siRNA沉默Livin基因对胃癌细胞生长、凋亡的影响

目的:观察小分子干扰RNA(siRNA)沉默Livin基因在胃癌BGC-823细胞中的表达, 并探讨Livin基因对胃癌细胞生长、凋亡的影响.方法:自行设计两条针对Livin基因的siRNA:Livin-sh-1和Livin-sh-2, 以此构建相应的表达载体并分别转染至对数生长期胃癌BGC-823细胞, 经G418筛选后分别采用半定量RTPCR检测不同siRNA实验分组细胞BGC-823mRNA水平变化, 四氮唑盐比色法(MTT)检测细胞增殖、流式细胞仪检测胃癌细胞的凋亡.结果:siRNA对照组与空siRNA载体组Livinα/β mRNA表达差别无显著性; 但转染siRNA组Livin α/β mRNA表达显著低于空白对照组和空siRNA载体组(Livin α:0.11±0.07 vs 0.37±0.10, 0.34±0.08; Livin β:0.13±0.04 vs 0.43±0.09, 0.45±0.11, 均P<0.05). 空白对照组与空siRNA载体组相比, 24、48、96 h和1 wk时细胞生长未受影响; 而siRNA组在转染后24 h和48 h细胞生长未受影响, 但在96 h和1 wk时则被明显抑制( P<0.01). 转染siRNA组的细胞的凋亡率与空白对照组和转染空siRNA载体组相比显著增加(14.85%±1.35% vs 4.51%±0.36%, 6.13%±0.71%, 均P<0.05).结论:siRNA沉默Livin基因能抑制胃癌细胞的生长, 促进胃癌细胞的凋亡, Livin基因有可能成为胃癌治疗的新靶点.     

RNA干扰抑制雌激素受体α亚基对雌激素诱导人成骨样细胞护骨素表达的影响

目的 探讨RNA干扰抑制人成骨样细胞株MG63中雌激素受体α亚基(estrogen receptor α subunit ERα)后，对17β-雌二醇(E2)诱导护骨素(OPG)表达的影响。方法 利用计算机辅助设计ERα特异性siRNA，体外合成siRNA基因，并将其定向克隆入真核表达载体pSilencer4．1-CMV。以脂质体法转染ERα siRNA载体至人的成骨样细胞株MG63中，鉴定后分别用不同浓度的雌激素或G蛋白抑制剂苏拉明干预经ERα siRNA转染的MG63细胞或未经ERα siRNA转染的MG63细胞，RT-PCR法检测OPG mRNA的表达水平。结果 双酶切法鉴定重组质粒后，RT-PCR法鉴定ERα siRNA载体可特异地抑制MG63细胞中ERα的表达。不同浓度的17β-E2上调MG63细胞OPG mRNA的表达，其中以10^-7mol／L的作用最强。但经ERα siRNA载体抑制MG63细胞ERα亚基后，17β-E2上调MG63细胞OPG mRNA表达的作用消失。结论 17β-E2主要经ERα亚基上调MG63细胞OPG的表达。     

Survivin基因沉默对结直肠癌PTTG mRNA的影响

目的探讨重组载体介导的Survivin小干扰RNA(siRNA)对人结肠癌细胞株Lovo中PTTG mRNA的影响。方法前期成功构建的Survivin特异性siRNA真核表达载体转染结肠癌Lovo细胞后,采用实时荧光定量PCR检测PTTG mRNA的表达水平。结果 Survivin基因沉默后24～72 h,与正常对照组相比,Survivin mRNA表达明显降低(P<0.05);基因沉默24和48 h后,pGenesil-2-Survivin 1组和pGenesil-2-Survivin 2组PT-TG mRNA表达显著低于正常对照组(P<0.05)。结论 Survivin基因沉默后结直肠癌细胞PTTG mRNA表达显著下调,提示Survivin和PTTG可能相互促进共同参与结直肠癌的发生发展。     

C/EBPα基因在大鼠肝星状细胞内的表达及意义

目的 初步探讨CCAAT增强子结合蛋白α(C／EBPα)在肝星状细胞(HSC)激活过程中的作用。方法 采用免疫细胞化学、western blot及RT-PCR检测原代培养不同时间段HSC内C／EBPd蛋白和mRNA的表达，以及α平滑肌肌动蛋白(α SMA)、结蛋白、基质金属蛋白酶-2(MMP2)mRNA、Ⅰ型前胶原(α1)mRNA的表达；Lipofect AMINE2000介导的瞬时转染方法将pcDNA3．1(-)-C／EBPα真核表达质粒转染入激活的HSC内，采用免疫细胞化学方法鉴定转染成功及转染后HSC内增殖细胞核抗原(PCNA)的表达；在相差显做镜下观察HSC在原代培养过程中形态的改变。结果 原代正常HSC中可以检测到C／FBPα mRNA和蛋白的表达，蛋白位于细胞质和细胞核内，但主要位于细胞质内，且除新鲜分离(0d)组以外，随着HSC培养至2、4、7、10d，C／EBPα蛋白和mRNA的表达呈逐步下降的趋势，而α-SMA、MMP2和Ⅰ型前胶原(α1)的表达则逐步增强；转染后24h，目的基因转染组HSC内C／EBPα的表达明显强于空载体对照组，而PCNA的阳性细胞数较空载体对照组明显减少；转染后36h，目的基因转染组细胞几乎全部死亡，残存的细胞形态变细，体积缩小，而空载体对照组细胞仍存括。结论 C／EBPα基因可能参与HSC的激活调控机制，且C／EBPα过表达对HSC的增殖存在抑制作用。     

siRNA靶向沉默hTERT基因对宫颈癌Caski细胞特性的影响

目的研究siRNA靶向沉默h TERT基因后对宫颈癌Caski细胞特性的影响。方法设计、合成特异性针对h TERT mRNA的siRNA,将其克隆入p Genesil-1.1质粒中,重组成h TERT mRNA-siRNA的表达载体,导致目的基因沉默,是由电转染入宫颈癌Caski细胞,从而产生RNA干扰作用。应用Western印迹法及RT-PCR法检测沉默h TERT基因后对于宫颈癌Caski细胞的蛋白及mRNA的表达情况;检测细胞周期运用流式细胞仪;沉默h TERT基因后宫颈癌Caski细胞的增殖能力可通过CCK-8增殖实验检测。沉默h TERT基因后宫颈癌Caski细胞的侵袭能力可通过小室侵袭实验检测。结果 h TERT基因沉默48 h以后,与空白组及未转染组相比,转染组宫颈癌Caski细胞的蛋白及mRNA表达出现明显降低(P<0.05);细胞周期的检测结果显示S期的细胞数目明显减低,转染组的宫颈癌Caski细胞停留于G0/G1周期,空白组、转染组及未转染组相比差异显著(P<0.05);宫颈癌Caski细胞在转染组的增殖过程中被明显抑制(P<0.05);转染组穿过滤膜的细胞数量明显减少(P<0.05)。结论 Si RNA靶向沉默h TERT基因电转染后,使宫颈癌Caski细胞的增殖和迁移能力得到抑制,一定程度上改善了宫颈癌患者的预后。     

FasL基因siRNA真核表达载体的构建及意义

目的构建针对细胞凋亡基因FasL的小干扰RNA（siRNA）表达载体,探讨载体介导的RNA干扰技术用于肺间质纤维化基因治疗的可行性。方法依据siRNA靶序列的设计原则,以FasL mRNA为靶基因,合成两对编码短发卡结构的两条DNA序列,经退火合成DNA双链,再克隆至siRNA表达载体pSilencer2．0中,转化后进行PCR鉴定和DNA序列测定。将构建的载体用脂质体介导转染入人肺腺癌A549细胞株,采用实时荧光定量PCR法检测细胞FasL mRNA水平变化。结果成功构建发卡样FasL siRNA真核表达载体;其转染人肺腺癌A549细胞后,细胞FasL mRNA的表达水平显著下降。结论FasL siRNA真核表达载体能显著抑制人肺腺癌A549细胞FasL mRNA的表达;本研究为肺间质纤维化的基因治疗奠定了基础。     

ShRNA靶向干扰BHRF1基因抑制鼻咽癌细胞增殖

目的针对ShRNA靶向干扰BHRF1基因抑制鼻咽癌细胞增殖以分析癌症靶向治疗的前景。方法通过基因测序法鉴定所构建的siRNA表达载体。用四唑盐比色(MTT)法、流式细胞术评价转染siRNA后对鼻咽癌细胞增殖、凋亡的影响。结果与NC-shRNA组相比,BHRF1-shRNA组细胞凋亡增加,凋亡率为(31.51±1.59)%。结论由慢病毒载体介导的shRNA表达载体进入细胞后,可以有效下调BHRF1基因表达水平,抑制细胞增殖,促进细胞凋亡。     

介导EGFR siRNA转染肝癌HepG2细胞的试剂筛选及条件优化

目的筛选介导表皮生长因子受体（EGFR）小干扰RNA（siRNA）转染肝癌HepG2细胞的试剂,并优化转染条件。方法设计靶向EGFR的特异性siRNA,分别用Lipofectamine 2000、siPORT Amine、ICAFectin 442、N-TER nanoparticle、X-tremeGENE、polyMagnetofection、combiMAGnetofection介导转染肝癌HepG2细胞48、72 h。实时定量RT-PCR检测HepG2细胞的EGFR mRNA,计算敲除EGFR mRNA率,据此筛选出最佳转染试剂,继续进行不同试剂用量、不同siRNA浓度、正反向转染的对比。测算转染后细胞存活率及转染率。结果 Lipofectamine2000、siPORTAmine及combiMAGnetofection介导转染72 h后,HepG2细胞的EGFR mRNA敲除率均超过65%。2μl的combiMAGnetofection及200 nM的EGFR siRNA组合、72 h时HepG2细胞的EGFR mRNA沉默效率最高（90%±1%）,其细胞存活率为94%±8%,转染率超过95%。结论介导EGFR siRNA转染HepG2细胞的最佳试剂是combiMAGnetofection,优化转染条件为2μl的combiMAGnetofection、200 nM的EGFR siRNA、转染72 h。     

RNA干扰下调雌激素受体α亚基的人成骨样细胞模型的构建

目的 构建雌激素受体α亚基(ERα)下调的人成骨样细胞模型.方法 采用计算机辅助设计并合成ERα特异性小干扰RNA(siRNA)前体基因后,定向克隆入pSilencer 4.1-CMV质粒中,构建重组的ERα siRNA表达载体并测序鉴定.由脂质体介导重组质粒稳定转染人成骨样细胞株MG63,潮霉素筛选阳性抗性克隆细胞.逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)法检测ERα基因在人成骨样细胞株MG63内的表达,抗生物素蛋白-生物素-过氧化物酶复合体法(ABC)分析ERα蛋白在人成骨样细胞株MG63内的表达与定位.MTT法测ERα基因被特异性下调后对MG63细胞生长的影响.流式细胞术分析ERα siRNA对人成骨样细胞株MG63细胞生长周期的影响.采用改良Gomori氏钙钻法分析ERα siRNA对人成骨样细胞株MG63表达碱性磷酸酶的影响.结果 构建表达ERαsiRNA的重组真核表达载体,并成功地下调了人成骨样细胞株MG63的ERα亚基基因,其中MG63细胞的G1期为68.6%,G2期为17.6%,S期为13.8%;ERα siRNA MG63细胞的G1期为68,6%,G2期为16.8%,S期为14.6%.而ERα siRNA下调人成骨样细胞株MG63的ERα亚基对细胞的生长特性无明显影响.结论 成功地构建了ERα下调的人成骨样细胞模型,该模型为进一步研究雌激素及其受体对骨代谢影响的分子机制提供了基础材料.     

应用表达载体介导siRNA抑制胰腺癌STAT3基因表达的研究

目的探讨表达载体介导小干扰RNA（siRNA）对人胰腺癌细胞系SW1990转录激活因子-3（STAT3）表达的抑制作用。方法设计合成3种可编码后形成小发夹结构针对STAT3基因的siRNA的DNA序列，将其连入pRNAT—U6．1／Neo质粒中，构建STAT3siRNA表达载体。表达载体进行PCR及测序鉴定，并分别转染SW1990细胞，实时定量PCR和Western blot观察SW1990细胞转染后STAT3 mRNA和蛋白表达的改变。结果PCR和DNA测序证实携带3种STAT3 siRNA表达载体构建成功，分别转染SW1990细胞后，STAT3基因的mRNA和蛋白表达量与空质粒转染相比均明显下降（P〈0．05），其中，第二种STAT3 siRNA作用明显，可使mRNA和蛋白表达水平分别下降63％和60％。结论本研究构建的STAT3．siRNA表达载体可有效抑制SW1990细胞STAT3的mRNA和蛋白表达，为下一步以STAT3为靶点的胰腺癌基因治疗实验研究奠定了基础．     

应用表达载体介导siRNA抑制胰腺癌STAT3基因表达的研究

目的 探讨表达载体介导小干扰RNA(siRNA)对人胰腺癌细胞系SW1990转录激活因子-3(STAT3)表达的抑制作用.方法 设计合成3种可编码后形成小发夹结构针对STAT3基因的siRNA的DNA序列,将其连入pRNAT-U6.1/Neo质粒中,构建STAT3 siRNA表达载体.表达载体进行PCR及测序鉴定,并分别转染SW1990细胞,实时定量PCR和Western blot观察SW1990细胞转染后STAT3 mRNA和蛋白表达的改变.结果 PCR和DNA测序证实携带3种STAT3 siRNA表达载体构建成功,分别转染SW1990细胞后,STAT3基因的mRNA和蛋白表达量与空质粒转染相比均明显下降(P＜0.05),其中,第二种STAT3 siRNA作用明显,可使mRNA和蛋白表达水平分别下降63%和60%.结论 本研究构建的STAT3 siRNA表达载体可有效抑制SW1990细胞STAT3的mRNA和蛋白表达,为下一步以STAT3为靶点的胰腺癌基因治疗实验研究奠定了基础.     

小干扰RNA沉默脂肪酸合酶基因对人肝细胞株HepG2脂代谢的影响

目的:研究基因干扰技术沉默脂肪酸合酶(FAS)基因后对人肝细胞株HepG2细胞内外脂质含量及脂代谢相关基因表达的影响。方法:合成3对针对FAS mRNA不同位点序列的小干扰RNA(siRNA),分别转染至人肝细胞株HepG 2,实时荧光定量聚合酶链反应(PCR)检测空白对照组(HepG2细胞不经过任何处理)、阴性对照组(转染没有任何基因干扰作用的阴性siRNA)、FAS-siR NA-1转染组、FAS-siRNA-2转染组和FAS-siRNA-3转染组的FAS mRNA的表达。蛋白免疫印迹(Western blot)法检测蛋白质的表达水平,筛选出沉默效果最佳的一对siR NA。将最有效siRNA转染至HepG2细胞,48 h后测定细胞内外甘油三酯及总胆固醇含量以及脂代谢相关基因的mRNA表达水平。结果:25 nmol/L si RNA和3μl/孔(24孔板)转染试剂的转染效率最高。FAS-siRNA-3对HepG2的FAS基因的沉默效果最好,FAS-si RNA-3转染组的FAS在mRNA水平和蛋白水平分别降低为空白对照组的(52.33±3.07)%和(51.57±3.14)%。FAS-siRNA-3沉默FAS基因后HepG2的细胞内和细胞外培养液中甘油三酯含量显著低于空白对照组,细胞外总胆固醇含量显著低于空白对照组。与空白对照组比较,FAS-siRNA-3转染组HepG2的肝脂酶基因mRNA表达水平显著升高(P0.0001),微粒体甘油三酯转运蛋白基因mRNA表达水平显著降低(P0.05),差异均有统计学意义。结论:FAS基因沉默可显著降低HepG2细胞内甘油三酯、细胞外培养液甘油三酯和总胆固醇的含量,需进一步的体内外实验加以验证。     

PIM1对老年食管癌患者癌细胞增殖和凋亡的影响

目的探讨PIM1对老年食管癌患者癌细胞增殖和凋亡的影响。方法将RNAi重组质粒(PIM1-shRNA-3)经脂质体介导转染食管癌ECA-109细胞株。PIM1基因沉默(PPIM1-shRNA-3)稳定转染的ECA-109细胞(转染组),用空质粒载体稳定转染的ECA-109细胞(空白转染组)和正常培养的ECA-109细胞(对照组)作为对照进行体外研究。通过细胞计数法绘制细胞生长曲线图,RT-PCR法测量PIM1基因表达水平,CCK-8法计算其增殖抑制率,Annexin V-FITC/PI流式法和TUNEL法测算凋亡情况来检测细胞的增殖能力。结果载体成功转入到食管癌细胞中并表达,转染组ECA-109细胞数量减少;转染组肿瘤细胞PIM1基因表达水平明显低于空白转染组和对照组(P<0.05),且转染组PIM1 mRNA相对表达与空白转染组和对照组相比显著降低(P<0.05);相比空白转染组和对照组,ECA-109细胞计数和增殖能力在转染组明显降低(P<0.05);与空白转染组和对照组比较,转染组细胞的细胞抑制率明显升高,P<0.05;TUNEL和Annexin V-FITC/PI法检测结果表明:PIM1基因沉默可促进细胞的凋亡反应,进而抑制细胞的增殖水平。结论食管癌ECA-109细胞株可通过PIM1基因沉默抑制增殖,增加凋亡。     

生存素siRNA表达质粒对MGC-803细胞增殖的影响

目的:应用siRNA表达载体介导的RNAi技术,观察 RNA干扰沉默生存素基因对胃癌MGC-803细胞增殖的影响．方法:用脂质体介导将生存素siRNA表达质粒转染 MGC-803细胞,通过倒置显微镜观察转染后细胞形态学的变化,四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测细胞增殖活性,流式细胞术分析细胞周期的变化,逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)方法检测生存素mRNA的表达水平．结果:生存素siRNA表达质粒转染组MGC-803细胞变圆、浮起,生存素siRNA表达质粒明显下调MGC-803 细胞内生存素mRNA的表达,与空白对照组相比降低了48．2％,阻断细胞周期在G1期(77．4％),显著抑制细胞增殖,siRNA转染组细胞吸光度比空白组显著降低 (24 h:0．272±0．048 vs 0．576±0．018;48 h:0．270±0．060 vs 0．809±0．027;72 h:0．143±0．046 vs 1．015±0．075;均 P<0．01)．转染24,48和72 h后的抑制率分别为53．4％, 66．7％和86.3％．结论:应用siRNA表达载体介导的RNAi技术,可有效下调生存素在MGC-803细胞中的表达,并在体外抑制细胞的增殖．     

Fas基因修饰胃癌耐药细胞的表达

目的 将Fas基图导入胃癌耐药细胞，建立Fas基因表达耐药株，并比较转导前后mRNA与蛋白的表达水平。方法：采用分子克隆技术将Fas基因插入真核表达载体pBK-CMV的多克隆克隆位点之间，以脂质体介导法将重组表述载体转染受体细胞SGC7901／VCR，G418筛选克隆细胞，Southern blot、Northern blot、Weston blot检测Fas基因和Bel-2基因的表达．结果：成功地构建了真核表述载体pBK-Fas eDNA-转导细胞后．从2×10^5细胞中筛选出大约120个抗性克隆，转导率大于0．5‰，随机挑选2十克隆继续筛选与扩增培养-获得了l株稳定的抗生细胞，从而建立了Fas基困表达耐药株，我们命名为SCXC7901／VCRFascells杂交结果表明,转导株与非转导株均有FaseDNA的表达，但转导株Fas mRNA及其蛋白水平的表过则显高于非转导株。结论：在胃癌耐药细胞中Fas基镯处于低表达状态;通过脂质体介导的基因转染．Fas基因可成功地导入胃癌耐药细胞，并能有效地增强FasmRNA及其蛋白的表达，为诱导细胞凋亡逆转胃癌耐药细胞的研究奠定了重要基础。     

VEGF基因沉默对肝癌HepG2细胞侵袭和迁移的影响

目的观察VEGF基因沉默对人肝癌细胞株HepG2迁移和侵袭的影响。方法采用siRNA技术沉默HepG2细胞内血管内皮细胞生长因子(VEGF)基因。体外成功构建针对VEGF的3种siRNA表达载体和1个阴性对照,分别命名为pGenesil-1-VEGF-shRNA-1、2、3和pGenesil-1-VEGF-shRNA-scramble。Lipofectamine 2000介导转染HepG2,用RT-PCR筛选出沉默效果最好的siRNA片断(pGenesil-1-VEGF-shRNA-2),将其重组质粒转染HepG2(观察组),以空质粒细胞(空载组)和空白细胞(空白组)作为对照。采用细胞创伤愈合试验、Transwell小室体外侵袭试验分别检测三组细胞迁移、侵袭能力。结果细胞创伤愈合试验显示,观察组细胞迁移速度为(3.02±0.03)μm/h,显著慢于空载组的(8.67±0.02)μm/h和空白组的(8.78±0.03)μm/h,P均<0.05;细胞侵袭试验显示,观察组穿膜细胞数为(14.0±1.3)个,显著低于空载组的(35.0±2.3)个和空白组的(36.0±2.5)个,P均<0.05。结论 VEGF基因沉默可抑制肝癌细胞株HepG2的迁移和侵袭能力。     

WWOX基因转染抑瘤效应的实验研究

目的建立肿瘤抑制基因WWOX真核表达载体，观察其瞬时转染对肿瘤细胞凋亡的影响。方法采用RT-PCR方法，从正常人胚肾细胞HEK-293中钓取WWOX基因，将其克隆至pMD18-T载体上，测序正确后克隆到真核表达载体pcDNA4／myc-His中；采用脂质体介导法体外瞬时转染人肺腺癌A549细胞；RT—PCR法和Western印迹法分别检测WWOX基因mRNA和蛋白表达水平；流式细胞术检测细胞凋亡率；克隆形成试验观察肿瘤细胞克隆形成能力的变化。结果成功构建了WWOX的真核表达载体，体外转染的A549细胞凋亡率明显高于未转染和空载体转染细胞，且细胞克隆形成能力下降，形成率为35．43％，明显低于未转染细胞和空载体转染细胞。结论所构建的pcDNA4／myc-WWOX真核表达载体转染肿瘤细胞能够抑制肿瘤生长并诱导细胞凋亡。     

Ap-1基因RNA干扰对大鼠血管平滑肌细胞增殖的影响

目的探讨Ap-1基因RNA干扰抑制血管平滑肌细胞（VSMCs）基因对VSMCs增殖的影响。方法以Ap-1基因RNA干扰VSMCs基因，应用MTr比色试验检测VSMCs增殖情况，流式细胞仪检测VSMCs细胞周期，免疫细胞化学染色观察增殖细胞核抗原（PCNA）表达。结果siRNA转染后，3个阳性siRNA转染组Ap-1基因表达水平均降低；VSMCs的MTY吸光度值和PCNA表达量均降低；VSMCs出现明显的G0／G1期阻滞。结论RNA干扰介导的Ap-1基因沉寂可显著抑制VSMCs增殖。     

体外转染野生型p16基因对兔血管平滑肌细胞生长的抑制作用

目的 :研究体外转染外源性野生型 p16基因对兔血管平滑肌细胞生长的影响。　　方法 :构建野生型 p16基因的重组逆转录病毒载体 ,并体外转染兔血管平滑肌细胞 ,应用 Northern blot及 Westernblot检测外源 p16基因的表达 ,并用四唑盐 ( MTT)法及流式细胞仪检测其对细胞生长的抑制作用。　　结果 :逆转录病毒载体可有效地将外源性 p16基因导入平滑肌细胞 ,表达 P16蛋白 ,并显著抑制血管平滑肌细胞的生长使细胞滞留于 G1 期。　　结论 :体外转染外源性野生型 p16基因可有效抑制血管平滑肌细胞的生长。     

外源性双链RNA在蚊虫细胞中介导的基因沉默

目的 近年来，双链RNA介导的基因沉默(RNA干扰)已在许多动植物中发现，并成为研究基因功能的强有力的工具。为确定蚊虫细胞中是否有RNA干扰现象，以期为利用RNAi效应消除蚊虫抗药性研究奠定基础。方法 设计5′端带T7启动子的绿色荧光蛋白(GFP)及糜蛋白酶特异性引物，PCR扩增目的基因获得5′端带有T7启动子DNA片段，体外转录成单链RNA，退火后形成双链RNA。转染带有GFP基因的昆虫细胞表达载体pAct．GFP和双链RNA进入C6／36蚊虫细胞，72h后收集细胞，用激光共聚焦显微镜和流式细胞仪检测GFP的表达差异，用半定量RT-PCR检测GFP的mRNA的表达水平。结果 转染糜蛋白酶基因双链RNA和pAct．GFP质粒的细胞及仅转染pAct．GFP的细胞的GFP表达水平没有明显差异；转染GFP基因的双链RNA和pAct．GFP质粒的细胞的GFP表达水平显著下降，达40％～50％，GFP的mRNA的表达水平也相应下降了60％。结论 在蚊虫细胞内，双链RNA能特异性的抑制相应的同源性基因的表达，引起基因沉默，证实蚊虫细胞内RNA干扰现象的存在。