紫云英苷通过上调PHD2抑制缺氧诱导的卵巢癌细胞增殖和侵袭

目的 探索紫云英苷(ATG)抑制卵巢癌细胞HIF-1α表达及细胞增殖和侵袭的作用及机制。方法 分别给予缺氧条件培养的OVCAR-8和SK-OV-3细胞ATG(ATG组)或ATG联合PHD2抑制剂IOX2(ATG+IOX2组)处理24h,并以仅缺氧培养24h的细胞为空白对照。采用Western blot和实时荧光定量PCR检测各组细胞HIF-1α、PHD2、PCNA、MMP-2和MMP-9蛋白和mRNA表达变化;以正常条件培养的细胞为阴性对照,采用缺氧试剂盒检测ATG处理后细胞缺氧状态变化;采用Transwell实验检测各组细胞侵袭能力;采用CCK-8试剂盒检测各组细胞增殖活力。分别以梯度浓度的ATG联合梯度浓度的卡铂或顺铂处理OVCAR-8和SK-OV-3细胞72h后采用CCK-8试剂盒检测细胞增殖活力,并进行联合效应分析。结果 缺氧培养条件下,与空白对照组相比,ATG组OVCAR-8和SK-OV-3细胞PHD2蛋白及mRNA表达均升高,细胞增殖和侵袭能力均降低,HIF-1α蛋白表达均减少,PCNA、MMP-2和MMP-9蛋白及mRNA表达均降低,但HIF-1α的mRNA水平以及细胞缺氧状态无明显变化;而与ATG组相比,ATG+IOX2组OVCAR-8和SK-OV-3细胞增殖和侵袭能力均增加,PCNA、MMP-2、MMP-9蛋白和mRNA表达及HIF-1α蛋白表达均升高,但HIF-1α的mRNA水平无明显变化。此外,ATG可明显增强OVCAR-8和SK-OV-3细胞对顺铂和卡铂的敏感性,具有较好的联合效应。结论 ATG可通过上调PHD2表达,促进缺氧诱导的HIF-1α降解,进而抑制卵巢癌细胞增殖和侵袭。     

熊果酸联合顺铂对卵巢癌干细胞的增殖、凋亡、侵袭和迁移的影响

目的:观察熊果酸（ursolic acid,UA）联合顺铂(DDP)对卵巢癌干细胞增殖、凋亡、侵袭及迁移能力的影响及其作用机制。方法:通过体外无血清悬浮培养人卵巢癌SKOV3干细胞并进行细胞鉴定。实验分为SKOV3干细胞组、熊果酸组、熊果酸联合顺铂组。MTT法检测干细胞的增殖,Transwell实验检测干细胞侵袭与迁移能力,采用Annexin V/PI双染法流式细胞术检测干细胞凋亡。Real-time PCR检测上皮间质转化（epithelial-mesenchymal transition,EMT）相关标记分子Vimentin、N-cadherin、E-cadherin、Fibronectin、Twist的mRNA表达情况,Western-blot检测E-cadherin、Vimentin、Twist蛋白表达情况。结果:熊果酸对SKOV3干细胞增殖有显著抑制作用,呈剂量依赖性（P＜0.05）;流式细胞术显示熊果酸组、熊果酸联合顺铂组均可提高SKOV3干细胞的凋亡率,与SKOV3干细胞组相比有统计学差异（P＜0.05）;熊果酸组、熊果酸联合顺铂组可有效抑制SKOV3干细胞的侵袭和迁移能力（P＜0.05）;Real-time PCR测定熊果酸组、熊果酸联合顺铂组作用SKOV3干细胞后EMT基因表达水平,结果显示Fibronectin、Twist、Vimentin、N-cadherin表达降低,E-cadherin表达升高（P＜0.05）;Western-blot结果显示熊果酸组、熊果酸联合顺铂组可上调E-cadherin蛋白的表达,下调Vimentin、Twist蛋白的表达;与熊果酸组相比,熊果酸联合顺铂组对干细胞凋亡率更高,迁移和侵袭能力更低,E-cadherin表达更高,Vimentin和Twist表达更低,以上差异均有统计学意义（P＜0.05）。结论:熊果酸对卵巢癌干细胞有抑制增殖、侵袭和迁移,诱导凋亡的作用,联合顺铂作用效果更优,其机制可能与逆转EMT有关。     

下调SIRT6对肝癌干细胞干性维持的抑制作用

摘 要：［目的］ 探讨抑制SIRT6表达在肝癌干细胞干性维持中的作用及潜在机制。［方法］ 在不同肝癌细胞系中构建肝癌干细胞模型（Lv-Pnanog-GFP），利用流式细胞术分选出不同来源的肝癌干细胞，采用蛋白免疫印迹（Western blot，WB）和免疫细胞化学（immunocytochemistry，ICC）技术检测SIRT6蛋白在肝癌干细胞中的表达水平；构建SIRT6慢病毒短发卡RNA感染载体（shSIRT6）感染肝癌干细胞，采用WB技术检测shSIRT6的干扰效率；采用实时定量反转录聚合酶链反应（real-time PCR）检测抑制SIRT6后肝癌干细胞的干性基因（Nanog、OCT4、CD13、SOX2、EpCAM、CD44）mRNA的表达水平，ICC方法检测EpCAM蛋白的表达水平；采用5-乙炔基-2’脱氧尿嘧啶核苷（EdU）试剂盒和细胞增殖活力（CCK8）试剂盒检测抑制SIRT6表达后肝癌干细胞的增殖能力；采用克隆形成和成球实验检测抑制SIRT6后肝癌干细胞的自我更新能力；利用衰老相关β-半乳糖苷酶（SA-β-Gal）试剂盒检测抑制SIRT6后肝癌干细胞的衰老水平。［结果］ WB和ICC检测结果显示，Nanog阳性肝癌干细胞中SIRT6表达水平明显高于Nanog阴性肝癌细胞；real-time PCR检测结果显示，抑制SIRT6后，肝癌干细胞的干性基因（Nanog、OCT4、CD13、SOX2、EpCAM、CD44）mRNA表达水平降低。与real-time PCR结果一致，ICC结果也表明，抑制SIRT6后，干性标志物EpCAM的蛋白表达水平降低（P<0.01）。细胞增殖检测结果进一步显示，抑制SIRT6，肝癌干细胞的增殖水平降低（P<0.05）。克隆形成实验和细胞成球实验结果显示，抑制SIRT6导致肝癌干细胞的克隆形成能力和成球能力一致性降低（P<0.01）。SA-β-Gal活性检测结果显示，抑制SIRT6后，肝癌干细胞的SA-β-Gal活性显著性提高（P<0.01）。［结论］肝癌干细胞高表达SIRT6，通过抑制SIRT6表达可诱导肝癌干细胞发生衰老，导致其干性标志物表达水平下降，增殖能力降低，肝癌干细胞克隆形成和成球能力下降。     

沉默Snail基因对胃癌MKN-28细胞的生物学影响

目的:探讨转录因子Snail对胃癌MKN-28细胞的增殖、凋亡及侵袭的影响。方法:慢病毒沉默胃癌MKN-28细胞株的Snail基因,顺铂处理MKN-28细胞,CCK-8法检测各组细胞的增殖情况,透射电镜观察各组细胞的凋亡情况,Transwell小室观察各组细胞的侵袭能力,Real time PCR检测Snail mRNA、E-cadherin mRNA和Bcl-2 mRNA的表达水平。结果:细胞增殖情况,慢病毒沉默Snail基因组和顺铂处理组的细胞出现了增殖抑制,特别是shRNA-Snail+顺铂组的细胞增殖抑制率明显增高（P<0.05）。各组细胞的凋亡表现,不同刺激因素组细胞的凋亡程度明显高于单纯MKN-28细胞组。细胞侵袭实验显示,shRNA+Snail+顺铂组的细胞迁出的细胞数明显低于其他各组（P<0.05）。顺铂处理MKN-28细胞后,shRNA+Snail+顺铂组的细胞Snail mRNA和Bcl-2 mRNA的表达水平均低于单纯MKN-28细胞组（P<0.05）,E-cadherin mRNA的水平高于单纯MKN-28细胞组（P<0.05）。结论:慢病毒沉默Snail基因,影响胃癌MKN-28细胞的增殖、促进了细胞的凋亡,抑制MKN-28细胞的侵袭,增加了化疗药的敏感性,可为肿瘤的靶向治疗提供一定理论依据。     

沉默ATF5对卵巢癌细胞顺铂敏感性影响的研究

目的:探讨显性负抑制人转录激活因子5(ATF5)对卵巢癌细胞SKOV-3顺铂敏感性的影响。方法:采用RT-PCR和蛋白质印迹法检测不同卵巢癌细胞系ATF5的表达。采用脂质体介导法将真核表达质粒pLeGFP-C1-NT-Azip-ATF5和pLeGFP-C1分别转染SKOV-3细胞,同时设空白对照组;于转染后24h给予不同浓度的顺铂作用48h,通过MTT法测定细胞增殖抑制率;转染后24h给予4μmol/L顺铂作用0、12、24和48h,通过流式细胞术和蛋白质印迹法分别检测细胞凋亡和Bcl-2蛋白的表达。结果:ATF5在3种卵巢癌细胞系中均有不同程度的表达,其中SKOV-3细胞系表达最高;显性负抑制SKOV-3细胞内源性ATF5的功能联合顺铂作用后,与非特异性转染组和空白对照组相比,特异性转染组细胞增殖明显受抑制,顺铂的IC50由5.4μmol/L下降为3.6μmol/L;顺铂作用24h,特异性转染组细胞凋亡率显著升高,约为非特异性转染组3倍,抗凋亡基因Bcl-2蛋白表达明显下降,P<0.05。结论:显性负抑制ATF5的表达可明显增强卵巢癌细胞系SKOV-3对顺铂的化疗敏感性,其协同顺铂诱导细胞凋亡的机制可能与Bcl-2的下调相关。     

SOX4对非小细胞肺癌细胞A549的顺铂耐药作用的影响

背景与目的 肺癌是最严重的恶性肿瘤之一,其中非小细胞肺癌发病率在肺癌中居首位.部分患者对顺铂耐受是导致化疗失败的主要原因.SOX4是转录调节因子,在多种肿瘤的发生发展过程中发挥着重要的作用,通过调控β-catenin的表达对Wnt信号通路进行调控.本研究旨在探讨SOX4对非小细胞肺癌细胞A549的顺铂耐药作用的影响.方法 体外诱导法建立顺铂耐药的肺癌细胞株A549/DDP,CCK8法检测A549及A549/DDP细胞对顺铂的耐药性.绘制A549与A549/DDP细胞生长曲线.Western blot检测耐药细胞株中SOX4的蛋白表达水平.CCK8法检测敲减SOX4后耐药细胞株A549/DDP对顺铂耐药性.实时定量PCR和免疫印迹法检测敲减SOX4后A549/DPP细胞中β-catenin和Survivin蛋白的表达.结果 成功构建非小细胞肺癌顺铂耐药细胞株A549/DDP,其耐药性是亲本细胞的13.7倍,差异有统计学意义(P<0.001).生长曲线显示耐药细胞株与亲本细胞增殖速度没有统计学差异(P<0.05);与A549细胞相比,耐药细胞A549/DDP细胞中SOX4的表达显著增高(P<0.001).敲减SOX4后,A549/DDP细胞的耐药性显著降低;敲减SOX4后,A549/DDP细胞中β-catenin和Survivin的mRNA和蛋白表达水平显著降低.结论 SOX4的表达水平影响非小细胞肺癌细胞A549对顺铂的耐药性.     

卡铂对子宫内膜癌Ishikawa细胞的作用

[目的]研究卡铂对子宫内膜癌Ishikawa细胞的作用.[方法]不同浓度卡铂(空白对照组、低剂量卡铂组、高剂量卡铂组)作用Ishikawa细胞48h,Western blot技术检测卡铂处理后Ishikawa细胞株中bcl-2、bax蛋白表达的变化;Annexin V-PE染色后流式细胞仪检测细胞的凋亡情况;PI染色检测细胞周期变化;Tranwell肿瘤侵袭实验检测细胞侵袭能力的变化.[结果]卡铂作用于Ishikawa细胞的IC50为31.86μg/ml.卡铂作用48h后,细胞内bcl-2蛋白表达下调,bax蛋白表达上调(P＜0.05).卡铂可诱导Ishikawa细胞凋亡,空白对照组凋亡率为3.2％±0.3％,明显低于低剂量卡铂组的17.3％±2.8％和高剂量卡铂组的50.0％±3.7％(P＜0.05).卡铂作用后细胞周期呈G2期阻滞,空白对照组G2期比例为28.75％±4.29％,明显低于低剂量卡铂组的57.74％±6.42％和高剂量卡铂组的78.64％±6.38％ (P＜0.05);Ishikawa细胞侵袭能力受到抑制,相对于空白对照组,低剂量卡铂组抑制率为62.00％,高剂量卡铂组抑制率为81.33％(P＜0.05).[结论]卡铂可明显抑质Ishikawa细胞生长,诱导细胞凋亡,并下调Ishikawa细胞中bcl-2/bax比例.     

miR-135a 通过下调SOX2 抑制喉癌Hep-2 细胞的恶性生物学行为和增强对奥沙利铂的敏感性

[摘要] 目的：探讨敲降miR-135a 对人喉癌上皮Hep-2 细胞的恶性生物学行为和奥沙利铂敏感性的影响。方法：收集2018年1 月至2018 年6 月郑州大学附属南阳医院南阳市中心医院行喉癌切除术10 例患者的喉癌组织和癌旁组织标本。采用qPCR检测喉癌组织和Hep-2 细胞中miR-135a 的表达水平。miR-135 inhibitor 转染喉癌Hep-2 细胞后,采用CCK-8 检测Hep-2 细胞活性,集落形成实验检测Hep-2 细胞集落形成能力,Transwell 实验检测Hep-2 细胞的侵袭及迁移能力,WB实验检测Hep-2 细胞中SOX2蛋白的表达水平。0.5、1.0、1.5、2.0 μmol/L的奥沙利铂处理已转染miR-135 inhibitor 的Hep-2 细胞,CCK-8 实验检测Hep-2 细胞的增殖活性,Annexin-V-FITC/PI 染色流式细胞术检测Hep-2 细胞的凋亡率。采用miR-135a inhibitor 质粒、对照pcDNA 空载体（SOX2-Con）质粒、pcDNA-SOX2（SOX2-OE）质粒共转染Hep-2 细胞,构建miR-135a inhibitor+SOX2-Con 组和miR-135a inhibitor+SOX2-OE组,检测此2 组细胞的增殖活性、集落形成能力、侵袭及迁移能力。结果：与癌旁组织比较,喉癌组织中miR-135a表达水平显著升高（P<0.01）;与正常NHP细胞比较,miR-135a 在Hep-2 细胞中表达水平明显上调（P<0.01）;转染miR-135a inhibitor导致Hep-2 细胞中miR-135a 表达水平明显降低（P<0.01）。敲降miR-135a 明显降低Hep-2 细胞的增殖活性、细胞集落数、迁移、侵袭和SOX2 表达（均P<0.01）;明显增强细胞对奥沙利铂敏感性（P<0.01）;与miR-135a inhibitor+SOX2-Con 组比较,miR-135a inhibitor+SOX2-OE 组的Hep-2 细胞的增殖活性、细胞集落数、迁移与侵袭能力均明显增加（均P<0.01）;同时,用不同浓度的奥沙利铂处理此2 组细胞,相对于miR-135a inhibitor+SOX2-Con组,miR-135a inhibitor+SOX2-OE组的Hep-2 细胞存活率显著升高（P<0.01）。结论：敲降miR-135a 可能通过下调转录因子SOX2 的表达抑制Hep-2 细胞的恶性生物学行为,并增强其对奥沙利铂的敏感性。     

抑制survivin基因对人卵巢癌SKOV3细胞顺铂药物敏感性的影响(英文)

目的:探讨应用RNA i技术下调survivin基因对人卵巢癌SKOV3细胞增殖、凋亡及顺铂敏感性的影响。方法:构建survivin基因shRNA真核表达载体,转染人卵巢癌SKOV3细胞。定量PCR和Western blotting观察SKOV3细胞survivin mRNA和蛋白表达的改变;噻唑蓝(MTT)检测细胞增殖活性和药物敏感性;流式细胞仪检测细胞凋亡。结果:SKOV3-siRNA组细胞survivin mRNA及蛋白表达下降,同时细胞增殖能力明显降低,细胞凋亡率显著增加(P<0.05)。SKOV3-siRNA组细胞对顺铂的化学敏感性升高,顺铂的IC50值降低(P<0.05)。结论:下调survivin基因表达能够抑制卵巢癌SKOV3细胞增殖能力,诱导细胞凋亡,增强细胞顺铂药物敏感性。因此,survivin基因可能成为抗肿瘤治疗的潜在靶点。     

SRC抑制胶质母细胞瘤的增殖、迁移、侵袭和干性维持的分子机制

目的 研究SRC在胶质母细胞瘤发生发展中的作用,并初步探讨可能的分子机制。方法  采用生物信息学的方法分析SRC在胶质母细胞瘤中的表达变化;利用shRNA下调胶质瘤母细胞系U87MG中SRC的表达,通过RT-PCR和免疫印迹法验证其抑制效率,并筛选出稳定干涉的细胞株;采用WST-1法、划痕愈合实验和Transwell迁移实验检测SRC shRNA干涉后细胞增殖、迁移和侵袭能力的变化;利用干细胞培养液筛选出SRC shRNA稳定干涉的胶质瘤干细胞,观察SRC shRNA对肿瘤干细胞干性的影响;利用细胞免疫荧光法观察干性基因SOX2的表达变化。结果 在胶质母细胞瘤标本中SRC的表达水平高于对照组,筛选到两条有效的SRC shRNA序列;通过shRNA下调SRC的表达后可以显著抑制胶质瘤母细胞U87MG的增殖、迁移、侵袭和肿瘤干细胞干性维持,并且可以明显抑制SOX2的表达。结论 SRC通过调控胶质母细胞瘤的增殖、迁移、侵袭和干性维持影响其发生发展,其对干性维持的作用可能是通过影响SOX2的表达实现的。     

MKP-1增强组蛋白去乙酰化酶抑制剂对脑胶质瘤干细胞敏感性及其作用机制

目的 探讨MKP-1对组蛋白去乙酰化酶抑制剂（histone deacetylase inhibitors，HDACi）作用脑胶质瘤干细胞（glioma stem cells，GSC）敏感性的影响及可能的作用机制。方法 收集武汉市第三医院神经外科2016年1月至2018年12月收治的53例脑胶质瘤患者肿瘤及健康脑组织。RT-PCR检测MKP-1表达，分离并培养脑胶质瘤干细胞，采用MTT实验检测HDACi MS-275作用脑胶质瘤干细胞的IC₅₀。以MKP-1过表达质粒转染干细胞构建差异表达MKP-1的脑胶质瘤干细胞模型，MTT实验分析HDACi MS-275的敏感性，CCK-8实验检测细胞增殖情况，RT-PCR及Western blot实验检测肿瘤干细胞相关因子SOX2、SOX9的表达，Western blot实验检测p38、JNK、ERK1/2的表达。结果 MKP-1在脑胶质瘤组织中的表达较健康脑组织明显降低（P<0.001）。HDACi MS-275作用GSC的IC₅₀为（55.12±7.31） nmol/mL，作用后细胞增殖能力较对照组明显降低（P<0.001），MKP-1表达明显升高（P<0.001）。HDACi MS-275作用过表达MKP-1脑胶质瘤干细胞的IC50较对照组和空白组明显降低（P<0.001）。MKP-1组GSC增殖能力，SOX2、SOX9 mRNA和蛋白表达量均较对照组和空白组明显降低（P<0.001）。MKP-1组JNK和p38表达较均对照组和空白组降低（P<0.001），但ERK1/2表达差异无统计学意义（P＞0.05）。结论 脑胶质瘤干细胞对HDACi的敏感性与MKP-1表达有关，MKP-1可能通过调控SOX2、SOX9、p38、JNK而影响脑胶质瘤干细胞对HDACi的应答。     

下调视黄醇结合蛋白2基因表达对顺铂耐药卵巢癌细胞生物学特性的影响及其机制

目的探讨下调视黄醇结合蛋白2(RBP2)基因表达对卵巢癌细胞生物学特性的影响及其机制。方法建立稳定下调RBP2表达的顺铂(DDP)耐药卵巢癌细胞株SKOV3/DDP-RBP2i, 并设置阴性对照组和空白对照组。采用细胞计数盒8(CCK-8)法检测细胞增殖能力, 流式细胞术检测细胞凋亡情况, 划痕实验和Transwell侵袭实验检测细胞迁移和侵袭能力, 实时荧光定量聚合酶链反应(RT-qPCR)和Western blot法检测上皮-间质转化(EMT)相关分子标志物的表达。通过裸鼠移植瘤实验验证RBP2对卵巢癌生长的影响, 采用美国TCGA数据库中的卵巢癌临床数据分析RBP2表达与肿瘤转移和患者预后的关系。结果下调RBP2的表达后, SKOV3/DDP细胞的增殖能力明显下降, 第5天时, SKOV3/DDP-RBP2i组、阴性对照组和空白对照组的增殖活性分别为(56.67±4.16)%、(84.67±3.51)%和(87.00±4.00)%, 差异开始有统计学意义(P<0.001)。SKOV3/DDP-RBP2i组的凋亡率为(14.19±1.50)%, 高于阴性对照组[(8.77±0...     

微小RNA-106a靶向PTEN通路对胃癌细胞的增殖与凋亡的调控作用

目的探讨微小RNA-106a(miR-106a)靶向磷酸酶和张力蛋白同源物(PTEN)通路对胃癌细胞的增殖与凋亡的调控作用。方法对数生长期的胃癌BGC-823细胞为三组:miR-106a组、对照组与空白组,分别转染miR-106a mimic、miR-NC与等体系的磷酸盐缓冲液。采用CCK法检测细胞增殖,流式细胞仪检测细胞凋亡,Transwell小室实验检测细胞迁移与侵袭,Western blot检测PTEN蛋白表达,qRT-PCR检测miR-106a表达。结果细胞转染后24 h与48 h,miR-106a组的miR-106a相对表达量显著高于空白组和对照组(P<0.05);与空白组和对照组相比,miR-106a组的细胞增殖指数、细胞迁移指数、侵袭指数PTEN蛋白相对表达水平显著降低(P<0.05),细胞凋亡指数显著增加(P<0.05),而前两组相比差异无统计学意义(P>0.05);与24 h时相比,48 h时三组细胞凋亡、侵袭、迁移指数以及PTEN蛋白相对表达水平显著降低(P<0.05),其余指标仅miR-106a组两个时间点相比差异具有统计学意义(P<0.05),而空白组和对照组相比均不具有统计学意义(P>0.05)。结论miR-106a过表达可通过靶向调控PTEN信号通路,抑制胃癌细胞增殖、迁移与侵袭,并促进细胞凋亡。     

苯丁酸调控对顺铂抑制人肺腺癌A549/DDP耐药细胞株增殖与侵袭协同作用研究

目的肺癌已成为威胁人类生存的重要杀手,且随着环境恶化,其发病率和死亡率有逐年升高趋势。本研究分析4-苯丁酸对顺铂作用下人肺腺癌耐药细胞株A549/DDP细胞增殖和侵袭影响,为临床治疗提供参考。方法体外培养人肺腺癌耐药细胞株A549/DDP至生长状态良好,分析顺铂及4-苯丁酸联合顺铂对A549/DDP细胞株增殖作用,酶联免疫吸附测定法分析细胞凋亡相关蛋白表达变化,Transwell实验分析细胞侵袭力变化,蛋白质印迹法和免疫细胞化学分析细胞中JAK/STAT信号通路蛋白表达变化。结果随着时间延长,各组对A549/DDP细胞株增殖抑制率呈上升趋势,且高剂量4-苯丁酸联合顺铂组对A549/DDP细胞株增殖抑制率较高,差异有统计学意义,F药物=110.342,P<0.001;F时间=34.527,P<0.001;F药物×时间=58.321,P<0.001。与对照组相比,低剂量4-苯丁酸联合顺铂组和高剂量4-苯丁酸联合顺铂组细胞凋亡蛋白Bcl-2水平降低,Bax、Caspase-3和Caspase-6水平升高,均P<0.001。对照组、顺铂组、低剂量4-苯丁酸联合顺铂组和高剂量4-苯丁酸联合顺铂组细胞侵袭力分别为423.3±35.6、389.3±24.7、375.6±35.2和285.6±23.9,F=44.458,P<0.001;蛋白质印迹法检测发现对照组、顺铂组、低剂量4-苯丁酸联合顺铂组和高剂量4-苯丁酸联合顺铂组JAK2水平分别为1.32±0.26、1.01±0.24、0.90±0.12和0.74±0.13,F=18.633,P<0.001;STAT2水平分别为0.78±0.13、0.70±0.15、0.62±0.09和0.54±0.09,F=18.996,P<0.001;STAT3水平分别为1.01±0.23、0.89±0.14、0.74±0.10和0.40±0.10,F=19.687,P<0.001。免疫细胞化学法检测发现对照组、顺铂组、低剂量4-苯丁酸联合顺铂组和高剂量4-苯丁酸联合顺铂组JAK2水平分别为0.85±0.14、0.78±0.11、0.62±0.17和0.52±0.09,F=21.854,P<0.001;STAT2水平分别为0.85±0.20、0.77±0.14、0.69±0.08和0.52±0.13,F=17.852,P<0.001;STAT3水平分别为0.63±0.14、0.57±0.11、0.50±0.09和0.42±0.08,F=29.754,P<0.001。结论4-苯丁酸调控对顺铂作用下人肺腺癌耐药细胞株A549/DDP细胞增殖、侵袭有明显抑制作用,且其作用可能与影响JAK/STAT信号通路蛋白表达有关。     

siRNA干扰Id-1表达对人结肠癌SW480细胞株生长与侵袭能力影响研究

目的 DNA结合分化抑制因子-1(inhibitor-1 0f DNA binding/differentiation-1,Id-1)对结肠肿瘤细胞侵袭行为影响的研究较少,本研究探讨siRNA转染下调Id-1表达对人结肠癌SW480细胞侵袭和转移行为的影响.方法 将合成Id-1干扰序列(siRNA)转染至SW480细胞作为实验组(抑制组),并以Id 1表达干扰空白组、空载体组作为对照,应用反转录聚合酶链反应(RT-PCR)和蛋白质印迹法检测各组细胞中Id-1和基质金属蛋白酶-9(matrix metalloprotein,MMP-9)的表达情况,四甲基偶氮唑盐(MTT)法检测细胞的增殖能力;划痕损伤实验、Transwell小室和Matrigel侵袭模型评价Id-1对细胞侵袭和转移能力的影响.结果 抑制组Id-1 mRNA表达水平为(0.14±0.02),与空白组(1.27±0.03)和空载体组(1.25±0.06)比较明显降低,差异有统计学意义,P＜0.001;抑制组Id-1蛋白表达水平为0.25±0.02,与空白组(1.18±0.03)和空载体组(1.16±0.04)比较明显降低,差异有统计学意义,P＜0.001;抑制组MMP-9 mRNA表达水平为0.19±0.02,与空白组(1.33±0.04)和空载体组(1.38±0.03)比较明显降低,差异有统计学意义,P＜0.001;抑制组MMP-9蛋白表达水平为0.12±0.02,与空白组(0.89±0.04)和空载体组(0.91±0.02)比较明显降低,差异有统计学意义,P＜0.001;生长曲线表明,从第3天起抑制组细胞增殖明显减弱,与空白组和空载体组差异明显;划痕损伤实验结果显示,空白组和空载体组向划痕处的迁移速度明显快于抑制组;迁移试验显示,抑制组迁移细胞数为75±12,明显少于空白组(201±12)和空载体组(206±15);抑制组侵袭细胞数为51±10,明显少于空白组(121±17)和空载体组(126±14),差异均有统计学意义,P＜0.001.结论 Id-1促进SW480细胞的侵袭和转移,其机制可能与诱导MMP-9的表达有关.     

CrkⅡ表达水平对喉癌细胞Hep-2增殖、迁移及侵袭的影响

目的探讨CrkⅡ表达水平对喉癌细胞Hep-2增殖、迁移及侵袭的影响。方法采用免疫组化法检测CrkⅡ在108例喉癌患者喉癌组织及癌旁正常组织中的表达情况,分析不同临床特征喉癌患者喉癌组织中CrkⅡ蛋白的阳性表达情况。构建并验证CrkⅡRNA干扰质粒,将培养后的Hep-2细胞分为空白对照组(未转染质粒)、阴性对照组(转染阴性对照质粒)和实验组(转染CrkⅡ干扰质粒),细胞转染后行实时聚合酶链反应(PCR)扩增。采用蛋白质印迹法(Western blot)检测转染后Hep-2细胞中CrkⅡ的表达水平,噻唑蓝(MTT)法检测细胞的增殖情况,Transwell实验检测细胞的侵袭和迁移能力,细胞划痕实验检测细胞的迁移情况。结果喉癌组织中CrkⅡ蛋白的阳性表达率明显高于癌旁正常组织(P﹤0.01)。临床分期为Ⅲ~Ⅳ期、组织分化程度为中低分化、有淋巴结转移喉癌患者喉癌组织中CrkⅡ蛋白的阳性表达率均高于临床分期为Ⅰ~Ⅱ期、组织分化程度为高分化、无淋巴结转移的喉癌患者(P﹤0.05)。实验组喉癌细胞Hep-2中CrkⅡmRNA和蛋白的相对表达量均低于阴性对照组、空白对照组(P﹤0.05)。实验组穿过基质膜至下室的细胞数目低于阴性对照组和空白对照组(P﹤0.05)。转染48 h时,实验组细胞的迁移率低于阴性对照组、空白对照组(P﹤0.05)。细胞培养24、48、72 h时,实验组Hep-2细胞的光密度(OD)值均低于空白对照组和阴性对照组(P﹤0.05)。结论喉癌细胞Hep-2中CrkⅡ的表达下调可降低细胞的增殖、迁移和侵袭能力,CrkⅡ有可能成为喉癌临床治疗的新靶点。     

LncRNA HOTAIR通过Wnt/β-Catenin信号通路调控NSCLC细胞增殖、迁移及侵袭

目的 探究长链非编码RNA HOTAIR对非小细胞肺癌增殖、迁移和侵袭的影响及其分子作用机制.方法 采用qRT-PCR法检测NSCLC细胞系A549、H460、H1650中HOTAIR的相对表达.转染干扰序列siRNNA敲降HOTAIR基因表达,验证干扰效率.采用CCk-8法、Transwell实验分别检测敲降HOTA...     

siRNA沉默livin的表达对人结肠癌HT-29细胞增殖、凋亡及侵袭的影响

目的:探讨小干扰RNA(small interference RNA,siRNA)沉默人结肠癌HT-29细胞livin表达对HT-29细胞增殖、凋亡和侵袭的影响。方法:合成靶向livin的双链siRNA(livin-siRNA),转染HT-29细胞,RT-PCR及Western blotting检测HT-29细胞中livin mRNA及蛋白的表达,MTT实验检测HT-29细胞的增殖,流式细胞术检测HT-29细胞周期分布及凋亡,细胞侵袭实验检测HT-29细胞侵袭性的变化,caspase-3活性检测试剂盒检测caspase-3活性的变化。结果:Livin-siRNA转染后48 h,与空白组、阴性对照组及脂质体组相比,livin-siRNA转染组HT-29细胞中livin mRNA水平明显下降(0.073±0.007 vs 0.395±0.082、0.423±0.025、0.418±0.032,P<0.05),其蛋白表达也明显下调(0.106±0.003 vs 0.456±0.065、0.473±0.078、0.491±0.045,P<0.05)。转染96 h后,livin-siRNA组HT-29细胞增殖能力明显低于对照组及脂质体组(0.564±0.102 vs0.833±0.127、0.860±0.153,P<0.05),且细胞凋亡率升高[(16.5±2.8)%vs(2.4±0.5)%、(3.7±1.0)%,P<0.05]。侵袭实验显示,livin-siRNA转染后,穿过Matrigel膜的HT-29细胞数量明显少于对照组及脂质体组[(31.3±4.5)vs(101.3±8.6)、(97.4±7.8)个,P<0.05)]。livin-siRNA组HT-29细胞的caspase-3活性低于对照组(0.160±0.023 vs 0.347±0.058,P<0.05)。结论:siRNA沉默livin的表达可抑制HT-29细胞的增殖,诱导细胞凋亡,抑制细胞的侵袭。     

miR-429在鼻咽癌细胞中的表达及其对细胞增殖、迁移的影响

目的:探讨微小RNA-429（miR-429）在鼻咽癌细胞中的表达及其对细胞增殖、迁移及侵袭能力的影响。方法:选取本院收治的78例鼻咽癌患者为鼻咽癌组,另选取同期因其他疾病需进行鼻内镜手术患者33例为对照组。采用实时荧光定量PCR（qRT-PCR）法检测两组组织中miR-429的表达。体外培养人鼻咽上皮细胞NP69与鼻咽癌细胞株CNE-2,将miR-429阴性对照质粒、miR-429 mimics质粒分别转染至CNE-2细胞,分别命名为阴性转染组、miR-429过表达组,未经处理的细胞命名为空白组,采用qRT-PCR技术检测各转染组细胞中miR-429表达。MTT法检测各转染组细胞增殖情况;平板克隆细胞形成实验检测细胞菌落形成情况;Transwell检测细胞迁移及侵袭能力;蛋白免疫印迹（Western blot）检测E盒结合锌指蛋白（ZEB1）、基质金属蛋白酶2（MMP-2）、钙黏附蛋白E（E-cadherin）蛋白表达量。结果:鼻咽癌组织中miR-429表达水平显著低于对照组（P＜0.05）,且CNE-2细胞中miR-429表达水平显著低于NP69细胞（P＜0.05）;miR-429过表达组miR-429表达水平显著高于空白组、阴性转染组（P＜0.05）;miR-429过表达组细胞增殖能力显著低于空白组、阴性转染组（P＜0.05）;miR-429过表达组细胞菌落形成、迁移细胞及侵袭细胞数量均显著低于空白组、阴性转染组（P＜0.05）;miR-429过表达组细胞中ZEB1、MMP-2蛋白表达水平显著低于空白组、阴性转染组,而E-cadherin蛋白表达水平显著升高（P＜0.05）。结论:鼻咽癌细胞中miR-429呈低表达,miR-429过表达后可显著抑制鼻咽癌细胞增殖、迁移及侵袭。     

LINC00958 通过上调VEGF-C 表达促进宫颈癌细胞的恶性生物学行为及小鼠模型的淋巴结转移

目的：探讨LINC00958/血管内皮生长因子 C（VEGF-C）信号通路在宫颈癌的淋巴管生成和淋巴转移中的作用。方法：从2020 年9月至2022 年9月期间在河南省人民医院接受手术的患者中收集了42 例宫颈癌组织标本,通过qPCR检测宫颈癌组织和宫颈癌细胞（Hela、C33A、SiHa、Caski）中LINC00958 的表达情况。将LINC00958 过表达载体（LINC00958 组）或对照载体（CMV 组）转染Caski 细胞,敲减LINC00958（shLINC00958 组）、VEGF-C（shVEGF-C 组）的shRNA 序列或阴性对照shRNA （shNC 组）转染SiHa 细胞。分别通过CCK-8法、Transwell 实验检测过表达或敲减LINC00958 对宫颈癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响。观察转染后细胞的培养上清液对人淋巴管内皮细胞（HLEC）淋巴管形成能力的影响。建立小鼠腘淋巴结转移模型,观察过表达LINC00958 或同时敲减VEGF-C对宫颈癌淋巴结转移的影响。结果：LINC00958 在宫颈癌组织中呈高表达（P<0.001）,高水平的LINC00958 与大肿瘤、晚期肿瘤分级、浸润深度和淋巴转移有关联（P<0.05 或P<0.01）。与正常人宫颈上皮细胞ende1617相比,宫颈癌细胞中LINC00958 水平均显著升高（P<0.01 或P<0.001）。shLINC00958 组SiHa 细胞的增殖、迁移、侵袭能力及其培养上清液的促HLEC淋巴管形成能力均显著低于shNC 组（P<0.05、P<0.01 或P<0.001）,LINC00958 组Caski 细胞的增殖、迁移、侵袭能力及其培养上清液的促HLEC淋巴管形成能力显著高于CMV组（P<0.05、P<0.01或P<0.001）。通过RNA下拉、RNA免疫沉淀实验发现宫颈癌细胞中LINC00958 能够特异性结合VEGF-C。LINC00958+shVEGF-C 组Caski 细胞的增殖、迁移、侵袭能力及其培养上清液的促淋巴管形成能力显著低于LINC00958 组（P<0.01 或P<0.001）;在小鼠腘淋巴结转移模型中,LINC00958+ shVEGF-C 组中小鼠腘窝淋巴结的体积和VEGF-C 蛋白、N-cadherin 蛋白以及LYVE-1的阳性细胞比例均显著低于LINC00958 组（均P<0.001）。结论：LINC00958通过直接与VEGF-C蛋白相互作用增强宫颈癌细胞的增殖、侵袭、淋巴管生成能力,促进小鼠腘淋巴结转移模型的淋巴结转移。