雌激素对去势大鼠SIRT1表达的影响

目的：研究雌激素对去势大鼠大脑、心脏和肝脏等组织中沉默信息调节因子2相关酶1（SIRT1）表达的影响,以探讨其抗衰老作用。方法：选取3个月龄Sprague-Dawley（SD）雌性大鼠33只,手术切除大鼠双侧卵巢以建立大鼠去势模型,以部分模拟更年期的某些病理生理改变,分为实验组、去卵巢对照组和假手术对照组（每组各11只）,实验组灌胃给予雌二醇（E2）,去卵巢对照组和假手术对照组给予等量生理盐水,每天1次,共12周。满12周后腹主动脉采血,测定大鼠血卵泡刺激素（FSH）、E2水平,处死大鼠后取大脑、心脏、肝脏等组织。采用逆转录聚合酶链反应实验（RT-PCR）和酶联免疫吸附实验（ELISA）检测各组织SIRT1 mRNA及其蛋白水平,分析比较各组间SIRT1的表达水平。结果：大鼠灌胃12周后,去卵巢对照组FSH水平高于实验组和假手术对照组（P＜0.001）,E2水平低于实验组和假手术对照组（P＜0.001）。在大鼠心脏、肝脏和脑组织中,实验组和假手术对照组SIRT1蛋白及mRNA水平均高于去卵巢对照组（P＜0.05）,实验组和假手术对照组SIRT1蛋白及mRNA水平差异无统计学意义（P＞0.05）。在实验组和假手术对照组中,心脏SIRT1蛋白水平高于肝脏和脑组织（P＜0.05）,肝脏组织SIRT1蛋白量高于脑组织（P＜0.05）;而去卵巢对照组的心脏和肝脏组织SIRT1蛋白水平高于脑组织（P＜0.05）,但心脏和肝脏组织SIRT1蛋白水平差异无统计学意义（P＞0.05）。3组心脏和脑组织SIRT1 mRNA水平均低于肝脏组织（P＞0.05）。结论：雌激素可显著提高去势大鼠SIRT1蛋白及mRNA水平,进而发挥其抗衰老作用。     

沉默信息调节因子1小干扰RNA诱导前列腺癌细胞PC3细胞凋亡

摘要:目的　观察沉默信息调节因子1（SIRT1）小干扰RNA（siRNA）对前列腺癌细胞PC3细胞生长增殖、DNA合成、细胞凋亡和Bcl-2和Bax蛋白的表达变化,探讨SIRT1在前列腺癌发生中的可能机制。方法　体外培养PC3细胞,分空白对照组（mock组）,转染阴性对照组（scramble siRNA组）和SIRT1 siRNA转染组;Western blot检测PC3细胞中SIRT1的干涉效能;MTT法测定PC3细胞的增殖率;BrdU掺入法测定DNA合成;流式细胞术检测细胞凋亡;Western blot检测PC3细胞中细胞凋亡关键调控因子Bcl-2和Bax的蛋白表达。结果　与对照组比较,SIRT1 siRNA组SIRT1蛋白表达降低（P＜0.01）,PC3细胞的增殖和DNA合成明显受抑制（P＜0.01）,细胞凋亡比例增加（P＜0.01）,Bcl-2蛋白表达减少,Bax的表达增加。结论　下调SIRT1的表达抑制细胞增殖和DNA合成,诱导前列腺癌PC3细胞发生凋亡,其机制可能与改变细胞凋亡关键调控因子Bcl-2和Bax的蛋白表达相关。     

Sirtuin1功能及调控研究进展

Sirtuin1(SIRT1)是依赖于烟酰胺腺嘌呤二核苷酸辅酶(nicotinamide adenine dinucleotide,NAD+)的去乙酰化酶(Sirtuins,SIRTs)家族7个成员中最大的一个,是近年来研究最为广泛的长寿因子。SIRT1除了对组蛋白赖氨酸残基去乙酰化修饰调节表观遗传外,SIRT1还可以调节细胞其他关键蛋白活性,控制细胞增殖、分化和细胞凋亡等生理功能。最近研究发现,SIRT1调控细胞功能除了与其酶活性水平有关,也可能与其在细胞中的定位有关。SIRT1在细胞核质之间穿梭和SIRT1活性水平及其相对应的生理功能仍需深入研究.     

SIRT3与女性生育力的研究进展

Sirtuins家族是近年研究的热点，参与细胞代谢、基因表达、氧化应激以及细胞衰老等众多生物学过程。SIRT3是Sirtuins家族成员之一，具有重要的抗氧化、抗损伤的作用。线粒体中SIRT3的去乙酰化作用最为活跃，通过多种分子机制调控活性氧簇（ROS）的生成与清除、三磷酸腺苷（ATP）生成及线粒体功能等。作为调控ROS生成的重要因子之一，SIRT3对卵巢储备和卵泡发育、卵母细胞减数分裂和植入前胚胎发育进程、卵母细胞老化以及颗粒细胞功能都具有重要的调控作用。因此，SIRT3的调节有望为临床卵巢功能的改善提供潜在的药物靶点。综述SIRT3在生殖系统中的调控作用以及相关分子通路。     

孕哺期铅暴露对雄性子代大鼠海马组织中沉默信息调节因子表达的影响

目的探讨大鼠孕期及哺乳期铅暴露对雄性仔鼠海马组织中沉默信息调节因子(silent information regulator1,SIRT1)表达的影响。方法将12只健康SPF级雌性SD孕鼠随机分为3组,分别为对照组(去离子水)、低剂量铅暴露组(0.5 g/L乙酸铅)和高剂量铅暴露组(2.0 g/L乙酸铅),每组4只。采取自由饮水的方式进行染毒,自妊娠第1天开始至仔鼠21 d断乳为止。在仔鼠断乳后,采用电感耦合等离子体原子发射光谱法(ICP-AES)检测6只雄性仔鼠全血和海马组织中铅的含量,采用RT-PCR检测6只雄性仔鼠海马组织SIRT1 mRNA水平的变化,采用Western blot和免疫荧光组织化学法检测6只雄性仔鼠海马组织SIRT1蛋白水平的变化。结果孕哺期不同剂量铅暴露后,雄性仔鼠血铅和海马组织中铅含量均高于对照组,海马中SIRT1 mRNA和蛋白水平的表达均低于对照组,且高剂量铅暴露组仔鼠海马中SIRT1mRNA和蛋白水平低于低剂量组,差异均有统计学意义(P0.05)。结论孕哺期铅暴露可下调仔鼠海马中SIRT1基因表达,从而可能影响海马神经元功能及仔鼠学习记忆能力。     

miR-138-5p在锰致SH-SY5Y细胞自噬中的作用

[目的]探讨miR-138-5p在氯化锰(MnCl_2)诱导人神经母细胞瘤SH-SY5Y细胞自噬中的作用及其机制。[方法]以生理盐水处理组作为对照,0.125、0.25、0.5、1 mmol/L MnCl_2染毒SH-SY5Y细胞6 h后,利用MTT法检测细胞活力;0.25和0.5 mmol/L MnCl_2处理细胞6 h后,采用Western blot检测自噬相关蛋白LC3和Beclin1的表达;MnCl_2染毒6 h后,使用反转录PCR和Western blot检测miR-138-5p和组蛋白脱乙酰酶SIRT1 mRNA以及蛋白表达的变化;使用miRNA模拟物转染细胞实现miR-138-5p过表达,然后0.25 mmol/L MnCl_2染毒6 h,检测SIRT1 mRNA和蛋白的表达以及自噬相关蛋白LC3和Beclin1的变化。[结果]MnCl_2可剂量依赖性地降低SH-SY5Y细胞活力(趋势χ~2=12.42,P0.05)。与对照组相比,0.25、0.5 mmol/L MnCl_2染毒后,自噬相关蛋白LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ值和Beclin1表达水平明显增加(P0.05);miR-138-5p表达下调,SIRT1 mRNA及蛋白表达上调(均P0.05)。miR-138-5p过表达后,相比未过表达的MnCl_2染毒组,SIRT1 mRNA及蛋白表达均出现下调,自噬相关蛋白LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ值及Beclin1蛋白表达也相应下调(P0.05)。[结论]miR-138-5p过表达可通过调节SIRT1的表达抑制锰诱导的SH-SY5Y细胞自噬。     

视网膜色素上皮氧化损伤SIRT1表达改变

目的明确氧化应激对视网膜色素上皮细胞(RPE)中去乙酰化酶1(SIRT1)表达的影响。方法以人RPE细胞为实验对象,不同浓度H_2O_2(0、200、300μmol/L)处理RPE细胞,观察处理后24 h细胞形态的改变情况,检测处理后24 h与72 h细胞中SIRT1的mRNA与蛋白表达情况。结果 H_2O_2作用后,随H_2O_2浓度的增加,RPE细胞的形态受损,有凋亡小体的出现;在氧化应激24 h后细胞内SIRT1的转录水平增加,而在氧化应激72 h后SIRT1的蛋白表达显著下降。结论氧化应激可导致RPE细胞形态改变,SIRT1在RPE细胞内维持着氧化与抗氧化应激系统平衡,因此将SIRT1可作为临床上年龄相关性黄斑变性病(AMD)治疗的靶点。     

STRT1通过调控VEGFA参与子痫前期的发病机制研究

目的 研究沉默信息调节因子2相关酶1(silence information regulator 2 homolog 1,SIRT1)和血管内皮生长因子A(vascular endothelial growth factor A,VEGFA)在子痫前期(preeclampsia, PE)患者胎盘中的表达情况,探讨SIRT1通过改变VEGFA表达来影响PE疾病发生的可能性。方法 选择2019年7月至2021年3月于上海交通大学医学院附属国际和平妇幼保健院产科经剖宫产分娩的产妇40例,其中PE孕产妇24例为PE组,健康孕产妇16例为对照组,均为单胎妊娠。收集母婴临床资料以及产妇胎盘组织,采用实时荧光定量聚合酶链式反应(qPCR)和免疫印迹法(Western blot)检测孕妇胎盘组织中SIRT1和VEGFA的mRNA及蛋白表达水平;采用免疫组织化学技术检测孕妇胎盘组织中SIRT1的表达,结合孕妇的临床指标和胎盘中SIRT1和VEGFA表达水平进行相关性分析。结果 VEGFA在PE组的表达显著低于对照组,差异有统计学意义(P<0.01);SIRT1在PE组的表达显著高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05);两组孕产妇血压、尿蛋白、胎盘重量、新生儿出生体重及身长相比差异有统计学意义(P<0.001);SIRT1和VEGFA在mRNA水平的表达呈负相关(r=-0.358,P<0.05);PE组胎盘组织SIRT1的表达与胎盘重量、新生儿出生体重及身长呈显著负相关(P<0.05)。结论 SIRT1和VEGFA均参与PE的进程,SIRT1可能通过调控VEGFA的表达影响PE孕妇胎盘中滋养层细胞侵袭与血管形成。     

广西巴马长寿地区居民血清沉默信号调节蛋白6的表达水平

目的 了解广西巴马地区居民血清沉默信号调节蛋白6(silent information regulator6,SIRT6)蛋白表达水平的差异,探讨其与家庭聚集性长寿现象的关系.方法 于2011年5--6月,在巴马地区单纯随机抽取有3～4代直系亲属的家庭分为长寿家族史组共137例(年龄30～106岁,男70人,女67人)和非长寿家族史组共91例(年龄22～89岁,男51人,女40人).测定血压、血生化指标[总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、高密度脂蛋白(HDL)、低密度脂蛋白(LDL)、空腹血糖(FPG)]和血清SIRT6蛋白表达水平.结果 长寿家族史组血清TC、TG和HDL含量均低于非长寿家族史组(P＜0.05,P＜0.01).长寿家族史组血清中SIRT6表达水平低于非长寿家族史组(P＜0.05).经单因素分析,长寿家族史组血清SIRT6蛋白水平与年龄、FPG含量呈正相关(P＜0.05),与TG含量呈负相关(P＜0.05);而非长寿家族史组血清SIRT6蛋白水平仅与年龄呈负相关(P＜0.05).结论 血清SIRT6蛋白表达水平可能与巴马地区家庭聚集性长寿现象存在一定联系.     

SIRT1与NLRP3在子痫前期患者胎盘组织中的表达及临床意义

目的：探讨沉默信息调节因子1(SIRT1)和Nod样受体蛋白3(NLRP3)炎性小体在子痫前期(PE)胎盘中的表达及临床意义。方法：采用免疫组化SABC法检测SIRT1和NLRP3在胎盘石蜡切片中的表达情况，其中早发型PE 40例，晚发型PE 40例，另有正常孕妇40例作为对照组。结果：SIRT1在早发型PE组、晚发型PE组和对照组中的阳性表达率分别为12.5%、35%、92.5%,差异有统计学意义(χ²=54.71,P<0.05)。NLRP3在早发型PE组、晚发型PE组和对照组中的阳性表达率分别为95%、72.5%、30%,差异有统计学意义(χ²=38.75,P<0.05)。在PE胎盘组织中，SIRT1与NLRP3之间的表达水平呈负相关(r=-0.60,P<0.05)。结论：低表达的SIRT1、高表达的NLRP3可能推动了PE的发生发展。     

沉默信息调节因子 1 与急性肺损伤/急性呼吸窘迫综合征

沉默信息调节因子1(Sirtuin1,silent information regulator 1,SIRT1)是与酿酒酵母沉默信息调节器2(Sir2)同源的去乙酰化酶家族。SIRT1通过介导多条细胞信号通路,在细胞生物学功能和疾病发生机制中发挥关键作用,调节各种疾病的病理进展。在急性肺损伤(acute lung injury,ALI)/急性呼吸窘迫综合征(acute respiratory distress syndrome,ARDS)的动物模型中,SIRT1表达异常,且表达水平与模型的疾病严重程度密切相关,可能成为早期诊治ALI/ARDS新的生物学指标。本文简要综述了SIRT1通过抗炎、抗氧化应激、调节细胞凋亡及自噬、改变血管内皮细胞通透性等途径发挥其减轻ALI/ARDS的作用,探讨SIRT1在ALI/ARDS防治中的潜在价值。     

Kumiss Supplementation Reduces Oxidative Stress and Activates Sirtuin Deacetylases by Regulating Antioxidant System

Abstract

It was aimed to investigate the effects of kumiss a fermented mare horse beverage on the sirtuin deacetylases in the oxidative stress which had been induced by 1,2-dimethyl hydrazine (DMH). Forty BALB/C male mice were divided into four groups as control, kumiss (2?×?10⁸ cfu/mL), DMH (20?mg/kg), and kumiss?+?DMH (2?×?10⁸?cfu/mL + 20?mg/kg). At the end of 20-week regimen, SIRT2, SIRT3 protein expressions by western blotting, immunolocalizations, and inhibitory anti-oxidant activity analysis in liver, colon, and kidney tissues were performed. SIRT2 and SIRT3 expressions in DMH group were decreased in liver, colon, and kidney tissues and the decrease further stimulated by kumiss reinforcement. SIRT3, a mitochondrial protein, immunostaining increased in cell nuclei of tissues in response to kumiss treatments. The oxidative stress induced by DMH was determined to increase plasma 8-OH-2-deoxyguanosine, tissue oxidative stress index, and total oxidant capacity levels. Kumiss supplement was identified to reduce these levels and increase tissue total antioxidant capacity and reduced glutathione levels. Clarifying the molecular relationship between intracellular changes in the locations of SIRT2 and SIRT3 and oxidative stress might be important with regards to developing new medical treatments in the future. The kumiss may show a protective effect against DMH-induced damage by regulating the expression of sirtuin proteins and by protecting antioxidant system.     

SIRT6 in mouse spermatogenesis is modulated by diet-induced obesity

Male obesity is associated with reduced sperm function and increased incidence of sperm DNA damage; however, the underlying molecular mechanisms have not yet been identified. Mammalian SIRT6 protein is involved in caloric-dependant DNA damage repair in other tissue types, yet a possible role for SIRT6 in male obesity and subfertility has not been investigated previously. To assess SIRT6 levels and activity in the testes, male mice (n=12 per diet) were fed either a control diet (CD; 6% fat) or a high-fat diet (HFD; 21% fat) for 16 weeks before the collection of testes and spermatozoa. SIRT6 protein was localised to the nucleus of transitional spermatids and the acrosome of mature spermatozoa, with levels significantly decreased in HFD-fed male mice (P<0.05). This decrease in SIRT6 protein was associated with transitional spermatids having increased levels of acetylated H3K9 in the nucleus (P<0.01) and increased DNA damage (P<0.001). We propose a role for SIRT6 in spermiogenesis and potentially protamination processes, which are known to be compromised by male obesity.     

SIRT1、p53在卵巢浆液性肿瘤中的表达及意义

目的：探讨SIRT1、p53 蛋白在卵巢浆液性肿瘤中的表达,分析其在卵巢浆液性癌发生发展中的作用.方法：应用Envision二步免疫组织化学方法检测SIRT1、p53 在41 例卵巢浆液性囊腺癌,26 例卵巢交界性浆液性囊腺瘤,28 例卵巢浆液性囊腺瘤中的表达.结果：（1）SIRT1、p53 在卵巢浆液性囊腺癌,卵巢交界性浆液性囊腺瘤,卵巢浆液性囊腺瘤中阳性表达差异有统计学意义（P〈0.05） ;（2）SIRT1在卵巢浆液性囊腺癌低分化组的表达高于高分化组,在淋巴结阳性组的表达明显高于淋巴结阴性组（P〈0.05）.（3）SIRT1 与p53 无明显相关性.结论：SIRT1 在卵巢浆液性癌中高表达.且在病理高级别及淋巴结阳性组的患者中的表达较高,提示SIRT1 在肿瘤的发生发展中起到了促进作用.     

白藜芦醇通过上调沉默信息调节因子1调节香烟提取物诱导心肌线粒体产生活性氧簇的机制

目的探讨沉默信息调节因子1（SIRT1）调节香烟提取物（CSE）诱导心肌线粒体产生活性氧簇（ROS）的机制及白藜芦醇（Res）心肌保护作用。方法 H9C2细胞分5组：C组（对照组）、二甲亚砜组（DMSO溶剂对照组）、CSE组（CSE刺激组）、CSE＋Res组、Res组。采用Taqman探针荧光定量PCR检测各组SIRTI的mRNA表达、Weston Blot检测各组细胞SIRTI蛋白表达、荧光分光光度计检测细胞线粒体膜电位、荧光微量平板法检测不同浓度CSE刺激H9C2细胞产生ROS的变化、特异性荧光探针CM-H2DCFDA检测活细胞内ROS变化。结果与C组相比,CSE组SIRT1mRNA及蛋白质表达显著降低,ROS表达显著增强。与CSE组相比,CSE＋Res组SIRT1mRNA及蛋白质表达升高,ROS表达显著减少。随CSE刺激浓度增加,线粒体膜电位降低,ROS产生增加。提前给予Res可使线粒体膜电位升高,ROS产生减少。结论 Res可通过刺激SIRT1的表达而抑制CSE诱导的心肌细胞线粒体功能受损、ROS的释放,这可能是其吸烟相关慢性阻塞性肺疾病诱导的心脏氧化应激损伤中发挥心脏保护作用的机制之一。     

Impact of Dietary Modifications on Plasma Sirtuins 1, 3 and 5 in Older Overweight Individuals Undergoing 12-Weeks of Circuit Training

Sirtuins are nicotinamide adenine dinucleotide (NAD+)-dependent deacetylases that regulate numerous pathways such as mitochondrial energy metabolism in the human body. Lower levels of these enzymes were linked to diseases such as diabetes mellitus and were also described as a result of aging. Sirtuins were previously shown to be under the control of exercise and diet, which are modifiable lifestyle factors. In this study, we analyzed SIRT1, SIRT3 and SIRT5 in blood from a subset of healthy elderly participants who took part in a 12-week randomized, controlled trial during which they performed, twice-weekly, resistance and aerobic training only (EX), the exercise routine combined with dietary counseling in accordance with the guidelines of the German Nutrition Society (EXDC), the exercise routine combined with intake of 2 g/day oil from Calanus finmarchicus (EXCO), or received no treatment and served as the control group (CON). In all study groups performing exercise, a significant increase in activities of SIRT1 (EX: +0.15 U/mg (+0.56/−[−0.16]), EXDC: +0.25 U/mg (+0.52/−0.06), EXCO: +0.40 U/mg (+0.88/−[−0.12])) and SIRT3 (EX: +0.80 U/mg (+3.18/−0.05), EXDC: 0.95 U/mg (+3.88/−0.55), EXCO: 1.60 U/mg (+2.85/−0.70)) was detected. Group comparisons revealed that differences in SIRT1 activity in EXCO and EXDC differed significantly from CON (CON vs. EXCO, p = 0.003; CON vs. EXDC, p = 0.010). For SIRT3, increases in all three intervention groups were significantly different from CON (CON vs. EX, p = 0.007; CON vs. EXDC, p < 0.001, CON vs. EXCO, p = 0.004). In contrast, differences in SIRT5-activities were less pronounced. Altogether, the analyses showed that the activity of SIRT1 and SIRT3 increased in response to the exercise intervention and that this increase may potentially be enhanced by additional dietary modifications.