXCL10、CXCL12低表达或无表达,提示瘢痕局部趋化因子的表达水平可能对Th1、Th2细胞在增生性瘢痕中的差异性表达起作用。     

重组血管生成抑制因子-1对增生性瘢痕组织血管及其相关因子的影响

目的 研究基因转染血管生成抑制对兔耳增生性瘢痕组织血管及其相关因子表达的影响.方法 将基因重组血管抑制剂Ad-METH-1作用于兔耳增生性瘢痕,用微循环显微镜检、组织学染色、免疫组织化学染色等方法,研究Ad-METH-1对兔耳瘢痕组织增生、血管生成及血管内皮细胞生长因子(vascular endothelial cell growth factor,VEGF)、碱性成纤维细胞生长因子(basic fibroblast growth factor,bFGF)表达的影响,探讨基因转染血管生成抑制对增生性瘢痕的影响.结果 Ad-METH-1注射后30 d,实验组瘢痕组织微血管计数为12.38±2.56,VEGF阳性细胞百分比为17.64%,bFGF阳性细胞为18.24%;对照组微血管计数为48.12±6.46,VEGF阳性细胞百分比为31.34%,bFGF阳性细胞为28.26%.结果 显示,实验组瘢痕组织微血管计数低于对照组,两组间差异有统计学意义(P＜0.01);实验组瘢痕组织VEGF及bFGF的阳性细胞百分比均低于对照组,两组间差异有统计学意义(P＜0.05).结论 Ad-METH-1对兔耳瘢痕组织增生、血管生成及VEGF、bFGF表达产生了明确的抑制作用,早期行血管抑制治疗可抑制增生性瘢痕的形成.基因转染血管抑制治疗有望成为一种有效的增生性瘢痕防治方法.     

细菌纤维素对兔耳增生性瘢痕中羟脯氨酸含量的影响

目的：观察细菌纤维素（BC）对兔耳增生性瘢痕的影响。方法：成年新西兰白兔30只,全麻下建立兔耳腹侧增生性瘢痕模型。在术后第21天（创面上皮化）后,根据每只兔耳5个不同瘢痕面随机给予不同处理方式分为5组,分别为3组实验组（贴敷持水性不同的细菌纤维素（BC）膜,A组BC（1：5）、B组BC（1：6）、C组BC（1：8））和2组对照组（贴敷疤痕贴的为阳性对照D组,未贴任何敷料且瘢痕自然生长的为阴性对照E组）。在给予瘢痕面不同处理方式之后的第0天、第14天、第21天、第28天、第42天、第56天分别切取标本行羟脯氨酸（Hpr）含量检测。结果：A、B、C三组瘢痕Hpr含量高于D组但低于E组（P〈0.01）;A、B、C、三组瘢痕Hpr含量分别比较A〉B〉C组（P〈0.05）。结论：兔耳创面愈合后增生性瘢痕贴敷的细菌纤维素抑制了兔耳瘢痕的增生,各组细菌纤维素减轻增生性瘢痕效果比较A组〈B组〈C组。     

积雪草甙对兔耳增生性瘢痕TGF-β1 mRNA表达的影响

目的：通过建立兔耳腹侧增生性瘢痕的模型,探讨积雪草甙（Asiaticoside,hd）对TGF-β1 mRNA表达的影响。方法：新西兰大白兔20只（喂养过程中死亡4只）,在兔耳腹侧制备直径为1cm、深达软骨膜的圆形瘢痕93个,随机分为4组：空白对照组、得宝松组、低浓度积雪草甙组（25mg／m1）、高浓度积雪草甙组（50mg／m1）,分别于瘢痕制备3天后局部应用相应药物,2周后取材,分别测量瘢痕组织TGF-β1 mRNA的表达量。结果：积雪草甙组与空白对照组相比,TGF-β1 mRNA表达量明显降低,有明显统计学差异（P〈0．01）;积雪草甙与阳性对照组相比,二者mRNA表达量无统计学差异（P〉0．05）;积雪草甙组之间,高浓度组与低浓度组相比有统计学差异（P（0．05）。结论：较高浓度积雪草甙注射液局部注射可以减少增生性瘢痕TGF-β1mRNA的表达。     

黑布药膏对兔耳增生性瘢痕成纤维细胞增殖的影响

目的：探讨黑布药膏对兔耳增生性瘢痕成纤维细胞增殖的影响。方法：成年大耳白兔24只,建立兔耳腹侧面增生性瘢痕模型,21天后,将瘢痕动物模型随机分为黑布药膏治疗组和瘢痕模型组,在黑布药膏治疗组瘢痕局部涂抹黑布药膏,每3天一次。在用药后第2、4、6、8周分别切取两组瘢痕组织,对比研究在瘢痕形成过程中黑布药膏对兔耳瘢痕成纤维细胞的影响。采用HE染色法观察瘢痕形态,计算瘢痕增生指数和成纤维细胞密度;采用免疫组化方法检测增殖细胞核抗原（PCNA）蛋白表达。结果：黑布药膏治疗组和模型对照组比较,PCNA蛋白表达明显减弱（P〈0.05）,光镜下见黑布药膏能明显抑制成纤维细胞增殖;黑布药膏能降低瘢痕增生指数和成纤维细胞密度,与模型对照组比较,差异有显著性意义（P〈0.05）。结论：黑布药膏可抑制兔耳增生性瘢痕成纤维细胞增殖。     

强脉冲光治疗兔耳增生性瘢痕

目的探讨强脉冲光（intense pulsed light,IPL）对兔耳增生性瘢痕的作用及机制。方法选取新西兰大白兔30只,在每只兔耳腹侧面制作2个增生性瘢痕模型,随机分为治疗组和对照组。治疗组瘢痕在建立模型第3、5、7周采用IPL进行治疗,对照组不进行治疗。观察各组瘢痕形态变化,并且于建立模型第3、5、7周IPL治疗前及建立模型第9周采集各组瘢痕组织标本,苏木精-伊红（HE）染色,采用免疫组织化学方法检测“平滑肌肌动蛋白（a—smooth mascle actin,a—SMA）、血管内皮细胞生长因子（vascular endothelial growth factor,VEGF）、增殖细胞核抗原（proliferating cell nuclear antigen,PCNA）的表达,并利用a—SMA的表达进行微血管密度（microvessel density,MVD）计数,观察微血管变化。建立模型9周时,切取正常喂养的2只兔子的腹侧正常皮肤组织标本进行同上的检查。结果经IPL治疗后的同期瘢痕色泽变淡、厚度降低。IPL治疗组瘢痕软化、完全平坦所需时间较对照组缩短。组织内a-SMA、VEGF和PCNA的表达均降低,差异有统计学意义（P〈0．05）。结论IPL对兔耳增生性瘢痕有明显的治疗作用。     

The effect of the angiogenesis inhibitor, angiostatin, on hypertrophic scarring

Introduction: Hypertrophic scarring is commonly seen by plastic surgeons in China. Since the etiology of hypertrophic scarring is still unknown, the only reliable treatment is surgical excision. To understand if angiogenesis plays an important role in the formation of hypertrophic scars, we investigated the effect of angiostatin, a potent angiogenesis inhibitor, on hypertrophic scar formation. Our hypothesis is that angiogenesis is required for increased scar formation and angiogenesis inhibition may be one of the methods that can be used to prevent the formation of hypertrophic scars. Methods: We have developed a reliable model in rabbits that results in hypertrophic scarring by creating a 6mm x 6mm full thickness skin wound on both ears. The cDNA for angiostatin is cloned into the pcDNA 3.1 mammalian expression vector. After the wounds re-epithelialized but prior to excessive scarring, the angiostatin expression vector was injected with Lipofectin 2000 once every two days. The expression of angiostatin was confirmed by RT-PCR. The scar tissue was harvested 14 days after injection and processed for histology and total protein. Histology was examined with routine stains, the amount of collagen deposition in the scar tissue was detected by proline assay, and TGF-β1 and VEGF expression was detected by western blot. Results: Compared to the control injection scar, the injection of angiostatin led to a much more normal-looking of scar in the rabbit ear. The proline assay demonstrated that the injection of the angiostatin expression vector resulted in much less collagen in the scar tissue. Western blot analysis showed there was less TGF-β1 and VEGF protein expression in the treated ear compared to the control. Conclusion: The introduction of a vector over-expression angiostatin can result in the decreased formation of hypertrophic scars in a rabbit ear model. This is corroborated by evidence of decreased collagen deposition, the primary extracellular matrix component of scars. In addition, we demonstrate the decreased expression of τηε pro-fibrosis growth factor, TGF-1, and the potent angiogenic factor, VEGF. These data suggest that angiogenesis inhibitors may have a potential role in the treatment of hypertrophic scarring.     

口服积雪苷和槲皮素对兔耳增生性瘢痕的影响

目的:探讨口服积雪苷和槲皮素对兔耳增生性瘢痕的影响。方法:新西兰大白兔9只,在兔耳腹侧制备标准创面(每耳4个,共72个),随机分为3组:空白对照组、积雪苷组及槲皮素组。4周后收集标本,从瘢痕横截面最高点制作切片,比较各组的瘢痕增生指数。结果:积雪苷组(1.55±0.03)与空白对照组(1.67±0.02)相比,瘢痕增生指数明显降低(17.9%),有统计学显著性差异(P=0.003)。槲皮素组(1.59±0.03)与空白对照组相比,两者瘢痕增生指数无统计学显著性差异(P=0.053)。结论:口服积雪苷可显著抑制兔耳瘢痕增生,口服槲皮素对兔耳增生性瘢痕的抑制作用尚待进一步实验证实。     

水蛭素对皮肤增生性瘢痕成纤维细胞bFGF及TGFβ_1表达的影响

目的：检测水蛭素对人皮肤瘢痕成纤维细胞碱性成纤维细胞因子（basic fibroblast growth factor,bFGF）、转化生长因子β1（transforming growth factor beta 1,TGFβ1）表达的影响,探讨水蛭素抑制瘢痕形成的作用及机制。方法：体外培养并鉴定人皮肤瘢痕成纤维细胞,实时荧光定量RT-PCR和免疫细胞化学法分别检测不同浓度水蛭素作用人成纤维细胞24h后,bFGF、TGFβ1的mRNA和bFGF、TGFβ1蛋白表达水平。结果：浓度为0.156～2.5 U/L的水蛭素可下调瘢痕成纤维细胞TGFβ1mRNA、蛋白的表达,同时上调bFGF的mRNA、蛋白的表达,不同浓度组间比较,差异有统计学意义。水蛭素可抑制增生性瘢痕成纤维细胞分泌TGFβ1,促进其分泌bFGF。结论：水蛭素抑制瘢痕可调节bFGF、TGFβ1分泌,由此抑制成纤维细胞的生长、增殖并进一步抑制瘢痕形成。     

TNF-α抑制兔耳瘢痕增生的实验研究

目的：通过建立兔耳增生性瘢痕模型,研究肿瘤坏死因子（tumor necrosis factor-alpha,TNF-α）在减轻增生性瘢痕形成中的作用。方法：建立兔耳增生性瘢痕模型,实验动物随机分为A、B、C、D、E五组,并设C组为对照组,A、B、D、E组瘢痕内分别注射不同浓度TNF-α溶液0．1ml（100ng／ml,500ng／ml,1000ng／ml,5000ng／ml）,C组瘢痕内注射等量生理盐水。观察增生性瘢痕组织块的组织结构、成纤维细胞的密度以及caspase-3蛋白的表达情况。分析不同浓度TNF-α对增生性瘢痕形成的影响。结果：瘢痕增生块减轻程度随TNF-α浓度增加而增加,即TNF-α浓度越高,增生性瘢痕体积越小,成纤维细胞密度越低,caspase-3表达强度越强。结论：肿瘤坏死因子-α可明显抑制兔耳增生性瘢痕的形成及瘢痕组织增生．     

建立更加稳定和有效的兔耳瘢痕模型

目的：建立更加稳定和有效的兔耳瘢痕模型。方法：选用16只新西兰大耳白兔,分别在兔耳腹侧中段作1cm×1cm的全层皮肤缺损共192个,以形态学、瘢痕增生指数及羟脯氨酸（HPr）的含量变化对创面愈合后形成的增生块,进行动态组织病理学、细胞增殖活性及胶原纤维合成等检测。结果：兔耳腹侧中段创面可产生类似于人类的增生性瘢痕,其发生率为91．5％,增生块最长持续时间可达120多天。结论：采用本实验的模型复制方法,可以得到更加稳定和有效的兔耳增生性瘢痕。     

15-脱氧-△^12,14-前列腺素J2对兔耳增生性瘢痕的作用

目的探讨γ过氧化物酶体增殖物激活受体（peroxisome proliferator activated receptor-7,PPAR-γ）的配体15-脱氧-△^12,14-前列腺素J2（15-deoxy-△^12,14-prostagliandxinJ2,15d—PGJ2）对兔耳增生性瘢痕I型胶原、结缔组织生长因子（connective tissue growth factor,CTGF）、α平滑肌肌动蛋白（a—smooth muscle actin,α—SMA）表达的影响,探讨15d—PGJ2防治增生性瘢痕的可能性。方法选取新西兰大白兔18只,在兔耳腹侧面制作2cm×3cm全层皮肤缺损创面,每耳2个,共计72个,建立兔耳增生性瘢痕动物模型,随机分为2组,一组为实验组,另一组为对照组,分别用15d—PGJ2和生理盐水行瘢痕内注射,1次／d,共7次。停药后第7、14、21天两组同时取材;每组每次切取12个组织块。应用免疫组织化学检测I型胶原、CTGF和α—SMA的表达。结果各组兔耳腹侧创面愈合后均不同程度出现类似人增生性瘢痕的组织块。与对照组相比,15dPGJ2注射后瘢痕体积缩小,变软变平,色泽轻度变浅。在各个时间点15d—PGJ2组I型胶原、CTGF和α-SMA的表达均较对照组低,且差异有统计学意义（P〈0．05）。结论PPAR-γ的配体15d—PGJ2可降低瘢痕内I型胶原、CTGF和α—SMA的含量,引起瘢痕萎缩,有一定防治瘢痕的作用,可能为临床治疗增生性瘢痕提供一条新的途径。