基于p38 MAPK/iNOS信号通路探讨加味散偏汤对硝酸甘油诱导的大鼠偏头痛作用机制

目的：探讨加味散偏汤对硝酸甘油诱导的大鼠偏头痛的作用机制。方法：将72只SPF级Wistar大鼠随机分为空白组、模型组(硝酸甘油，10 mg·kg^-1)、利扎曲坦组(0.89 mg·kg^-1)、加味散偏汤高、中、低剂量组(12.96、6.48、3.24 g·kg^-1)。腹腔注射硝酸甘油建立大鼠偏头痛模型。测试大鼠眼眶和足底痛觉敏感[机械痛阈值(MPT)]行为学实验；酶联免疫吸附测定法(ELISA)检测大鼠血清一氧化氮(NO)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、γ干扰素(IFN-γ)和白细胞介素-1β(IL-1β)等炎症因子水平；免疫组化法(IHC)检测大鼠三叉神经脊束核尾核(TNC)诱导性一氧化氮合酶(iNOS)的表达；蛋白免疫印迹法(Western blot)检测大鼠TNC区磷酸化p38丝裂原活化蛋白激酶(p-p38 MAPK)/p38丝裂原活化蛋白激酶(p38 MAPK)和iNOS蛋白表达；实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)检测大鼠TNC区iNOS、p38 MAPK和IL-1β mRNA表达。结果...     

补肾活血复方含药血清对大鼠成骨细胞磷酸化GSK-3β、p38MAPK及ERK1/2蛋白的影响

目的:观察补肾活血复方含药血清对大鼠成骨细胞磷酸化糖原合成激酶3β(GSK-3β)、p38丝裂原活化蛋白激酶(p38 MAPK)及细胞外信号调节激酶1/2(ERK1/2)蛋白的作用。方法:3月龄SD雌性大鼠灌胃制备空白血清和含药血清,并分离培养1日龄新生鼠颅骨成骨细胞。实验分为空白血清组和含药血清组,分别采用MTT、ELISA、Western-blot等方法检测两组成骨细胞的增殖、ALP和BGP的分泌及磷酸化GSK-3β、p38 MAPK和ERK1/2蛋白的变化。结果:与空白血清组相比,含药血清组可明显促进成骨细胞的增殖、ALP和BGP的分泌,并促进胞内磷酸化p38 MAPK和ERK1/2蛋白的表达,对磷酸化GSK-3β蛋白的表达未见明显影响。结论:补肾活血复方含药血清可促进大鼠成骨细胞的增殖和分化,提高p38 MAPK和ERK1/2蛋白磷酸化水平。     

柴朴汤对哮喘模型大鼠气道炎症及ERK/p38 MAPK信号通路的影响

目的:观察柴朴汤对哮喘模型大鼠气道炎症及细胞外信号调节激酶(ERK)/p38丝裂原活化蛋白激酶(p38MAPK)信号通路的影响。方法:SD大鼠随机分为空白组、模型组、柴朴汤低、中、高(0.75,1.5,3.0 g·kg-1)组,地塞米松组。采用卵蛋白(OVA)致敏激发建立大鼠哮喘模型。柴朴汤低、中、高剂量组于激发前0.5 h给予相应剂量柴朴汤灌胃;地塞米松组于激发前0.5 h给予地塞米松(0.005 g·kg-1)灌胃;模型组于激发前0.5 h给予等体积生理盐水灌胃;空白组以生理盐水代替OVA进行腹腔注射及雾化吸入;隔日1次,共激发28 d。观察各组大鼠支气管肺泡灌洗液(BALF)中细胞总数及分类细胞计数的变化;酶联免疫吸附法(ELISA)检测肺组织磷酸化ERK(p-ERK),磷酸化p38 MAPK(p-p38 MAPK)的活性;实时荧光定量PCR(Real-time PCR)分析检测ERK,p38 MAPK mRNA的表达;蛋白免疫印迹法(Western blot)检测ERK,p-ERK,p38MAPK,p-p38 MAPK蛋白的表达;光镜下观察病理组织形态学变化及进行炎症评分。结果:模型组大鼠BALF中细胞总数和分类细胞计数;肺组织p-ERK,p-p38 MAPK的活性,ERK,p38 MAPK mRNA的表达,p-ERK,p-p38 MAPK的表达,炎症评分均明显高于空白组(P0.01);柴朴汤低、中、高剂量组和地塞米松组上述指标则明显低于模型组(P0.05,P0.01)。结论:柴朴汤可改善哮喘模型大鼠气道炎症,其机制可能与其抑制ERK/p38 MAPK信号通路有关。     

对叶百部总生物碱抑制非小细胞肺癌NCI-H460细胞增殖和诱导细胞凋亡的作用机制

目的：观察对叶百部总生物碱对人非小细胞肺癌NCI-H460细胞增殖和凋亡的影响，并探讨其可能的作用机制。方法：以非小细胞肺癌NCI-H460细胞作为研究对象，设置空白组和对叶百部总生物碱组(50、100、150、200、250 mg·L^-1)。通过噻唑蓝(MTT)比色法和平板克隆形成实验观察对叶百部总生物碱对人非小细胞肺癌NCI-H460细胞增殖的影响；Hoechst33258染色法和流式细胞术观察细胞凋亡；实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)检测对叶百部总生物碱对胱天蛋白酶-3(Caspase-3)、B细胞淋巴瘤-2(Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)和表皮生长因子受体(EGFR)mRNA的表达水平；蛋白免疫印迹法(Western blot)检测对叶百部总生物碱对Caspase-3、Bax、Bcl-2、蛋白激酶B(Akt)、磷酸化(p)-Akt、EGFR、c-Jun氨基末端激酶(JNK)、p-JNK、p38丝裂原活化蛋白激酶(p38 MAPK)及p-p38 MAPK蛋白表达的影响。结果：与空白组比较，对叶百部总生物碱组细胞增殖抑制率...     

益母草碱对血管紧张素Ⅱ诱导的心肌细胞肥大p38 MAPK信号通路和miRNA-1表达的影响

目的:研究益母草碱对血管紧张素Ⅱ(angiotensin,AngⅡ)诱导心肌细胞肥大的作用,并分析其对p38丝裂原活化蛋白激酶(p38 mitogen-activated protein kinase,p38 MAPK)信号通路和微小RNA-1(microRNA-1,miRNA-1)表达的影响。方法:以AngⅡ(0. 1μmol·L~(-1))诱导肥大心肌细胞。实验分为空白组,模型组,p38 MAPK抑制剂组(SB203580,10μmol·L~(-1))以及益母草碱低、中、高浓度组(5,10,20μmol·L~(-1))。以图像分析软件测量心肌细胞表面积; Folin-酚试剂法(Lowry)检测心肌细胞蛋白含量;酶联免疫吸附测定法(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)检测细胞上清心房钠尿肽(atrial natriuretic peptide,ANP)含量;实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)检测心肌细胞miRNA-1 mRNA的表达水平;蛋白免疫印迹法(Western blot)检测心肌细胞内皮素-1(endothelin-1,ET-1),p38 MAPK,磷酸化p38 MAPK(p-p38 MAPK),肌细胞增强因子2(myocyte enhancer factor 2,MEF2),β-肌球蛋白重链(β-myosin heavy chain,β-MHC)和α-肌球蛋白重链(α-myosin heavy chain,α-MHC)蛋白的表达水平。结果:与空白组比较,模型组心肌细胞表面积、蛋白含量及细胞上清ANP含量明显升高(P 0. 05),ET-1,p38 MAPK,p-p38 MAPK,MEF2和β-MHC蛋白表达水平明显上调(P 0. 05),α-MHC蛋白及miRNA-1 mRNA的表达水平明显下调(P 0. 05)。与模型组比较,益母草碱高浓度组明显减少肥大心肌细胞表面积、蛋白含量及细胞上清ANP含量(P 0. 05);下调ET-1,p38 MAPK,p-p38 MAPK,MEF2和β-MHC蛋白表达水平(P 0. 05);上调α-MHC蛋白及miRNA-1的表达水平(P 0. 05)。结论:益母草碱高浓度组(20μmol·L~(-1))可抑制AngⅡ诱导的心肌细胞肥大,其机制可能与抑制p38MAPK信号通路活化和上调miRNA-1的表达有关。     

活血及活血解毒配伍中药含药血清对肿瘤坏死因子-α诱导人内皮细胞与中性粒细胞黏附及相关通路蛋白表达的影响

目的探讨活血及活血解毒配伍中药含药血清对肿瘤坏死因子-α(TNF-α)诱导人脐静脉内皮细胞(HUVECs)与外周血中性粒细胞(PMN)黏附、炎症反应及相关通路蛋白的影响。方法采用随机数字表法将32只大鼠分为空白对照组、芎芍胶囊组、黄连胶囊组及芎芍胶囊加黄连胶囊组,每组8只,各给药组按临床等效剂量灌胃,采血制备含药血清。空白对照组予等体积蒸馏水作对照。常规方法培养HUVECs,以TNF-α(100 ng/m L)为刺激物,制备HUVECs细胞损伤模型。细胞分为5组:空白对照组、模型组、活血组、解毒组及活血解毒组。空白对照组及模型组给予正常大鼠血清,其他3组以10%含药血清干预24 h后收集细胞,应用孟加拉玫瑰红染色法观察HUVECs与PMN发生病理性黏附情况;酶联免疫法检测细胞上清液相关炎症因子E选择素(E-selectin)、细胞黏附分子-1(ICAM-1)及白细胞介素-1β(IL-1β)含量;Western blot法检测丝裂素活化蛋白激酶p38(p38MAPK)及细胞外信号调节激酶1/2(ERK 1/2)蛋白磷酸化水平。结果与空白对照组比较,模型组细胞出现明显的氧化损伤,PMN黏附数量明显增加,IL-1β、E-selectin及ICAM-1水平升高,且HUVEC上清p-p38MAPK、p-ERK 1/2蛋白表达增加(均P0.01)。与模型组比较,活血组、解毒组及活血解毒组HUVECs与PMN黏附数量减少(P0.05),细胞培养上清液IL-1β、E-selectin及ICAM-1水平降低(P0.05,P0.01),且内皮细胞p-p38MAPK、p-ERK 1/2蛋白表达降低(P0.01)。结论活血及活血解毒含药血清能减轻TNF-α诱导的HUVECs损伤,抑制HUVECs-PMN黏附和黏附因子释放。其机制可能与调节内皮细胞MAPK通路p38MAPK、ERK 1/2蛋白磷酸化水平有关。     

丹参提取物对系膜增生性肾小球肾炎大鼠TGF-β1/p38MAPK信号通路的影响研究

目的:观察丹参提取物对系膜增生性肾小球肾炎(Mesangial proliferative glomerulonephritis,MsPGN)大鼠肾组织转化因子-β1(Transforming growth factor-β1,TGF-β1)和p38丝裂原活化蛋白激酶(p38 mitogen-activated protein kinase,p38MAPK)的影响。方法:将46只SD大鼠分为正常组、缬沙坦组、模型组、丹参提取物组,除正常组外,其余各组大鼠建立MsPGN模型。丹参提取物组按丹参5 g/(kg·d)的剂量灌胃给药;缬沙坦组按缬沙坦0.01 g/(kg·d)的剂量溶于温水灌胃,模型组和正常组每天给予等量温水灌胃,连续灌胃12周后处死大鼠。Western blot检测大鼠肾组织TGF-β1和p38 MAPK蛋白的表达,RT-PCR检测TGF-β1和p38MAPK的mRNA表达。结果:与正常组比较,模型组大鼠24 h尿蛋白水平、TGF-β1和p38MAPK蛋白相对表达量及mRNA表达均显著升高(P<0.05);与模型组比较,给药6周和12周缬沙坦组、丹参提取物组24 h尿蛋白水平显著降低(P<0.05);TGF-β1和p38MAPK蛋白相对表达量及mRNA表达均显著下降(P<0.05);与缬沙坦组比较,丹参提取物组TGF-β1和p38MAPK mRNA表达均下降(P<0.05)。结论:丹参提取物的肾保护作用可能是通过下调TGF-β1、p38MAPK蛋白和mRNA水平,抑制TGF-β1/p38MAPK信号通路激活来实现的。     

虎杖苷对骨髓瘤细胞的生长、凋亡及ROS/p38 MAPK信号通路作用

目的：研究虎杖苷对骨髓瘤细胞生长、凋亡及ROS/p38 MAPK信号通路的作用。方法：体外培养人多发性骨髓瘤(MM)细胞系U266细胞,通过细胞增殖与活性检测(CCK-8)法检测0、20、40、80、160、200 mg·L^-1质量浓度虎杖苷对U266细胞生长的影响,计算其半抑制浓度(IC₅₀)。取处于对数生长期的U266细胞,随机分为空白组、虎杖苷低质量浓度(80 mg·L^-1)组、虎杖苷高质量浓度(160 mg·L^-1)组、硼替佐米(75 nmol·L^-1)组,经药物分组处理后,通过CCK-8法测定各组细胞活力;通过流式细胞实验测定各组细胞凋亡率;通过酶联免疫吸附测定法(ELISA)测定各组细胞炎性因子肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-1β(IL-1β)及活性氧(ROS)水平;通过蛋白免疫印迹法检测各组细胞凋亡相关因子胱天蛋白酶-9(Caspase-9)、B细胞淋巴瘤-2(Bcl-2)相关X蛋白(Bax)及p38丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)、磷酸化(p)-p38...     

隔药灸对克罗恩病大鼠结肠p38MAPK、ERK1/2及c-fos调节作用的研究＊

目的 观察隔药灸对克罗恩（Crohn s Disease，CD）大鼠结肠p38MAPK、ERK1/2、c-fos的影响，探讨隔药灸治疗CD的作用机制。方法 将清洁级雄性SD大鼠随机分为正常组、模型组、隔药灸组和假灸组4组。采用TNBS合50%乙醇溶液灌肠制备大鼠CD模型。模型制备成功后，隔药灸组取天枢穴（双）、气海穴进行隔药饼灸治疗；假灸组取穴、操作与隔药灸组相同，但不点燃艾炷。治疗结束后，采用HE染色，光镜下观察大鼠结肠组织形态学变化；采用实时荧光定量PCR技术检测结肠p38MAPK mRNA表达；应用ELISA技术检测结肠p38MAPK、c-fos蛋白含量，Western blot技术检测结肠ERK1/2蛋白表达。结果 与正常组比较，模型组大鼠结肠组织损伤严重，可见全壁性炎症、裂隙状溃疡，部分大鼠结肠可见纤维化；与模型组、假灸组比较，隔药灸组大鼠结肠形态结构改善，肠道炎症减轻；假灸组大鼠结肠损伤程度、炎症反应与模型组类似。与正常组比较，模型组p38MAPK mRNA表达增加（P < 0.01），p38MAPK、ERK1/2、c-fos蛋白含量均增加（均P < 0.05）；与模型组比较，隔药灸组p38MAPK mRNA表达降低（P < 0.05），p38MAPK、ERK1/2、c-fos蛋白含量均降低（均P < 0.05）；假灸组均无显著变化（均P > 0.05）。结论 隔药灸能下调克罗恩病大鼠结肠p38MAPK、ERK1/2、c-fos的表达，改善炎症、促进肠道组织修复。     

黄芪对脂多糖诱导大鼠急性肺损伤p38丝裂原活化蛋白激酶表达的影响

目的探讨脂多糖(LPS)诱导急性肺损伤(ALI)大鼠肺组织磷酸化 p38丝裂原活化蛋白激酶(p38MAPK)表达的变化以及黄芪对其影响。方法静脉注射 LPS 复制大鼠 ALI 模型。随机分成3组,即正常对照组、LPS 刺激组和黄芪干预组。采用蛋白质印迹法检测肺组织磷酸化 p38MAPK 的表达,并观察大鼠动脉血氧分压(PaO_2)、肺湿/干重比(W/D)、支气管肺泡灌洗液(BALF)白蛋白、血清肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的变化以及肺组织病理学改变。结果 LPS 刺激组大鼠肺组织磷酸化 p38MAPK 的表达较正常对照组显著增加(P<0.01)。与LPS 刺激组比较,黄芪干预组大鼠肺组织磷酸化 p38 MAPK 的表达、W/D、BALF 白蛋白以及血清 TNF-α含量显著下降,PaP_2显著上升(P<0.05),肺组织病理学损伤明显减轻。结论 ALI 时肺组织 p38 MAPK 磷酸化表达增加;黄芪注射液对内毒素性肺损伤有保护作用,其机制可能与抑制磷酸化 p38MAPK 的表达有关。