抗铜绿假单胞菌 PcrV 蛋白单克隆抗体的筛选和功能验证

目的:获得能应用于治疗铜绿假单胞菌(Pseudomonas aeruginosa)感染的抗PcrV 蛋白全人源单克隆抗体。方法:以铜绿假单胞菌PAO1 基因组为模板,PCR 扩增PcrV 基因并构建重组表达载体pET-28a-PcrV,转化至大肠杆菌BL21(DE3),利用IPTG 诱导表达,并通过镍离子螯合树脂亲和纯化PcrV 蛋白。利用噬菌体抗体库筛选PcrV 结合的噬菌体克隆并进行序列测定,以测序正确的阳性克隆质粒为模板,PCR 扩增该抗体的重链可变区基因和轻链可变区基因并构建重组表达载体转染至293E 细胞,收取培养细胞上清,并利用Protein A 树脂亲和纯化抗体。利用ELISA 实验检测抗体亲和力,并通过小鼠铜绿假单胞菌感染肺炎模型验证抗体活性。结果:获得重组蛋白PcrV,通过噬菌体展示技术筛选并制备了一株全人源抗PcrV单克隆抗体YG5。ELISA 实验结果表明YG5 抗体具有较高的亲和力(EC50 =61 ng/ ml),进一步的实验结果表明,YG5 能有效抵抗铜绿假单胞菌感染,降低小鼠的死亡率。结论:靶向铜绿假单胞菌PcrV 蛋白的全人源单克隆抗体YG5 能够有效地抑制铜绿假单胞菌致病性,降低其对机体感染,有可能成为抗铜绿假单胞菌感染的治疗性抗体。     

重组Bb(pGEX-OprF-I)疫苗的构建及对小鼠的诱导保护作用

目的构建和鉴定重组两歧双歧杆菌介导的铜绿假单胞菌外膜蛋白F-I[rBb(pGEX-OprF-I)]疫苗,研究其对小鼠抗铜绿假单胞菌感染的免疫保护作用。方法 PCR扩增OprF和OprI基因,采用基因拼接法剪切,得到OprF-I融合基因,双酶切后定向克隆至载体pGEX-1λT,构建重组质粒pGEX-OprF-I,将该质粒电转化两歧双歧杆菌(Bb),构建rBb(pGEX-OprF-I)疫苗并进行双酶切和PCR鉴定,经异丙基-β-D硫代-吡喃半乳糖苷(IPTG)诱导表达, SDS-PAGE和Western blot法分析和鉴定表达产物。将21只BALB/c鼠随机分成疫苗组、 Bb-pGEX-1λT空载体和Bb对照组,取5×10~8菌落形成单位(CFU)疫苗口服灌胃,每周连续接种3 d,持续3周。初次免疫后4周用5×10~7 CFU PA01株滴鼻攻击,攻击后2周无菌杀鼠,计数肺组织的细菌菌落数。常规ELISA检测免疫前、初次免疫后4周和攻击后2周的小鼠静脉血中IgG水平。结果 PCR扩增出1289 bp的OprF-I融合基因;双酶切和PCR鉴定证实该基因插入pGEX-1λT并转化Bb,成功构建rBb (pGEX-OprF-I)疫苗; SDS-PAGE显示该疫苗经IPTG诱导可表达相对分子质量(M_r)约68 000的融合蛋白; Western blot表明该蛋白能被铜绿假单胞菌感染的鼠血清特异性识别。疫苗组的肺组织细菌菌落数较对照组明显减少;免疫小鼠血清IgG水平在初次免疫后4周和攻击后2周依次升高,且高于同一时间点的其余对照组。结论成功构建了铜绿假单胞菌rBb(pGEX-OprF-I)疫苗,该疫苗在小鼠抗铜绿假单胞菌感染过程中可产生一定的免疫保护作用。     

应用患者恢复期血清初步筛选猪链球菌体内诱导表达抗原

目的利用患者恢复期血清对中国猪链球菌2型05ZY/H33强毒株体内诱导表达抗原进行初步筛选,并对建立的05ZY/H33菌株基因组表达文库及体内诱导表达抗原筛选平台的可行性进行初步验证。方法提取05ZY/H33菌基因组DNA,由Sau3AⅠ不完全酶切后回收0.5～3kbDNA片段,插入经其同尾酶BamHⅠ酶切及去磷酸化处理的pET-30a/b/c表达载体系统,转化大肠埃希菌BL21(DE3),构建05ZY/H33菌株基因组表达文库。将收集的患者恢复期血清等体积混合,经体外培养的05ZY/H33和BL21(DE3)全细胞及细菌超声裂解物吸附处理后,获得吸收血清。用此血清采用免疫印迹法筛选IPTG诱导的基因组表达文库,寻找05ZY/H33强毒株的体内诱导表达抗原。结果 05ZY/H33强毒株的基因组文库构建共得到3.2×104个重组子,重组阳性率达95%。随机挑选文库中的2000个重组子运用吸附处理后的患者恢复期血清对其进行体内诱导抗原的初步筛选,共筛到5个阳性克隆,经测序鉴定和生物信息学分析显示5个克隆子包含了05ZY/H33基因组的7个开放阅读框(ORF),其编码产物均参与细菌新陈代谢、复制增殖及损伤修复等重要的生命活动,极有可能为05ZY/H33强致病株的体内诱导抗原。结论本实验成功建立了运用中国猪链球菌2型05ZY/H33强毒株患者恢复期血清进行菌株体内诱导表达抗原筛选的技术平台,为05ZY/H33菌株体内诱导抗原的系统筛选奠定了基础。     

MyD88-铜绿假单胞菌表位核酸疫苗的构建及其真核表达

目的:构建重组MyD88基因的铜绿假单胞菌(PA)表位核酸疫苗,并研究其在真核细胞中的表达.方法:将PA的OprF的三个中和性B细胞表位及一个外源通用T细胞表位串联,表位之间用赖氨酸间隔,采用重叠PCR方法合成全基因,并在此序列前插入组织纤溶酶原激活物(tPA)的信号肽基因,将获得的片段与MyD88基因分别克隆到pIRES载体的两个多克隆位点,构建真核双表达重组质粒pIRES-tPA-OprF-MyD88.电穿孔法将pIRES-tPA-OprF-MyD88转入COS-7细胞,通过Western blot检测其细胞上清tPA-OprF蛋白及细胞内MyD88蛋白的表达.结果:构建的真核表达质粒pIRES-tPA-OprF-MyD88,经电转COS-7细胞后,在其培养的上清液及细胞内检测到目的蛋白.结论:成功构建pIRES-tPA-OprF-MyD88表达载体,并在转染的真核细胞中得以有效地表达,为研究PA预防性疫苗奠定了实验基础.     

屎肠球菌介导的铜绿假单胞菌寡肽酶B(Ef-PopB)疫苗诱导小鼠产生保护作用及体液免疫应答

目的研究屎肠球菌介导的铜绿假单胞菌寡肽酶B(Ef-PopB)疫苗免疫小鼠诱导的保护力及体液免疫应答反应。方法用5×10~8菌落形成单位(CFU)的重组疫苗灌胃接种BALB/c小鼠,每日1次,连续3 d,持续3周。首次免疫后4周用5×10~7 CFU的铜绿假单胞菌PA01株滴鼻攻击小鼠。攻击后两周处死小鼠,取肺计数细菌负荷,分别于免疫后0、 4和6周采静脉血,分离血清,用ELISA测定IgG及其亚类和IgE水平。结果 Ef-PopB疫苗免疫组小鼠肺细菌菌落数明显低于空载体组和Ef对照组。疫苗组小鼠血清抗体IgG、 IgG1、 IgG2b、 IgG3和IgE在初次免疫后4周均升高,在攻击后两周达较高水平。结论铜绿假单胞菌重组Ef-PopB疫苗可诱导小鼠产生良好的保护作用和体液免疫应答。     

弓形虫RH株速殖子期表达型cDNA文库的构建及鉴定

为构建弓形虫速殖子期表达的基因的完整长度cDNA文库 ,用CF 11纤维素柱快速提纯速殖子 ,以盐酸异硫氰酸胍 (AGPC)一步法抽提总RNA ,oligo dT纤维素分离mRNA后 ,用ClonTech公司的SmartTMPCRcDNA文库构建试剂盒 ,构建了弓形虫RH株的表达型文库。获得 5× 10 6个独立克隆 ,重组率为 99% ,插入片段的平均长度约为 1kb。根据已知序列设计引物 ,从cDNA文库中扩增出编码棒状体蛋白 1(ROP1)的基因 (不含编码信号肽的序列 ) ,本文库可望用于弓形虫疫苗研究的候选基因的筛选。     

基于免疫信息学的SARS-CoV-2 表位筛选及疫苗分子设计分析

目的：基于新型冠状病毒（SARS-CoV-2）全病毒或Spike蛋白作为免疫原可能存在的无关抗原表位干扰，筛选鉴定优势保护性抗原表位，构建候选多价表位疫苗。方法：以免疫信息学确定诱导主要中和抗体、激活细胞免疫应答的细胞保护性抗原表位，以Raptor X、trRosetta预测蛋白疫苗的二级、三级结构，并对候选蛋白疫苗进行二硫键的设计及对接分析，以C-ImmSim服务器模拟预测分析多表位疫苗的免疫原性和免疫应答。结果：实验筛选了Spike蛋白免疫原性强的B细胞表位，具有高保守性和人群覆盖度广的IFN-γ、IL-4阳性的Th表位及CTL表位，计算模拟验证了疫苗的免疫应答特性。结论：信息学分析结果初步显示候选表位疫苗具有良好的平衡体液免疫和细胞免疫应答能力。     

大肠杆菌O157∶H7多糖-重组铜绿假单胞菌外毒素A结合疫苗的研制

目的　用大肠杆菌O15 7∶H7(EscherichiacoliO15 7∶H7,E .coliO15 7)的一个重要保护性抗原即菌体脂多糖 (LPS)制备有效的候选疫苗。方法　选用Westphal热酚法提纯E .coliO15 7∶H7的LPS ,经酸水解法进一步脱毒处理后得到无毒但却具弱免疫原性的O 特异性多糖 (O SP) ,然后采用己二酸二肼 (ADH)将其共价结合到琥珀酰化 (或没琥珀酰化 )重组铜绿假单胞菌外毒素 (rEPAsucc或rE PA)上。结果　制备得到的E .coliO15 7∶H7的O SP rEPAsucc或O SP rEPA结合疫苗是安全有效的 ,其免疫原性要比单一O SP的免疫原性强 ,免疫小鼠后产生的血清抗LPSIgG抗体滴度比单一O SP免疫后产生的抗体水平均有显著性升高 (P <0 .0 1) ,且再次注射后存在加强应答。结论　E .coliO15 7∶H7的O SP rEPAsucc结合疫苗可望作为一种预防肠出血性E .coli引起的感染性腹泻的有效候选用疫苗     

应用siRNA干扰技术沉默铜绿假单胞菌外排泵基因mexB的蛋白表达

目的 观察siRNA干扰质粒转入铜绿假单胞菌后,MexB蛋白表达量的变化.方法 针对mexB基因设计合成特异性siRNA分子,与pGPU6/GFP/Neo载体连接,构建pGPU6/GFP/NeosiRNA重组质粒.构建重组表达质粒pET22b+/mexB,并转化大肠杆菌BL21( DE3) plysS,诱导表达MexB蛋白,蛋白纯化后免疫家兔制备多克隆抗体.siRNA质粒分别电转化铜绿假单胞菌野生株、临床耐药株及mexB基因高表达株,运用Western blot观察转化8、12、24h后MexB蛋白表达量的变化.结果 成功构建pGPU6/GFP/Neo-siRNA重组质粒.成功表达铜绿假单胞菌外排泵蛋白MexB,并制备多克隆兔抗.siRNA质粒对铜绿假单胞菌野生株、临床耐药株及mexB基因高表达株的mexB基因均具有良好的沉默效果,而且沉默效果存在时间差异性.结论 siRNA质粒转化3株铜绿假单胞菌后,在8h及12 h时均可观察到MexB蛋白表达量明显减少,而在24 h时MexB蛋白表达量无改变.     

铜绿假单胞菌外膜蛋白的免疫原性及免疫保护性

铜绿假单胞菌亦称绿脓杆菌,是一种最常见的条件致病菌。铜绿假单胞菌感染占院内感染的15 %以上,并还有上升趋势,这与铜绿假单胞菌对抗生素耐药率增高有关〔1〕。在国内外烧伤中心对革兰阴性细菌感染的临床调查表明,铜绿假单胞菌感染占首位(约5 0 %) 〔2〕。为此,人们一直在寻找有效的防治对策。既往研究的菌体疫苗缺点较多,如不同血清型保护率及保护时间不甚理想等。因此,发展高免疫保护性、低不良反应的亚单位疫苗非常必要。制备亚单位疫苗的关键在于找出与保护性免疫相关的抗原。细胞膜中的一种重要成分———外膜蛋白,在免疫方面的作用越…     

新生期肺炎链球菌肺炎对气道平滑肌表型的影响

目的研究新生期肺炎链球菌肺炎(Streptococcus pneumoniae pneumonia,S.pp)对气道平滑肌表型的影响。方法Balb/c小鼠出生后第7天鼻腔滴注2×107CFU肺炎链球菌5μl建立新生期S.pp模型,对照组滴注等量PBS。感染5周后收集肺组织标本,免疫组织化学检测气道平滑肌肌层厚度;RT-PCR检测气道平滑肌Acta2-mRNA、My11-mRNA、Tagln-mRNA表达量;Western blot检测α-SMA、SMMHC、SM22α蛋白表达量。结果 S.pp组气道平滑肌面积(α-SMA+area/Pbm)较对照组显著增加(46.06±10.74 vs 22.50±9.131,P<0.01),平滑肌收缩蛋白SMMHC面积(SMMHC+area/Pbm)较对照组明显增加(58.33±29.40 vs19.75±13.10,P<0.05),2组间平滑肌收缩蛋白SM22α面积(SM22α+area/Pbm)无统计学差异(37.20±10.67 vs 41.33±5.871,P>0.05);Western blot分析发现S.pp组小鼠肺组织α-SMA、SMMHC蛋白较对照组显著升高(分别为1.352±0.552 9 vs 0.633 0±0.157 5,P<0.05;1.291±0.487 2 vs 0.776 8±0.279 3,P<0.01),肺组织SM22α蛋白表达水平差异无统计学意义(1.435±0.436 5 vs 1.398±0.437 3,P>0.05);RT-PCR检测发现S.pp组Acta2-mRNA、My11-mRNA表达水平较对照组显著增加(分别为2.704±1.044 vs0.906 5±0.214 8,P<0.01;1.780±0.454 6 vs 1.183±0.369 9,P<0.05),而2组间Tagln-mRNA表达水平无统计学差异(1.438±0.321 3vs 1.207±0.334 5,P>0.05)。结论新生期肺炎链球菌肺炎可诱导气道平滑肌表型改变,促进气道高反应性形成。     

肌肽对小鼠化学性肝损伤氧化应激和炎症因子的影响

目的研究肌肽(carnosine,CAR)对四氯化碳(carbon tetrachloride,CCl_4)诱导的化学性肝损伤小鼠氧化应激和炎症反应的影响。方法 30只ICR小鼠被随机均分为对照组、CCl_4模型组和CAR组。除对照组外,模型组和CAR组均以10 ml/kg剂量的0.2%CCl_4花生油溶液灌胃,建立肝损伤模型。造模后CAR组连续7 d给予300 mg/kg肌肽干预。第8天采血测定各组血清中谷丙转氨酶((alanine aminotransferase,ALT)、谷草转氨酶(aspartate aminotransferase,AST)、白蛋白(albumin,ALB)和谷氨酰转肽酶(glutamyltranspeptidase,GGT)水平,同时HE染色观察肝组织病理变化,ELISA检测超氧化物岐化酶(superoxide dismutase,SOD)活性和谷胱甘肽(glutathion,GSH)及丙二醛(malonaldehyde,MDA)的含量变化,Western blot检测环氧化酶-2(cyclooxygenase-2,COX-2)和血红素氧合酶1(heineoxygenase-1,HO-1)的表达;RT-PCR检测炎症因子白介素1β(interleukin1β,L-1β)、肿瘤坏死因子α(tumor necrosis factorα,TNF-α)和白介素10(interleukin 10,IL-10)的水平。结果与模型组相比,经肌肽干预后,CAR组小鼠血清中ALT、AST和GGT水平下调明显(t=5.776,P<0.000 1;t=7.443,P<0.000 1;t=4.548,P<0.000 1),ALB水平回升(t=6.061,P<0.000 1),肝功指标明显恢复;氧化应激标记物SOD活性(t=6.818,P<0.000 1)和GSH含量(t=5.739,P<0.000 1)增加,MDA含量得以明显下降(t=6.526,P<0.000 1);氧化/氧合蛋白酶COX-2表达降低(t=5.754,P=0.001),但HO-1表达仍持续上升(t=2.367,P=0.001);炎症因子TNF-α(t=7.025,P<0.000 1)和IL-1β(t=11.963,P<0.000 1)的mRNA水平获得明显下调,IL-10则有明显增加(t=6.074,P<0.000 1)。结论肌肽可通过缓解机体氧化应激状态和影响炎症反应水平来改善和保护CCl_4诱导的化学性肝损伤。     

补体因子Ⅰ缺乏患儿1例分子与临床特征研究

目的探讨1例补体因子Ⅰ(complement factorⅠ,CFⅠ)缺乏患儿CFⅠ基因突变、蛋白表达水平、免疫表型及临床特征。方法对1例临床表现为反复头痛伴发热,脑电图及脑脊液检查异常的疑似无菌性脑膜脑炎患儿行免疫学筛查,免疫相关基因新一代测序及ELISA检测CFⅠ蛋白表达。结果该患儿补体C3水平明显降低,抗体水平及外周血精细免疫分型正常,经基因分析发现CFⅠ基因第5号内含子拼接位点发生纯合772+1G>T突变,患儿父母均为该突变的携带者。ELISA检测示患儿CFⅠ蛋白表达量与正常对照相比明显降低。结论通过临床、免疫学筛查、基因分析及蛋白检测,确诊1例发生CFⅠ基因突变的补体缺乏患儿,为此前未见报道的新发突变。对反复发热伴头痛,脑膜脑炎诊断不明确及C3降低的患儿应考虑补体缺乏并进行补体相关基因分析以最终确诊。     

过敏性鼻炎患者总IgE、嗜酸性粒细胞和特异性IgE结果分析

目的 探讨血清总IgE(immunoglobulin E,IgE)水平及外周血嗜酸性粒细胞(eosinophil,EOS)计数在过敏性鼻炎(allergic rhinitis,AR)诊断中的作用,以及两者与血清特异性IgE(specific immunoglobulin E,sIgE)水平之间的关系。方法选择对蒿属花粉过敏的过敏性鼻炎患者60例作为鼻炎组,60例健康人作为对照组。将鼻炎组分为男性组与女性组,青年组(18~40岁)与中年组(41~65岁),将鼻炎组患者根据sIgE结果分为:中低水平(0.35 IU/mL≤sIgE<3.5IU/mL)、高水平(3.5 IU/mL≤sIgE<17.5 IU/mL)与极高水平(sIgE≥17.5 IU/mL)。结果 鼻炎组总IgE水平和EOS计数均高于对照组,差异有统计学意义( P <0.05);鼻炎组、男性组、女性组、青年组和中年组总IgE与sIgE均成正相关( r s =0.541,0.490,0.599,0.566,0.462,均 P <0.05);鼻炎组患者总IgE与sIgE等级成正相关( rs =0.449, P <0.05)。结论 血清总IgE可作为AR诊断辅助指标,联合检测血清总IgE及sIgE可为AR的诊断提供更充分的依据。     

月坛社区卫生服务中心1749例受试者胃幽门螺旋杆菌感染数据分析

目的了解月坛社区卫生服务中心1749例受试者胃幽门螺旋杆菌不同性别及年龄感染情况。方法收集2016年6月至2018年12月期间首都医科大学附属复兴医院月坛社区卫生服务中心进行HP检测的受试者共1749例。采用尿素 13C呼气试验药盒进行检测。结果男性和女性HP感染阳性率差异无统计学意义( P >0.05)。HP感染青少年是重点人群,在不同年龄段的阳性率随着年龄段的增长,其呈逐渐降低的趋势,然而,其降低趋势差异并无统计学意义( P > 0.05 )。结论 HP感染阳性率与性别无关,与年龄段增长相关,但差异无统计学意义,以期为社HP感染防控提供一定的理论依据。     

沿海地区孕妇尿碘检测水平分析

目的调查本地区孕妇人群尿碘水平,指导孕妇合理适度补碘,提高新生儿出生质量。方法采用砷铈催化分光光度法进行尿碘水平的检测。结果在2189例孕妇标本中,调查对象尿碘水平中位数为143.1μg/L;尿碘水平低于适宜水平者1187例,占54.2%,高于适宜水平者313例,占14. 3%。孕早、中、晚期3组的孕妇尿碘中位数分别为141.8、144. 6、131.3μg/L,各孕期孕妇的尿碘水平差异无统计学意义(χ~2=0.941,P>0.05)。结论该地区虽属沿海地区,但近半数及以上的孕妇尿碘水平处于不足状态,孕妇尿碘水平总体偏低。     

甲酰肽受体在缺氧时对血管平滑肌细胞IL-6和IL-8产生的作用

目的探讨甲酰肽受体(formyl peptide receptor,FPR)在缺氧时对血管平滑肌细胞(vascular smooth muscle cells,VSMCs)炎症因子产生的作用。方法按照缺氧时间将大鼠血管平滑肌细胞随机分为0 h、12 h、24 h组,将各组细胞放入缺氧培养箱(1%O2、5%CO2、99%N2)培养相应时间后,用Western blot检测平滑肌细胞中IL-6、IL-8的蛋白水平,用RT-PCR检测其m RNA水平。同时使用FPR拮抗剂t BOC预处理细胞并缺氧不同时间(0 h、12 h、24 h、)后,检测IL-6、IL-8的表达水平。另外,为了进一步明确FPR与炎症因子表达的关系,用FPR激动剂f MLP直接处理细胞之后,检测IL-6、IL-8的表达水平。然后使用细胞在缺氧条件下培养后的上清液作用于未缺氧的细胞,检测IL-6、IL-8的表达水平变化,并通过观察FPR拮抗剂处理后的变化,明确FPR在其中的作用。用f MLP刺激p38抑制剂预处理过的细胞,检测IL-6、IL-8的表达水平变化,以观察FPR激活后引起炎症因子表达对p38途径的依赖性。结果缺氧后血管平滑肌细胞的IL-6、IL-8 m RNA和蛋白含量均显著高于0 h组;当t BOC处理细胞后显著削弱了这一效应(P<0.05)。而且FPR激动剂能直接显著提高未缺氧的细胞的IL-6、IL-8的表达水平(P<0.05)。使用缺氧细胞的上清作用于常氧细胞后IL-6、IL-8的表达水平显著高于常氧细胞上清的作用效果;FPR拮抗剂处理显著削弱了这一效应(P<0.05)。用p38抑制剂预处理过的细胞加入f MLP与单纯加入f MLP的细胞相比,血管平滑肌细胞IL-6、IL-8表达水平显著低于单纯加入f MLP组(P<0.05)。结论缺氧引起血管平滑肌细胞IL-6、IL-8的表达,FPR在这一过程中发挥了重要的介导作用,而FPR是被缺氧细胞释放出来的激动剂激活。激活后的FPR引起IL-6、IL-8的表达依赖于p38信号途径。     

lncRNA XLOC006926抑制肝癌细胞增殖、迁移和侵袭的研究

目的探讨lnc RNA XLOC006926调控肝癌细胞增殖和转移机制,结合肝癌患者临床病理特征,分析其临床意义。方法利用实时荧光定量PCR方法检测lnc RNA XLOC006926在肝癌细胞系及肝癌患者配对(癌、癌旁)组织(n=88)中的表达水平。进一步通过CCK-8、克隆形成、划痕及transwell实验检测过表达或抑制lnc RNA XLOC006926对细胞增殖、迁移和侵袭的影响,同时结合临床信息统计分析其与临床病理特征及患者预后的相关性。结果 lnc RNA XLOC006926在肝癌细胞及肝癌组织中的表达显著降低,过表达lnc RNA XLOC006926后肝癌细胞增殖、迁移和侵袭能力降低,相反抑制lnc RNA XLOC006926后肝癌细胞增殖、迁移和侵袭能力增强。结合患者临床信息分析,lnc RNA XLOC006926的表达量与肿瘤大小(P=0.007)、PVTT(P=0.024)具有显著相关性,其低表达预示着预后较差。结论 lnc RNA XLOC006926在肝癌发生发展中发挥了重要作用,参与调节肝癌细胞的增殖及迁移,有望成为肝癌发生发展的生物标志物和肝癌预防治疗的新靶点。     

基于超声压痕技术的兔眼角膜生物力学特性

目的利用超声压痕技术探索兔眼角膜的生物力学特性。方法选取7月龄新西兰白兔眼球7只,制作完整角膜试样并固定于人工前房上。用微量注射泵给人工前房注水改变前房内的压力,并用压力传感器测量;在不同前房压力状态下,利用超声压痕设备在角膜顶点位置进行压痕实验,获得力-位移曲线。研究角膜力学参数(弹性模量、滞回量等)与前房压力的关系。结果由角膜压痕实验所得的力-位移曲线呈现非线性特点。前房内压力越大,角膜的力-位移曲线越陡峭。兔眼角膜的弹性模量随前房压力升高而增大,在前房压力为7～45 mm Hg(1 mm Hg=0. 133 k Pa)范围内,其数值范围为0. 30～1. 55 MPa。随前房压力增大,角膜滞回量呈现线性上升趋势。结论基于超声压痕技术获得的兔眼角膜弹性模量随前房压力呈线性增大,滞回量等角膜黏性特性参数与前房压力也相关。     

运用行业标准对sdLDL-C试剂盒进行性能评价

目的对Beckman AU5800生化分析仪上检测小而密低密度脂蛋白胆固醇(sdLDL- C)所用试剂盒进行性能评价。方法参考卫健委发布的WS/T 492- 2016、WS/T 408- 2012及WS/T 402- 2012行业标准,选用异常和正常两个水平的质控品验证sdLDL- C试剂盒的测量精密度,选取尽量接近临床高值的样本配制成一定浓度的样本验证sdLDL- C试剂盒的线性范围,选取本院正常体检人群进行参考区间验证。结果 2个水平质控品的实验室内变异系数( CV )分别为4.84%和4.79%,符合试剂盒宣称的不精密度。对线性范围实验未发现离群点,一次多项式 Y =0.491 X -0.383为最适多项式。生物参考区间验证无离群点,实验结果显示所有数据均落在厂家提供的生物参考区间范围内。结论该sdLDL- C试剂盒检测的精密度符合厂商宣称值,sdLDL- C浓度在0.103~2.038mmol/L范围内为线性范围,厂家提供的生物参考区间可被本实验室直接引用。