天麻种子发芽营养来源的研究

天麻种子无胚乳及其它营养贮备,发芽非常困难。蜜环菌有抑制种子发芽的作用。天麻种子属共生萌发类型,种子发芽的营养,来源于消化侵入种胚细胞的紫萁小菇(Mycena osmundicola Lange),壳斗科(F(?)gace(?)e)植物的树叶是紫萁小菇良好的培养基,是种子萌发的间接营养来源。     

揭开天麻生长之谜

天麻在我国入药已有两千多年的历史 ,但由于它无叶无根 ,不能进行光合作用 ,国内外多年研究都未能人工栽培成功。 6 0年代初 ,中国医学科学院徐锦堂教授等科研人员分离培养出与天麻共生的蜜环菌 ,使人工栽培获得成功。 70年代 ,徐锦堂教授等又研究出天麻无性繁殖固定菌床栽培新技术。然而 ,天麻经过多代无性繁殖 ,退化现象严重 ,产量骤减。 80年代初 ,徐教授等首先分离、筛选和鉴定出与天麻种子共生萌发的紫萁小菇等优良菌株 ,后又分离出兰小菇等三个同属新种 ,经观察证明 ,天麻必须与小菇属一些真菌共生 ,消化侵入菌菌丝获得营养才能发芽 ;…     

天麻生活史的研究

研究认识天麻的生活史.天麻种子无胚乳及其他营养贮备,无外源营养供给不能发芽.蜜环菌对天麻种子发芽有明显的抑制作用。发现天麻种子必须与紫萁小菇等萌发菌建立营养关系才能发芽.发芽后的原球茎在当年进行第一次无性繁殖,必须同化蜜环菌才能正常生长。天麻与紫萁小菇等萌发菌及蜜环菌先后共生,三年(24个月)完成由种子到下一代种子的全过程。     

白芨种子萌发和幼苗生长与紫萁小菇等4种真菌的关系

本文报道白芨种子荫发特点及紫萁小菇等4种真菌在其萌发中的作用。实验结果表明:白芨种子在常规条件下能正常发芽,为兰科植物中易萌发的种子类型。种子伴紫萁小菇等4种真菌播种,真菌对原球茎的子叶分化、生长及假根形成均有显著促进作用。用紫萁小菇培养物的醇、水粗提液及二者混合液播种种子,混合液有利于种子萌发;醇提液可加快原球茎子叶的分化与生长,且效果显著。     

天麻营繁茎被蜜环菌侵染过程中细胞结构的变化

目的 研究天麻营繁茎被蜜环菌侵染后细胞结构的变化,及天麻整个生长期的营养来源。方法 作天麻营繁茎连续纵切片结合横切片观察;在天麻生长期切断其与菌材连接的蜜环菌素,测量生麻生长情况。结果 密环菌索侵入天麻营繁茎后,分成多个分枝的菌丝通道,菌丝突破通道形成菌丝流,向外侵入皮层细胞形成菌丝结,向内直接侵入大型细胞被天麻消化作为营养;切断天麻与菌材连接的密环菌索,新生麻就停止生长。结论 密环菌索侵入天麻营繁茎后,菌丝结、突破菌丝爱道的菌丝流,及大型细胞等三层细胞层呈片状环周包围了整个营繁茎,菌丝通道是天麻整个生长期营养的补给线。     

真菌在罗河石斛和铁皮石斛种子萌发中的作用

本实验证明,从兰科植物原球茎中分离的3种真菌对促进石斛种子萌发有显著效果,采用种子伴菌播种方法,罗河石斛种子发芽率达20％,铁皮石斛种子发芽率达64％,而无菌播种则无1粒种子萌发。对铁皮石斛种子接菌萌发中细胞超微结构的变化进行观察,菌丝由胚柄侵入种胚,染菌的胚细胞器消失;菌丝被胚细胞质包围并加厚,菌丝逐渐被分解作为胚萌发的营养物质,邻近染菌细胞的未染菌胚细胞代谢功能旺盛。     

天麻种子萌发菌——紫萁小菇

1979年以来,作者先后从天麻种子发芽的原球茎中分离到12个种子萌发菌,选其中较优良的01号菌株与天麻种子伴播,天麻种子发芽率在20％以上,推广应用于大面积生产取得较好的效果。最近在室内成功地诱导出大量的子实体,经鉴定为担子菌纲(Basidiomycetes)、伞菌目(Agaricales)、口蘑科(Tricholomataceae)、小菇属(Mycena)的紫萁小菇(Mycena osmundicola Lange),属国     

人成纤维细胞的原代培养及鉴定

目的建立不同组织来源成纤维细胞的培养方法并比较其培养差异。方法用消化法和贴壁法分离人胚胸主动脉成纤维细胞与人胚肺成纤维细胞,利用差速培养法纯化成纤维细胞,并对所培养的细胞进行倒置显微镜观察和苏木素-伊红染色,观察成纤维细胞形态,并对培养的细胞行波形蛋白免疫染色鉴定。结果接种24 h后人胚胸主动脉成纤维细胞全部贴壁,48 h后细胞体积增大并伸出伪足,形状以梭形或不规则形为主;而消化的人胚肺组织中细胞形态不一,经继续培养4～5代后,培养物完全由成纤维细胞构成。结论用胶原酶Ⅰ消化人胚胸主动脉成纤维细胞效果好,而用胰蛋白酶液消化人胚肺成纤维细胞效果较好,用差速生长纯化的成纤维细胞可用于实验研究。     

野生建兰菌根的显微结构特征

目的：探讨兰科植物菌根的形态解剖特征，了解内生真菌与兰科植物共生的方式。方法：野生建兰采自粤北山区，样品采用Trypan Blue染色法、在光学显微镜下观察菌根的内部结构，并计算兰根中的细胞感染率。结果：菌根真菌由根被和外皮层侵入到皮层薄壁组织，在皮层薄壁细胞内形成菌丝团，并扩展成一定的感染区域。部分皮层细胞内的菌丝团已被消解吸收，菌丝体呈团块状。结论：野生建兰具有典型的兰科菌根构造。菌根真菌只感染皮层薄壁细胞，而不侵染到表皮细胞内部和中部的维管柱。兰科植物通过消解胞内菌丝团而摄取养分。     

电子自旋共振研究鸡胚细胞核膜和胚下卵黄颗粒膜在胚胎发育期的有序程度和流动性

本文用电子自旋共振(ESR)研究和比较了鸡胚细胞核膜和卵黄颗粒膜在胚胎发育阶段脂类分子的有序性和流动性。 实验结果表明鸡胚细胞核膜和胚下卵黄颗粒膜上脂类分子的有序参数是有差异的,前者的序参数值S小,而后者的S值大,这表明胚细胞核膜上脂肪分子的流动性大而卵黄颗粒膜的脂肪分子流动性小,可能由于胚细胞及其核在胚胎发育期分裂速度快使其膜系     

天麻种子发芽营养采源的研究

The seeds of Gastrodia elata lack an endosperm and other stored nutrition and thus do not easily germinate. Armillaria mellea inhibit germination of the seeds, which exist in a type of symbiotic relationship with fungi. The nutrition necessary for germination is derived from Mycena osmundicola invading cells of the embryo. The tree leaves provide a good medium for Mycena osmundicola growth and an indirect nutritional source for germination.     

受人E2F1启动子调控的条件复制型腺病毒载体的构建与鉴定

目的构建并鉴定受人E2F1基因启动子调控的条件复制型腺病毒载体。方法以人胚肾293细胞的基因组DNA为模板,PCR扩增E2F1基因启动子调控序列,构建表达质粒pE2F1 p-EGFP;PCR扩增腺病毒早期基因E1A,构建表达质粒pTERT p-E1A;将重组质粒pTERT p-E1A酶切得到的E1A基因,插入线性化的pE2F1 p-EGFP,构建pE2F1 p-E1A;酶切重组质粒pE2F1 p-E1A产生受E2F1基因启动子调控E1A的完整表达框,插入质粒pDC311中,构建腺病毒包装穿梭质粒pDC311-E2F1 p-E1A,与腺病毒骨架质粒pBHGlox△1,3Cre共转染人胚肾293细胞,得到条件复制型腺病毒Ad-E2F1 p-E1A;扩增病毒并分别感染E2F1活性增强的系列肿瘤细胞株,利用病毒空斑形成实验检测重组条件复制型病毒的条件复制能力。结果限制性内切酶鉴定显示重组质粒构建成功,受人E2F1基因启动子调控的溶瘤腺病毒载体仅在E2F1活性增强的肿瘤细胞株中实现条件性复制。结论构建的新型条件复制型腺病毒载体具有良好的选择性复制能力,在E2F1活性增强的肿瘤治疗方面有良好的应用前景。     

小鼠子宫内膜细胞的原代培养与鉴定

目的:建立小鼠围着床期子宫内膜细胞的原代培养,并对其进行形态学鉴定。方法:通过挤压法获取小鼠子宫内膜组织,胶原酶Ⅰ消化,过滤法,进行单层培养。通过倒置显微镜观察其大体形态,免疫细胞化学染色法对间质细胞(ESC)及上皮细胞(EEC)进行鉴定。结果:EEC和ESC经角蛋白抗体和波形蛋白抗体染色,胞质被染成棕黄色的细胞为阳性细胞。结论:成功培养了原代小鼠子宫内膜细胞,方法简便有效,获得细胞成活率高,生长稳定。成功建立子宫内膜细胞原代体外培养体系,为从细胞和分子水平方面研究子宫内膜的各种功能及干预调节奠定基础。     

人早孕蜕膜单层细胞与鼠胚共培养系统的建立

目的　获得鼠胚与人早孕蜕膜单层细胞的共培养系统。方法　经过细胞培养、传代获得蜕膜单层细胞 ;冻融后接种获得冻融蜕膜单层细胞 ;对单层细胞作免疫组织化学检查其雌、孕激素受体的表达。结果　人早孕蜕膜细胞有良好的体外培养活力 ,易于获得培养及传代。将获得的冻融蜕膜单层细胞进行雌、孕激素受体检查 ,见阳性表达。获得昆明白小鼠超促排卵后的单细胞受精卵 ,分别与传代及冻融的蜕膜细胞共培养获得囊胚孵出。结论　人早孕蜕膜单层细胞与鼠胚共培养系统的建立为人胚胎与其冻融的自体子宫内膜单层细胞共培养的研究提供了可行性分析。     

川芎嗪对TGF-β1诱导人胚肾近端小管上皮细胞转分化影响的实验研究

目的利用原代培养的人胚肾近端小管上皮细胞作为研究对象,探讨川芎嗪(TMP)对转化生长因子β1(TGF-β1)诱导的人胚肾近端小管上皮细胞转分化的影响。方法采用胶原酶消化后系列网筛过滤,再用密度梯度离心分离纯化细胞的方法,进行人胚肾近端小管上皮细胞的原代培养。原代培养的人胚肾近端小管上皮细胞传至第2代后分为5组,空白对照组、10ng/mL TGF-β1刺激组、5ng/mLTMP+10ng/mL TGF-β1刺激组、10ng/mLTMP+10ng/mL TGF-β1刺激组及20ng/mLTMP+10ng/mL TGF-β1刺激组。刺激48h后,采用倒置相差显微镜、透射电子显微镜、酶化学染色和免疫细胞化学方法检测细胞的转分化情况。结果 TGF-β1刺激人胚肾近端小管上皮细胞后细胞拉长呈梭形,细胞间隙加大;电子显微镜下细胞失去极性,微绒毛减少直至消失;碱性磷酸酶染色阴性;细胞角蛋白18(CK-18)表达减弱,波形蛋白(Vimentin)表达增强,并表达α平滑肌肌动蛋白抗体(α-SMA)。各浓度TMP+10ng/mL TGF-β1刺激组细胞的上述变化均有不同程度的减弱,减弱程度与TMP浓度呈正比。结论 TMP能以浓度依赖方式阻止TGF-β1诱导的人胚肾近端小管上皮细胞的转分化。     

肠内营养支持对胎儿宫内发育迟缓的疗效

目的探讨肠内营养支持对胎儿宫内发育迟缓（IUGR）治疗效果,以及妊娠期长时间应用肠内营养支持的可行性和安全性。方法胎儿宫内发育迟缓孕妇48例,随机分为观察组和对照组,每组24例,对照组给予相应胎龄所需热量的饮食,观察组除给予对照组的饮食外再加适量的肠内营养制剂,应用30天。结果观察组孕妇的宫高和双顶径的增加显着大于对照组孕者;观察组胎儿无应激试验（NST）阳性的比率显着大于对照组（P〈0.01）;观察组低体重出生儿（小儿出生体重小于2500g）及和Apgar小于7分的患儿比率显着小于对照组（P〈0.01）。结论肠内营养支持在胎儿宫内发育迟缓的治疗中不仅有效,而且对孕妇和胎儿也是安全的。     

胚胎小鼠神经干细胞的培养和诱导分化

目的 探索体外培养和诱导分化胚胎小鼠神经干细胞(neural stem cells,NSCs)的方法 .方法分离12.5 d ICR小鼠胚胎的大脑皮质,通过Accutase酶消化法和机械消化法,将组织消化成单个细胞,置于完全培养基中培养,3d后神经干细胞增殖成神经球;将传代的神经球消化,通过诱导培养基诱导其分化;采用细胞免疫荧光染色和qRT-PCR技术检测巢蛋白(Nestin)、中间微管相关蛋白2(Map2)和胶质纤维酸性蛋白(Gfap)的表达,鉴定NSCs、分化形成的神经元和星形胶质细胞.结果 NSCs能被Nestin特异性标记,诱导分化后的细胞可被Map2和Gfap抗体特异识别;qRT-PCR结果显示,诱导后Nestin的表达水平降低,而Map2和Gfap的表达水平升高.结论 通过Accutase酶消化法联合机械消化法分离小鼠胚胎脑皮质,进行体外培养,可获得具有自我更新能力和多向分化潜能的NSCs.