沉默EZH2诱导舌癌Tca-8113细胞凋亡及其对放射敏感性的影响

目的 探讨zeste基因增强子同源物2（enhancer of zeste homolog 2,EZH2）对舌鳞癌细胞凋亡及放射敏感性的影响。方法 以舌鳞癌Tca-8113细胞为研究对象,细胞转染EZH2小干扰RNA（EZH2 siRNA1、EZH2 siRNA2）及小干扰RNA阴性对照（siRNA-NC）,RT-PCR和Western blot检测EZH2表达水平,筛选干扰效果较好的EZH2 siRNA2继续研究。将转染EZH2 siRNA2后的Tca-8113记为EZH2 siRNA2组,同时以不做处理的细胞为对照组,用8 Gy剂量照射转染siRNA对照组和EZH2 siRNA2细胞,并依次命名为照射组和联合组,四甲基偶氮唑盐（MTT）检测细胞增殖,流式细胞术检测细胞凋亡,Western blot检测信号转导与转录因子3（STAT3）、磷酸化的STAT3（p-STAT3）、活性Caspase-3（Cleaved Caspase-3）表达。siRNA-NC组和EZH2 siRNA2组细胞用0、2、4、6、8 Gy剂量照射处理后,细胞克隆实验检测放射敏感性。结果 EZH2 siRNA1、EZH2 siRNA2均能够干扰舌鳞癌细胞中EZH2的表达,且EZH2 siRNA2干扰效果最好（t_mRNA=8.660,P_mRNA<0.01;t_蛋白=2.883,P_蛋白<0.05）。下调EZH2 siRNA2组细胞凋亡率为（29.90±1.64）%,联合组凋亡率为（38.17±1.59）%,二者比较,差异有统计学意义（t=4.742,P<0.05）,同时下调EZH2还可以降低p-STAT3水平,促进Cleaved Caspase-3蛋白表达。干扰EZH2表达后Tca-8113细胞辐射增敏比为1.668。结论 干扰EZH2表达能够协同放疗促进舌鳞癌细胞凋亡,抑制舌鳞癌细胞增殖,增加舌鳞癌细胞放射敏感性。     

沉默GRAMD1A及抑制STAT5信号通路对肝癌细胞Huh7放射敏感性的影响

目的 探讨沉默GRAMD1A及抑制STAT5信号对肝癌细胞Huh7放射敏感性的影响,旨在为肝癌临床联合治疗提供新思路。方法 慢病素感染构建沉默GRAMD1A的Huh7细胞株,采用qPCR和Western blot进行验证,qPCR和荧光素酶报告实验检测沉默GRAMD1A后对Huh7细胞中STAT5及其下游基因表达的影响;以克隆形成率和细胞凋亡为指标检测沉默GRA株。结果 构建后的Huh7细胞经2 Gy照射后,沉默GRAMD1A联合照射组细胞克隆形成能力较阴性对照联合照射组显著降低,差异有统计学意义（t=8.494,P<0.05）;沉默GRAMD1A联合照射组细胞凋亡较阴性对照联合照射组显著增加,差异有统计学意义（t=3.560,P<0.05）。沉默GRAMD1A后Huh7细胞放射敏感性明显增加,且细胞中STAT5及其下游基因表达显著降低。SH-4-54抑制剂联合照射组较二甲基亚砜联合照射组细胞克隆存活能力显著降低,差异有统计学意义（t=8.660,P<0.05）,SH-4-54抑制STAT5通路后,Huh7细胞放射敏感性显著增加。结论 沉默GRAMD1A可能通过STAT5信号通路增强肝癌细胞Huh7的放射敏感性,表明GRAMD1A在肝癌发生发展中起重要作用,将可能为肝癌靶向治疗及联合治疗提供新靶点。     

CD44+/CD24+宫颈癌细胞和耐辐射宫颈癌细胞特性研究

目的 探讨放疗抵抗的宫颈癌细胞特性,揭示宫颈癌复发和转移的机制。方法 用多次分割照射获得耐辐射的宫颈鳞状细胞癌Siha细胞,利用流式细胞仪从宫颈鳞癌的亲代细胞中分选获得CD44+/CD24+宫颈鳞癌细胞。将耐辐射的宫颈鳞癌细胞和CD44+/CD24+宫颈鳞癌细胞设为实验组,亲代宫颈鳞癌细胞设为对照组,分别进行克隆形成实验和肿瘤移植瘤实验,评估实验组细胞是否具备肿瘤干细胞特性。通过Transwell侵袭实验研究实验组及对照组细胞侵袭和转移能力的差异。利用RT-PCR和Western blot检测实验组及对照组细胞OCT-4、Survivin、ABCG2和bcl-2 mRNA的表达,以及与肿瘤转移相关的E-cadherin和vimentin蛋白表达。结果 辐射抵抗的宫颈鳞癌细胞和CD44+/CD24+宫颈鳞癌细胞较亲代宫颈癌细胞高表达抗凋亡蛋白Bcl-2（t=205.26、198.17,P<0.05）和凋亡抑制蛋白survivin（t=896.62、765.34,P<0.05）,并表达肿瘤干细胞相关标志物OCT-4和ABCG2（t=92.13、81.26、220.45、216.32,P<0.05）。两组细胞均具有较强的致瘤能力以及侵袭和转移能力,且表现出E-cadherin下调和vimentin蛋白上调的EMT相关的分子表型变化。结论 放射抵抗的宫颈鳞癌细胞与CD44+/CD24+宫颈鳞癌细胞表现出相同的肿瘤干细胞特性,经历了上皮间质转化过程,放射可以富集宫颈癌干细胞。     

PI3K/Akt信号通路与肝星状细胞活化的关系及其在放射性肝纤维化中的作用

目的 探讨磷脂酰肌醇3激酶-蛋白激酶B(PI3K/Akt)信号通路与肝星状细胞(HSC)活化的关系及其在放射性肝纤维化中的作用。方法 6 MV X射线照射,联合PI3K/Akt信号通路特异性抑制剂处理HSC,分为空白对照组、抑制剂组、10 Gy照射组、10 Gy+抑制剂组、20 Gy照射组和20 Gy+抑制剂组。检测各组的细胞凋亡率、细胞上清液转化生长因子β1(TGF-β1)浓度、平滑肌肌动蛋白(α-SMA)的mRNA表达量和磷酸化蛋白激酶B(p-Akt)的表达量。结果 与空白对照组相比,10 和20 Gy照射组细胞的凋亡率随照射剂量的增加而增加(t=8.43、11.63,P<0.05);与10 和20 Gy照射组比较,分别加抑制剂后细胞的凋亡率降低(t=8.09、4.88,P<0.05)。与10 Gy照射组比较,20 Gy照射组TGF-β1、α-SMA、p-Akt的量增加(t=6.91、7.80、9.28,P<0.05),10 Gy+抑制剂组TGF-β1、α-SMA、p-Akt的量降低(t=6.17、15.11、10.34,P<0.05)。与20 Gy照射组比较,20 Gy+抑制剂组TGF-β1、α-SMA、p-Akt的量同样降低(t=10.04、6.85、23.84,P<0.05)。结论 X射线通过激活PI3K/Akt信号通路使HSC活化,导致放射性肝纤维化的发生。     

PinX1对食管癌细胞放射敏感性及活性氧水平的影响研究

目的 研究端粒酶抑制因子X1（PinX1）对食管癌细胞放射敏感性及活性氧（ROS）水平的影响。方法 食管癌细胞分为对照组（未做细胞转染）、照射组（8 Gy X射线）、PinX1组（转染pDsRed1-PinX1至过表达）、照射+PinX1（转染pDsRed1-PinX1至过表达后8 Gy X射线照射）。MTT测定细胞增殖,流式细胞术测定细胞凋亡,Western blot测定细胞中含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶3（Caspase-3）和含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶9（Caspase-9）的活化水平,二氯二氢荧光素-乙酰乙酸酯（DCFH-DA）法测定细胞中ROS水平,集落形成实验测定放射敏感性。构建EC9706细胞致裸鼠皮下移植瘤模型,每组20只,小鼠每4天接受5次8 Gy剂量的γ射线局部照射,分析异种移植小鼠模型中PinX1过表达与放射敏感性的关系。结果 与对照组相比,照射组和PinX1组细胞的存活率从100%降低至（67.92±4.71）%和（83.14±4.01）%,差异有统计学意义（t=9.433、4.957,P<0.05）,细胞凋亡率从（6.47±1.46）%升高到（44.38±4.16）%和（25.42±2.78）%,差异有统计学意义（t=12.882、6.439,P<0.05）,细胞中Caspase-3活化水平升高（t=6.655、2.531,P<0.05）,Caspase-9的活化水平升高（t=3.775、3.088,P<0.05）,细胞内ROS水平升高（t=12.110、7.339,P<0.05）。与照射组相比,照射+PinX1组细胞存活率从（67.92±4.71）%下降至（52.73±5.58）%,差异有统计学意义（t=8.942,P<0.05）,细胞凋亡率从（44.38±4.16）%升高至（55.29±4.98）%,差异有统计学意义（t=3.707,P<0.05）,细胞中Caspase-3活化水平升高（t=15.435,P<0.05）,Caspase-9的活化水平也升高,（t=17.990,P<0.05）,ROS水平升高（t=4.526,P<0.05）。过表达PinX1的EC9706细胞放射敏感性增加,增敏比为1.408。过表达PinX1的细胞裸鼠移植瘤体积明显减小。结论 PinX1抑制食管癌细胞增殖,诱导食管癌细胞凋亡,增加食管癌细胞放射敏感性。     

VEGFR2/STAT3/MMP-9介导阿帕替尼抑制辐射后鼻咽癌细胞迁移

目的 探讨阿帕替尼对X射线照射后鼻咽癌细胞迁移能力的影响及机制。方法 通过划痕实验比较人永生化鼻咽上皮细胞（NP69）和鼻咽癌细胞（CNE-1、CNE-2）的迁移能力,以及不同浓度阿帕替尼（0、5、10和15 μmol/L）对其的影响;通过CCK-8检测阿帕替尼对鼻咽癌细胞活性的影响,确定药物干预浓度;将鼻咽癌细胞分为对照组、阿帕替尼组（15 μmol/L）、照射组和阿帕替尼联合照射组,检测各组迁移能力;通过Western blot检测各实验组磷酸化血管内皮细胞生长因子受体2（pVEGFR2）、磷酸化信号传导及转录激活因子（pSTAT3）、STAT3、基质金属蛋白酶（MMP-9）和上皮间质转化（EMT）相关信号通路激活与蛋白表达的变化。结果 与人永生化鼻咽上皮细胞（NP69）相比,鼻咽癌细胞CNE-1和CNE-2迁移能力明显更强（t=-5.759、-16.578,P<0.05）;与对照组相比,鼻咽癌细胞在阿帕替尼（5、10和15 μmol/L）干预后迁移能力明显降低,并具有剂量依赖性（t=2.804~13.362,P<0.05）;与照射组相比,阿帕替尼联合照射组的鼻咽癌细胞划痕愈合速率降低（t=5.932、2.791,P<0.05）,说明阿帕替尼可以明显抑制X射线照射后鼻咽癌细胞的迁移;Western blot结果显示,鼻咽癌细胞经过阿帕替尼处理后,磷酸化的VEGFR2和STAT3表达显著下降,同时,MMP-9蛋白表达明显下降,EMT相关蛋白发生变化。结论 阿帕替尼可能通过下调VEGFR2/STAT3/MMP-9信号通路抑制鼻咽癌细胞EMT化,从而抑制X射线照射后鼻咽癌细胞的迁移。     

Ta4C3-PVP纳米片对4T1三阴性乳腺癌小鼠移植瘤的放射增敏作用

目的 研究Ta₄C₃-PVP纳米片对三阴性乳腺癌4T1细胞小鼠移植瘤的放射增敏作用。方法 于雌性BALB/c小鼠右侧腹皮下注射4T1细胞建立4T1荷瘤小鼠模型,按肿瘤体积大小均匀分为空白对照组、单纯Ta₄C₃-PVP组、单纯照射组、Ta₄C₃-PVP联合照射组。尾静脉注射20 mg/kg Ta₄C₃-PVP预处理24 h后给予8 Gy单次肿瘤局部X射线照射,测量移植瘤体积、瘤重,检测肿瘤细胞增殖标志物Ki-67蛋白表达、DNA双链断裂（DSBs）分子标志物γ-H2AX焦点形成,绘制肿瘤生长曲线并计算放射增敏系数（EF）及抑瘤率。结果 与空白对照组相比,单纯照射组、Ta₄C₃-PVP联合照射组于照射后16 d均能明显抑制肿瘤生长（t=5.41、9.59,P<0.05）、降低瘤重（t=2.67、4.40,P<0.05）,其中Ta₄C₃-PVP联合照射组的EF达1.57,抑瘤率约为64%,明显优于单纯照射组（42%）。免疫组织化学结果显示,与空白对照组相比,单纯照射组和Ta₄C₃-PVP联合照射组肿瘤细胞Ki-67蛋白表达受到明显抑制（t=5.73、8.02,P<0.05）、γ-H2AX焦点产额明显增加（t=2.97、9.86,P<0.05）,且Ta₄C₃-PVP联合照射组较单纯照射组Ki-67表达抑制更显著（t=4.75,P<0.05）、γ-H2AX焦点产额更多（t=4.42,P<0.05）。结论 Ta₄C₃-PVP纳米片可通过增加射线诱导的DNA DSBs,增强4T1荷瘤小鼠移植瘤的放射敏感性。     

程序性细胞死亡4基因增强胰腺癌细胞放射敏感性的研究

目的 探讨程序性细胞死亡4（PDCD4）对胰腺癌细胞放疗敏感性的影响及机制。方法 收集胰腺癌组织及对应的癌旁组织,采用RT-PCR和Western blot检测PDCD4表达水平。以人胰腺癌细胞Sw1990为研究对象,细胞转染PDCD4过表达载体（pIRES2-PDCD4组）、空载体（pIRES2组）,同时以只加入转染试剂的细胞为未转染组,RT-PCR和Western blot检测PDCD4表达水平。细胞经放射处理后,流式细胞术检测细胞凋亡情况,细胞克隆实验检测细胞放射敏感性,Western blot检测细胞中β-连环蛋白、Wnt信号通路下游靶基因c-myc、活化的含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶3（Cleaved Caspase-3）表达水平。结果 胰腺癌组织中PDCD4 mRNA和蛋白表达水平均明显低于癌旁组织（t=4.869、9.208,P<0.05）。pIRES2-PDCD4组细胞中PDCD4 mRNA和蛋白表达水平均明显高于未转染组（t=9.074、18.927,P<0.05）。照射处理后,pIRES2-PDCD4组细胞凋亡率及细胞中Cleaved Caspase-3水平均明显高于未转染组（t=3.670、4.086,P<0.05）,而细胞中β-连环蛋白、c-myc表达水平均明显低于未转染组（t=9.242、17.644,P<0.05）。pIRES2-PDCD4组放射敏感性高于未转染组,增敏比为1.843。结论 PDCD4能够增加胰腺癌细胞放射敏感性,促进胰腺癌细胞凋亡,作用机制可能与Wnt信号通路有关。     

尼妥珠单抗及西妥昔单抗增强照射对人食管癌细胞系的作用

目的 观察尼妥珠单抗（h-R3）、西妥昔单抗（C225）联合照射对人食管鳞癌细胞系TE-13的作用。方法 分为无药对照组、h-R3组、C225组、单纯照射组、h-R3联合照射组、C225联合照射组,采用MTS法观察处理组对食管癌细胞增殖的影响,并计算细胞增殖率;采用克隆形成实验检测h-R3、C225对食管癌细胞系放射敏感性的影响,多靶单击模型拟合细胞存活曲线;通过流式细胞仪分析细胞周期分布及细胞凋亡变化。结果 与单纯照射组相比,单抗联合照射组的细胞增殖率明显降低（F=325.59,P<0.05）,细胞凋亡率明显升高（F=120.59,P<0.05）, SF₂、D₀、D_q及N值均显著降低,G₀/G₁、G₂/M期细胞比例均增加,S期细胞比例减少。C225联合照射组的细胞凋亡率高于h-R3联合照射组（F=120.59,P<0.05）,C225联合照射组SER（1.83）高于h-R3联合照射组SER（1.46）。结论 h-R3与C225均能提高照射对食管鳞癌细胞系TE-13的抗肿瘤作用,C225的杀伤作用略优于h-R3。     

不同非小细胞肺癌细胞对碳离子放射敏感性的影响

目的 分析不同非小细胞肺癌（NSCLC）细胞对碳离子照射放射敏感性的影响,并探讨其相关的分子机制。方法 采用¹²C⁶⁺对肺腺癌A549细胞、鳞癌H520细胞和大细胞癌PGCL3细胞进行照射,吸收剂量分别为0、2、4和6 Gy。通过克隆实验检测3种细胞系的存活率,流式细胞术检测细胞的周期分布,利用Hoechst 33258染色检测细胞的凋亡率,实时RT-PCR方法检测细胞内DNA-PKcs基因的表达。结果 2、4、6 Gy照射后,A549、H520和PGCL3细胞的存活率明显下降,其中A549细胞辐射敏感性最低,其次是PGCL3细胞,H520细胞辐射敏感性最高。受照射后细胞均出现G₂/M期阻滞与凋亡,且随剂量的升高呈现上升的趋势。受照射H520与PGCL3细胞的阻滞率（t=4.813、20.738、25.654和t=2.790、2.977,P<0.05）和凋亡率（t=8.579、14.289、15.244和t=3.785、5.098、8.105,P<0.05）明显高于A549细胞。受照射细胞DNA-PKcs表达明显上调,A549细胞最高,其次是PGCL3细胞,H520细胞最低;并且随着剂量的升高,DNA-PKcs的表达呈现下降趋势。2、4 Gy照射后H520和PGCL3细胞DNA-PKcs的表达明显低于A549细胞（t=7.782、3.689和t=3.889、2.814,P<0.05）。结论 不同NSCLC细胞对¹²C⁶⁺离子的放射敏感性不同,H520鳞癌细胞最高,A549腺癌细胞最低。肺腺癌A549细胞放射敏感性较低可能与高表达的DNA-PKcs参与NHEJ途径修复DNA双链断裂有关。     

鼻咽癌细胞放射敏感性的比较蛋白质组学研究

目的 探讨与鼻咽癌细胞放射敏感性相关的并可能预测鼻咽癌细胞放射敏感性的蛋白质。方法 以人鼻咽癌细胞株CNE-2诱导建立放射抗拒的鼻咽癌细胞株CNE-2(R743),通过克隆形成实验及流式细胞术检测以比较CNE-2和CNE-2(R743)细胞的放射敏感性及细胞周期的特征。提取细胞总蛋白质,进行双向凝胶电泳,Image Master 7.0图像分析软件分析图谱以识别差异蛋白质点,MALDI-TOF/TOF肽质量指纹图谱分析,蛋白质质谱数据库搜索鉴定差异蛋白。应用RT-PCR和Western blot验证2种细胞中相关差异蛋白的表达。 结果 得到7个差异表达较显著的蛋白质,与CNE-2相比较,CNE-2(R743)细胞中6个上调,1个下调。Western blot及 RT-PCR证实膜联蛋白A2、原肌球蛋白及糖调节蛋白78在CNE-2(R743)的表达均上调(t=24.22、24.20和29.19,P<0.05),与蛋白质组学结果一致。结论 不同放射敏感性鼻咽癌细胞存在差异表达的蛋白质,其中膜联蛋白A2、原肌球蛋白及糖调节蛋白78有可能成为预测鼻咽癌细胞放射敏感性的候选生物标志物。     

内质网应激预处理对肝毒性药物导致原代大鼠肝细胞损伤的保护作用研究简

目的探讨大鼠肝细胞的内质网应激预处理对临床相关肝毒性药物肝细胞损伤的保护作用。方法（1）将培养的原代大鼠肝细胞分为8组,分别予以不同浓度的衣霉素和毒胡萝卜素进行干预,尔后检测葡萄糖调节蛋白78GRP78、葡萄糖调节蛋白94GRP78。（2）衣霉素和毒胡萝卜素干预作用24h后,可造成50％～75％的细胞死亡。对肝细胞进行预处理后,再使用顺铂、百草枯和利福平对细胞进行干预,检测细胞生存率。结果内质网应激诱导剂（毒胡萝卜素、衣霉素）对于GRP78和GRP94的表达表现出剂量相关的诱导作用．随着浓度的增加其表达量也逐渐增加,其变化具有明显的统计学意义（P〈0．05）。而临床相关的毒性药物（顺铂、利福平、百草枯）对细胞的损伤可明显地因毒胡萝卜素和衣霉素的内质网应激预处理而减轻,其结果具有统计学意义。结论内质网应激预处理对临床相关肝毒性药物导致原代大鼠肝细胞损伤具有保护作用。这些结果提示在药物导致的肝损伤中内质网应激或许起到了一定作用。     

小檗碱对果糖诱导人肾小管细胞内质网应激PERK凋亡通路的影响

目的 探讨小檗碱对果糖诱导下肾小管上皮细胞凋亡的影响.方法 人肾小管上皮细胞株(HK-2细胞)于含10%胎牛血清的DMEM培养基中进行体外培养,然后随机分为正常组(C组)、果糖组(F组,含25mmol/L果糖培养液)、小檗碱组(B组,25mmol/L果糖+10μmol/L小檗碱)和TUDCA组(T组,25mmol/L果糖+2μmol/L TUDCA培养液).培养24h后收集细胞,Western blotting检测葡萄糖调节蛋白78(GRP78)、CHOP蛋白表达水平及蛋白激酶R样内质网激酶(PERK)、真核启始因子2α(eIF2α)的磷酸化水平,流式细胞仪检测各组细胞周期情况,TUNEL法检测各组细胞凋亡率.结果 与C组比较,F组GRP78、CHOP蛋白表达水平上调,同时p-PERK、p-eIF2α水平明显上升(P<0.05);与F组比较,B组、T组GRP78、CHOP、p-PERK、p-eIF2α表达水平均明显下降(P<0.05);T组与B组GRP78、CHOP、p-PERK、p-eIF2α表达水平比较无明显差异.与C组比较,F组HK-2细胞活力明显降低,细胞凋亡指数明显升高(P<0.05);与F组比较,B组和T组肾小管上皮细胞活力明显增加,细胞凋亡指数明显下降(P<0.05);T组B组细胞活力指数、细胞凋亡率比较无明显差异.结论 持续采用果糖培养HK-2细胞可激活细胞内PERK通路,引起内质网应激的发生,小檗碱能够抑制果糖诱导的PERK和eIF2α的磷酸化,下调GRP78、CHOP表达,从而调控PERK通路缓解细胞周期阻滞现象,降低细胞凋亡率.     

沉默细胞周期检测点激酶1(Chk1)对宫颈癌HeLa细胞放射敏感性的影响

目的 探讨siRNA沉默细胞周期检测点激酶1（Chk1）基因对宫颈癌HeLa细胞放射敏感性的影响。方法 合成Chk1基因的小分子干扰RNA（si-Chk1）,将si-NC或者si-Chk1分别转染到宫颈癌HeLa细胞中,0、2、4、6、8、10 Gy剂量的X射线照射细胞,RT-qPCR和Western blot检测转染后Chk1的mRNA水平和蛋白水平的表达,MTT方法检测细胞增殖能力,流式细胞仪检测细胞凋亡,克隆形成实验检测转染后HeLa细胞放射敏感性,Western blot检测转染后P21蛋白和抗凋亡基因Bcl-2蛋白的表达水平。结果 si-Chk1转染到HeLa细胞后,HeLa细胞Chk1基因的mRNA和蛋白表达水平均显著下降（t=2.12~5.86,P<0.05）,沉默Chk1的表达抑制了宫颈癌HeLa细胞的增殖（t=3.15~6.36,P<0.05）,同时降低宫颈癌HeLa细胞克隆形成能力（t=1.58~6.36,P<0.05）,上调P21（t=4.35,P<0.05）、下调Bcl-2蛋白（t=2.37,P<0.05）的表达水平。结论 siRNA沉默Chk1表达能够增强HeLa细胞放射敏感性。     

缺氧诱导乳鼠心肌细胞内质网应激的时效性观察

目的 研究不同缺氧时间心肌细胞内质网应激蛋白的表达变化,探讨内质网应激在心肌细胞凋亡中所起的作用.方法 将体外培养的乳鼠心肌细胞随机分为0h(对照组)及缺氧6、l2、18、24、30h组,缺氧组通入95％N,及5％ CO2混合气体进行不同缺氧时间处理,对照组在常氧状态下培养,不给予缺氧刺激.采用Western blotting检测内质网应激蛋白GRP78、CHOP及Caspase-12的表达变化,采用流式细胞术检测心肌细胞凋亡情况.结果 对照组GRP78蛋白有一定量的基础性表达,缺氧6h后蛋白表达呈上升趋势,缺氧12h时表达显著增加(P＜0.05),缺氧18h时表达至高峰,但随着缺氧时间延长(＞18h)GRP78表达呈下降趋势.缺氧12h内质网应激蛋白CHOP、Caspase-12蛋白开始表达,缺氧18～30h呈持续升高(P＜0.05).流式细胞术检测显示,缺氧12h即出现典型的细胞凋亡特征,缺氧18、24、30h组心肌细胞凋亡数量明显增多,与对照组比较差异有统计学意义(P＜0.05).结论 内质网应激在心肌细胞缺氧不同时期发挥不同的作用.     

塞来昔布对正常脑胶质细胞和脑胶质瘤细胞放射增敏效应的比较及其机制

目的 探讨塞来昔布对正常少突胶质细胞（oln93）及脑胶质瘤细胞（u373）的放射增敏作用及其作用机制。方法 将两种细胞按空白处理、单独接受塞来昔布或X射线、塞来昔布联合X射线4种不同处理方式分为对照组、给药组、照射组和联合组,MTT法、克隆形成法对比两种细胞的增殖和放射敏感性,流式法测细胞的周期分布,Western blot法分析相关蛋白表达。结果 与未加药物相比,塞来昔布能抑制oln93细胞和u373细胞生长（t=2.215~30.996,P<0.05;t=0.383~11.732,P<0.05）,但相同药物浓度下抑制两种细胞差异无统计学意义。放射增敏比SER分别为1.13和1.21,并诱导G₀/G₁期阻滞（t=-6.1~5.141,P<0.05）。联合组与照射组比较,oln93细胞发生S期阻滞（t=-18.174,P<0.05）,CyclinA蛋白表达增加（t=-8.087,P<0.05）;u373细胞发生G₂/M期阻滞,Cyclin B1、DNA-PKcs、MRE11蛋白表达下降（t=-8.838~10.45,P<0.05）。结论 塞来昔布对u373的放射增敏作用比oln93细胞明显,其机制与调节细胞周期分布及DNA损伤修复有关。     

缬沙坦抑制内质网应激对糖尿病肾损害大鼠足细胞的保护作用

 目的 探讨缬沙坦对糖尿病肾损害大鼠肾脏足细胞凋亡及内质网应激标志性蛋白GRP78、caspase12表达的影响。方法 将雄性SD大鼠随机分为正常对照组和实验组。实验组大鼠给予腹腔注射链脲佐菌素建立糖尿病模型,然后随机将其分为模型组和缬沙坦组,正常对照组和模型组1次/d给予反渗水灌胃,缬沙坦组1次/d给予缬沙坦(8 mg/kg)灌胃,时间为6周。对nephrin、GRP78、caspase12表达水平进行分析,同时观察血糖、血尿素氮、肌酐、24 h尿蛋白定量等指标。结果 建模第6周,模型组大鼠肾脏较正常对照组凋亡细胞数明显增多,模型组GRP78(6.75±0.65)及caspase12(11.51±0.32)表达较正常对照组GRP78(1.57±0.39)、caspase12(2.66±0.57)增强(P＜0.05),模型组nephrin(2.29±0.15)较正常对照组(5.71±0.53)表达减少(P＜0.05)。缬沙坦组较模型组凋亡细胞数减少,GRP78(3.14±1.00)、caspase12(8.08±2.48)表达减弱(P＜0.05),nephrin(3.35±0.40)表达减少较轻(P＜0.05)。结论 缬沙坦通过减缓内质网应激并可能通过抑制内质网特有的caspase12凋亡途径,减少足细胞的凋亡,从而发挥对糖尿病肾病的保护作用。
     

miR-155在淋巴瘤Raji细胞辐射抵抗中作用的研究

目的 研究miR-155在淋巴瘤Raji细胞辐射抵抗中的作用及其机制。方法 实时定量聚合酶链反应检测Raji细胞miR-155的表达,CCK-8法检测细胞增殖,流式细胞仪检测细胞凋亡,Western blot检测PTEN和p-AKT的表达。结果 miR-155 RNA和p-AKT蛋白在Raji细胞中表达较高,而pten基因mRNA和蛋白质表达水平极低,单纯4.0 Gy照射48 h后Raji细胞凋亡率较低;miR-155 siRNA不仅使miR-155 RNA和p-AKT表达水平明显下降,而且pten基因mRNA和蛋白质水平显著增高,同时细胞显示出增殖抑制作用,显著增加Raji细胞对该辐射剂量敏感性,siRNA+射线照射组细胞凋亡率为(36.78±1.35)%,高于单纯照射组(t=12.572,P<0.05)。结论 miR-155 表达对Raji细胞辐射敏感性具有重要影响,其机制与PTEN/PI3K/AKT信号途径激活有关。     

乏氧诱导的A549细胞外泌体特征及其对放射抗拒性的影响

目的 收集乏氧和常氧条件下人肺腺癌A549细胞产生的外泌体,观察常氧下A549细胞与外泌体共培养后对X射线敏感性及侵袭性的变化。方法 分别在乏氧（1% O₂）和常氧条件下（21% O₂）培养A549细胞,超高速离心法收集在细胞分泌的常氧外泌体（N-EXO）和乏氧外泌体（H-EXO）。NanoSight检测外泌体数量,扫描电镜观察外泌体的外观和大小。蛋白印迹检测外泌体蛋白CD63。CCK8检测细胞对X射线的耐受性。荧光显微镜观察A549细胞对PKH67标记的外泌体的摄取。细胞划痕实验和Transwell实验观察加入不同的外泌体后细胞侵袭和侵袭性变化,ELISA方法检测细胞上清液中基质金属蛋白酶2（MMP2）和基质金属蛋白酶9（MMP9）的表达变化。细胞克隆形成实验观察二种外泌体对细胞放射抵抗性的改变。结果 每ml细胞培养液中H-EXO的数量增多。H-EXO和N-EXO均呈现出典型的环饼状,H-EXO直径变小,粒径分布在30~200 nm,小于N-EXO的粒径（50~220 nm）。H-EXO和N-EXO的CD63表达无明显差别。乏氧条件培养的A549细胞接受2 Gy X射线后,细胞的增殖水平在4和6 d时远高于常氧条件下的细胞。PKH67绿色荧光标记的外泌体分布在细胞内部。12、24、48 h后,H-EXO组细胞划痕宽度远小于N-EXO组（t=2.96、6.76、3.35,P<0.05）。H-EXO组细胞穿膜细数量大于N-EXO组和对照组（t=4.84、7.88,P<0.01）。H-EXO组上清液中MMP2（t=4.70、3.21,P<0.05）和MMP9（t=5.61、3.76,P<0.05）表达水平较对照组和N-EXO组均明显增高。对照组、N-EXO和H-EXO的D₀值分别为2.614、2.552、4.850。H-EXO较N-EXO可以明显增强A549细胞的放射抵抗性。结论 乏氧条件下,A549细胞释放的外泌体数量增多、粒径变小,乏氧外泌体可以促进常氧细胞的侵袭性,并且能够增强细胞对X射线的耐受性。     

TAB182维持RPA2 mRNA稳定性促进DNA同源重组修复的研究

目的:探讨TAB182促进同源重组(HR)修复的相关调控分子及机制。方法:利用shRNA敲低人乳腺癌MCF-7细胞中的TAB182基因,TAB182敲低的MCF-7细胞为沉默组,使用shRNA阴性对照物的MCF-7细胞为TAB182阴性对照组。通过RNA测序分析,筛选与TAB182相关差异表达的HR修复基因。qRT-P...