肝癌组织及外周血单核细胞端粒酶异常对肝癌诊断价值的研究

目的探讨肝癌组织及外周血单核细胞中端粒酶表达对肝癌诊断的临床价值。方法以0.05%2-乙基氨基芴(2-FAA)饲料饲养SD大鼠诱发肝癌发生,在肝细胞癌变过程中观察端粒酶的动态变化及与总RNA的关系。并从人肝癌和非癌组织中制备总RNA,采用端粒重复扩增法-ELISA分析肝组织及外周血单核细胞端粒酶活性及其对肝癌的诊断与鉴别价值。结果经大鼠诱癌后,在肝细胞经细胞变性、癌前病变和肝癌形成的过程中,肝内总RNA和端粒酶显著表达,并呈正相关关系(r=0.83,P<0.01);在人肝癌组端粒酶活性明显高于它的非癌组织,而总RNA则是非癌组明显高于癌组;外周血单核细胞中,癌组端粒酶活性明显高于肝硬化组、慢性肝炎组及正常对照(P<0.01);外周血AFP浓度与单核细胞端粒酶活性联合分析,对肝癌具有互补诊断价值。结论肝癌发生过程中端粒酶表达异常,外周血中端粒酶活性检测有助于肝癌的诊断及预后观察。     

端粒酶与肝癌

肝癌组织中端粒酶阳性表达率80％以上,正常肝组织中无端粒酶活性表达,肝炎、肝硬化组织中有不同程度的表达率,但其活性明显较肝癌组织低,端粒酶活性检查可以帮助早期诊断分化良好的肝细胞癌,有望成为肝癌早期诊断的标志物,端粒酶活性水平与细胞的分化有关,影响肿瘤的生长和复发,端粒酶活性水平检测也有助于判断肝癌复发的危险,针对端粒酶进行肿瘤治疗可能有重要意义。     

端粒酶与肝癌

肝癌组织中端粒酶阳性表达率８０％以上,正常肝组织中无端粒酶活性表达,肝炎,肝硬化组织中有不同程度的表达率,但其活性明显较癌组织柢,端粒酶活性检查可以帮助早期诊断分化良好的肝细胞癌,有望成为肝癌早期诊断的标志物。     

对原发性高血压患者外周血和动脉组织中端粒酶活性的研究

目的 :探讨原发性高血压 (EH)患者外周血单个核细胞和胆囊动脉组织中端粒酶的活性。方法 :用端粒酶 PCR- ELISA方法测定 90例 EH患者和 56例血压正常者外周血端粒酶的活性 ,同时测定 2 4例 (EH、血压正常者各 1 2例 )胆囊动脉组织中端粒酶活性的变化 ,并与 2 1例结肠癌患者进行对比。结果 :EH组外周血单个核细胞的端粒酶活性比对照组明显增高 , 级、低危 EH患者中已有外周血单个核细胞端粒酶活性的增加 ,这种酶的变化并不随血压的水平和预后危险因素的增加而增加 ,但规则的降压治疗可使外周血单个核细胞端粒酶活性降低。EH患者动脉组织中端粒酶活性也比血压正常者和癌周组织高 ,但较癌组织中的端粒酶活性低。结论 :端粒酶是细胞增殖活性的分子水平标志物 ,外周血单个核细胞端粒酶的激活可能是 EH的危险因素之一 ,动脉组织中端粒酶活性的增加可能促进 EH的血管重塑     

端粒酶在胃良恶性病变患者组织和外周血中的表达及其临床意义

目的测定胃癌、胃良性病变患者及正常人的胃组织、外周血中的端粒酶活性,以探讨端粒酶活性的表达及其在临床应用七的意义。方法应用TRAP-PCR-ELISA方法检测36例胃癌患者胃癌组织、外周血,30例胃良性病变患者胃黏膜、外周血,20例正常人胃黏膜、外周血中端粒酶的活性。结果胃癌组肿瘤组织和外周血中端粒酶阳性率分别为80．6％（29／36）、50％（18／36）。胃良性病变组胃黏膜组织和外周血中端粒酶阳性率分别为10％（3／30）、3％（1／30）。正常人胃黏膜组织和外周血中均未检测到端粒酶阳性。胃癌组中端粒酶活性与患者的性别、年龄、肿瘤大小、浸润深度、分化程度、淋巴转移和TNM分期等临床病理参数无明显相关性（P〉0．05）。结论端粒酶活性是判断良恶性肿瘤的一个重要指标,检测外周血中端粒酶活性有助于胃癌的早期诊断．对预后监控及治疗也有重要意义。     

膀胱癌组织端粒酶活性表达及其与临床病理特征关系的研究

目的 探讨膀胱移行细胞癌（transitional cells carcinoma,TCC）组织端粒酶活性表达与膀胱癌临床病理特征的关系.方法 应用端粒酶重复序列扩增（telomeric repeat amplification protocol,TRAP）银染TRAP-ELISA方法检测25例膀胱癌组织（实验组）和4例膀胱正常组织（对照组）中端粒酶活性的表达,并与临床病理分期、病理分级及预后关系进行分析.结果 实验组中端粒酶活性表达率为96%,对照组无表达,实验组端粒酶活性高于对照组（P＜0.001）;端粒酶活性临床病理分期T2高于T1、T3高于T2（P＜0.01）,晚期组高于早期组（P＜0.001）;端粒酶活性病理分级G2高于G1、G3高于G2（P＜0.01）.结论 实验组端粒酶活性高表达,并与膀胱癌临床病理分期、病理分级呈正相关,端粒酶激活可能在膀胱癌的发生及发展过程中起重要作用,端粒酶可作为膀胱癌早期诊断及判定预后的分子生物学标记.     

原位逆转录PCR检测胃癌及癌前组织中端粒酶RNA及其临床意义

目的　研究胃癌及癌前病变胃粘膜端粒酶RNA的检测及其临床意义。方法　选取经病理组织学证实的胃粘膜活检标本 15 0例 ,包括慢性浅表性胃炎 3 2例、肠上皮化生 3 6例、不典型增生 3 4例、胃癌 48例 ,采用原位逆转录PCR、端粒重复序列扩增 (TRAP)法检测上述胃粘膜端粒酶RNA与端粒酶活性。结果　原位逆转录PCR技术检测胃粘膜活检标本端粒酶RNA阳性率为 5 5 .3 % (83 / 15 0 ) ,显著高于TRAP法检测端粒酶活性阳性率 (4 0 .0 % ,60 / 15 0 ) ,P <0 .0 5。端粒酶RNA在胃癌及癌前病变 (包括肠上皮化生与异型增生 )中检出率显著高于浅表性胃炎 (P <0 .0 5 ) ,胃癌中端粒酶RNA检出率亦显著高于肠上皮化生及不典型增生 (P <0 .0 5 ) ,但后两者比较差异无显著性 (P >0 .0 5 )。端粒酶RNA主要分布于胃粘膜癌细胞及癌前病变上皮细胞的胞核内。结论　端粒酶RNA与胃癌的发生密切相关。原位逆转录PCR技术检测胃粘膜端粒酶RNA对胃粘膜癌变的早期诊断和预测有重要价值 ,而且可能是较端粒酶活性更灵敏的生物学指标     

肝癌组织端粒酶活性检测临床应用研究进展

自Ｋｉｍ[1] 等 1994年建立了端粒酶活性检测的ＴＲＡＰ法 ,并发现端粒酶活性与多数恶性肿瘤密切相关以来 ,有关端粒酶与肿瘤关系及其临床应用研究的报道逐年增加。本文综述了肝癌 (ｈｅｐａｔｏｃｅｌｌｕ ｌａｒｃａｒｃｉｎｏｍａＨＣＣ)组织中端粒酶活性检测在肝癌诊断和预后判断上应用的研究进展。1　端粒酶作为分子标记诊断肝癌的基础研究表明[2 - 10 ] ,端粒酶活性在大多数 (80 % -10 0 % )肝癌组织中呈阳性或强阳性 ,而在正常肝组织为阴性 ;10 % - 4 0 %的慢性肝病可出现弱的端粒酶活性 ,而这些端粒酶阳性的慢性肝病患者中有相当一…     

肝癌组织及外周血TGF-β1 mRNA检测

目的探讨转化生长因子(TGF)_β1及其TGF_β1 mRNA对肝癌(HCC)诊断和转移监测的临床价值。方法从肝癌癌灶、癌周组织及外周血单核细胞中制备总RNA,经随机引物和逆转录酶合成TGF_β1_cDNA,经巢式聚合酶链反应扩增及DNA测序证实,并分析肝病患者外周血TGF_β1 mRNA的临床意义。结果DNA测序证实所扩增基因片段大小211 bp,方法灵敏度为2 ng/L。癌灶和癌周组织中TGF_β1基因片段检出率分别为100%和46.2%;外周血TGF_β1基因检出率,肝癌为53.3%,明显高于肝硬化组(20.0%)和慢性肝炎组(5.0%),其他组未见扩增片段检出;在Ⅲ期肝癌组为83.3%,高于Ⅰ期和Ⅱ期肝癌;在肝癌伴有肝外转移时全数阳性;且与AFP浓度及肿瘤大小无明显相关性。结论TGF_β1及TGF_β1mRNA分析有助于肝癌诊断和远处转移的监测。     

肝癌组织甲胎蛋白表达特点及其基因片段的扩增分析

目的探讨肝癌组织甲胎蛋白(AFP)表达的病理学特点及其基因分析的临床价值。方法以免疫组织化学法研究AFP在肝癌及癌周组织中的胞内分布及其表达;并从肝癌的癌灶、癌旁组织中制备总RNA,以巢式聚合酶链反应(nested_PCR)扩增不同癌组织AFP_mRNA片段,以探讨AFP表达的临床病理学特征及其AFP_mRNA分析的应用价值。结果肝癌细胞及癌旁肝细胞的胞浆中,均可见AFP阳性的棕黄色颗粒,癌组织中AFP阳性表达率为73.3%,癌旁组织中为40.0%,中、低分化组肝癌中AFP的表达阳性率明显高于高分化组肝癌(P<0.05),且癌旁组织中AFP的表达强度明显低于肝癌的癌灶组织。肝癌组织、癌周组织的总RNA表达水平存在差别,癌组织中AFP_mRNA片段扩增全数阳性(100%),显著高于癌周组织(P<0.01)。结论肝癌不同组织中AFP表达存在差异,AFP_mRNA分析有助于肝癌的早期发现和诊断。     

Dynamic alteration of telomerase expression and its diagnostic significance in liver or peripheral blood for hepatocellular carcinoma

AIM: To investigate the dynamic alteration of telomerase expression during development of hepatocellular carcinoma (HCC) and its diagnostic implications in liver tissues or peripheral blood mononuclear cells for HCC. METHODS: Dynamic expressions of liver telomerase during malignant transformation of hepatocytes were observed in Sprague-Dawly (SD) rats fed with 0.05% of 2-fluoenyacetamide (2-FAA). Total RNA and telomerase were extracted from rat or human liver tissues. The telomerase activities in livers and in circulating blood were detected by a telomeric repeat amplification protocol-enzyme-linked immunosorbent assay (TRAP-ELISA), and its diagnostic value was investigated in patients with benign or malignant liver diseases. RESULTS: The hepatoma model displayed the dynamic expression of hepatic telomerase during HCC development. The telomerase activities were consistent with liver total RNA levels (r = 0.83, P < 0.01) at the stages of degeneration, precancerosis, and cancerization of hepatocytes. In HCC patients, the telomerase levels in HCC tissues were significantly higher than in their adjacent non-cancerous tissues, but liver total RNA levels were lower in the former than in the latter. Although the circulating telomerase of HCC patients was abnormally expressed among patients with chronic liver diseases, the telomerase activity was a non-specific marker for HCC diagnosis, because the incidence was 15.7% in normal control, 25% in chronic hepatitis, 45.9% in liver cirrhosis, and 85.2% in HCC, respectively when absorbance value of telomerase activity was more than 0.2. If the value was over 0.6, the incidence was 60% in HCC group and 0% in any of the others (P < 0.01) except in two cases with liver cirrhosis. However, the combination of circulating telomerase with serum alpha-fetoprotein level could increase the positive rate and the accuracy (92.6%, 125 of 135) of HCC diagnosis. CONCLUSION: The overexpression of telomerase is associated with HCC development, and its abnormality in liver tissues or in peripheral blood could be a useful marker for diagnosis and prognosis of HCC.     

外周血白蛋白mRNA分析在肝癌诊断和转移监测中的价值

目的     

人肝癌组织GGT基因甲基化状态与酶蛋白异常表达关系的研究

目的探讨肝癌发生过程中γ－谷氨酰转肽酶（ＧＧＴ）的表达及其改变机制。方法将肝癌、癌旁及远癌组织总ＧＧＴ和ＲＮＡ纯化，观察总ＧＧＴ、膜结台和可溶性ＧＧＴ的表达，并以逆转录巢式ＰＣＲ扩增ＧＧＴ非编码区基因片段，分析Ｍ３位点的甲基化状态。结果肝癌、癌旁和远癌组总ＲＮＡ浓度呈明显的梯度升高趋势（Ｐ＜０．０５）；癌组织总ＧＧＴ、膜结合和可溶性ＧＧＴ均高于癌周和远癌组织（Ｐ＜０．０５）；在癌、癌旁和远癌组织中，特定基因片段的扩增检出率分别为１００％，８５％和７５０／０，Ｍ３位点低甲基化频率分别为７５％，５５％和５０％。结论肝癌组织中ＧＧＴ呈异常表达与基因低甲基化状态有关，分析ＧＧＴ基因可望成为监测肝细胞癌变的灵敏方法。     

γ-谷氨酰转移酶mRNA亚型对肝细胞癌变的监测

目的 探讨γ-谷氨酰转移酶（GGT）mRNA亚型的转化与原发性肝癌（HCC）发生的关系,寻找肝癌早期诊断的新方法。方法 以逆转录聚合酶链反应方法检测正常对照组、非癌肝病组、肝癌组及肝转移癌肝组织及外周血的3种GGTmRNA亚型(A、B、C亚型)。结果 正常肝纤维、非癌肝病的肝组织及肝转移癌癌周组织主要的GGTmRNA类型为A亚型,肝癌组织、癌旁组织及远癌组织GGTmRNA-B亚型的阳性率显著高于正常肝脏及非癌肝癌的肝组织（P＜0．05）,癌组织GGT mRNA-A亚型阳性率明显低于正常对照及非癌肝病组（P＜0．05）。在26例HCC中有12例外周血中检出GGTmRNA-B亚型,甲胎蛋白阴性的10例HCC中有5例检出GGTmRNA-B亚型。结论 GGT mRNA亚型转化与肝癌发生有密切关系,分析GGT基因可望成为监测肝细胞癌变的灵敏方法。     

人肝癌组织中γ-谷氨酰转移酶异常表达及其基因甲基化程度的研究

目的探讨γ谷氨酰转移酶（ＧＧＴ）基因在人类肝癌发生过程中的表达及改变机制。方法以病理组织学、生物化学和分子生物学方法,将自身配对的肝癌、癌旁组织和远癌组织中总ＲＮＡ纯化,对ＧＧＴ的表达与改变进行了分析;并设计两套引物,以逆转录巢式ＰＣＲ法扩增ＧＧＴ５′非编码区（ＮＣ）基因和限制性内切酶消化分析了不同肝癌组织中ＧＧＴ基因的甲基化程度。结果在病理组织学证实的２４例肝癌、癌旁和远癌组织中：①从肝癌灶至远癌的不同组织中,总ＲＮＡ浓度呈逐步升高趋势,三种不同组织间的差异均有显著性（Ｐ＜０．０５）;②癌组织中总ＧＧＴ比活性（Ｕ／ｇ）较癌周和远癌组织明显升高（Ｐ＜０．０５）;③以自行设计建立的逆转录巢式ＰＣＲ法,成功地扩增ＧＧＴ的５′ＮＣ基因片段,特异性强且区带清晰,ＰＣＲ产物经酶切分析证明,ＧＧＴ基因５′ＮＣＭ３位点（ＣＣＧＧ）,其内位Ｃ在癌灶、癌周和远癌组织中的低甲基化频率分别为７０．８３％,５８．３３％和５４．１７％,非常明显地高于同组中已甲基化程度。结论肝癌组织中ＧＧＴ基因甲基化程度较低,且与肝癌ＧＧＴ的异常表达关系密切,对肝细胞癌变可能起促进作用。     

循环血单核细胞GPC-3mRNA和甲胎蛋白对肝癌诊断与转移监测的潜在价值

目的分析肝癌患者外周血单核细胞中磷脂酰肌醇蛋白多糖(GPC)-3 mRNA表达及甲胎蛋白(AFP)对肝癌诊断与转移监测的价值。方法收集住院肝病患者外周血,分离单核细胞,制备总RNA,经逆转录合成GPC-3cDNA,以荧光定量PCR扩增并分析其对肝癌诊断与转移监测的价值。结果外周血单核细胞中GPC-3 mRNA阳性仅见肝癌患者,55例肝癌患者中39例阳性(70.9%);肝硬化、肝炎、转移性肝癌、非肝肿瘤患者及正常对照组中未检出阳性(χ2=26.773,P<0.001)。外周血单核细胞GPC-3 mRNA阳性表达与HBsAg阳性(χ2=14.601,P<0.001)、肝癌的TNM分期(χ2=15.252,P<0.001)、门静脉癌栓(χ2=45.658,P<0.001)及伴肝外转移显著相关(χ2=22.273,P<0.001),与瘤体直径、数目、AFP浓度及分化程度间无明显相关;与血AFP可互补诊断,提高肝癌诊断阳性率(90.9%)。结论循环血单核细胞GPC-3 mRNA分析,有助于肝癌诊断和肝外转移监测,对AFP阴性肝癌具互补诊断价值。     

人肝癌组织血管内皮生长因子及微血管密度分析的临床价值

目的 探讨血管内皮生长因子(VEGF)在肝癌(HCC)微血管形成、生长和转移方面的作用。 方法 以免疫组织化学法分析36例HCC组织中VEGF表达状态和细胞内分布,采用微血管染色方法测定微血管密度(MVD),并定量检测癌及癌周组织中总RNA和VEGF水平。 结果 所有HCC组织中VEGF阳性率为63.9％,无包膜组为78.3％,伴有远处转移组为90.9％;VEGF表达与MVD密切相关(t=4.49,,P<0.01);HCC组织VEGF水平或MVD值,在肿瘤直径大小组及肿瘤分化程度高低组间差异无显著性;HCC组织总RNA水平低于癌旁及远癌组织,而VEGF水平明显高于癌旁和远癌组织(q=6.10,P<0.01)。 结论VEGF过度表达和MVD异常是反映HCC侵润生长及转移的有效指标。     

AFP、h-TERT及VEGF基因在肝细胞癌患者外周血中的诊断价值

目的:探讨肝细胞癌(HCC)患者外周血中甲胎蛋白(AFP)、端粒酶逆转录酶(h-TERT)及血管内皮生长因子(VEGF) mRNA的表达及联合检测对诊断HCC的应用价值.方法:应用荧光定量PCR(FQ-PCR)对40例HCC、20例肝外良性疾病及10例正常体检人群的外周血AFP mRNA、h-TERT mRNA及VEGF mRNA的表达量进行检测.结果:3种指标在HCC患者中阳性率分别为77.5%、85%及72.5%,与对照组相比差异有统计学意义(P<0.01).且AFP mRNA、VEGF mRNA的阳性表达与HCC患者血清AFP水平无关(P>0.05),h-TERT mRNA与患者血清AFP水平存有相关性(P=0.01);3种指标与HCC患者的TNM分期高度相关(P<0.01).AFP mRNA在诊断HCC特异性较高,而AFP mRNA和h-TERT mRNA联合检测效果更好(敏感度92.%,特异度80%).结论:3种指标对诊断HCC均能起到良好的参考作用,联合检测AFP mRNA及h-TERT mRNA能增加诊断HCC的敏感度及特异度.