人前脂肪细胞的原代培养

[目的]建立人前脂肪细胞原代培养方法,以更深入地研究人体脂肪组织增生的生物学特征.[方法]选用成人的腹部脂肪组织,采用原代消化细胞培养法培养出棱形细胞;同时取皮肤组织,进行成纤维细胞培养作为对照.[结果]培养出的棱形细胞成分均一,增殖旺盛,分化率高.经形态学动态变化的观察,生长曲线及油红O脂肪染色抽取法测定,证明是功能活跃的前脂肪细胞,并在体外重现了其增殖的全过程.[结论]在成熟的脂肪组织中存在着可分化成熟、生成脂肪的前脂肪细胞.由于脂肪细胞是胰岛素作用的经典靶细胞之一,本实验为进一步研究与肥胖及胰岛素抵抗相关的疾病如多囊卵巢综合症等打下了基础.     

成人前脂肪细胞的原代培养

目的探索人前脂肪细胞的原代培养方法.方法取成人的腹部纯脂肪颗粒,采用原代消化细胞培养法培养出梭形细胞,对培养细胞进行形态学研究,测定生长曲线并用油红O脂肪染色法进行染色及定性.结果培养出的梭形细胞成分均一,增殖旺盛,分化率高,经动态形态学观察、生长曲线测定及油红O脂肪染色法测定,证明是功能活跃的前脂肪细胞.结论在成熟的脂肪组织中存在着可以增殖并分化成熟、形成脂肪组织的前脂肪细胞.组织工程化的脂肪组织是修复软组织缺损的最佳填充材料,该实验为脂肪组织工程的发展和应用打下了一定的基础.     

成人前脂肪细胞的原代培养

目的 探索人前脂肪细胞的原代培养方法。方法 取成人的腹部纯脂肪颗粒,采用原代消化细胞培养法培养出梭形细胞,对培养细胞进行形态学研究,测定生长曲线并用油红O脂肪染色法进行染色及定性。结果 培养出的梭形细胞成分均一,增殖旺盛,分化率高,经动态形态学观察、生长曲线测定及油红O脂肪染色法测定,证明是功能活跃的前脂肪细胞。结论 在成熟的脂肪组织中存在着可以增殖并分化成熟、形成脂肪组织的前脂肪细胞。组织工程化的脂肪组织是修复软组织缺损的最佳填充材料,该实验为脂肪组织工程的发展和应用打下了一定的基础。     

人网膜前脂肪细胞原代培养

目的：建立人网膜前脂肪细胞原代培养方法。方法：选取成人网膜脂肪组织,用原代消化细胞培养法培养出形态均一的梭形细胞,用条件培养基诱导分化,油红O染色进行脂肪细胞鉴定。结果：培养出的细胞形态均一,4-5代以内增殖旺盛。用条件培养基诱导后,细胞形态由梭形向圆形变化,细胞体积增大,胞浆内聚集脂肪颗粒,油红O染色鉴定为成熟的脂肪细胞。结论：人网膜脂肪组织中存在一定数量的前脂肪细胞,予以适当刺激可完成其向成熟脂肪细胞的分化。     

原代大鼠脂肪细胞胰岛素抵抗模型的建立

目的:建立一种大鼠脂肪细胞抵抗模型原代培养方法,为科研实验提供原代胰岛素抵抗大鼠脂肪细胞。方法:取4周龄大鼠附睾的脂肪组织,原代培养前脂肪细胞经分化后,采用地塞米松造模方法,建立胰岛素抵抗的原代大鼠脂肪细胞模型。结果:原代前脂肪细胞培养后,经分化成为成熟的脂肪细胞,脂肪细胞内脂滴聚集,用油红O染色后,确定分化成为脂肪细胞。用地塞米松造模,用葡萄糖氧化酶法测定葡萄糖含量,计算各组细胞的葡萄糖消耗量,确定胰岛素抵抗脂肪细胞模型。结论:用4周龄大鼠附睾组织能培养出大鼠脂肪细胞,并用1 μmol/L浓度的地塞米松培养48 h造模法建立了胰岛素抵抗的脂肪细胞模型。     

胰岛素抵抗患者前脂肪细胞培养及增殖与分化模型的建立

目的 探索多囊卵巢综合征(PCOS)胰岛素抵抗(IR)患者的前脂肪细胞原代培养模型.方法 取PCOS IR患者腹部纯脂肪颗粒,采用改进的"贴壁-天花板"法,培养出梭形细胞,同时取皮肤组织,进行成纤维细胞培养作对照,采用胰岛素样生长因子-1(IGF-1)为主的脂肪细胞分化培养液,诱导前脂肪细胞的分化.结果 培养出的梭形细胞成分均一,增殖旺盛,分化率高.经形态学动态观察、生长曲线及对IGF-1和地塞米松反应的测定证明其是功能活跃的前脂肪细胞,在体外重现了其增殖、分化的全过程.结论 采用改良"贴壁-天花板"法,能成功地培养出胰岛素抵抗患者前脂肪细胞;采用IGF-1取代胰岛素作为脂肪细胞分化培养液,可以诱导前脂肪细胞的分化.     

小鼠棕色脂肪原代培养模型的建立

目的:探索小鼠棕色脂肪细胞原代培养的方法?方法:取C57BL/6J小鼠棕色脂肪组织,采用胶原酶消化过滤法获得梭形细胞,对培养出来的细胞进行形态学观察,诱导分化后用油红O染色法染色定性,荧光定量PCR检测棕色脂肪标志基因表达情况?结果:培养出的梭形细胞成分均一,增殖旺盛,诱导分化后分化率高,经油红O染色证实为脂肪细胞,荧光定量PCR检测棕色脂肪标志基因UCP-1表达量明显升高?结论:从C57BL/6J小鼠棕色脂肪组织中可以分离出具有很强增殖?分化能力的前棕色脂肪细胞,这种棕色脂肪细胞原代培养模型的建立为在体外进一步研究棕色脂肪的功能提供了良好的基础?     

小鼠皮下和内脏前脂肪细胞原代培养模型的建立

目的:探索小鼠皮下和内脏前脂肪细胞的培养方法?方法:取C57BL/6J 小鼠腹股沟皮下脂肪和附睾旁内脏脂肪组织,采用胶原酶消化过滤法获得梭形细胞,对培养的细胞进行形态学观察,诱导分化后用油红O染色法染色定性,荧光定量PCR检测成脂功能标志基因表达情况?结果:培养出的梭形细胞成分均一,增殖旺盛,诱导后分化率高,经油红O染色证实分离获得的前脂肪细胞可以分化为成熟脂肪细胞,荧光定量PCR检测成脂功能标志基因Fabp4(fatty acid binding protein 4)的表达量明显升高?结论:从C57BL/6J 小鼠腹股沟皮下和附睾旁内脏脂肪组织中可以分离出具有很强增殖?分化能力的皮下和内脏前脂肪细胞,这种前脂肪细胞原代培养模型的建立为在体外进一步研究皮下?内脏脂肪功能的差异提供了良好的基础?     

甲状腺相关眼病患者眼眶脂肪抵抗素的表达

 【目的】通过检测抵抗素在甲状腺相关眼病患者及对照组眼眶脂肪组织和脂肪细胞中的表达，为进一步探讨抵抗素与甲状腺相关眼病的相关性打下基础。【方法】通过体外原代培养获得前脂肪细胞，前脂肪细胞在分化液的作用下转化为成熟脂肪细胞。用RT-PCR法检测眶脂肪组织、前脂肪细胞及成熟脂肪细胞中抵抗素mRNA的表达，并进行免疫组化检测抵抗素蛋白的表达。【结果】前脂肪细胞中无抵抗素mRNA及蛋白的表达。成熟脂肪细胞及眶脂肪组织中有抵抗素mRNA及蛋白的表达。免疫组化结果显示抵抗素蛋白位于成熟脂肪细胞胞浆中。【结论】甲状腺相关眼病患者眶脂肪中抵抗素mRNA及蛋白表达丰富，说明甲状腺相关眼病患者眶脂肪增多是因成熟脂肪细胞所占比例增加、脂肪细胞分化增强所致．     

甲状腺相关眼病患者眼眶脂肪抵抗素的表达

【目的】通过检测抵抗素在甲状腺相关眼病患者及对照组眼眶脂肪组织和脂肪细胞中的表达，为进一步探讨抵抗素与甲状腺相关眼病的相关性打下基础。【方法】通过体外原代培养获得前脂肪细胞，前脂肪细胞在分化液的作用下转化为成熟脂肪细胞。用RT-PCR法检测眶脂肪组织、前脂肪细胞及成熟脂肪细胞中抵抗素mRNA的表达，并进行免疫组化检测抵抗素蛋白的表达。【结果】前脂肪细胞中无抵抗素mRNA及蛋白的表达。成熟脂肪细胞及眶脂肪组织中有抵抗素mRNA及蛋白的表达。免疫组化结果显示抵抗素蛋白位于成熟脂肪细胞胞浆中。【结论】甲状腺相关眼病患者眶脂肪中抵抗素mRNA及蛋白表达丰富，说明甲状腺相关眼病患者眶脂肪增多是因成熟脂肪细胞所占比例增加、脂肪细胞分化增强所致．     

人大网膜间充质干细胞的体外培养、鉴定及诱导化分方法

目的建立人大网膜脂肪问充质干细胞（adiposederivedIIlesechymalSteITIcells,ADSCs）的原代培养及诱导分化为脂肪细胞的方法．方法术中取人大网膜脂肪组织,采用胶原酶消化法原代培养,经流式细胞仪鉴定细胞CD44、CD34、CD90和CD45分子、MTTr法测定细胞生长曲线,取P3细胞以3-异丁基-1-甲基黄嘌呤、胰岛素、地塞米松及吲哚美辛诱导该细胞向脂肪细胞分化,油红O脂肪染色法进行脂肪细胞鉴定．结果培养卅的细胞形态均-呈梭形或漩涡状生长,经流式细胞仪鉴定为ADSCs,细胞生长曲线表明P3细胞增值旺盛,用分化培养基诱导后,细胞形态由梭形变为圆形,细胞体积增大,胞浆内聚集脂肪颗粒,油红0染色鉴定为成熟的脂肪细胞．结论该方法能培养出形态均一的人大网膜ADSCs,经诱导后可向成熟脂肪细胞分化．     

甲状腺相关眼病患者眼眶前脂肪细胞的培养及分化

[目的]研究甲状腺相关眼病患者(TAO)眼眶组织中是否存在前脂肪细胞,在一定条件下能否分化为成熟脂肪细胞,探讨脂肪细胞在TAO发病中的作用.[方法]选用TAO患者眼眶中的脂肪颗粒,共8例(8只眼),采用组织块培养法培养细胞,观察细胞形态;细胞免疫组织化学方法检测前脂肪细胞因子-1的表达,初步验证前脂肪细胞的存在;诱导细胞向成熟脂肪细胞分化,油红O染色观察细胞形态及细胞内脂滴形成情况;RT-PCR检测分化过程中转录因子过氧化物酶体增殖体激活受体γ(PPARγ)表达的改变.[结果]原代培养细胞为梭形,增殖旺盛;免疫组化显示前脂肪细胞因子-1表达阳性;细胞可分化为成熟脂肪细胞,并伴有PPARγ基因表达的增强.[结论]TAO患者眼眶组织中存在着功能活跃的前脂肪细胞;进一步验证了脂肪细胞数量的增加在TAO发病中的重要作用.     

肥胖和缺氧对小鼠原代脂肪细胞分泌TNFa的影响

目的：常氧和缺氧培养正常和肥胖小鼠的原代脂肪细胞,比较其分泌的肿瘤坏死因子a（TNFa）水平,探讨缺氧在脂肪组织慢性炎症中的作用。方法：高脂及普通饮食喂养4周龄C57BL／6雄性小鼠16周,测量体质量、葡萄糖耐量、胰岛素耐量;处死小鼠后取睾周脂肪组织,提取原代脂肪细胞,常氧或缺氧培养24h后取上清,ELISA法测定培养基中TNFa的浓度。结果：高脂饮食喂养造成小鼠肥胖和胰岛素抵抗。常氧培养的肥胖小鼠脂肪细胞较正常小鼠的脂肪细胞分泌更多的TNFa;缺氧孵育比常氧孵育的正常小鼠脂肪细胞分泌更多的TNFa;但缺氧不进一步增加肥胖小鼠脂肪细胞分泌TNFa。结论：缺氧和肥胖均上调小鼠原代脂肪细胞TNFa的分泌,但缺氧不影响肥胖小鼠脂肪细胞分泌TNFa,提示肥胖小鼠脂肪细胞缺氧与其慢性炎症及胰岛素抵抗有关。     

人网膜前脂肪细胞原代培养及其生物学特性研究

目的建立人网膜前脂肪细胞原代培养的方法,研究内脏脂肪增生肥大和内分泌功能的生物学特性。方法选取人网膜脂肪组织,采用酶消化细胞原代培养出梭形细胞,对培养细胞进行形态学观察、MTT法测定生长曲线、油红O脂肪染色法进行脂肪细胞鉴定、酶联免疫法测定脂肪细胞因子瘦素和脂联素水平。结果培养出的梭形细胞成分均一。第3天开始增殖,4～9d为指数增长期,倍增时间约为60h。经分化诱导21d约有90％的细胞分化为成熟脂肪细胞。前脂肪细胞可检出低水平瘦素分泌,经诱导分化分泌量持续增多,第17天达峰值（1．6ng·ml^-1·24h^-1）,之后保持高分泌状态至诱导结束;而脂联素直到诱导分化第7天始可检测到低水平分泌,此时光镜下已可见胞质含脂滴的细胞;7～17d分泌逐渐增多,第17天分泌达峰值（99ng·ml^-1·24h^-1）,之后有明显下降趋势。经油红0脂肪染色和瘦素、脂联素分泌检测证实分离培养的细胞为功能活跃的前脂肪细胞。结论成功建立了人网膜前脂肪细胞模型,观察到瘦素和脂联素不同分泌模式。脂联素可作为鉴定前脂肪细胞分化成熟的内分泌功能特异标志物。     

绿色荧光蛋白基因在脂肪细胞分化研究中的应用

目的建立人脂肪细胞分化的绿色荧光蛋白活体检测动态模型,为进一步进行脂肪细胞分化及其相关基因表达研究奠定基础。方法用PCR法从培养的人前脂肪细胞总DNA中扩增出过氧化物体酶增殖物激活受体γ2(PPARγ2)基因启动子,将该启动子插入真核细胞表达载体pEGFP-1后转染3T3成纤维细胞及人前脂肪细胞,并诱导脂肪细胞分化。结果在胰岛素、地塞米松及3-异丁基-1-甲基黄嘌呤诱导下,人前脂肪细胞分化为成熟脂肪细胞时表达绿色荧光蛋白基因,而3T3细胞则不能诱导为脂肪细胞及表达绿色荧光蛋白基因。结论脂肪组织特异表达的PPARγ2基因启动子与绿色荧光蛋白基因构成的重组基因转化人前脂肪细胞后,能够用来动态活体检测脂肪细胞分化状态。这一模型的建立为脂肪细胞分化调控的分子机制研究提供一个更加方便的检测途径。     

甲状腺相关眼病患者眼眶前脂肪细胞的培养及分化

【目的】研究甲状腺相关眼病患者(TAO)眼眶组织中是否存在前脂肪细胞，在一定条件下能否分化为成熟脂肪细胞，探讨脂肪细胞在TAO发病中的作用。【方法】选用TAO患者眼眶中的脂肪颗粒，共8例(8只眼)，采用组织块培养法培养细胞，观察细胞形态；细胞免疫组织化学方法检测前脂肪细胞因子-1的表达，初步验证前脂肪细胞的存在；诱导细胞向成熟脂肪细胞分化，油红O染色观察细胞形态及细胞内脂滴形成情况；RT-PCR检测分化过程中转录因子过氧化物酶体增殖体激活受体γ(PPARγ)表达的改变。【结果】原代培养细胞为梭形，增殖旺盛；免疫组化显示前脂肪细胞因子-1表达阳性；细胞可分化为成熟脂肪细胞，并伴有PPARγ基因表达的增强。【结论】TAO患者眼眶组织中存在着功能活跃的前脂肪细胞；进一步验证了脂肪细胞数量的增加在TAO发病中的重要作用。     

绿色荧光蛋白基因在脂肪细胞分化研究中的应用

目的建立人脂肪细胞分化的绿色荧光蛋白活体检测动态模型，为进一步进行脂肪细胞分化及其相关基因表达研究奠定基础。方法用PCR法从培养的人前脂肪细胞总DNA中扩增出过氧化物体酶增殖物激活受体γ2（PPARγ2）基因启动子．将该启动子插入真核细胞表达载体pEGFP-1后转染3T3成纤维细胞及人前脂肪细胞，并诱导脂肪细胞分化，结果在胰岛素、地塞米松及30异丁基-1-甲基黄嘌呤诱导下，人前脂肪细胞分化为成熟脂肪细胞时表达绿色荧光蛋白基因，而3T3细胞则不能防导为脂肪细胞及表达绿色荧光蛋白基因。结论脂肪组织特异表达的PPARγ2基因启动子与绿色荧光蛋白基因构成的重组基因转化人前脂肪细胞后，能够用来动态活体检测脂防细胞分化状态。这一模型的建立为脂肪细胞分化调控的分子机制研究提供一个更加方便的检测途径。     

人眼眶前脂肪细胞的培养和诱导分化及鉴定

目的近来研究显示,人眼眶脂肪组织中的前脂肪细胞可能参与多种疾病的发病过程。文中建立人眼眶前脂肪细胞原代培养模式,对其进行培养、诱导分化及鉴定,以便深入了解人眼眶前脂肪细胞的生物学特性。方法从18～56岁成人眼眶脂肪组织中分别以组织块法及酶消化法分离得到前脂肪细胞,进行形态学观察,成脂诱导分化,并对其进行鉴定。结果 2种方法均可获得前脂肪细胞,细胞为长梭形,呈"S"形生长,可成脂分化,且油红O染色阳性。结论从人眼眶脂肪组织中可分离出纯度高、增殖快、成脂分化率高的前脂肪细胞。     

雌二醇对人网膜脂肪细胞分泌脂肪细胞因子的研究

目的 体外原代培养人大网膜前脂肪细胞,诱导其分化成熟过程中,探讨雌二醇对脂肪细胞分泌瘦素和脂联素的作用. 方法 选取择期开腹手术患者的新鲜脂肪组织,采用胶原酶消化的方法分离培养人大网膜前脂肪细胞,诱导分化至成熟后分别用 1nmol/L、10nmol/L、100nmol/L的雌二醇干预24h后收集上清液.用酶联免疫吸附法同批检测所收集细胞上清液中瘦素和脂联素蛋白含量.     

白细胞介素6对人原代脂肪细胞增殖分化的影响

目的:近来研究显示,肥胖是一种慢性低度炎症,脂肪组织能够分泌众多炎性因子,其中,白细胞介素6(IL-6)是最重要的介质之一.文中观察IL-6对人原代脂肪细胞的增殖和分化的影响.方法:用酶消化法获得人原代脂肪细胞,MTT法检测人原代脂肪细胞生长增殖的状况.分化液诱导脂肪细胞分化至产生脂滴,同时用不同浓度IL-6(0、1、5、10、50、100、1000pg/ml)干预脂肪细胞分化,油红O染色测定脂肪细胞脂滴合成状况.结果:IL-6能抑制脂肪细胞的增殖,其中5pg/ml组细胞增殖被抑制14.1%(P＜0.05),10 pg/ml组被抑制18.7%(P＜0.05).IL-6能够抑制细胞分化,减少脂肪的合成,其中1pg/ml组最为明显(P＜0.05).结论:IL-6能有效抑制人原代脂肪细胞的增殖,并且抑制人原代脂肪细胞从前脂肪细胞向成熟脂肪细胞的分化.