Nrf2和NF-κB在口腔癌和癌前病变细胞中的表达及意义

目的探讨Nrf2与NF—κB调控的氧化应激与口腔鳞状细胞癌发生的相关性及其作用机理,为口腔癌治疗寻找新的靶点。方法采用免疫组化技术检测抗氧化应激反应的重要转录因子Nrf2在口腔鳞状细胞癌细胞株Tca8113、KB及口腔癌前病变细胞株DOK细胞中的表达,同时对应用全基因组表达芯片从Tea8113、KB及DOK细胞中筛选出的与氧化应激相关的差异表达基因GSTπ与NF—κB进行验证。结果Nrf2、NF-KB、GSRπ在Tea8113、KB及DOK细胞中均有表达,Nrf2在Tea8113和KB细胞胞核中表达增高,NF—κB、GSTπ主要在Tea8113和KB细胞胞浆中表达增高。结论氧化应激可能与口腔癌前病变、口腔鳞状细胞癌的发生密切相关;可能是通过Nrt2与NF-κB调控的氧化应激导致口腔鳞状细胞癌的发生。Nrf2、NF-κB可能成为口腔癌化学预防新的靶点。     

LncRNA FOXCUT在口腔鳞状细胞癌中的表达及功能研究

目的：分析LncRNA( long non-coding RNA,LncRNA) FOXCUT基因在口腔鳞状细胞癌中的表达及功能,探讨口腔鳞癌分子标志物及靶基因。方法采用实时定量荧光聚合酶链反应检测23例鳞状细胞组织及口腔鳞癌细胞Tca8113和SCC-9中FOXCUT的表达,然后采用MTS(细胞增殖实验)单细胞克隆及细胞划痕等细胞功能实验检测FOXCUT基因下调以后在口腔鳞癌细胞Tca8113中的功能。结果 LncRNA FOXCUT在23例口腔鳞癌有21例高表达,在Tca8113和SCC-9细胞中表达均高于人正常黏膜HOK细胞中的表达。当Tca8113细胞转染FOXCUT siRNAs后,FOXCUT的表达降低了,在体外口腔鳞癌Tca8113细胞功能实验中,FOXCUT表达下调后抑制细胞增殖和细胞迁移能力。结论 LncRNAFOXCUT可能与口腔鳞癌的发生发展相关,可能成为口腔鳞癌潜在的新型生物标志物及治疗靶标。     

P73蛋白在金黄地鼠颊囊癌变过程中的表达及意义

目的 检测p73基因在口腔癌前病变和鳞状细胞癌发生发展中的表达，为明确p73在口腔癌前病变和鳞状细胞癌中的诊断和治疗价值提供理论依据。方法 采用免疫组化SABC法研究p73在60只地鼠颊囊黏膜癌前病变和鳞状细胞癌中的表达。结果 p73在口腔癌前病变和鳞状细胞癌中表达逐渐增加，证实p73参与了黏膜癌前病变和鳞状细胞癌的发生与发展，有可能用于肿瘤的基因治疗。结论 结果对口腔黏膜癌前病变和鳞状细胞癌的早期诊断、鉴别诊断、基因治疗提供了理论依据。     

苯并蒽诱导金黄地鼠颊黏膜癌变的重要致病基因筛选

目的 利用基因芯片和生物信息学分析技术探讨口腔黏膜癌变发生发展的不同阶段基因表达谱的改变,并筛选癌变的重要致病基因.方法 用9,10-二甲基1,2苯并蒽(9,10-dimethylen-1,2-benzanthracene,DMBA)诱导建立金黄地鼠颊鳞状细胞癌模型,分别提取并纯化正常颊黏膜、癌前病变和鳞状细胞癌组织的总RNA并合成用Cy3荧光标记的cRNA,分别与含有41 000条基因-表达序列标签(expressed sequence tags,EST)的Agilent大鼠全基因表达谱芯片杂交,以Ratio≥2和≤0.5为阈值确定癌变3个不同阶段的差异表达基因并分析相关生物信息,然后用Gene Spring10.0软件行Venn图分析,筛选出在口腔颊黏膜癌变发生发展的3个不同阶段均持续表达异常的基因,用反转录聚合酶链反应(RT-PCR)对部分差异表达基因行验证分析.结果 金黄地鼠颊黏膜自正常黏膜到鳞状细胞癌的过程中,共有5255条差异表达基因,其中表达上调2896条,下调2359条.癌变的3个不同发展阶段均持续表达异常的基因共有22条,其中表达上调3条,下调19条.对上调基因Eaf-2和下调基因Ecg-2行RT-PCR验证结果与芯片结果相符.结论 口腔黏膜癌变涉及众多基因表达的改变;癌变的不同阶段均持续表达异常的基因可能为癌变的重要致病基因,对以上基因的探讨将对研究口腔黏膜癌变发生发展的分子机制和靶向治疗具有重要作用.     

基于铁死亡相关基因的口腔鳞状细胞癌的生物信息学分析

目的:探究铁死亡相关基因在口腔鳞状细胞癌(OSCC)发生发展中的作用,初步确定潜在生物标志物.方法:从癌症基因组图谱数据库(TCGA)中下载头颈部鳞状细胞癌相关临床数据并筛选得到OSCC相关数据.利用R软件筛选差异表达的铁死亡相关基因并对差异表达基因进行GO和KEGG富集分析.利用STRING数据库构建蛋白质相互作用网络并利用R软件筛选关键基因.对关键基因进行Kaplan-Meier生存曲线绘制和Cox回归分析.结果:共筛选出44个铁死亡相关差异表达基因,进一步分析发现9个关键基因,其中IFNG和EGFR在OSCC组织中的表达水平与生存率显著相关(P<0.05).结论:铁死亡相关基因IFNG和EGFR可作为口腔鳞状细胞癌患者预后潜在的标志物.     

口腔鳞癌组织中doc1基因mRNA表达的意义

目的:doc1基因的转录产物p12蛋白与肿瘤的发生、发展密切相关.本研究旨在检测doc1基因mRNA在不同分化的口腔鳞状细胞癌中的表达,探讨其在口腔鳞状细胞癌组织中表达的意义.方法:用半定量RT-PCR方法检测30例口腔鳞状细胞癌和20例正常口腔黏膜中doc1基因mRNA的表达,并分析doc1基因mRNA表达量与临床病理特征的关系.结果:doc1基因mRNA在高、中、低分化口腔鳞状细胞癌中的灰度平均值为:1.35±0.04,1.20±0.05,1.08±0.03;正常口腔黏膜上皮doc1 mRNA的灰度平均值为:1.58±0.15,表达高于口腔鳞状细胞癌组织,两者之间的差异具有显著性意义,高中低分化的口腔鳞状细胞癌两两比较,均有统计学差异.结论:doc1基因可能在口腔鳞状细胞癌早期具有重要作用,doc1 mRNA低表达可能是口腔鳞状细胞癌中的早期事件.     

口腔鳞状细胞癌转移相关基因实时定量PCR的验证

目的 对应用基因表达谱芯片从高低转移潜能的口腔鳞癌细胞系中筛选出的差异表达基因,进行基因转录水平的定量验证,筛选转移相关的基因.方法 选择基因表达谱芯片检测发现的、在高低转移潜能的口腔鳞癌细胞系中的差异表达基因,应用实时定量PCR定量检测方法,在口腔鳞癌低转移细胞系Tca8113及其配对的高转移亚细胞系Tb细胞中,进行基因转录水平的检测.将两种检测结果进行对比分析,筛选出可能与口腔鳞癌转移有关的基因或信号转导通路.结果 选择9个基因进行研究.其中有6个基因在高转移的Tb细胞中高表达,1个基因表达下调,2个基因在Tb和Tca8113细胞中表达无明显差异.实时定量PCR检测结果与基因芯片结果的符合率为66.7%.NF-κB信号转导通路中的主要基因A20、IκBα、TANK和p65在Tb细胞中表达明显上调.结论 NF-κB信号通路和其它一些基因,如IER3、CD44和GPMNB可能在口腔鳞状细胞癌侵袭和转移过程中发挥重要作用,这些基因和信号通路为深入研究口腔鳞癌转移的分子机理和治疗靶点奠定了基础.     

DNA甲基化与口腔鳞状细胞癌的相关性研究进展

DNA甲基化紊乱会增加人类罹患肿瘤的危险性.在口腔鳞状细胞癌(OSCC)研究中,以癌相关基因高甲基化研究相对较多,以甲基化特异性聚合酶链反应检测为主,多集中于健康黏膜-癌旁健康组织和肿瘤组织,以肿瘤早期诊断和恶性转化判定为目的.OSCC全基因组甲基化水平研究多采用高通量检测技术.获得癌前病变与健康黏膜、鳞状细胞癌与癌前病变、鳞状细胞癌与健康黏膜的DNA甲基化数据及DNA甲基化差异表达情况,可为下一步候选基因DNA甲基化研究奠定基础.     

舌鳞状细胞癌Tca8113细胞株醛脱氢酶高表达亚群细胞生物学特性的研究

目的检测醛脱氢酶（ALDH）在舌鳞状细胞癌Tca8113细胞株中的表达,研究ALDH高表达（ALDHhig）亚群细胞的生物学特性。方法采用流式细胞仪检测Tca8113细胞株中ALDH的表达;分选ALDHhig与ALDHlow亚群细胞,体外培养观察其增殖、分化及在无血清培养基中的成球能力;利用抑制消减杂交（SSH）技术筛选ADLHhig亚群细胞高表达基因。结果舌鳞状细胞癌Tca8113细胞株中仅有1.3%的细胞高表达ADLH;分选出的ADLHhig肿瘤细胞增殖能力高于ALDHlow细胞和未分选的肿瘤细胞;随着培养时间的延长,体外培养的ALDHhig细胞比例逐渐下降至分选前水平;ALDHhig亚群细胞能够在无血清培养基中悬浮生长形成肿瘤球,且高表达干细胞相关基因。结论舌鳞状细胞癌Tca8113细胞株中有一小群细胞高表达ALDH,具有干细胞的生物学特性;ALDH可能是舌鳞状细胞癌干细胞的标志物之一。     

颊癌及转移淋巴结角蛋白谱的分析研究

目的探讨口腔颊黏膜鳞状细胞癌及转移淋巴结角蛋白谱的特点。方法颊部鳞状细胞癌活检标本及转移淋巴结活检标本,提取角蛋白,进行SDS-PAGE电泳和利用免疫印迹(Western Blot)杂交方法研究转移角蛋白谱的表达。结果颊黏膜化鳞状细胞癌中出现了单层角蛋白上皮如CK18、19,而CK10表达缺失;淋巴结转移鳞状细胞癌中出现了单层角蛋白上皮如19等,并且出现了大量角蛋白片段。结论颊黏膜鳞状细胞癌变异性表达CK18、19,不表达CK 10。转移淋巴结和原发鳞状细胞癌的角蛋白谱是不同的,在口腔鳞状细胞癌淋巴结转移过程中,角蛋白谱发生了变化。     

口腔粘膜鳞癌和癌前病变p53、ras基因突变的检测及p53、p21蛋白的表达

目的　探讨 p5 3、ras基因改变在口腔粘膜鳞癌及癌前病变发生过程中的意义。方法　应用聚合酶链反应和免疫组织化学法检测 2 3例口腔粘膜鳞癌和 15例癌前病变 p5 3、ras基因突变和 p5 3、p2 1蛋白的表达。结果　43.5 % (10 / 2 3)的口腔粘膜鳞癌存在 p5 3基因第 8外显子突变 ,47.8% (11/ 2 3) ras基因有突变 ;口腔粘膜鳞癌 p5 3、p2 1蛋白表达阳性率分别为 43.5 % (10 / 2 3)和 6 0 .9% (14/ 2 3)。癌前病变有 1例存在 p5 3基因第 8外显子和 ras基因突变 (6 .7% ) ;p5 3、p2 1蛋白表达阳性率分别为 13.3% (2 / 15 )和 2 0 % (3/ 15 )。两组间差异显著 (P<0 .0 5 )。结论　 p5 3、ras基因突变和 p5 3、p2 1蛋白过量表达与口腔粘膜鳞癌的发生过程密切相关 ,可作为癌前病变发展为癌危险性的生物指标     

端粒酶hTR基因在口腔癌前病变及鳞癌中的表达

目的探讨端粒酶ｈＴＲ基因在口腔癌前病变及鳞癌中的表达。方法用原位杂交技术检测８２例标本,其中正常口腔粘膜７例,上皮单纯性增生７例,上皮异常增生３０例,原位癌、鳞癌３８例。结果正常口腔粘膜及上皮单纯性增生组织中ｈＴＲ表达较弱,阳性细胞主要位于基底层,检出率２８．５６％（４／１４）。癌前病变中随着异常增生程度的增加,ｈＴＲ表达逐渐增强,阳性细胞逐步由基底层向棘层波及,检出率６０％（１８／３０）。原位癌及鳞癌均有较强的ｈＴＲ表达,检出率为８１．５８％（３１／３８）。结论端粒酶的激活可能出现在口腔癌前病变的晚期阶段,在口腔鳞癌的形成过程中起了关键性作用。     

Short telomeres in an oral precancerous lesion: Q-FISH analysis of leukoplakia

J Oral Pathol Med (2012) 41 : 372–378 Objectives: A precancerous condition is a lesion that, if left untreated, leads to cancer or can be induced to become malignant. In the oral region, leukoplakia is a lesion that has been regarded as precancerous. In cases of oral carcinoma, we have frequently noticed that a type of leukoplakia histologically demonstrating hyper‐orthokeratosis and mild atypia (ortho‐keratotic dysplasia; OKD) is often associated with carcinoma, either synchronously or metachronously. Therefore, we consider OKD‐type leukoplakia to be a true precancerous lesion. Materials and Methods: In an attempt to clarify the relationship between OKD as a precancerous condition in the oral mucosa and telomere length, we estimated telomere lengths in this type of leukoplakia using quantitative fluorescence in situ hybridization, and also quantified the frequency of anaphase–telophase bridges (ATBs) in comparison with squamous cell carcinoma in situ (CIS) and the background tissues of CIS and OKD. Results: Ortho‐keratotic dysplasia was frequently associated with squamous cell carcinoma (45.0%) and showed significantly shorter telomeres than normal control epithelium, CIS, or the background of CIS or OKD. The frequency of ATBs was much higher in OKD than in control epithelium or CIS. Conclusion: Ortho‐keratotic dysplasia appears to be frequently associated with carcinoma, chromosomal instability, and excessively shortened telomeres, not only in the lesion itself but also in the surrounding background. Therefore, when this type of leukoplakia is recognized in the oral region, strict follow‐up for oral squamous cell carcinoma is necessary, focusing not only on the areas of leukoplakia, but also the surrounding background.     

舌癌中原癌/抑癌基因及凋亡/应激反应相关基因的表达谱研究

目的：应用cDNA微阵列技术研究舌癌中原癌/抑癌基因及凋亡/应激反应相关基因的差异表达基因。方法：分别提取4例舌癌组织和正常舌黏膜组织的mRNA,逆转录后制成cDNA探针,纯化后与含有100条细胞凋亡/应激反应相关基因和234条原癌/抑癌基因相关基因的基因表达谱芯片进行杂交分析,筛选相关的差异表达基因。结果：共筛选出与细胞凋亡/应激反应有关的基因14条,其中表达增加的基因有4条,表达降低的基因有10条。在原癌/抑癌基因相关的234条基因中,共有17条基因在舌癌组织中存在差异表达,其中表达增加的基因10条,表达降低的基因7条。结论：运用cDNA微阵列技术能成功检测出两种不同组织中多个基因的差异表达,为研究舌癌提供有价值的筛选资料。     

口腔癌及癌前病变组织中MMP-9基因表达的意义

目的：探讨口腔癌及癌前病变组织中MMP-9基因表达的临床意义。方法：应用原位杂交技术检测42例口腔癌，20例癌转移淋巴结，22例癌前病变组织及21例正常口腔黏膜组织中MMP-9的表达，并分析其与临床病理特性的关系。结果：转移淋巴结、口腔癌、癌前病变及正常组织中MMP-9基因阳性表达率分别为100％，73．81％，22.73％，9．52％。结论：MMP-9的过度表达与口腔癌的浸润和淋巴结转移密切相关。     

口腔扁平苔藓基因表达谱中差异表达基因初步探讨

目的筛选口腔扁平苔藓组织中的差异表达基因,并对其进行功能分类。方法用4 000种人类基因多聚酶链反应产物制成BiostarH- 40s型表达谱芯片,分离纯化正常口腔黏膜组织和口腔扁平苔藓病变组织mRNA,制备表达谱探针,用ScanArray 4000 荧光扫描仪扫描芯片荧光信号图像,分析正常口腔黏膜组织和口腔扁平苔藓组织之间差异表达的基因。结果1）在4 000条基因中,有213条基因表达差异,其中122条基因表达上调,91条基因表达下调。2）在表达上调基因中,功能分类主要包括免疫相关基因、代谢相关基因、癌基因、细胞因子、细胞信号和传递蛋白。3）在表达下调基因中,功能分类主要包括DNA结合、转录和转录因子、细胞信号和传递蛋白、免疫相关基因、细胞因子、代谢相关基因。结论口腔扁平苔藓的发生、发展过程中存在着多条不同功能基因表达调控的改变。     

口腔粘膜癌前病变、鳞癌的DNA倍体和AgNOR测定及其相关性的初步研究

〕对１９例口腔粘膜癌前病变及鳞癌用流式细胞仪作ＤＮＡ定量测定，同时用Ｐｌｏｔｏｎ改良银染法作ＡｇＮＯＲ定量计数。结果显示：ＤＮＡ异倍体检出率为鳞癌组＞异常增生组＞ＯＬＰ、ＬＫ组（无异常增生组），鳞癌组与ＯＬＰ、ＬＫ组间差异有显著性；ＡｇＮＯＲ值鳞癌组＞异常增生组＞ＯＬＰ、ＬＫ组，各组间有显著性差异，ＤＮＡ倍体含量与ＡｇＮＯＲ值间相关性显著。提示：ＤＮＡ含量测定与ＡｇＮＯＲ计数对鉴别口腔粘膜良、恶性病变有一定价值，二者意义相近且互补，为口腔粘膜病理学诊断提供了一个新的量化指标，有助于临床对癌前病变的早期诊断     

口腔鳞癌患者与健康人外周血清差异表达蛋白的初步研究

目的通过口腔鳞癌患者血清及健康人血清中蛋白质组成的对比分析,获得口腔鳞癌患者血清中的蛋白变化。方法口腔鳞癌患者及健康人外周血清各20例,通过固相p H梯度双向凝胶电泳以及质谱鉴定和生物信息学分析,寻找在口腔鳞癌中差异表达的蛋白质。结果口腔鳞癌和正常人血清差异表达明显的7个点,对其进行质谱鉴定和生物信息学分析,鉴定了其中的一个点,为Chain B,T-To-T(High)Quaternary Transitions In Human Hemoglobin.在口腔鳞癌血清中均为低表达。结论Chain B,T-To-T(High)Quaternary Transitions In Human Hemoglobin:Deshis146beta Deoxy Low-Sal.在口腔鳞癌发生发展过程中可能起重要调控作用。     

Gene expression profile changes correlated with lymph node metastasis in oral squamous cell carcinoma

The purpose of this research was to identify biomarkers for predicting cervical lymph node metastasis in oral squamous cell carcinoma (OSCC). We surveyed the expressions of 1289 cancer-related genes in 41 cases of OSCC by cDNA array analysis. We extracted genes upregulated or downregulated in their expression in association with lymph node metastasis. Of 1289 cancer-related genes, we identified 39 genes differentially expressed in OSCC with or without lymph node metastasis. Expression levels of 9 genes were lower, and those of 30 genes were higher, in node-positive cases. The genes expressed at higher levels in node-positive cases included angiogenesis-related molecules, cell adhesion molecules, and proteolytic enzymes. We suggest that these characteristic genes could provide, if verifiable, useful information for predicting the risk of lymph node metastasis in OSCC.     

Survivin, a potential early predictor of tumor progression in the oral mucosa

Survivin is a recently described apoptosis inhibitor selectively over-expressed in most tumors. Immunohistochemistry was used to investigate a potential role of survivin as an early predictor of malignant transformation in precancerous and cancerous lesions of the oral cavity. Survivin was present in 10/30 cases (33%) of oral precancerous lesions without malignant progression, and in 15/16 cases (94%) of oral precancerous lesions evolved into full-blown squamous cell carcinoma. Tumors that progressed from these precancerous lesions retained widespread survivin positivity (100%). Variations among group means were highly statistically significant (p < 0.001). No significant correlation was found between survivin expression and the degree of dysplasia. High expression of cytoplasmic/nuclear survivin is an early event during oral carcinogenesis and may provide a useful tool for the identification of precancerous lesions at higher risk of progression into invasive carcinoma.