开心散及其各单药成分的肠吸收研究

目的:采用改良外翻肠囊模型,研究开心散复方及各单药的肠吸收情况。方法:利用翻转肠囊法建立开心散复方及各单药的大鼠肠吸收模型,并用HPLC、HPLC-MS法检测开心散及其各单药的肠吸收成分。结果:HPLCDAD检测器条件下可测得开心散复方中主要吸收入肠成分是远志中的成分,未检测到人参、茯苓、石菖蒲的肠吸收成分。多级质谱研究表明开心散复方和远志中主要的可吸收成分为寡糖酯类化合物。结论:HPLCDAD检测条件下,发现开心散肠吸收的主要成分是远志中的寡糖酯类成分,但这些成分的化学结构及人参、茯苓、石菖蒲的肠吸收成分需进一步研究。     

基于UHPLC-HRMS/MS的鲜人参不同部位中皂苷类成分差异分析

目的 采用UHPLC-HRMS/MS对鲜人参中的三萜皂苷类成分进行分析鉴定,并阐明鲜人参不同部位(主根、侧根、须根和芦头)所含的三萜皂苷类成分的差异性。方法 以水饱和正丁醇为提取溶剂,以水-乙腈为流动相进行梯度洗脱,在ESI负离子模式下建立新鲜人参药材中皂苷类成分的UHPLC-Q-Exactive Orbitrap MS/MS分析表征方法,并采集各样品的高分辨质谱数据。结合色谱保留行为、精确分子量、多级质谱裂解规律及对照品比对等,鉴定各样品中的人参皂苷类成分;依据已鉴定的人参皂苷色谱峰的相对丰度,筛选差异色谱峰,阐明鲜人参各部位差异。结果 从鲜人参不同部位中共检测到68种差异皂苷类成分,其中主根有44种,侧根有47种,须根有52种,芦头有37种。结论 鲜人参不同部位中皂苷类成分差异较大;人参侧根、芦头等非主要药用部位中含有多种人参皂苷,且存在其他部位未检测到的成分,可作为药物研发的重要原料及多种人参皂苷的提取原料。     

中药三七化学成分的 HPLC/ESI-MS分析

目的建立分析中药三七的HPLC-UV-MS方法, 鉴定三七的化学成分.方法色谱柱: Phenomenex Luna C18 柱 (250 mm×4.6 mm ID, 5 μm); 流动相:0.005%甲酸水溶液(A) 和0.005%甲酸乙腈溶液(B), 梯度洗脱;紫外检测波长范围:195-400 nm; 采用正负离子检测模式.结果三七成分获得了良好的分离与检测.通过与对照品的保留时间、正负离子质谱比较, 鉴定了14个成分, 根据正负离子质谱数据和文献, 分析推断了41个成分, 其中, 野三七皂苷-H、野三七皂苷-E、竹节参皂苷-L5、丙二酰基人参皂苷-Rg1、以及三七皂苷-J、-A、-R1、-G、-R2和人参皂苷-Rh3的异构体为首次在三七中发现.结论本方法灵敏度高、分离度好, 适合三七成分的鉴定.本结果有助于进一步对三七进行活性成分研究及质量控制.     

芪苈强心胶囊中人参皂苷类成分在大鼠体内药动学研究

目的建立高效液相色谱–串联质谱(HPLC-MS/MS)法考察芪苈强心胶囊中人参皂苷类成分(人参皂苷Rb_1、Rb_2、Rg_1、Rg_3、Rc、Rd、Re、Rf、F_2)在大鼠体内的药动学特征。方法 SD大鼠ig 1.3 g/kg芪苈强心胶囊混悬液,于给药后0.083、0.167、0.333、0.667、1、1.5、2、3、4、6、8、12、24 h经目内眦静脉丛取血,样品处理后,采用HPLC-MS/MS法测定血浆中人参皂苷Rb_1、Rb_2、Rg_1、Rg_3、Rc、Rd、Re、Rf、F_2的血药浓度。通过DAS 3.0软件拟合计算药动学参数。结果大鼠ig芪苈强心胶囊后,血浆中人参皂苷Rb_2的药动学参数t_(max)为1.5 h,其余人参皂苷类成分的t_(max)均在0.67 h;AUC_(0-∞)排序依次为人参皂苷Rb_1人参皂苷Rc人参皂苷Rg_1人参皂苷Re人参皂苷Rb_2人参皂苷Rd人参皂苷Rf人参皂苷Rg_3人参皂苷F_2;t_(1/2)的排序依次为人参皂苷Rb_2人参皂苷Rb_1人参皂苷Rg_1人参皂苷Re人参皂苷F_2人参皂苷Rf人参皂苷Rd人参皂苷Rg_3人参皂苷Rc。结论该检测方法专属性强,重复性好,可用于芪苈强心胶囊中人参皂苷类成分的药动学研究。     

超高效液相色谱-四级杆-飞行时间串联质谱法同时快速鉴定复方延寄参胶囊的化学成分

目的采用超高效液相色谱-四级杆-飞行时间串联质谱(UPLC-Q-TOF-MS)法在负离子模式下对复方延寄参胶囊甲醇提取物的主要化学成分进行快速鉴定。方法超声提取法制备复方延寄参胶囊甲醇提取物,采用ACQUITY UPLCTM BEH C18(100mm×2.1mm,1.7μm)色谱柱为分析柱,以乙腈-1mL·L-1甲酸水为流动相,进行梯度洗脱分离各主要成分;质谱采用电喷雾离子源,负离子模式下扫描采集数据,对各主要色谱峰进行归属。结果复方延寄参胶囊甲醇提取物中共定性鉴别出以下成分:人参皂苷类化学成分10种,包括三七皂苷R1、人参皂苷Re、人参皂苷Rf、人参皂苷Rg1、人参皂苷Rb1、人参皂苷Rd、人参皂苷Ro、人参皂苷Rb2、人参皂苷Ra1和人参皂苷Rg3;黄酮类化学成分3种,包括新北美圣草苷、柚皮素和柚皮苷;酚酸类化学成分3种,包括富马酸、原儿茶酸和咖啡酸。结论采用UPLC-Q-TOF-MS法在同一条件下共定性鉴别出16种化合物,该方法分辨率高、高效、便捷,可快速准确地鉴别复方延寄参胶囊的化学成分。     

HPLC-DAD/ELSD、UPLC-MS/MS分析复方五仁醇胶囊中皂苷类成分

目的：分析复方五仁醇胶囊中皂苷类成分。方法：分别采用HPLC—DAD／ELSD、UPLC—MS／MS检测,通过与对照品色谱图比对及比较制剂和对照品提取离子流色谱图（EIC）。并通过质谱图相关离子峰分析,鉴别制剂中的皂苷类成分。结果：HPLC—DAD／ELSD检测出三七皂苷R1、人参皂苷Rg1及人参皂苷Rb1,未检测到柴胡皂苷A和D;UPLC—MS／MS除检测到上述3种三七皂苷类成分外,还检测到柴胡皂苷D,但柴胡皂苷A仍未检测到。结论：复方五仁醇胶囊中存在三七和柴胡所含皂苷类成分。     

基于UHPLC/Q-TOF/MS分析羊耳菊有效组分的入血成分

目的应用UHPLC/Q-TOF/MS技术和血清药物化学研究手段,分析检测羊耳菊有效组分的入血成分。方法大鼠灌胃给予羊耳菊有效组分提取物后,腹主动脉抗凝采血,血浆经甲醇二次沉淀蛋白处理。采用Eclipse Plus C18RRHD色谱柱(2.1 mm×100 mm,1.8μm),0.1%甲酸水(A)-0.1%甲酸乙腈(B)做流动相梯度洗脱,流速0.3 mL·min-1。负离子检测模式,同时结合布鲁克道尔顿公司的Metabolite Tools软件,鉴定和表征其血中的移行成分。结果给药后,在大鼠血浆中共检测到16个代谢产物,包括9个原型成分和7个代谢物,代谢方式主要以咖啡酰基奎宁酸类化合物的异构化、甲基化及甲基葡萄糖醛酸化的复合反应为主。结论本研究较为全面地阐释了羊耳菊活性部位提取物在大鼠血中的入血成分,为进一步研究羊耳菊药材的体内过程和药效物质基础提供了一定的参考。     

基于UFLC-Triple TOF-MS/MS技术的银杏叶提取物注射液化学物质基础研究

目的采用超快速高效液相色谱串联四级飞行时间质谱(UFLC-Triple TOF-MS/MS),对银杏叶提取物注射液的化学成分进行系统研究。方法采用Agilent zorbax SB C_(18)色谱柱(3 mm×150 mm,3.5μm),以含0.1%甲酸的乙腈和0.1%甲酸溶液为流动相梯度洗脱,流速0.3 m L·min~(-1);采用高分辨三重四极杆飞行时间质谱,分别在正、负离子模式下进行检测。结果通过与对照品对照,确证了18个化合物,通过准确分子量和裂解碎片分析,指证了39个化合物,共57个化合物;其中包括21个水溶性成分、30个黄酮类成分和6个内酯类成分。结论本研究全面系统地揭示了银杏叶提取物注射液的化学物质基础,为提升银杏叶提取物注射液质量评价体系、阐明其药效物质提供了依据。     

基于UPLC-QE-HF-MS/MS技术分析红凉伞化学成分及入血成分

目的 分析红凉伞提取物化学成分及入血成分,初步阐明其可能的药效物质基础。方法 采用配对比较法将12只大鼠随机分为空白组和红凉伞给药组,每组6只。每天上、下午各给药1次,连续3 d;第4天再次给药后,取血后制备血清样品。采用超高效液相色谱-四极杆-静电场轨道阱高分辨质谱技术对红凉伞提取物和血清样品中化学成分进行分析鉴定。使用Compound Discoverer 3.0软件进行保留时间矫正、峰识别、峰提取等工作,根据二级质谱信息,利用Thermo mzCloud在线数据库、Thermo mzVault本地数据库,并参照有关文献和对照品质谱信息,初步鉴定红凉伞化学成分及入血成分。结果 从红凉伞提取物中共鉴定出34个化合物,主要为香豆素类、黄酮类、有机酸类、氨基酸类等成分,包括岩白菜素、槲皮素、没食子酸、L-焦谷氨酸等化合物;从血清样本中共鉴定出5个入血成分,分别为L-焦谷氨酸、丁香酸、岩白菜素、朱砂根皂苷A、麦考酚酸。结论 本研究初步推测L-焦谷氨酸、丁香酸、岩白菜素、朱砂根皂苷A、麦考酚酸是红凉伞的药效物质基础。     

HPLC-FT-ICR MS法研究中药大花红景天在阿尔茨海默模型大鼠血中的移行成分

目的研究中药大花红景天在阿尔茨海默病模型大鼠血中的移行成分。方法选用雄性SD大鼠,双侧海马注射Aβ1-42致阿尔茨海默症(Alzheimer's disease,AD)模型,造模后次日开始灌胃给予大花红景天(2.24 g·kg^-1),连续给药28 d,采用Morris水迷宫定向航行试验考察大鼠的空间学习记忆能力;利用HPLC-FT-ICR-MS方法研究大花红景天醇提取物灌胃给药后的大鼠血浆样品的基峰离子流色谱图、提取离子流色谱图及二级质谱图等信息。通过对比空白血浆和给药血浆中各个色谱峰的保留时间、精确质量数、二级碎片等特征,确认其在AD模型大鼠血浆中的移行成分。结果在模型大鼠血浆中共检测到42个与大花红景天相关的化学成分,包括19个原形化学成分和23个相关的代谢产物。结论本研究为阐明中药大花红景天治疗AD的药效物质基础提供了实验依据。     

LC/MS/MS与GC/MS法分析鉴定小鼠尿中沙美特罗的代谢产物

目的:鉴定沙美特罗在小鼠尿中的主要代谢产物.方法:ig给药后,收集小鼠尿液,经固相提取,葡萄糖醛酸酶水解,进行LC/MS/MS分析和硅烷化后进行GC/MS分析同时分离鉴定沙美特罗代谢产物.结果和结论:在给药后尿样中发现沙美特罗原型和4种代谢产物M1～M4,其结构推测为19-羟基沙美特罗(M1)、2-羰基沙美特罗(M2)、19-羰基沙美特罗(M3)和19-羟基-8-甲氧基沙美特罗(M4).     

Advanced glycation end-products/peptides: a preliminary investigation by LC and LC/MS

An investigation on AGE-peptides, originating by proteolysis of in vitro glycated proteins, was carried out by LC methods with different detection applied to the mixture produced by proteinase K digestion of in vitro glycated human serum albumin (HSA). Classical approaches, like spectroscopic (UV, fluorescence) and mass spectrometric methods (MALDI, LC/ESI/MS), show that the digestion mixture is highly complex. However, there are clearcut differences between the digestion mixtures of glycated and unglycated HSA, in the former case allowing identification of possible glycated peptides belonging to the AGE-peptide class. MS/ MS experiments on selected species seem to be promising as regards structural information.     

高效液相色谱-质谱联用测定人血浆中辛伐他汀浓度

目的建立测定人血浆中辛伐他汀浓度的方法。方法血浆样品中加入内标,用乙醚提取,浓缩后采用高效液相色谱-质谱联用进行测定。结果血浆样品中辛伐他汀线性范围为0.1～20ng·mL-1(r=0.9999);萃取回收率为94.3%。结论本方法灵敏度高、专属性强、重现性好、准确,可用于辛伐他汀片人体药动学及生物等效性研究。     

HPLC/MS/MS联用技术测定全血中的瑞芬太尼

目的:建立全血中瑞芬太尼的HPLC／MS／MS测定方法,并测定围麻醉期患者体内瑞芬太尼的血药浓度。方法:全血样品中加入枸橼酸芬太尼作内标,用1-氯丁烷进行提取。以乙腈与三氯甲烷(V乙腈:V三氧甲烷= 1:1)混合液加乙酸铵(2 mmol·L-1)为流动相,色谱柱为Intersil ODS-3(50 mm×2．1 mm,3μm),流速0．3 mL·min-1。三级四极杆质谱采用正离子模式,离子采集方式为多反应监测模式(MRM),离子源温度200℃,离子源电离电压为5 000 V,雾化气流速8 L·min-1。采集离子(母离子／子离子)为瑞芬太尼377／228,芬太尼337／188。结果:瑞芬太尼在0．5～50．0 ng·mL-1浓度范围内呈良好的线性(r=0．9994)。日内、日间精密度均在15％以内,提取回收率大于67．3％,方法回收率在95．0％～97．6％。结论:本方法灵敏、准确,适合瑞芬太尼的体内分析。     

液相色谱-质谱联用法测定人血浆双氢青蒿素浓度

目的:建立液相色谱-质谱联用法测定健康人血浆中双氢青蒿素浓度的方法。方法:以青蒿素为内标,血浆样品采用液-液萃取法处理。用电喷雾离子化和正离子多离子反应监测方式检测双氢青蒿素。结果:该方法双氢青蒿素线性范围为1.01~2020 ng.ml-1;定量下限为1.001±0.072 ng.ml-1;方法回收率在93.0%~98.2%;批内、批间变异系数均<10%。结论:该方法准确、灵敏、特异、简便,适用于健康人血浆双氢青蒿素浓度的测定。     

血塞通注射液指纹图谱研究

目的采用超高效液相色谱-紫外检测器-质谱(UPLC/UV/MS)法对血塞通注射液进行指纹图谱研究,并对其有效成分进行定性。方法采用Waters Acquity UPLCTM BEH C18柱(100 mm×2.1 mm,1.7μm),以乙腈-10 mmol/L醋酸铵溶液进行二元线性梯度洗脱,流速0.2 mL/min。离子化模式为ESI+。结果得到了分离度和重现性均较好的血塞通注射液超高效液相色谱-紫外检测器-质谱指纹图谱,标示了8个共有峰。结论超高效液相色谱-紫外检测器-质谱法可以用于血塞通注射液的快速鉴定及质量控制。     

氯吡格雷在人血浆浓度的液质联用测定法

目的建立测定人血浆中氯吡格雷(抗心肌及抗脑梗死药)血药浓度的HPLC/MS/MS法。方法血浆样品用叔丁基甲醚提取,内标为噻氯匹定;色谱柱用X-Terra MS C_(18)(2.1 mm×50 mm,5μm),柱温30℃,流动相:乙腈-水(含10 mmol·L~(-1)醋酸铵,调pH为4.0)为70:30,流量为0.3 mL·min~(-1);质谱用ESI离子源,定量分析的离子反应分别为m/z 322→z 212 (氯吡格雷),m/z 264→m/z 154(内标噻氯匹定)。结果氯吡格雷的线性范围为10×10~4～1.2×10~4pg·mL~(-1)(γ=0.9993),日内、日间RSD均小于10%,提取回收率约为80%。结论该方法快速、准确、灵敏度高,可用于氯吡格雷血药浓度测定。     

UPLC(超高效液相色谱)/MS/MS联用技术测定全血中的西罗莫司

目的 建立全血中西罗莫司的UPLC（超高效液相色谱）／MS／MS测定方法,方法 全血样品中加入他克莫司（FK506）作内标，用叔丁基甲醚进行提取。以乙腈与含千分之五甲酸的水溶液为流动相（40：50），色谱柱为AcquityUPLCTMBEHC。（50mm×2．1mm，1．7μm），流速0．5ml／min。三重四极杆质谱采用正离子模式，离子采集方式为多反应监测模式（MRM），离子源温度105℃，离子源电离电压为3300V，雾化气流速500L／h。采集离子（母离子／子离子）西罗莫司为931．2／864．1，FK506为822．0／577．0。结果 西罗莫司在1～240腿／L浓度范围内呈良好的线性（n=0．9995）。日内、日间精密度均在15％以内，提取回收率大于75．0％，方法回收率为95．0％～98．5％，最低检测限为0．2μg／L。结论 本方法灵敏、准确，适合临床西罗莫司的全血分析。     

Copper induces oxidative stress and apoptosis of hippocampal neuron via pCREB/BDNF/ and Nrf2/HO-1/NQO1 pathway

Disordered copper metabolism has been suggested to occur to several neurological conditions, including Alzheimer's disease and Parkinson's disease. However, the underlying mechanism was still unclear. This might link to copper-induced hippocampal neuronal apoptosis and decrease in neurons viability. Our vitro experiment showed copper exposure induced oxidative stress and promoted apoptosis of HT22 murine hippocampal neuronal cell. Mechanistically, we found copper, on the one hand, prevented phosphorylation of cAMP response element binding protein (CREB) to decrease expression its downstream target protein Brain-derived neurotrophic factor (BDNF), and to decrease mitochondrial membrane potential and Bcl-2/Bax ratio; on the other hand, copper-induced reactive oxygen species (ROS), promoted lipid peroxidation, reduced antioxidant enzyme activity of GSH-Px. Copper-induced oxidative damage further decreased the phosphorylation of CREB, decreased expression of Bcl-2, enhanced expression of Bax, and accelerated the dissociation of keap1-Nrf2 complex, promoted the nuclear translocation of Nrf2, stimulate the expression of antioxidant molecules HO-1 and NQO1. In conclusion, we found copper inhibited pCREB/BDNF signaling pathway by prevent CREB from phosphorylation, further found that oxidative damage not only inhibited neuroprotective signaling pathways and induced apoptosis, but activated antioxidant protection signals Nrf2/HO-1/NQO1 signaling pathway.