噬菌体变色法检测结核分支杆菌的临床研究

目的初步建立一种结核分支杆菌快速检测方法。方法取两支无菌培养管,一支加入结核分支杆菌标准株（H37Rv）或者处理后的痰标本液;另一支加入蒸馏水作对照。两支试管均加入噬菌体D29,37℃培养90min,用硫酸亚铁铵杀死结核分支杆菌菌体外的噬菌体,柠檬酸三钠和氯化钙混和液中和硫酸亚铁铵。加入耻垢分支杆菌和硝酸钾,37℃培养6h,加入显色剂显色。同时应用噬菌体显色法和改良罗氏培养法检测20份临床标本,观察两种方法的检测效果。结果该方法灵敏度和特异性都为100％;临床标本的本法和罗氏检测表明两方法结果具有一致性（P〉0．01）。结论噬菌体变色法可作为结核分支杆菌的快速检测方法。     

噬菌体生物扩增法检测结核杆菌在HIV/AIDS合并结核感染快速诊断中的应用

目的 探讨噬菌体生物扩增法检测结核分支杆菌在HIV/AIDS合并结核感染快速诊断中的应用价值.方法 收集本院艾滋病区和艾滋病咨询门诊HIV/AIDS患者的痰、支纤镜抽取液、穿刺液、脓液标本共126份,应用噬菌体生物扩增法检测结核分支杆菌,同时作抗酸染色、并用VersaTREKTM细菌培养仪做分支杆菌培养.噬菌体生物扩增法和/或培养阳性的菌株44株做分支杆菌菌种鉴定.结果 噬菌体生物扩增法检测的阳性率32.5%(41/126)显著高于涂片法17.4%(22/126),(P＜0.01),与VersaTREKTM培养法阳性率30.2%(38/126)相比,无显著性差异(P＞0.05).35株VersaTREKTM培养法与噬菌体生物扩增法同时阳性的菌株和6株噬菌体生物扩增法阳性菌株均鉴定为结核分支杆菌;3株VersaTREKTM培养法阳性菌株鉴定为非结核分支杆菌.结论 噬菌体生物扩增法检测结核分支杆菌具有快速、特异、敏感的特点,在HIV/AIDS合并结核感染的快速诊断中有重要价值.     

利用GeneXpert检测结核分支杆菌及其利福平耐药性的研究

目的研究GeneXpert检测在结核分支杆菌及其利福平耐药性检测中的应用。方法选取2014年7月至2015年11月我院所收治的116例涂片阳性的肺结核患者的痰液标本。对痰液标本中的结核分枝杆菌及福平耐药性行GeneXpert检测,均与传统的罗氏培养结果和药敏试验结果比较。结果 GeneXpert检测对结核分支杆菌的诊断符合率为93.1%,对利福平耐药性的诊断符合率为97.2%。结论 GeneXpert检测结核分枝杆菌及其利福平耐药性,具有快速而准确的特点,为结核病的诊断和治疗提供可靠的依据。     

PCR-SSCP技术直接快速检测痰标本中结核分支杆菌rpoB,katG,ahpC基因突变的研究

目的：应用PCR－SSCP技术直接快速检测痰标本中结核分支杆菌rpoB,katG及ahpC基因突变,评价此方法用于结核分杆菌利福平（RFP）及异烟肼（INH）耐药性试验的意义。方法：以结核分支杆菌H37Rv为对照,30例耐RFP（单耐或多耐）、21例耐INH（单耐和多耐）的结核分枝杆菌临床分离株及10例敏感菌株;39例菌阳肺结核患者及30例非结核 性肺部疾病患者痰标本,采用PCR－SS－CP技术检测痰标本和菌株中的结核杆菌rpoB,katG,ahpC基因突变,并与药敏试验对照。结果：PCR－SSCP检测痰标本中结核分支杆菌rpoB,katG及ahpC基因突变的阳性率分别为79％（31／39）、46％（18／39）及5％（2／39）.结论：PCR－SSCP可望成为直接检测临床痰标本中结核分枝杆菌耐利福平及耐异烟肼的快速方法。     

结核分支杆菌荧光定量聚合酶链反应及噬菌体生物扩增法对结核性渗出性胸膜炎的检测意义

目的 利用针对结核分支杆菌的荧光定量聚合酶链反应及噬菌体生物扩增法检测技术,提高结核性渗出性胸膜炎的诊断.方式诊断为结核性渗出性胸膜炎的患者行胸腔穿刺抽液,同时送检结核分支杆菌培养,涂片找抗酸杆菌,结核分支杆菌的荧光定量聚合酶链反应和噬菌体生物扩增法,比较各种检测的敏感性.结果 荧光定量聚合酶链反应和噬菌体生物扩增法的敏感性高(P＜0.05).结论 结核分支杆菌的荧光定量聚合酶链反应和噬菌体生物扩增法对结核性渗出性胸膜炎敏感性高、特异性高,有重要的诊断价值.     

几种结核分支杆菌培养方法的应用分析

结核病是一种较严重的传染病,高耐药性结核病的疫情呈上升趋,已经成为结核病诊断和治疗的难点。结核分枝杆菌培养在结核病的诊断和治疗中起着重要作用。目前公认的结核分支杆菌培养方法有两种,即液体培养基快速检测法、罗氏固体培养法。液体培养法特点是结果报告时间短。缺点是价格昂贵,需特殊仪器。罗氏固体培养法是我国普及通用的方法,但缺点是时间长。针对二方法的优缺点我们研究出结核分支杆菌固液双向培养基,     

噬菌体裂解法快速检测结核分支杆菌

我们自2003年1月起采用结核分支杆菌(MTB)菌体裂解法快速检测肺结核患痰液标本中的结核分支杆菌。结果满意，现报告如下。     

耐多药结核分支杆菌临床分离株吡嗪酰胺耐药基因pncA的检测

本文对95株耐多药结核分支杆菌（MTB）临床分离株应用BACTEC--460培养系统进行结核分支杆菌常规培养和药敏检测，聚合酶链反应-单链构象多态性技术（PCR—SS—CP）检测其pncA基因，旨在了解耐多药结核分支杆菌PZA耐药基因pncA的突变情况，探讨其与耐吡嗪酰胺（PZA）之间的关系。从而探讨建立新的、快速、有效的结核分支杆菌药敏检测方法，以弥补常规药敏试验的不足。     

结核分支杆菌耐药基因的杂交检测

目的采用PCR-反向斑点杂交检测结核分支杆菌中rpoB基因、KatG基因和rpsL基因突变。评价该方法检测结核分支杆菌利福平（RFP）、异烟肼（INH）和链霉素耐药性,探讨直接检测结核患者痰标本的可行性。方法用PCR-反向斑点杂交技术分析对75株临床分离株和45例肺结核患者涂阳痰标本进行rpoB、rpsL和KatG基因突变的检测。结果临床耐药株分离株进行rpoB、rpsL和KatG基因突变的检测,其突变率分别为83.9%、62.5%、57.1%。肺结核患者涂阳痰标本中耐药株突变率分别为81.0%、60.0%、52.9%。结论rpoB基因、KatG基因和rpsL基因突变与结核分支杆菌耐利福平、异烟肼和链霉素密切相关,应用PCR-反向斑点杂交技术可快速检测结核分支杆菌对异烟肼、链霉素和利福平耐药性。PCR-反向斑点杂交技术有望成为结核分支杆菌耐药性检测的重要方法之一。     

研究GeneXpert检测在结核分支杆菌及其利福平耐药性检测中的应用

目的分析Gene Xpert检测在结核分枝杆菌及其利福平耐药性检测中的应用效果。方法选取2017年7月～2019年6月本院接收的涂片阳性肺结核患者80例痰液标本,利用Gene Xpert检测痰液标本中的结核分枝杆菌和利福平耐药性,并对比Gene Xpert检测与传统罗氏培养结果。结果液标本80份检测标本中,74份符合,符合率为92.50%。基因芯片实验未检出标本与传统培养的快速生长菌株相吻合,具有较高的准确率;74株结核分枝杆菌分离株,通过传统罗氏培养与Gene Xpert检测结核分枝杆菌对利福平耐药性,Gene Xpert检测5例耐药,传统罗氏培养检测4例,符合率为80.00%。结论 Gene Xpert检测在结核分枝杆菌及其利福平耐药性检测中应用效果明显,其不仅可以快速、准确检出疾病,同时也为临床结核疾病的诊治提供了重要数据参考,值得推广。     

噬菌体生物扩增法检测结核性液体标本的临床应用价值

目的评价噬菌体生物扩增法(PhaB法)检测结核性液体标本的临床应用价值。方法应用BacT/ALERT 3D培养法(3D培养法)、PhaB法对142例液体标本进行检测,其中结核病例组122例,包括胸腹腔积液69例、脑脊液26例、尿液10例、脓汁及干酪物10例、其他7例,对照组非结核病例20例,并以3D培养法为金标准,评价2种检测方法对结核性液体标本的诊断价值。结果 PhaB法、3D培养法检测阳性率分别为43.4%(53/122)、32.8%(40/122);PhaB法与3D培养法对比,差异有统计学意义(χ2=5.87,P<0.05);以3D培养法结果为金标准,则PhaB法检测准确度、敏感性为92.5%和100%。结论①PhaB法检测结核性液体标本具有较高的敏感性和特异性,且操作简便、快速,可以在肺外结核诊断中常规应用;②3D培养法可做分枝杆菌药物敏感性试验和菌型鉴定,但需时较长。     

结核病临床分离株及痰标本中embB基因型的快速测定

目的建立快速测定结核病耐乙胺丁醇(EMB)分离株和痰标本中结核分枝杆菌EMB耐药基因型的方法，以期为患者提供及时、有效地化验结果。方法应用16S rDNA聚合酶链反应(PCR)-单链构象多态性(SSCP)和PCR-限制性片段长度多态性(RFLP)对11株耐EMB分离株和46例结核病痰标本进行分子菌种鉴定和embB基因突变的部位与性质分析。结果以结核分枝杆菌H37Rv标准株为对照，11株耐EMB分离株和46例临床痰标本经16S rDNA PCR-SSCP分析电泳图谱均与结核分枝杆菌标准株相同；限制性内切酶NlaⅢ消化embB基因扩增产物显示，11株耐EMB分离株中4株(36．4％)不被NlaⅡ消化；46例结核病痰标本中10例(21．7％)不被NlaⅡ消化。结论部分结核分枝杆菌耐EMB是由于embB基因突变所致。采用PCR-SSCP和PCR-RFLP方法可直接快速测定结核病耐EMB分离株和痰标本中结核分枝杆菌耐EMB基因型。     

结核分枝杆菌异烟肼耐药基因katG点突变的快速检测

目的：探讨快速检测结核分枝杆菌异烟肼（INH）耐药基因型的分子药敏方法。方法：用聚合酶链反应－单链构象多态性（PCR－SSCP）检测了30株INH敏感菌株及30株耐药株的katG基因，随后用SSCP方法鉴定扩增产物有无突变，以结核分枝杆菌H37Rv作对照。结果：所有INH敏感株均观察到katG基因扩增产物，30株INH耐药株中28株观察到katG基因扩增产物。以H37Rv标准株为对照，30株敏感株SSCP带谱与对照相同；28株INH耐药株中13株与对照相同，15株有不同程度的差异。与药敏试验比较，PCR－SSCP检测INH耐药结核菌的敏感性为57%，特异性为100％。结论：多数结核分枝杆菌耐INH是由于katG基因突变所致，用PCR－SSCP筛选突变株可达到快速检测结核分枝杆菌INH耐药基因型的目的。     

噬菌体生物扩增法快速测定结核分枝杆菌对异烟肼和利福平的药物敏感性应用价值

目的探讨噬菌体生物扩增法（PhaB）快速测定结核分枝杆菌对异烟肼（INH）和利福平（褂甲）的药物敏感性在临床应用价值。方法选择初治肺结核病患者留痰后培养获得的结核分枝杆菌菌株69株和复治患者留痰后培养获得的结核分枝杆菌菌株98株。均经改良罗氏培养基培养并进行菌型鉴定,证实为结核分枝杆菌（MTB）。分别采用PhaB法和改良罗氏比例法检测其对INH和RFP的耐药性,将2种方法的结果进行敏感度、特异度和符合率比较。结果（1）初治结核分枝杆菌69株中,与改良罗氏比例法比较,PhaB法检测INH的敏感度、特异度和符合率分别为80％（4／5）、90．6％（58／64）和89．9％（62／69）;PhaB法检测趾11P的敏感度、特异度和符合率分别为100％（3／3）、95．5％（63／66）和95．7％（66／69）。（2）复治结核分枝杆菌98株中,与改良罗氏比例法比较,PhaB法检测INH的敏感度、特异度和符合率分别为89．7％（35／39）、88．1％（52／59）和88．7％（87／98）;PhaB法检测肿的敏感度、特异度和符合率分别为97．1％（34／35）、93．7％（59／63）和94．9％（93／98）。结论噬菌体生物扩增法同改良罗氏比例法比较有较高的敏感度、特异度和符合率,可快速、准确地检测结核分枝杆菌对INH和RFP的耐药性。     

γ-干扰素释放试验在辅助诊断活动性肺结核中的临床意义

目的探讨γ-干扰素释放试验在活动性肺结核诊断中的临床价值。方法应用γ-干扰素释放试验检测本院收治的94例肺结核疑似病例,将其诊断结果与结核菌培养结果进行对比。结果γ-干扰素释放试验诊断肺结核灵敏度为80.00%,特异性为87.50%,灵敏度显著高于结核菌培养(P<0.01)。29例肺结核培养显示为阴性的病例中,21例的γ-干扰素释放试验结果显示为阳性。结论γ-干扰素释放试验检测活动性肺结核的灵敏度高、特异性强,对于提高活动性肺结核的早期、快速诊断具有重要意义。     

结核感染药物治疗中耐药突变基因检测结果分析

目的探讨结核感染药物治疗中结核分枝杆菌（MTB）耐药突变基因检测对利福平（RFP）、异烟肼（INH）、链霉素（SM）和乙胺丁醇（EB）的检查结果在临床用药方面的应用价值。方法应用耐药突变基因实验方法和痰快速培养药敏（BACTEC MGIT 960培养系统）分别检测肺结核感染患者各60例,对耐药结果进行对比。结果用耐药突变基因实验和痰快速培养药敏检测：利福平、异烟肼、链霉素和乙胺丁醇的药敏结果的耐药百分率分别为35.00%、21.67%,56.67%、45.00%,36.67%、31.67%,16.67%、10.00%。χ2分别为2.627,0.989,0.333,1.154,P值均〉0.05,说明两种方法的差异统计学意义。统计耐药肺结核疾病患者应用耐药突变基因检测药敏结果,四种药物相应最常见突变位点分别为S531L、-15M、43M、306M2,占该药突变位点检出总数的59.09%、70.93%、60.00%、73.91%。结论耐药突变基因实验在结核感染临床用药治疗方面,优于其他方法具有很高的应用价值。     

淋巴结结核患儿分枝杆菌检测结果研究

目的:研究淋巴结结核患儿分枝杆菌检测结果。方法:选取2015年9月~2018年9月某院确诊的淋巴结结核患儿157例,经细针穿刺获取病理组织后,全部患儿均行罗氏培养和涂片镜检检验,分析分枝杆菌检测结果,采用硝基苯甲酸生长试验(PNB法)鉴别培养菌菌型。结果:157例患儿分支杆菌罗氏培养阳性率为30.57%,涂片镜检阳性率为63.69%,二者结合可明确诊断者占比57.96%;涂片镜检阳性率明显高于罗氏培养阳性率(P<0.05);48株病菌分离株中结合杆菌复合群占比97.92%,非结核分枝杆菌占比2.08%。结论:儿童淋巴结结核多由结核分枝杆菌复合群感染所致,与罗氏培养法相比较,涂片镜检法可有效提高分支杆菌检验阳性率。