新的bHLHZiP基因在人睾丸中的表达

目的 :鉴定成人和胎儿睾丸中特异性表达的基因。　方法 :制备人睾丸cDNA微阵列 ,提取成人和胎儿睾丸的mRNA ,并以此为模板 ,用RT PCR制备探针。用此探针与微阵列杂交。对不同表达的基因序列测序 ,并从GenBank数据库中检测其同源性。　结果 :成人或者胎儿睾丸的探针杂交 ,其阳性克隆率分别为96.8%和 95 .4%。这些基因中 ,有一种新的睾丸特异性基因TSP1在成人睾丸中高度表达 ,其cDNA长1 484bp ,cDNA序列在GenBanK中的检索序列号是AF3 3 3 0 98。TSP1序列也可以在InterimGenSymbol中检索 (Unigene,No.Hs.982 66)。蛋白质分析显…     

从大鼠不同生精细胞筛选精子发生过程中阶段特异表达基因

目的 :从大鼠精原细胞、粗线期精母细胞和圆形精子细胞筛选精子发生过程中阶段特异表达基因。　方法 :用牛血清白蛋白梯度沉降法 (STAPUT法 ) ,分别从 9d龄和成年大鼠睾丸中 ,分离出处于减数分裂前、中、后的 3种生精细胞 ,即精原细胞、粗线期精母细胞和圆形精子细胞。运用RNA差异显示方法筛选差示cDNA。　结果 :本实验获得 19个cDNA差示片段 ,并克隆和测序出其中 6个cDNA序列 ,通过非重复序列 (nr)和EST序列同源比较 ,发现 5条cDNA分别与小鼠睾丸、附睾、乳腺、早期胚胎和大鼠卵巢基因高度同源 (88%～ 98% ) ,有一条未知新EST。结论 :差异显示技术是分离与精子发生有关基因的强有力工具。     

ACRV1在人睾丸组织中的表达特征分析

目的 分析ACRV1基因在人睾丸组织中的表达变化,方法 采用人全基因组Affymetrix表达谱芯片,分析一个27岁正常男人睾丸和6月龄胎儿睾丸的差异表达基因谱,筛选得到ACRV1基因的表达值,然后通过免疫组织化学的方法鉴定ACRV1基因在人睾丸组织中的表达定位.结果 对Affymetrix全基因组芯片杂交结果分析后,筛选得到ACRV1基因在芯片上表达值,代表ACRV1基因的探针208013_s_at在6月龄胎儿睾丸和27岁成人睾丸中的表达值分别是5.8(A)和1210.7(P),表明该基因在胎儿期睾丸中没有表达,在成年期睾丸中出现高表达,免疫组织化学实验显示该基因的蛋白质只表达于成人睾丸组织中的长形精子的头部,在睾丸组织的其他位置均无表达.结论 ACRV1基因特异性地表达于成人精子细胞的头部,提示该基因在精子发生中起着重要作用.     

TNP2基因在小鼠睾丸组织中的表达研究

目的 筛选与精子发生相关的基因.方法 将4d、9d、18d、35d、54d和6月龄小鼠睾丸组织cDNA探针与Affymetrix全基因组芯片进行杂交,筛选出差异表达的基因.通过RT-PCR分析差异表达基因在小鼠睾丸不同发育阶段中的表达.结果 对Affymetrix全基因组芯片杂交结果分析后,筛选得到1个差异表达杂交点,通过NCBI网站与小鼠全基因组序列Blast分析可知,该差异表达基因是TNP2基因.小鼠TNP2基因全长724bp,其编码框大小为375bp.RT-PCR结果表明TNP2基因在小鼠21d龄及之前的睾丸中没有表达,在35d龄睾丸开始高表达.结论 TNP2基因为小鼠年龄依赖性表达基因,小鼠TNP2基因的表达与小鼠精子发生过程有很强的一致性,因此,可以推测该基因在精子发生中可能起重要作用.     

大鼠睾丸减数分裂相关基因的初步筛选

目的:比较成年大鼠睾丸生精小管处于减数分裂期的发育片段和睾丸间质细胞所表达基因的差异,初步筛选出与减数分裂相关的基因,为进一步研究减数分裂相关基因对精子发生的调控奠定基础。方法:运用在透射光解剖显微镜下区分和显微分割的方法,将成年大鼠新鲜睾丸生精小管第X III~I期处于减数分裂阶段的片段分离出来,同时分离睾丸间质细胞,将二者进行mRNA差异显示逆转录聚合酶链反应(DDRT-PCR)分析,所得差异片段进行纯化回收,然后进行反向斑点杂交。结果:经mRNA差异显示,第X III~I期生精小管片段共回收到7个差异cDNA片段,而间质细胞共回收到9个差异cDNA片段。经反向斑点杂交,共获得11个初步鉴定的特异表达增加的差异cDNA片段,片段大小为200~500 bp,其中6个从第X III~I期生精小管片段获得,5个从间质细胞获得。结论:这些差异片段可作为睾丸减数分裂表达的序列标签进行更深入地研究。     

睾丸特异性基因TSF22在小鼠中的表达研究

目的 筛选与精子发生相关的基因。方法 将4、9、18、35、54日龄和6月龄小鼠睾丸组织cDNA探针与Affymetrix全基因组芯片进行杂交，筛选出差异表达的基因。利用网络信息资源对该基因进行生物学信息分析。RT-PCR分析该基因在小鼠睾丸不同发育阶段及小鼠不同组织中的表达。结果 芯片结果分析筛选出一个差异表达杂交点（GenBank登录号：NM_199034），生物信息学分析发现该基因全长1597bp，含有570bp的完整ORF，编码190个氨基酸、分子量为22．106kDa的蛋白质，我们将其命名为TSF22。RT-PCR分析表明TSF22基因特异性表达于睾丸组织及18日龄小鼠睾丸中。结论 TSF22基因的表达与小鼠精子发生的过程一致，可能在精子发生中起重要作用。     

CatSper基因家族在人和小鼠组织中的表达特征

目的研究CatSper基因家族在人和小鼠组织中的分布特点。方法将不同发育阶段的小鼠睾丸组织cDNA与Affymetrix全基因组芯片探针进行杂交,筛选出差异表达基因CatSper基因家族。RT—PCR验证差异表达基因在不同发育阶段的小鼠睾丸组织的表达特征,及其在人和小鼠不同组织中的分布。结果基因芯片分析发现CatSper1、CatSper2和CatSper3在小鼠睾丸的表达呈阶段特异性。RT-PCR结果表明该基因家族在睾丸的表达丰度明显高于其它组织;CatSper1和CatSper4在人体睾丸组织中特异性表达。结论CatSper基因家族在人和小鼠中呈现睾丸特异性表达或高表达,可能在精子发生中发挥重要功能。     

利用基因芯片研究无精子症相关基因及RAP1 A基因初步探讨

目的 :应用基因芯片技术获取正常生育人睾丸组织与无精子症病人睾丸组织中差异表达的基因 ,并对结果进行初步分析研究。　方法 :抽提正常生育人睾丸组织与无精子症病人睾丸组织中的mRNA来制备探针 ,经过点样、杂交及洗涤后 ,通过计算机观察两者表达谱的差异情况 ,随后通过文献检索系统对其中明显上调的基因之一RAP1A进行了初步分析。　结果 :通过基因芯片筛选 ,获得 6 2 3条差异表达的基因 ,其中明显上调的基因RAP1A与人类精子调控关系密切。　结论 :基因芯片筛选正常生育人睾丸组织与无精子症病人睾丸组织差异表达的基因具有样品用量少、速度快的特性 ,可用于高通量筛选无精子症基因以及进一步的研究。     

睾丸特异性基因BAFL在人和小鼠中的表达及其生物信息学分析

目的 筛选与精子发生相关的基因.方法 将4d、9d、18d、35d、54d和6月龄小鼠睾丸组织cDNA探针与Affymetrix全基因组芯片进行杂交,筛选出差异表达的基因.利用网络信息资源对该基因进行生物学信息分析.RT-PCR分析该基因在小鼠睾丸不同发育阶段4d、9d、11d、14d、18d、21d、38d、6月龄及人和小鼠不同组织心、肝、脾、肺、肾、脑、附睾和睾丸中的表达.结果 芯片结果分析筛选出1个差异表达杂交点,生物信息学分析发现该差异点是BAFL基因,该基因全长527bp,含有273bp的完整ORF,编码90个氨基酸、相对分子量(Mr)为10.266kDa的蛋白质.RT-PCR分析表明小鼠mBAFL基因在小鼠21d龄睾丸及之前没有表达,在35d龄睾丸后开始高表达并特异性地表达于睾丸组织.人hBAFL基因在所检测的8种组织中,也只在睾丸组织中表达.结论 BAFL基因为睾丸特异性基因,小鼠mBAFL的表达与小鼠精子发生的过程一致,可能在精子发生中起重要作用.     

NYD-SP5基因发夹结构小干扰RNA真核表达载体的构建

目的:NYD-SP5基因是在人睾丸cDNA微阵列差异杂交的基础上,克隆的一个新的成人睾丸高度表达的基因。它由3598个核苷酸组成,包括一个编码1027个氨基酸的开放阅读框架。NYD-SP5基因是一条人-小鼠同源基因。结构域分析推测NYD-SP5蛋白是一种跨膜蛋白。本研究构建NYD-SP5基因发夹结构小干扰RNA(shRNA)表达质粒,拟为下一步建立基因NYD-SP5的转基因小鼠模型及研究该基因的功能奠定基础。方法:根据NYD-SP5基因mRNA序列,设计有小发夹结构的4条寡核苷酸序列,克隆到空载体pGPU6/GFP/Neo中,构建重组质粒,同时设计构建分别针对人GAPDH的干扰质粒作为阳性对照,不针对任何特异基因的质粒作为阴性对照。通过酶切鉴定和测序验证阳性克隆。结果:经重组质粒筛选及测序鉴定证实,重组质粒与设计的shRNA转录模板序列相同,提示重组质粒构建成功。结论:利用RNA干扰技术路线可成功构建NYD-SP5的发夹结构小干扰RNA表达载体。     

Identification of a novel testis-specific gene and its potential roles in testis development／spermatogenesis

Aim: To identify and characterize a novel gene with potential roles in testis development and spermatogenesis.Methods: A cDNA microarray was constructed from a human testis large insert cDNA library and hybridized with probes of human or mouse adult and fetal testes. Differentially expressed genes were isolated and sequenced. RT-PCR was used to test the tissue distribution of the genes of interest and in situ hybridization was performed to localize the gene expression in the mouse testis. A range of bioinformatical programs including Gene Runner, SMART, NCBI Blast and Emboss CpGPlot were used to characterize the new gene‘s feature. Results: A novel testis-specific gene,NYD-SPS, was differentially expressed in fetal and adult testes. The deduced protein structure of NYD-SP5 was found to contain an IQ motif (a short calmodulin-binding motif containing conserved lie and Gin residues), a Carbamate kinase-like domain, a Zn-dependent exopeptidase domain and a lactate dehydrogenase (LDH) C-terminal-like domain. RT-PCR analysis revealed that NYD-SP5 was predominantly expressed in the testis but not in other 15 tissues examined. In situ hybridization and RT-PCR examinations revealed that the expression of NYD-SP5 was confined in the male germ cell but not present in the somatic cell in the testes. Conclusion: NYD-SP5 is a newly found testisspecific gene with potential roles in testis development and spermatogenesis through a calmodulin-activated enzyme.     

细胞色素氧化酶10在非梗阻性无精子症患者睾丸组织中的表达

目的:评价细胞色素氧化酶10(COX10)基因在非梗阻性人无精子症及正常睾丸组织中的表达及意义。方法:应用包含有人COX10及RBM、EIF1AY等基因的微矩阵芯片对人正常睾丸及无精子症睾丸组织中差异表达基因谱进行了研究:通过RT-PCR方法获得两种组织mRNA,再分别用Cy5-dUTP及Cy3-dUTP标记制备cDNA探针。两种探针混合后与包含有人4096条cDNA序列的cDNA微矩阵芯片杂交,经扫描、计算机处理分析比较杂交结果;随后利用原位杂交技术对COX10mRNA在10例正常生育及39例非梗阻性无精子症睾丸组织中的表达进行了研究。结果:获得128个可能与无精子症相关的差异表达基因,其中56个基因表达上调,72个基因表达下调,其中COX10下调明显。与cDNA微矩阵杂交结果相同,原位杂交证实COX10mRNA在正常睾丸组织生精细胞中表达强于非梗阻性无精子症睾丸组织。结论:COX10可能在无精子症的发生与进展过程中起一定的作用;cDNA微矩阵技术可以应用于筛选非梗阻性无精子症相关基因的研究中。     

Expression of a novel beta adaptin subunit mRNA splice variant in human testes

中央驻青单位在西宁海关学习交流经验,海东大力培训农村实用人才,海西州提高干部考核质量,海北州分析评议做到“五个结合”,海南州干部人事制度改革成效显著,西宁市城北区优化村党支部班子结构,乐都县先进性教育与办实事相结合,门源县先进性教育促民族团结,河南县先进性教育重落实。     

基因芯片在筛选胆管癌相关基因差异性表达的应用研究

目的　应用cDNA芯片技术进行肝外胆管癌相关基因表达谱差异分析 ,筛选胆管癌相关基因。方法　按一步法分别抽提 6例胆管癌和正常人胆管黏膜总RNA、纯化 ,逆转录合成掺入荧光分子的cDNA链探针 ,与 10 68条人PCR微矩阵芯片杂交 ,扫描芯片荧光信号图像 ,计算机分析比较二种组织基因表达谱差异。结果　胆管癌与正常胆管黏膜的基因表达谱分析 ,发现有 194条基因表达差异 ,6组标本 47条与肿瘤相关的基因一致向上或向下表达 ,2 3条表达上调 ,2 4条表达下调。结论　基因芯片能快速筛选胆管癌相关基因 ,分析这些差异表达的基因能够阐明胆管癌复杂的生物学特性与基因表达之间的内在联系 ,并识别肿瘤的标记物。