磁性纳米颗粒Fe_3O_4@SiO_2的制备及在全血DNA提取中的应用

目的自制Fe_3O_4@SiO_2磁性纳米颗粒并评价在全血样本中DNA提取效果,进一步研究开发磁珠法检测HBV DNA的技术。方法采用溶剂热法自制Fe_3O_4磁性纳米颗粒,并用表面化学修饰法制备Fe3O4@SiO_2磁性复合颗粒;利用该颗粒经吸附、洗涤、洗脱等步骤提取全血样本中DNA,并通过电泳、PCR扩增等传统技术检测DNA提取效果,与煮沸法提取血清DNA样本的效果进行对比。结果成功制备出直径约550 nm的Fe_3O_4@SiO_2磁性纳米颗粒,该颗粒分散均匀;自制的磁性纳米颗粒可用于全血DNA提取与纯化,实验操作简便。自制磁性纳米颗粒提取全血DNA浓度为150.56 ng/μL,纯度为1.53;该提取方法与传统煮沸裂解法对96份样本进行对照研究,证实其灵敏度有较大提高。结论利用自制的Fe_3O_4@SiO_2磁性纳米颗粒和合适的缓冲液体系,可成功地提取纯度较高的DNA,通过PCR扩增及对比实验表明,该磁性纳米颗粒及其提取工艺经优化后,可用于传染病的体外分子诊断研究。     

载Fe3O4液态氟碳纳米粒增强磁共振成像的实验研究

目的 制备载Fe₃O₄液态氟碳(Fe₃O₄-PFOB)纳米粒,并探讨其增强磁共振成像效果。方法 采用薄膜-超声法制备Fe₃O₄-PFOB纳米粒,并检测其理化性质。将24只健康SD大鼠随机分为3组:Fe₃O₄-PFOB纳米粒组(静脉注射Fe₃O₄-PFOB纳米粒)、PFOB纳米粒组(静脉注射PFOB纳米粒)及生理盐水组(静脉注射生理盐水)。对各组大鼠于处理后24 h行肝脏MR扫描。扫描完成后取出大鼠肝脏组织,进行HE及普鲁士蓝染色观察。 结果 所得样品为膜壳装载Fe₃O₄、中心包裹液态氟碳的纳米粒,呈球形,粒径(272.9±19.5)nm。注射Fe₃O₄-PFOB纳米粒24 h后,大鼠肝实质信号显著降低,肝脏-肌肉信号比明显减少,与其余两组比较差异均有统计学意义。普鲁士蓝染色可见Fe₃O₄-PFOB纳米粒组大鼠肝实质内有较多蓝色颗粒分布,其余两组染色阴性。HE染色各组大鼠肝脏均未见明显的形态学改变。结论 Fe₃O₄-PFOB纳米粒能有效增强磁共振成像效果,可以用作MRI阴性对比剂。     

用纳米磁珠吸附富集样本中结核分支杆菌

摘要：目的：制备纳米磁珠用以吸附富集样本中结核分支杆菌 (MTB),有效提高培养的阳性率和实验操作安全性。 方法：用化学共沉淀法制备表面包被PEG600或油酸的纳米Fe₃O₄颗粒,在基本密闭系统下培养MTB,观察比较两种磁珠在3种pH下吸附能力的差异;并对包被PEG600的纳米磁珠的吸附容量进行测定。 结果：自制的两种磁珠具备显著的MTB吸附能力,两种磁珠之间以及不同pH下无明显差异,但pH 5.3条件下油酸纳米磁珠富集的MTB菌落形成较小。自制PEG600纳米磁珠的吸附能力为每100 μL 1~10 μg MTB磁珠悬液。 结论：自制的纳米磁珠能有效地吸附MTB,以PEG600纳米磁珠为优,并能够有效避免环境污染。     

基于类芬顿反应构建磁性纳米粒治疗卵巢癌:体外实验

目的 构建具有类芬顿反应性能的磁性靶向纳米粒,评价其体外光声成像效果及联合催化反应下抑制卵巢癌细胞的作用。方法 以双乳化法制备包裹四氧化三铁（Fe₃O₄）及葡萄糖氧化酶（GOx）的磁性聚乳酸羟基乙酸共聚物（PLGA）纳米粒Fe₃O₄@PLGA-GOx,观察其基本特性、体外稳定性及释药效果;采用酶标仪监测其联合催化活性,以共聚焦显微镜观察细胞摄取纳米粒能力;以荧光显微镜和流式细胞术观察纳米粒在联合催化作用下产生细胞毒性活性氧的能力;用细胞计数试剂盒（CCK-8）检测磁性Fe₃O₄@PLGA-GOx体外杀伤人卵巢癌SKOV3细胞的能力,并评价其体外光声成像效果。结果 成功制备出磁性纳米粒Fe₃O₄@PLGA-GOx,平均粒径（290.81±108.52）nm,表面电位（－18.41±5.90）mV;Fe₃O₄及GOx的包封率分别为（91.34±2.35）%和（26.53±6.72）%。外部磁场作用下,细胞对纳米粒摄取增加;随纳米粒浓度增加,光声信号增强。Fe₃O₄@PLGA-GOx可介导类芬顿反应,产生活性氧并发挥细胞毒性作用杀伤肿瘤细胞。结论 成功制备的具有类芬顿反应性能磁性纳米粒在光声成像引导下具有体外催化治疗肿瘤细胞作用。     

趋磁细菌磁小体及其相关MRI报告基因分子影像学研究

趋磁细菌受基因调控形成纳米Fe₃O₄颗粒——磁小体,自带天然脂性包膜,其独特结构与特性受到分子影像学研究的重视,特别是纯化磁小体在磁性粒子成像中的应用和磁小体相关调控基因在MRI报告基因的分子影像学中的应用。相关研究逐年增多,但有关MRI报告基因的研究尚处于初级阶段。本文对趋磁细菌磁小体及其相关基因在MRI报告基因的分子影像学研究进行综述。     

氧化钨(WO3-x@BSA)纳米颗粒的CT成像

目的 探讨氧化钨（WO_3-x@BSA）纳米颗粒作为CT对比剂的CT成像价值。方法 测定以不同浓度WO_3-x@BSA纳米颗粒、碘海醇为对比剂时增强CT的CT值;在管电压相同时,测定不同浓度钨的CT值;绘制浓度与CT值、电压与CT值的关系曲线。进行动物模型体内、外实验,通过尾静脉和腹腔2种注射方法将WO_3-x@BSA纳米颗粒分别注入2只活体SD大鼠体内,经门静脉将WO_3-x@BSA纳米颗粒注入新鲜离体猪肝,观察WO_3-x@BSA纳米颗粒作为对比剂的CT成像效果。结果 相同浓度时,钨对比剂的CT值高于碘对比剂,图像密度更高;当WO_3-x@BSA纳米颗粒对比剂浓度相同时,CT值随管电压的减小而增大。经不同途径注入大鼠体内的WO_3-x@BSA纳米颗粒均可到达各组织脏器,CT呈高密度。WO_3-x@BSA纳米颗粒进入新鲜离体猪肝后沿血管进行扩散、浸润分布,CT成像效果良好。结论 WO_3-x@BSA纳米颗粒作为对比剂CT成像效果良好。     

纳米磁珠法与试剂盒法分析载脂蛋白E基因的多态性

背景：相对于血液标本,口腔拭子标本更利于大规模载脂蛋白E基因多态性分析的研究,但目前对口腔拭子标本基因组DNA的提取尚无统一方法。 目的：探索合适的口腔拭子标本基因组提取方法以分析载脂蛋白E基因的多态性。 方法：收集50例散发性阿尔茨海默病患者口腔拭子标本,每份标本分别应用纳米磁珠法与PicoDNA微量核酸提取试剂盒法提取基因组DNA,对比分析两种方法获得的基因组DNA纯度和浓度,后续进行PCR反应,应用DNA电泳确认有无成功扩增出目的条带,通过DNA测序方法分析载脂蛋白E基因的多态性。 结果与结论：两种方法提取的基因组DNA纯度均较好,纳米磁珠法提取的基因组DNA浓度要高于PcioDNA微量核酸提取试剂盒法所得浓度（P〈0.05）。两组获取的基因组DNA均可成功进行PCR扩增,但电泳结果示纳米磁珠法扩增的目的条带更清楚。两组PCR产物DNA测序结果一致,载脂蛋白E基因ε2、ε3、ε4基因型的比例分别是6%,71%,23%。表明纳米磁珠法相对于PcioDNA微量核酸提取试剂盒法提取口腔拭子标本基因组DNA更适合用于大样本载脂蛋白E基因多态性的研究。     

免疫纳米荧光碳点技术快速检测乙型副伤寒沙门菌

摘要:目的:建立一种以新型纳米材料——纳米荧光碳点(carbon dots,CDs)免疫示踪技术快速检测样本中细菌的方法。 方法: 以检测乙型副伤寒沙门菌为例建立方法。用抗沙门菌Ha因子抗体耦联CDs制备成免疫纳米荧光碳点;用抗沙门菌O₄因子抗体耦联磁珠粒对样本中乙型副伤寒沙门菌进行富集后,与抗Ha抗体耦联的CDs进行特异性结合,形成抗O₄-磁珠粒-细菌-抗Ha CDs“三明治”式免疫复合物;再用免疫亲和分离液移除复合物中的磁珠粒,借助荧光光谱仪测定分离液中CDs的荧光强度,推算出样品中致病菌的污染情况。 结果：抗Ha-CDs可有效结合抗O₄磁珠粒富集的细菌,对乙型副伤寒沙门菌的最低检测限为10³ CFU/mL,总时间约为2 h。 结论：建立的CDs技术可用于样本中乙型副伤寒沙门菌的快速检测。     

儿童肠重复畸形的99TcmO4-动态平面显像、CT和超声表现

目的 探讨儿童肠重复畸形的超声、CT及⁹⁹Tc^mO₄-动态平面显像表现。方法 回顾性分析18例经手术病理证实为肠重复畸形患儿的超声（n=14）、CT（n=10）及⁹⁹Tc^mO₄-动态平面显像（n=18）表现。结果 18例中2例为广泛管状肠重复畸形,15例为单发囊状或囊实性畸形,1例为双囊状重复畸形。18例中3例含异位胃黏膜,15例未见异位胃黏膜。14例行超声检查的患儿中,11例表现为形态较固定的厚壁肠管样无声团诊为肠重复畸形,1例表现为一大一小"葫芦"形两腔相通的厚壁囊性管腔结构,均正确诊断,余1例误诊、1例漏诊。CT检查可见7例均表现为厚壁囊性为主占位,与肠道关系较密切,1例诊断为其他囊性病变,2例肠管状分布畸形漏诊。⁹⁹Tc^mO₄-动态平面显像的3例均为阳性,2例表现为与小肠分布相对应的弥漫性异常放射性浓聚,均正确诊断,1例为小团状异常固定放射性浓聚灶,提示肠重复畸形可能。结论 超声、CT及⁹⁹Tc^mO₄-动态平面显像检查各有优势,超声检查因无辐射、操作简便,常作为筛查首选,CT显示解剖结构较全面,⁹⁹Tc^mO₄-动态平面显像有助于诊断临床高度怀疑肠重复畸形,尤其对于CT、超声无明确阳性表现者。     

99TcmO4- SPECT/CT评估131I治疗格雷夫斯病效果

目的 观察⁹⁹Tc^mO₄^- SPECT/CT评估¹³¹I治疗格雷夫斯病（GD）效果的价值。方法 根据随访结果将44例接受¹³¹I治疗的GD患者分为治愈组（n=20）、未愈组（n=9）和甲减组（n=15）,观察各组治疗前、后⁹⁹Tc^mO₄^- SPECT/CT定量参数的差异,包括甲状腺体积、平均标准摄取值（SUV_mean）、最大标准摄取值（SUV_max）、锝摄取率及功能甲状腺质量（FTM）,及其与总三碘甲腺原氨酸（TT₃）、总甲状腺素（TT₄）、游离三碘甲腺原氨酸（FT₃）、游离甲状腺素（FT₄）及促甲状腺素（TSH）水平的关系,并观察各参数评估¹³¹I疗效的效能。结果 治疗前,3组甲状腺体积及SUV_mean差异均有统计学意义（P均<0.05）,而SUV_max、锝摄取率及FTM间差异无统计学意义（P均>0.05）。治疗后,3组甲状腺体积、SUV_mean、SUV_max、锝摄取率及FTM差异均有统计学意义（P均<0.05）;且所有患者治疗后甲状腺体积、SUV_mean、SUV_max、锝摄取率及FTM均较治疗前明显减小（P均<0.001）。其中,治愈组和甲减组治疗后甲状腺体积、SUV_mean、SUV_max、锝摄取率和FTM均较治疗前明显减小（P均<0.001）,而未愈组则无明显变化（P均>0.05）。治疗前、后甲状腺24 h摄碘率差值与SUV_mean差值及SUV_max差值均呈极强正相关（r=0.86、0.84,P均<0.05）,与FTM差值呈中度正相关（r=0.46,P<0.05）,而与锝摄取率差值呈弱正相关（r=0.38,P<0.05）。治疗前、后甲状腺体积差值与TT₃差值呈弱正相关（r=0.37,P<0.05）,而与FT₃差值呈中度正相关（r=0.43,P<0.05）。治疗前SUV_mean、SUV_max和锝摄取率判断¹³¹I治疗有效的曲线下面积（AUC）分别为0.84、0.74和0.85;治疗后,甲状腺体积、SUV_mean、SUV_max、锝摄取率及FTM较治疗前变化百分比的AUC分别为0.76、0.92、0.94、0.95及0.96,最佳截断值分别为34.50%、18.50%、24.50%、55.00%和53.00%。结论 ⁹⁹Tc^mO₄^- SPECT/CT定量参数甲状腺体积、SUV_mean、SUV_max、锝摄取率和FTM评估¹³¹I治疗GD效果具有一定价值。     

酚/氯仿法和盐析法提取人类外周血基因组DNA方法的比较

目的比较两种不同方法提取的基因组DNA的纯度、产量和后续实验效果。方法采用酚/氯仿法和盐析法两种方法直接从全血中提取基因组DNA,并采用电泳、PCR和基质支持的激光释放/电离飞行时间质谱分析（MALDI-TOF MS）方法进行检测。结果酚/氯仿法提取的基因组DNA纯度高于盐析法（P〈0.001）,但两组纯度平均值都高于1.80;没有发现两种方法提取的DNA浓度存在差异（P=0.819）。两组DNA在电泳中都没有出现明显拖尾现象,均很容易扩增出胰岛素诱导基因2片段,并且在MALDI-TOF MS检测中,两组DNA样本结果没有明显差异。结论酚/氯仿法和盐析法提取的基因组DNA质量无明显差异。相比酚/氯仿法,盐析法能简便、快速、无毒地进行DNA提取,适合于大规模的分子生物学实验。     

携带产新型碳青霉烯酶基因blaIMP-38肺炎克雷伯菌致病性分析

摘要：目的: 了解携带产新型碳青霉烯酶基因bla_IMP-38肺炎克雷伯菌（Kp）血清分型与毒力因子,探讨其致病性。 方法: 提取中南大学湘雅医院新生儿病房分离的9株携带bla_IMP-38的Kp基因组DNA,用PCR方法检测7种荚膜血清型（K1、K2、K3、K5、K20、K54、K57）和25种毒力基因（黏附性、铁摄入能力、荚膜多糖、脂多糖、尿素酶、抗血清活性、侵袭素、毒素及其他相关基因）。 结果: 9株携带bla_IMP-38的Kp菌株均携带9种毒力基因,分别为fimH1、mrkD、ycfm、kpn、entB、irp-2、uge、wabG和ureA,未发现其他毒力基因和上述荚膜血清型基因。 结论: 分离的携带bla_IMP-38的Kp菌株黏附性强,易在呼吸道和医疗器械定植,同时含有肠毒素和耶尔森毒素,可能是该克隆株致病性强的重要原因。     

基因组DNA高通量提取技术及其在骨髓库捐献者样本HLA基因分型中的应用

本研究旨在建立从全血EDTA抗凝样本中高通量提取基因组DNA的有效方法,以常规应用于Luminex rSSO HLA流式磁珠基因分型。使用2ml深孔板和TECAN DNA全自动工作站,从288份骨髓捐献者样本中提取基因组DNA提取的DNA样本用紫外分光光度仪测定其浓度和纯度,并采用琼脂糖凝胶电泳检测DNA的完整性;DNA样本用One lambda rSSO HLA—A、B和DRB1基因分型试剂盒进行PCR扩增、分子杂交和Luminex流式磁珠分析仪检测,统计分析每一DNA样本HLA—A、B和DRB1基因扩增产物经DNA探针分子杂交后的阳性磁珠和阴性磁珠的荧光信号强度。结果表明：从400μl全血中提取了基因组DNA,288份样本的DNA产量平均为3．217±0．715μg,A260／A280值平均为1．710±0．103,A260-A320／A280-A320值平均为1．761±0．151;用琼脂糖凝胶电泳法测得DNA的分子量均大于15kb;每一样本mA—A、-B和-DRB1杂交后的阳性磁珠的荧光信号强度均〉600RFU,而阴性磁珠的荧光信号强度〈50RFU。结论：本方法适用于从大量全血样本中快速提取基因组DNA,所得的基因组DNA适用于高通量中华骨髓捐献者样本的HLA流式磁珠基因分型等下游的移植免疫学与分子生物学实验。     

耐碳青霉烯类肠杆菌科细菌的耐药性分析及基因型研究

摘要：目的：探讨本院耐碳青霉烯类抗菌药物肠杆菌科细菌(CRE)的耐药性及基因型。 方法：收集临床分离的30株CRE,用改良Hodge试验检测碳青霉烯酶表型,PCR检测碳青霉烯酶bla_KPC、bla_IMP、bla_VIMVIM、bla_OXA-48及bla_NDM-1基因,阳性结果进行DNA测序,BLAST比对确定基因型。 结果: 30株CRE以肺炎克雷伯菌为主,占80%;感染患者主要来自ICU;感染部位以下呼吸道为主,占93.3%;对常用抗菌药物呈多重耐药;其中25株改良Hodge试验阳性;PCR扩增和DNA测序显示11株为bla_IMP-4,12株为bla_IMP-8,未检出bla_KPC、bla_VIM、bla_OXA-48及bla_NDM-1目的基因。 结论: bla_IMP-4型和bla_IMP-8型碳青霉烯酶是本院肠杆菌科细菌产碳青霉烯酶的主要型别,且已在ICU中局部流行。     

99Tcm-3PRGD2SPECT显像临床应用进展

整合素在肿瘤血管生成及转移中起着重要作用。精氨酸-甘氨酸-天冬氨酸(RGD)能够与整合素α_vβ₃亚型特异性结合。以RGD为基础开发的SPECT显像剂——⁹⁹Tc^m-联肼尼克酰胺-3聚乙二醇-精氨酸-甘氨酸-天冬氨酸环肽二聚体(⁹⁹Tc^m-3PRGD₂)可与细胞表面的整合素α_vβ₃受体相结合,主要用于诊断肿瘤和评估疗效等。本文就⁹⁹Tc^m-3PRGD₂显像临床应用进展进行综述。     

儿茶酚O-甲基转移酶基因多态性分析方法探讨

目的建立限制性片段长度多态性(RFLP)和变性高效液相色谱(DHPLC)分析儿茶酚O-甲基转移酶(COMT)基因多态性的方法,探讨分析基因多态性与临床疾病发生风险关系的方法学.方法从子宫内膜癌患者和对照组的全血和蜡块包埋组织提取DNA,应用RFLP和DHPLC法检测COMT基因第4号外显子第158位密码子G/A的多态性,并结合DNA测序法分析两种方法的一致性.结果全血和蜡块组织提取的DNA均可扩增PCR产物,且可行酶切反应;所有全血和小部分蜡块DNA PCR产物可行DHPLC分析.测序法与RFLP法比较,Kappa值=0.697;与DHPLC测序法比较,Kappa值=0.924.结论 RFLP与测序法的一致性好,适用于全血和蜡块提取的DNA的基因多态性分析;DHPLC与测序法的一致性极好,但对机器和样本要求较高,适用于血DNA的基因多态性分析.     

自动工作站提取基因组DNA方法的建立及其在HLA基因分型中的应用

目的研究和建立从大量全血标本中提取基因组DNA的有效方法,以应用于Luminex HLA流式磁珠基因分型。方法使用自动工作站(瑞士TECAN公司)从600μl全血中提取基因组DNA,提取的DNA样本用紫外分光光度仪测定其浓度和纯度,DNA的完整性用琼脂糖凝胶电泳检测,并统计分析每一DNA样本流式磁珠HLA-A,B和DRB1基因扩增产物经探针分子杂交后的荧光信号强度。结果从600μl全血中提取基因组DNA,含量平均为10.052±0.824μg,样本的A260nm/A280nm值平均为1.821±0.201。琼脂糖电泳法测得DNA的分子量约为21kb,HLA-A,B和DRB1位点PCR产物杂交后的平均荧光信号强度分别为2 183.84±478.12(exon2),2 168.28±338.59(exon3);2 057.27±397.41(exon2),1959.78±283.24(exon3);3 643.38±327.85。结论此方法适用于从大量全血样本中快速提取基因组DNA,所得基因组DNA适用于高通量HLA流式磁珠基因分型等下游的分子生物学实验。     

相变型液态氟碳纳米粒超声显像裸鼠移植瘤实验研究

目的 制备一种载Fe₃O₄包裹PFP的相变型液态氟碳纳米级超声造影剂PFP-MPLGA,观察其在裸鼠移植瘤内发生相变及增强超声显像的效果,探讨其对肿瘤组织的损伤。方法 用单乳化法制备PFP-MPLGA纳米粒,检测其一般特性;对裸鼠移植瘤局部注射纳米粒,用红外线照射肿瘤部位,用超声诊断仪观察纳米粒相变后增强超声显像的效果。结果 成功制备出PFP-MPLGA纳米粒;裸鼠瘤内局部注射纳米粒后,红外线照射可致其相变,显著增强超声显像;肿瘤组织HE染色观察到肿瘤组织内有大量空泡产生。结论 PFP-MPLGA纳米粒在红外线照射下能在移植瘤内发生相变增强超声显像,且能起到消融肿瘤组织的作用。     

七氟醚联合N2O吸入麻醉对老年大鼠学习与记忆的影响

目的：探讨七氟醚联合N₂O吸入麻醉对老年大鼠短期及长期学习与记忆能力的影响。方法：将40只18月龄SD大鼠随机分配入麻醉组和对照组。麻醉组给予1.3%七氟醚+50% N₂O吸入4 h，对照组给予50% O₂吸入4 h。两组均于麻醉48 h后进行连续6 d的定航训练，并分别于第7、14天进行空间探索实验。水迷宫实验结束后，大鼠断头取脑，分别采用Western印迹法和免疫组化检测海马细胞凋亡情况。结果：麻醉组大鼠在第1次空间探索实验时，认知功能较对照组减退（P<0.05），且海马区神经细胞凋亡增加（P<0.05）；第2次空间探索实验中，两组认知功能差异无统计学意义，且两组凋亡相关指标表达量差异无统计学意义。结论：七氟醚联合N₂O吸入麻醉致老年大鼠认知功能障碍呈可逆性。     

细胞裂解法提取全血基因组DNA及两种抗凝剂对其结果的影响

在以医学检验为目的PCR实验和分子生物学研究中,基因组DNA模板的提取是实验成功的关键因素之一.如果样品已高度降解,即使DNA量很大也不会产生任何信号[1].目前提取全血基因组DNA的方法较多,为研究采用较为经济简便的方法从样本中提取高纯度、高产量的DNA,作者在原有的盐析法[2]基础上建立了细胞裂解法提取抗凝全血DNA,同时与采用EDTA.K2和枸橼酸钠这2种抗凝剂处理的全血提取DNA的纯度、产量进行了比较.