FTY720通过激活CaMKK/Akt通路减轻全脑缺血再灌注损伤

目的采用大鼠全脑缺血再灌注(I/R)模型,观察1-磷酸鞘氨醇(S1P)受体激动剂芬戈莫德(FTY720)对海马组织Ca2+/CaM依赖的蛋白激酶的激酶CaMKK表达水平和Akt磷酸化水平的影响以及对缺血再灌注后神经元的保护作用。方法制备全脑缺血大脑四动脉结扎模型,采用免疫印迹技术检测FTY720和CaMKK抑制剂STO-609对缺血后海马CA1区CaMKK表达、Akt磷酸化水平的影响,采用TUNEL检测FTY720和STO-609对缺血后海马神经元凋亡的影响。结果 FTY720降低缺血后海马CA1区神经元凋亡细胞数(P<0.05),而且在缺血复灌1d提高了CaMKK表达水平、Akt磷酸化水平(P<0.05),而STO-609可以降低其两者升高的水平(P<0.05)。结论 FTY720对缺血复灌后神经元有抗凋亡作用而且可能的分子机制是激活了CaMKK/Akt信号通路。     

芬戈莫德对实验性自身免疫性脑脊髓炎小鼠脑组织基质金属蛋白酶-9表达影响的研究

目的探讨芬戈莫德对实验性自身免疫性脑脊髓炎(EAE)小鼠脑组织基质金属蛋白酶-9(MMP-9)mRNA及蛋白表达的影响。方法 48只雌性C57BL/6小鼠随机分为完全弗氏佐剂(CFA)组、EAE组、芬戈莫德组。运用髓鞘少突胶质细胞糖蛋白35-55构建EAE小鼠模型,小鼠神经功能缺损评分达到1分或免疫第14天,芬戈莫德组腹腔注射芬戈莫德10 mg·kg-1,相应的CFA组、EAE组给予生理盐水。观察小鼠行为学变化,中枢炎症和脱髓鞘情况,脑组织中的MMP-9 mRNA及蛋白表达。结果芬戈莫德组小鼠临床症状减轻,体重下降减少,潜伏期延长,发病率降低,炎性病灶数减少,脱髓鞘程度减轻。芬戈莫德组MMP-9 m RNA和蛋白表达水平较EAE组降低。结论芬戈莫德能抑制EAE小鼠脑组织中MMP-9 mRNA及蛋白表达水平。     

FTY720对EAE小鼠脑组织NO含量和iNOS表达影响的研究

目的探讨芬戈莫德(fingolimod,FTY720)对试验性自身免疫性脑脊髓炎(EAE)小鼠脑组织中一氧化氮(NO)含量和诱导型一氧化氮合酶(i NOS)表达的影响。方法 48只雌性C57BL/6小鼠随机平均分为3组,EAE组运用MOG35-55构建EAE小鼠模型;CFA组由生理盐水代替MOG35-55构建模型;FTY720干预组在EAE基础上给予FTY720腹腔注射,CFA组、EAE组给予生理盐水腹腔注射。HE染色和LBF染色观察炎症情况和脱髓鞘情况,ELLISA检测小鼠脑组织中的NO含量,RT-PCR检测的诱导型一氧化氮合酶(i NOS)mRNA表达。结果 FTY720组EAE小鼠较EAE组临床症状减轻,炎症程度和脱髓鞘程度减轻(P<0.05)。FTY720组小鼠脑组织NO含量较EAE组降低(P<0.05),i NOS mRNA表达量降低(P<0.05)。结论 FTY720能抑制EAE小鼠脑组织中i NOS mRNA表达,从而减少NO含量。     

芬戈莫德预处理对局灶性脑缺血再灌注大鼠脑组织炎症反应的影响

目的探究芬戈莫德(FTY720)对局灶性脑缺血再灌注大鼠模型炎症)的影响。方法 8周龄(250g~300 g) SD大鼠雌雄各半,分为假手术组、空白对照组、氯吡格雷组、FTY720组。应用线栓法制作大鼠缺血性卒中模型,不同组别经不同药物处理后进行行为障碍评分,并应用TTC染色观察脑缺血面积及HE染色观察缺血组织神经元损伤情况,取各组大鼠海马组织应用ELISA法测定炎症因子IL-1β及IL-6水平,Western-blot法测定pp38MAPK及NF-κB水平。结果 (1) FTY720可减轻模型大鼠行为障碍(P 0.01);(2) FTY720可缩小模型大鼠脑组织梗死面积(P 0.01)及减轻神经元损伤;(3) FTY720可降低大鼠缺血区脑组织中IL-1β(P 0.01)、IL-6(P0.01)及p-p38MAPK(P 0.01)、NF-κB(P 0.01)水平。结论 FTY720对局灶性脑缺血再灌注大鼠模型脑组织具有保护作用,其机制可能通过p38MAPK通路进而影响炎症反应。     

雷公藤内酯醇对实验性自身免疫性脑脊髓炎大鼠脑和脊髓ICAM-1表达的影响

目的探讨雷公藤内酯醇(Triptolide,Tri)对实验性自身免疫性脑脊髓炎(EAE)大鼠脑和脊髓细胞间黏附分子-1(ICAM-1)表达的影响。方法模型组采用豚鼠髓鞘蛋白匀浆和福(氏)完全佐剂诱发大鼠急性EAE,治疗组在此基础上给予不同剂量Tri[0.2 mg/(kg.d),0.4 mg/(kg.d)],观察其临床表现并进行评分。采用Loyez(氏)髓鞘染色法观察髓鞘病理改变,免疫组化法检测脑和脊髓ICAM-1表达。结果高剂量Tri治疗组大鼠未出现临床症状,其髓鞘结构完整;低剂量Tri治疗组临床症状较模型组轻且发病时间延迟,其髓鞘部分脱失。高剂量Tri治疗组ICAM-1阳性血管数为2.31±1.23,与模型组和低剂量Tri治疗组比较差异有统计学意义(P<0.01)。结论Tri对EAE的治疗作用与其抑制ICAM-1表达有关。     

芬戈莫德治疗复发缓解型多发性硬化的系统评价

目的 系统评价芬戈莫德治疗复发缓解型多发性硬化(RRMS)的疗效和安全性.方法 应用Cochrane系统评价方法通过计算机检索Cochrane Library、PubMed、EMBASE、中国生物医学文献数据库、中国期刊全文数据库和维普数据库,并手工检索相关领域杂志.检索不受语种限制,时间均从数据库建库至2012年7月,收集芬戈莫德治疗RRMS的所有随机对照试验相关文献.根据Cochrane协作网推荐的“风险评估工具”进行偏倚风险评估,用RevMan 5.1软件进行统计学分析.结果 最终共3个随机对照试验的2749例患者纳入研究.在有效性方面,芬戈莫德0.5 mg/d与1.25 mg/d组年复发率均低于β1a-干扰素、安慰剂等对照组；芬戈莫德组治疗期间未复发的MS患者人数高于对照组[其中,1.25 mg组OR=2.88,95％CI(1.59～5.22);0.5 mg组OR=2.45,95％ CI(1.82～3.29)]；芬戈莫德0.5 mg/d组与1.25 mg/d组比较EDSS评分降低更明显[MD=-0.11,95％CI(-0.19～-0.03)]、治疗期间未复发的MS患者人数更多[OR=2.45,95％ CI(1.82～3.29)].在安全性方面,总的不良反应事件[分别为1.25 mg组OR=1.04,95％ CI(0.74～1.47);0.5 mg组OR=0.85,95％ CI(0.36～2.00)]、总的严重不良反应事件[分别为1.25 mg组OR=1.29,95％ CI(0.71～2.34)；0.5 mg组OR=0.91,95％ CI(0.55～1.51)]、因不良反应而中止治疗的患者数[其中,1.25 mg组OR=2.21,95％ CI(1.57～3.12)；0.5mg组OR=1.17,95％CI(0.78～1.74)]等指标,芬戈莫德1.25 mg组和0.5 mg组与对照组比较均无统计学差异,但芬戈莫德95 mg组因不良反应而中止治疗的患者人数与较1.25 mg组少.结论 芬戈莫德1.25 mg和0.5 mg治疗RRMS的疗效均优于β1 a-干扰素、安慰剂治疗等对照,安全性方面两者无统计学差异.芬戈莫德0.5 mg/d治疗RRMS具有一定优势.     

芬戈莫德在脑白质缺血损伤中的神经保护研究

目的以临床常见的缺血性脑白质损伤为研究切入点,研究S1P受体激动剂芬戈莫德(FTY720)在小鼠低灌注脑白质损伤后对髓鞘脱失、认知功能障碍的影响,并探讨在小鼠低灌注脑白质损伤后FTY720对小胶质细胞活化、吞噬的影响,FTY720对少突胶质细胞存活、增殖、分化的影响。方法建立小鼠双侧颈总动脉狭窄(BCAS)模型,通过8臂迷宫行为学测试方法探究FTY720对小鼠造模后认知功能的影响; LFB染色观察FTY720对小鼠造模后髓鞘的影响;共聚焦显微镜观察FTY720干预后小胶质细胞在小鼠低灌注损伤后一个月的变化。结果成功建立小鼠低灌注白质损伤模型(BCAS)。FTY720干预后,白质区域损伤情况明显好于空白对照组。FTY720在低灌注后抑制小胶质细胞活化、吞噬,减轻小鼠的认知功能损害。结论慢性低灌注可以造成选择性的脑白质损伤以及认知功能障碍; FTY720在低灌注后抑制小胶质细胞活化、吞噬,减少髓鞘脱失,改善缺血性脑白质损伤,减轻小鼠的认知功能损害。因此FTY720有望成为缺血性脑白质损伤治疗的潜在靶点。     

FTY720通过抑制脑组织IL-23表达减轻脑缺血再灌注损伤

目的观察大鼠局灶性脑缺血再灌注(I/R)模型脑组织白细胞介素-23(IL-23)水平变化,观察1-磷酸鞘氨醇(S1P)受体激动剂芬戈莫德(fingolimod,FTY720)对IL-23表达及脑I/R损伤的影响,探讨IL-23和FTY720在脑I/R损伤中的作用。方法将雄性Wistar大鼠随机分成假手术组和I/R组,后者再分为I/R 3 h、6 h1、2 h2、4 h、24 h+安慰剂和24 h+FTY720六个亚组。应用"线栓法"制作大鼠右侧大脑中动脉闭塞模型,2h后拔出线栓进行再灌注,并分别于再灌注3、6、122、4 h处死大鼠。I/R 24 h+安慰剂组和I/R 24 h+FTY720组大鼠分别于再灌注前10 min经尾静脉按体质量1 mg/kg注入安慰剂和FTY720。利用免疫组化方法观察大鼠脑组织IL-23表达水平变化,以2,3,5-氯化三苯基四氮唑(TTC)染色法测定大鼠相对脑梗死体积和TUNEL阳性细胞计数,并比较I/R 24 h+安慰剂组和I/R 24 h+FTY720组大鼠神经功能评分。结果假手术组大鼠脑组织无IL-23表达,I/R 3 h、6 h1、2 h和24 h组大鼠梗死灶周围区皮质IL-23阳性细胞数依次为5.16±0.68、5.54±1.06、23.72±3.11和97.20±10.26,I/R各时间组间差异有统计学意义(P<0.05)。I/R 24 h+安慰剂组大鼠神经功能评分、相对梗死体积、凋亡细胞数、IL-23阳性细胞数分别为2.37±0.27(、14.7±3.40)%、19.00±2.10、101.75±12.04,I/R 24 h+FTY720组分别为1.31±0.21、(5.50±2.62)%、9.05±1.25、54.96±7.82,二组间比较差异均有统计学意义(均P<0.05)。结论 IL-23在脑I/R过程中表达水平上调,加重I/R损伤。FTY720可能通过抑制IL-23的表达发挥脑保护作用。     

天麻素注射液对蛛网膜下腔出血大鼠NF-κB/Bax/Caspase-3通路及神经元凋亡的影响

目的 探讨天麻素注射液对蛛网膜下腔出血(Subarachnoid hemorrhage,SAH)大鼠核转录因子-κB/B细胞淋巴瘤-2基因相关X蛋白/半胱氨酸天冬氨酸蛋白水解酶-3(Nuclear factor-κB,NF-κB/B cell lymphoma-2 associated X protein,Bax/Cysteinyl aspartate specific proteinase-3,Caspase-3)通路及神经元凋亡的影响。方法 血管穿刺法建立SAH大鼠模型,模型成功50只,随机分为模型组、天麻素低、中、高剂量组(腹腔注射5、10、20 mg·kg^-1·d^-1天麻素注射液)、阳性对照组(腹腔注射0.5 mg·kg^-1·d^-1地塞米松磷酸钠注射液),每组各10只,另10只大鼠设为假手术组; 干预3周后测定大鼠神经功能评分; 流式细胞术检测脑皮层细胞凋亡情况; 原位末端标记法(TdT-mediated dUTP-biotin nick end labeling assay,TUNEL)检测神经元凋亡状态; 蛋白免疫印迹(Western blot,WB)检测大鼠脑皮层NF-κB,Bax,Caspase-3、生长相关蛋白-43(Growth-associated protein-43,GAP-43)、突触素(Synaptophysin,SYN)蛋白表达水平。结果 与假手术组比较,模型组神经功能评分、脑皮层神经元凋亡率、脑组织中NF-κB,Bax,Caspase-3蛋白表达水平升高,脑皮层组织中GAP-43,SYN蛋白表达水平降低(P<0.05)。与模型组比较,天麻素中、高剂量组、阳性对照组神经功能评分、脑皮层神经元凋亡率、脑组织中NF-κB,Bax,Caspase-3蛋白表达水平降低,脑皮层组织中GAP-43,SYN蛋白表达水平升高(P<0.05); 天麻素低剂量组脑皮层神经元凋亡率、脑组织中NF-κB,Bax,Caspase-3蛋白表达水平降低,脑皮层组织中GAP-43,SYN蛋白表达水平升高(P<0.05); 随着天麻素注射液剂量的升高,神经功能评分、脑皮层神经元凋亡率、脑组织中NF-κB,Bax,Caspase-3蛋白表达水平降低,脑皮层组织中GAP-43,SYN蛋白表达水平升高(P<0.05)。结论 天麻素注射液可能通过抑制NF-κB/Bax/Caspase-3通路来实现对神经元凋亡的缓解和对SAH大鼠的脑保护。     

氯喹对EAE模型小鼠神经元损伤的影响

目的观察氯喹对实验性自身免疫性脑脊髓炎(EAE)小鼠脊髓神经元存活的影响,并探讨相关机制。方法采用髓鞘少突胶质细胞糖蛋白35-55(MOG35-55)诱导C57BL/6小鼠建立EAE模型,造模成功后给予氯喹干预。应用Knoz法进行临床评分,脊髓腰膨大节段石蜡包埋、冠状切片,行苏木精-伊红、LFB和Nissl染色,分别观察各组小鼠脊髓炎症反应、髓鞘脱失和神经元存活情况。脊髓腰膨大冷冻切片,行免疫荧光双标染色。同时提取脊髓腰膨大组织蛋白检测凋亡相关蛋白表达。结果氯喹缓解EAE小鼠临床症状,减轻脊髓炎性细胞浸润、髓鞘脱失、以及神经元死亡和损伤。与对照组相比,氯喹治疗组脊髓Bax水平降低,Bcl-2水平升高,Bax/Bcl-2比值降低。Neu N与Bcl-2荧光共定位明显增强。结论氯喹可能通过调节中枢神经系统前凋亡蛋白水平、上调神经元Bcl-2表达,从而减轻EAE小鼠神经元损伤以及神经功能缺失症状,发挥神经保护作用。     

巴豆生物碱通过ERK1/2通路对脑缺血再灌注大鼠海马神经元损伤及自噬的影响

目的 探讨巴豆生物碱(Croton alkaloids,CA)通过细胞外调节蛋白激酶1/2(Extracellular signal regulated kinase1/2,ERK1/2)通路对脑缺血再灌注大鼠海马神经元损伤及自噬的影响。方法 50只大鼠建立大脑中动脉闭塞(Middle cerebral artery occlusion,MCAO)再灌注模型,造模成功大鼠(48只),并随机分为模型组(12只)、CA低剂量组(12只)、CA中剂量组(12只)和CA高剂量组(12只),其余10只为对照组; CA低、中和高剂量组分别注射0.6、1.2、2.4 mg/kg的CA注射液,连续注射7 d; 对照组及模型组给予等量生理盐水注射; 应用神经功能评分法评定大鼠神经功能缺损和改善情况; 苏木精-伊红染色法(Hematoxylin eosin staining,HE)检测大鼠脑组织海马神经元的形态及数量; 原位末端转移酶标记法(Terminal uridine nick end labeling,TUNEL)检测大鼠脑组织细胞凋亡; 实时荧光定量聚合酶链反应(Real time quantitative PCR,RT-qPCR)和免疫印迹法(Western blot)检测各组大鼠海马ERK1/2、哺乳动物同源蛋白(Mammalian homologous protein,Beclin-1)、微管相关蛋白1轻链3(Microtubule-associated protein 1 light chain 3,LC3-Ⅱ)mRNA和蛋白表达水平。结果 与模型组比较,CA低、中、高剂量组神经功能评分、p-ERK1/2蛋白表达水平提高,神经细胞凋亡率、Beclin-1,LC3-Ⅱ mRNA和蛋白表达水平下降(P<0.05); 与CA低剂量组比较,CA中、高剂量组神经功能评分、p-ERK1/2蛋白表达水平提高,神经细胞凋亡率、Beclin-1,LC3-Ⅱ mRNA和蛋白表达水平下降(P<0.05); 与CA中剂量组比较,CA高剂量组神经功能评分、p-ERK1/2蛋白表达水平提高,神经细胞凋亡率、Beclin-1,LC3-Ⅱ mRNA和蛋白表达水平下降(P<0.05)。结论 CA可降低MCAO大鼠神经细胞凋亡率,在一定程度上修复MCAO大鼠神经功能,发挥神经保护作用,其机制可能与激活ERK1/2信号通路有关。     

丹参酮Ⅱa对实验性自身免疫性脑脊髓炎大鼠大脑GFAP和Caspase-3表达的影响

目的 观察丹参酮ⅡA对实验性自身免疫性脑脊髓炎(EAE)大鼠的治疗作用以及对大脑中胶质纤维酸性蛋白(GFAP)和半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3(Caspase-3)表达的影响.方法 把40只大鼠随机分成4组,空白对照组(Naive组)、EAE高剂量用药组(50 mg/kg,TSⅡA-H组)、EAE低剂量用药组(25 mg/kg,TSⅡA-L组)和EAE溶剂对照组(Vehicle组).EAE模型诱导后每天对大鼠进行神经功能评分和体质量测量.发病高峰期(第18天)处死大鼠并取材,分别进行H E染色和劳克坚牢蓝(LFB)染色检测大鼠脑组织炎性浸润改变和脊髓脱髓鞘情况.采用免疫组化法和免疫印迹法(West-ern Blot)检测各组大鼠脑组织中GFAP和Caspase-3的表达水平.结果 用药后TSⅡA-H组和TSⅡA-L组大鼠临床症状好转,大脑炎性细胞浸润减少,脊髓脱髓鞘的改变减轻,大脑中GFAP和Caspase-3的表达水平下降.结论 丹参酮ⅡA对EAE大鼠有治疗作用,其作用机制可能是通过下调GFAP和Caspase-3的表达来参与炎性反应和凋亡过程的调节.     

甲基泼尼松龙对实验性变态反应性脑脊髓炎大鼠脑组织 Nogo-A 及其受体 NgR 蛋白表达的影响

目的 探讨甲基泼尼松龙(MP)对实验性变态反应性脑脊髓炎(EAE)大鼠脑组织Nogo-A及其受体(NgR)蛋白表达的影响.方法 将60只Wistar大鼠随机分为正常对照组(10只)和实验组(50只).实验组大鼠通过皮下注射粗制髓磷脂碱性蛋白建立EAE模型,24只造模成功大鼠随机分为EAE组、大剂量MP(MP-H)组和小...     

CircTLK1通过miR-424-5p/FBXO3轴对氧糖剥夺/复氧诱导的神经细胞损伤的影响

目的 探讨环状RNA TLK1(CircRNA TLK1,CircTLK1)对氧糖剥夺/复氧(Oxygen glucose deprivation/Reoxygenation,OGD/R)诱导的神经元HT22损伤的影响以及对微小RNA(microRNA,miR)-424-5p/F-box蛋白3(F-box protein 3,FBXO3)的调控作用。方法 将HT22细胞分为对照组、OGD/R组、sh-NC组、沉默环状RNA TLK1(Silencing circular RNA tlk1,sh-circTLK1)组、sh-circTLK1+抑制剂NC组、sh-circTLK1+miR-424-5p抑制剂组、sh-circTLK1+miR-424-5p抑制剂+sh NC组、sh-circTLK1+miR-424-5p抑制剂+sh FBXO3组,除对照组外其余各组细胞均行OGD/R操作,细胞计数试剂盒8(Cell counting Kit 8,CCK-8)法测定HT22细胞活力; 脂连蛋白V-异硫氰酸荧光素(Adiponectin V-fluorescein isothiocyanate,Annexin V-FITC)细胞凋亡试剂盒测定HT22细胞凋亡; 测定HT22细胞乳酸脱氢酶(Lactate dehydrogenase,LDH)漏出率; 实时荧光定量聚合酶链反应(Real time fluorescent quantitative polymerase chain reaction,RT-qRCR)法测定HT22细胞miR-424-5p,FBXO3 mRNA水平; 蛋白免疫印记法(Western Blot)检测B淋巴细胞瘤-2关联基因X(B lymphoma-2 gene association X,Bax)、活化半胱天冬酶-3(Cleaved caspase-3)、FBXO3水平; 双荧光素酶测定CircTLK1与miR-424-5p以及miR-424-5p与FBXO3靶向关系,并使用RNA下拉实验验证CircTLK1与miR-424-5p关系。结果 与对照组比较,OGD/R组miR-424-5p,HT22细胞活力降低(P<0.05),circTLK1,FBXO3 mRNA水平,HT22细胞凋亡率、Bax,Cleaved caspase-3水平、LDH漏出率升高(P<0.05); 与OGD/R组比较,sh-circTLK1组HT22细胞活力增加(P<0.05),HT22细胞凋亡率、Bax,Cleaved caspase-3水平,LDH漏出率降低(P<0.05); 与sh-circTLK1组比较,sh-circTLK1+miR-424-5p抑制剂组细胞活力降低(P<0.05),HT22细胞凋亡率、Bax,Cleaved caspase-3水平、LDH漏出率升高(P<0.05); 与sh-circTLK1+miR-424-5p抑制剂组比较,sh-circTLK1+miR-424-5p抑制剂+sh FBXO3组细胞活力升高(P<0.05),HT22细胞凋亡率、Bax,Cleaved caspase-3水平、LDH漏出率降低(P<0.05); CircTLK1与miR-424-5p以及miR-424-5p与FBXO3均存在靶向关系。结论 CircTLK1沉默可能通过调控miR-424-5p/FBXO3对OGD/R诱导的HT22细胞损伤来发挥保护作用。     

Galectin-3/MAC-2 in experimental allergic encephalomyelitis

The removal of degenerating myelin by phagocytosis is central to pathogenesis and repair in traumatized and diseased nervous system. Galectin-3/MAC-2 is a differentiation and activation marker of murine and human monocytes/macrophages/microglia. Galectin-3/MAC-2, along with MAC-1 that mediates myelin phagocytosis, marks an in vivo activation state in macrophages, which are involved in myelin degeneration and phagocytosis in injured mouse peripheral nerves. In contrast, high levels of MAC-1 but extremely low levels of Galectin-3/MAC-2 are expressed in vivo in injured CNS where myelin degeneration and phagocytosis progress extremely slowly. The present study was aimed at testing whether an activation state marked by Galectin-3/MAC-2 is present in vivo in the CNS of EAE mice concomitant with autoimmune induced myelin degeneration and phagocytosis. EAE was inflicted by mouse spinal cord homogenate. Demyelination was assessed by light microscopy and Galectin-3/MAC-2, MAC-1, and F4/80 expression by immunocytochemistry. We presently document that Galectin-3/MAC-2 expression is up regulated, along with MAC-1 and F4/80, in spinal cords and optic nerves of EAE mice in areas of demyelination and myelin degeneration, in myelin phagocytosing microglia and macrophages. Copolymer 1 (Glatiramer acetate) suppresses EAE, demyelination, and Galectin-3/MAC-2 expression. EAE pathogenesis thus involves a state of activation in microglia and macrophages characterized by the expression Galectin-3/MAC-2 along with MAC-1. Furthermore, the in vivo responses to injury and autoimmune challenge in the CNS differ in the activation pattern of microglia and macrophages with regard to Galectin-3/MAC-2 expression and the corresponding occurrence of myelin degeneration and phagocytosis.     

黄芪多糖对阿尔茨海默病大鼠神经细胞活性、认知功能及Caspase-9表达水平的影响

目的 探讨黄芪多糖(Astragalus polysacharin,APS)对阿尔茨海默病(Alzheimer’s disease,AD)大鼠神经细胞活性、认知功能及天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶(Cysteinyl aspartate specific protease,Caspase)-9表达水平的影响。方法 36只无特定病原体(Specific pathogen free, SPF)级美国斯泼累格·多雷(Sprague Dawley)雌雄各半的大鼠,按照随机数字表分为6组,正常组、AD组、药物对照组、干预A组、干预B组及干预C组; 除正常组外,其余大鼠建立AD大鼠模型; 建模后药物对照组采用0.5 g/kg的吡拉西坦灌胃,干预A组、干预B组及干预C祖均采用0.2、0.4及0.8 g/kg的黄芪多糖(Astragalus polysacharin,APS)灌胃,正常组及AD组灌胃等剂量的生理盐水,均1次/d,灌胃时间连续60 d。采用Morris水迷宫实验观察认知功能; 苏木精-伊红(Hematoxy lin-Eosin,HE)染色观察海马组织病理学表现; 末端脱氧核苷酸转移酶介导的dUTP缺口末端标记测定法[Terminal dexynucleotidyl transferase(TdT)-mediated dUTP nick end labeling,TUNEL]法检测神经细胞凋亡率; 免疫印迹及实时定量聚合酶链反应(Quantitatie real time polymerase chain reaction,QRT-PCR)技术分别检测细胞色素C(Cytochrome c,Cyt-c),Caspase-3及Caspase-9蛋白及信使核糖核酸(Messenger RNA,mRNA)相对表达水平。结果 与正常组比较,AD组大鼠灌胃后第1～5 d的逃避潜伏期均延长(P<0.05); 与AD组比较, 干预A组、干预B组、干预C组逃避潜伏期均缩短(P<0.05),药物对照组逃避潜伏期与干预C组比较无明显差异(P>0.05)。与正常组比较,AD组大鼠游泳距离增加(P<0.05); 与AD组比较,干预A组、干预B组及干预C组大鼠游泳距离均减少(P<0.05),干预C组与药物对照组相似(P>0.05)。正常组海马结构完成,神经元排列紧密,细胞核清晰且无空泡; AD组大鼠海马组织结构紊乱,神经元数目减少,细胞核深染,细胞膜收缩及部分消失; APS干预组及药物对照组神经元排列较AD组整齐有序,肿胀程度减轻,细胞核较清晰。各组大鼠海马组织神经细胞凋亡率比较有明显差异(F=134.900,P<0.001); 与正常组比较,AD组神经细胞凋亡率升高(P<0.05); 与AD组比较,干预A组、干预B组及干预C组神经细胞凋亡率降低(P<0.05),药物对照组与干预C组神经细胞凋亡率相似(P>0.05)。与正常组比较,AD组海马组织Cyt-C,Caspase-3及Caspase-9蛋白及mRNA 相对表达水平上调(P<0.05); 与AD组比较,不同水平干预组海马组织Cyt-C,Caspase-3及Caspase-9蛋白及mRNA 相对表达水平下调(P<0.05),药物对照组与干预C组上述蛋白及mRNA相对表达水平相似(P>0.05)。结论 黄芪多糖能够改善AD大鼠认知功能,减轻海马组织病理损伤,抑制神经元凋亡且呈现水平依赖性,其机制可能与抑制Cyt-C及caspase-3/9信号通路有关。     

黄芩苷对实验性自身免疫性脑脊髓炎大鼠髓鞘的保护作用

目的观察黄芩苷(BAC)对实验性自身免疫性脑脊髓炎(EAE)大鼠髓鞘的保护作用。方法将大鼠随机分为正常对照(NC)组、EAE组、地塞米松(DXM)组和BAC组。抗原免疫1周后分别予以DXM组和BAC组大鼠DXM和BAC治疗7d;观察免疫后14d各组动物发病情况、脊髓病理变化及髓鞘碱性蛋白(MBP)的表达。结果(1)EAE组、DXM组和BAC组大鼠于抗原免疫后8～10d发病,发病潜伏期分别为9.62d、11.0d、9.85d,DXM组较EAE组潜伏期显著延长(P<0.05),BAC组与EAE组间差异无统计学意义;各组发病率分别为75.0%、66.7%、80%,各组间差异无统计学意义。(2)病程中EAE组和DXM组质量较BAC组明显下降(均P<0.05);DXM组和BAC组神经功能评分明显优于EAE组(均P<0.05)。(3)与EAE组比较,DXM组脊髓病灶数明显减少(P<0.05),BAC组病灶数有所减少,但差异无统计学意义。(4)与EAE组比较,DXM组和BAC组脊髓MBP阳性数显著增多(均P<0.05)。结论BAC对缓解EAE大鼠的临床症状、减轻髓鞘脱失的作用与DXM相似,而没有质量降低的不良反应。     

实验性自身免疫性脑脊髓炎大鼠听神经损害研究

目的建立实验性自身免疫性脑脊髓炎(experimental autoimmune encephalomyelitis,EAE)大鼠模型,研究其脑干听觉诱发电位(brainstem auditory evoked potential,BAEP)Ⅰ波和听神经组织学改变。方法40只Wistar大鼠分为实验组和对照组,实验组(EAE组)用含卡介苗的豚鼠全脊髓匀浆为抗原免疫Wistar大鼠建立EAE动物模型,对照组用生理盐水混合完全福氏佐剂注射,采用诱发电位仪检测EAE组急性发病的大鼠和对照组大鼠的BAEP,通过透射电镜观察发病大鼠听神经外周段组织学改变。结果急性发病实验组大鼠BAEP的Ⅰ波潜伏期较对照组显著延长(P<0.01)。透射电镜下观察听神经外周段髓鞘松散,板层分离,局部变薄,呈不完全性脱髓鞘改变,轴突完整。对照组大鼠未见组织学改变。结论急性发病EAE大鼠听神经外周段脱髓鞘可能引起脑干听觉诱发电位Ⅰ波的改变。     

Caspase-1抑制剂对大鼠外伤性脑损伤后脑水肿、神经细胞凋亡和IL-18表达的影响

目的研究天冬氮酸特异性半胱氨酸蛋白酶-1（Caspase-1）抑制剂对大鼠脑损伤后脑水肿、细胞凋亡和IL-18表达的影响。方法雄性sD大鼠170只，随机分为正常组、损伤组、治疗组。用改良的Feeney方法制备损伤模型。治疗组分别于损伤前后30min经右侧脑室注射Caspase-1抑制剂——z-YVAD—fmk。损伤组与治疗组分别于脑损伤后6、24、72、168h点断头取脑。检测脑组织含水量、Caspase-1与IL-18表达及细胞凋亡。结果伤后6、24、72及168h，损伤组脑损伤周围皮质组织含水量、Caspase-1与IL—18的表达及细胞凋亡较正常组明显增多（P〈0．05），但伤后6、24及72h，治疗组脑损伤周围皮质组织含水量、Caspase—1与IL-18的表达及细胞凋亡虽明显高于正常组，但与损伤组相比则明显降低（P〈0．05）。结论Caspase-1及其激活的细胞因子IL—18在创伤性脑损伤后脑水肿和细胞凋亡中起重要作用，Caspase-1抑制剂对脑创伤后神经细胞损害具有保护作用。     

Both endoplasmic reticulum and mitochondrial pathways are involved in oligodendrocyte apoptosis induced by capsular hemorrhage

ObjectiveThe white matter injury caused by intracerebral hemorrhage (ICH) includes demyelination and axonal injury. Oligodendrocyte apoptosis is reported to be involved in triggering demyelination. Experimental observations indicate that both endoplasmic reticulum and mitochondrial pathways could mediate cell apoptosis. The purpose of this study was to investigate the demyelination and the possible mechanisms in an autologous blood-injected rat model of internal capsule hemorrhage.MethodsTransmission electron microscope was applied to examine the pathological changes of myelinated nerve fibers in internal capsule. Western blotting was used to detect the myelin basic protein (MBP) which was an important component of myelin sheath. Double immunofluorescence and Western blotting were used to determine the apoptosis and apoptotic pathways. The levels of caspase-12 (a representative protein of endoplasmic reticulum stress) and cytochrome c (an apoptosis factor released from mitochondria) were assessed in this study.ResultsDemyelination occurred on day 1, 3, and 7 after ICH onset. Myelin sheaths of internal capsule nerve fibers were swollen and broken down in ICH groups. MBP expression showed a downregulation after ICH with its minimum value occurred on day 7 post-ICH. Besides, neuron and oligodendrocyte apoptosis were observed at different time intervals post-ICH accompanied with an upregulated caspase-12 expression and enhanced cytochrome c release.ConclusionsThese results suggested that oligodendrocyte and neuron apoptosis may contribute to the demyelination induced by internal capsule hemorrhage and oligodendrocyte apoptosis is positively mediated through both endoplasmic reticulum and mitochondrial pathways.