抑制Src酪氨酸激酶对非小细胞肺癌细胞VEGF表达的影响

目的：探讨抑制Src酪氨酸激酶对非小细胞肺癌细胞VEGF表达的影响。方法：采用ELISA法检测非小细胞肺癌细胞株培养上清中VEGF表达以及抑制Src酪氨酸激酶对VEGF表达的影响;采用雄性严重联合免疫缺陷（SCID）小鼠,敲除NK细胞,建立非小细胞肺癌细胞诱导的皮下肿瘤和实验性肺转移瘤动物模型,采用免疫组化法研究抑制Src酪氨酸激酶对皮下肿瘤和肺转移瘤中VEGF表达的影响。结果：本实验采用的3种非小细胞肺癌细胞都表达VEGF。0.1μmol/L、0.3μmol/L、1μmol/L和3μmol/L Src酪氨酸激酶抑制剂对H226细胞VEGF表达的抑制率分别为18%、8%、24%和47%,对A549细胞VEGF表达的抑制率分别为14%、23%、50%和43%,对PC-9细胞VEGF表达的抑制率分别为25%、56%、51%和71%。抑制Src酪氨酸激酶明显抑制VEGF在肺转移瘤和皮下肿瘤中的表达。结论：抑制Src酪氨酸激酶能够抑制非小细胞肺癌细胞体外和体内VEGF的表达。     

抑制Src酪氨酸激酶对非小细胞肺癌细胞增殖的影响

目的探讨抑制Src酪氨酸激酶对非小细胞肺癌(non-smalllungcancer,NSCLC)体内外增殖的影响。方法Westernblot和免疫沉淀法检测Src蛋白在NSCLC细胞株中的表达和磷酸化情况;MTT法检测抑制Src酪氨酸激酶活化对NSCLC细胞体外增殖的影响;采用雄性严重联合免疫缺陷(severecombinedimmunitydeficiency,SCID)小鼠,建立肺腺癌PC-9和A549细胞诱导的皮下肿瘤动物模型,研究抑制Src酪氨酸激酶活化对皮下肿瘤增生的影响。结果NSCLC细胞株中Src蛋白明显活化而没有过度表达。Src酪氨酸激酶抑制剂对NSCLC细胞株中Src蛋白的自主磷酸化呈现剂量依赖的抑制作用。亚微摩尔Src酪氨酸激酶抑制剂(<3μmol/L)对PC-9和A549细胞株体外增生表现出剂量依赖性抑制作用,P<0·05。3μmol/LSrc酪氨酸激酶抑制剂也能够显著抑制H226细胞增生,P<0·01。在PC-9细胞诱导的皮下肿瘤模型中,口服Src酪氨酸激酶抑制剂2周后,10和50mg/(kg·d)治疗组对皮下肿瘤体积抑制率分别为73·28%和93·4%,P<0·001。在A549细胞诱导的皮下肿瘤模型中,50mg/(kg·d)治疗3周后差异有统计学意义,抑制率维持在39·4%,P<0·05。结论抑制Src酪氨酸激酶活化能够抑制NSCLC细胞体内外增殖。     

抑制Src酪氨酸激酶对非小细胞肺癌细胞外信号调节激酶影响的研究

目的:探讨抑制Src酪氨酸激酶活化对非小细胞肺癌(NSCLC)细胞外信号调节激酶的影响及其作用。方法:采用NSCLC细胞株进行细胞培养,分别给予不同浓度的Src酪氨酸激酶抑制剂。蛋白质印迹检测NSCLC细胞外信号调节激酶1/2(ERK1/2)磷酸化以及抑制Src酪氨酸激酶活化对NSCLC细胞ERK1/2磷酸化的影响。MTT法检测抑制Src酪氨酸激酶活化对NSCLC细胞体外增殖的影响。软琼脂糖集落形成实验检测抑制Src酪氨酸激酶对NSCLC细胞克隆形成的影响。结果:选用的NSCLC细胞都存在ERK1/2磷酸化。抑制Src酪氨酸激酶对PC-9和A549细胞ERK1/2磷酸化呈现浓度依赖性抑制作用,亚微摩尔水平Src酪氨酸激酶抑制剂几乎完全抑制PC-9和A549细胞ERK1/2磷酸化。Src酪氨酸激酶抑制剂对PC-9和A549细胞体外增殖表现出明显的浓度依赖性抑制作用(F=5.072,P=0.004;F=4.368,P=0.008)。0.1、0.3和1.0μmol/L的Src酪氨酸激酶抑制剂对PC-9和A549细胞增殖的抑制率分别为14.7%、47.1%、61.3%和19.8%、24.2%、30.6%。而其余3种NSCLC细胞ERK1/2磷酸化以及体外增殖对Src酪氨酸激酶抑制剂反应不敏感。Src酪氨酸激酶抑制剂明显抑制PC-9和A549细胞的克隆形成(t=11.746,P<0.001;t=5.237,P<0.001)。结论:抑制Src酪氨酸激酶能够抑制PC-9和A549细胞ERK1/2磷酸化,从而抑制PC-9和A549细胞体外增殖。     

Src激酶抑制剂ZD6474在乳腺癌MCF-7细胞转移中的作用和机制

目的:探讨Src激酶抑制剂ZD6474在乳腺癌MCF-7细胞转移中的作用和机制。方法:乳腺癌MCF-7细胞经ZD6474处理后,检测肿瘤细胞体外黏附、侵袭能力的改变,应用Western blot及Real-time PCR观察细胞Src激酶磷酸化水平及E-钙黏素和β-连环蛋白表达的变化,报告基因技术检测Snail在转录水平表达的变化。结果:ZD6474可抑制MCF-7细胞中Src激酶活性,在ZD6474浓度为1×10-5mol/L和1×10-4mol/L时,细胞的抑制率分别为12.2%和27.5%。Src酪氨酸激酶抑制剂可上调E-cadherin在mRNA和蛋白表达水平,下调β-catenin在mRNA和蛋白表达水平及Snail启动子活性。结论:Src激酶与乳腺癌MCF-7细胞肿瘤转移能力密切相关,阻断Src激酶活性可抑制肿瘤细胞转移能力。     

Src蛋白在肺癌细胞增殖浸润中的作用

背景与目的 Src蛋白在肿瘤的发生、发展和转移中具有重要作用。本研究旨在探讨Src蛋白在肺癌细胞中的表达活化情况及其对肺癌细胞增殖浸润的影响。方法采用Western blot和免疫沉淀法检测Src蛋白在肺癌细胞株中的表达和磷酸化情况;M法检测抑制Src酪氨酸激酶活化对肺癌细胞体外增殖的影响;Boyden chamber法检测抑制Src酪氨酸激酶活化对肺癌细胞体外侵袭浸润的影响。结果本实验选用的肺癌细胞都存在pp60src的表达,非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)细胞株Src蛋白的自主磷酸化水平(SrcpY418)明显增高,而人小细胞肺癌细胞株SBC5中几乎检测不到SrcpY418。抑制Src酪氨酸激酶活化对肺癌细胞体外增殖呈现出不同的反应,亚微摩尔Src蛋白酪氨酸激酶抑制剂对PC-9和A549细胞体外增殖表现出剂量依赖性抑制作用(P<0.05);而1M Src酪氨酸激酶抑制剂对H226、PC14PE6和RERFLCOK细胞增殖没有明显的抑制作用。Src酪氨酸激酶抑制剂对肺癌细胞体外侵袭浸润呈现明显的剂量依赖性抑制作用(P<0.05)。结论 Src蛋白的活化,而不是过度表达,在NSCLC细胞体外增殖和浸润中发挥着重要作用。     

抑制Src酪氨酸激酶对非小细胞肺癌细胞分泌MMP-2和MMP-9的影响

背景与目的 Src酪氨酸激酶和基质金属蛋白酶在肺癌的浸润和转移中发挥重要作用。本研究旨在探讨抑制Src酪氨酸激酶对非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)细胞分泌基质金属蛋白酶-2(matrix metalloproteinase2,MMP-2)和基质金属蛋白酶-9(matrix metalloproteinase9,MMP-9)以及NSCLC细胞侵袭浸润的影响。方法采用ELISA法检测NSCLC细胞(PC14PE6、H226、PC-9、A549)培养上清中MMP-2和MMP-9含量以及抑制Src酪氨酸激酶对NSCLC细胞分泌MMP-2和MMP-9的影响;Boyden chamber法检测抑制Src酪氨酸激酶对NSCLC细胞体外侵袭浸润的影响。结果 NSCLC细胞中PC14PE6和H226中MMP-2和MMP-9的水平较高,A549细胞中MMP-9的水平较低,而MMP-2和MMP-9在PC-9细胞中检测不到。Src酪氨酸激酶抑制剂对PC14PE6中的MMP-2水平以及PC14PE6、H226和A549细胞中的MMP-9水平呈剂量依赖性抑制关系。10μM Src酪氨酸激酶抑制剂使PC14PE6细胞中的MMP-2水平、H226细胞和A549细胞中的MMP-9水平降低50%以上。10μM Src酪氨酸激酶抑制剂对H226细胞中的MMP-2无明显抑制作用。Src酪氨酸激酶抑制剂对4种NSCLC细胞体外侵袭浸润的抑制程度略有差异,但均呈现明显的剂量依赖性抑制作用。3μM Src酪氨酸激酶抑制剂对PC14PE6、H226、A549和PC-9细胞体外侵袭浸润的抑制率分别为79.1%、68.09%、90.96%和96.98%(P<0.001)。结论通过抑制NSCLC细胞分泌MMP-2和MMP-9,抑制Src酪氨酸激酶可降低细胞的体外侵袭浸润能力。     

抑制Src酪氨酸激酶对人类肺腺癌小鼠皮下移植瘤的抑制作用及其机制

 【摘要】　目的　探讨抑制Src酪氨酸激酶对人类肺腺癌小鼠皮下移植瘤的影响及其机制。方法　采用雄性严重联合免疫缺陷（SCID）小鼠,建立肺腺癌PC-9和A549细胞诱导的皮下移植瘤动物模型,采用免疫组织化学法研究抑制Src酪氨酸激酶对肺腺癌皮下移植瘤增生指数（PI）（Ki-67染色）和微血管密度（MVD）（CD31染色）的影响。结果　PC-9细胞皮下移植瘤对Src酪氨酸激酶抑制剂非常敏感,治疗组和对照组之间差异有统计学意义（P＜0.01）。10 mg?kg-1?d-1治疗组和50 mg?kg-1?d-1治疗组之间差异也有统计学意义（P＜0.01）。停药1周时10 mg?kg-1?d-1和50 mg?kg-1?d-1治疗组的抑瘤率分别为33.19 %和84.79 %。A549细胞皮下移植瘤对Src酪氨酸激酶抑制剂不敏感。在PC-9细胞皮下移植瘤中,50 mg?kg-1?d-1 Src酪氨酸激酶抑制剂治疗组和对照组相比,PI显著降低 （P＜0.01）。在A549细胞皮下移植瘤中,PI略有下降 （P＞0.05）。在PC-9和A549细胞皮下移植瘤中,50 mg?kg-1?d-1 Src酪氨酸激酶抑制剂治疗组和对照组相比,MVD均显著降低（P＜0.05）。结论　抑制Src酪氨酸激酶通过直接抑制肺腺癌细胞增生和间接抑制血管新生,进而抑制肺腺癌细胞皮下移植瘤生长。     

抑制Src酪氨酸激酶对小鼠肺转移癌的干预作用

目的：探讨抑制Src酪氨酸激酶对小鼠肺转移癌的干预作用及其机制。方法：采用雄性严重联合免疫缺陷（SCID）小鼠,敲除NK细胞,建立肺腺癌A549细胞诱导的实验性肺转移癌动物模型。每天给予小鼠口服Src酪氨酸激酶抑制剂,研究抑制Src酪氨酸激酶对实验性肺转移癌的影响;采用免疫组化法研究抑制Src酪氨酸激酶对转移瘤中增生指数（Ki67染色）和微血管密度（CD31染色）的影响。结果：A549细胞在肺表面形成弥漫性的转移性损伤,50mg/kg/d Src酪氨酸激酶抑制剂口服治疗组肺表面比对照组光滑,肺重量明显小于对照组和10mg/kg/d治疗组（P〈0.05）,而10mg/kg/d治疗组的肺重量和对照组相比没有明显差别。A549细胞接种后35天,对照组小鼠体重显著下降（P〈0.01）,而治疗组未见小鼠体重明显下降。口服Src酪氨酸激酶抑制剂50mg/kg/d,明显减少肺组织内转移性肺损伤的数目和面积,同时显著减少Ki67阳性的增生性肿瘤细胞数（P〈0.001）。结论：抑制Src酪氨酸激酶通过抑制局部增殖和浸润抑制A549细胞诱导的肺转移癌。     

抑制Src酪氨酸激酶对小鼠肺转移癌的干预作用

目的:探讨抑制Src酪氨酸激酶对小鼠肺转移癌的干预作用及其机制。方法:采用雄性严重联合免疫缺陷(SCID)小鼠,敲除NK细胞,建立肺腺癌A549细胞诱导的实验性肺转移癌动物模型。每天给予小鼠口服Src酪氨酸激酶抑制剂,研究抑制Src酪氨酸激酶对实验性肺转移癌的影响;采用免疫组化法研究抑制Src酪氨酸激酶对转移瘤中增生指数(Ki67染色)和微血管密度(CD31染色)的影响。结果:A549细胞在肺表面形成弥漫性的转移性损伤,50mg/kg/d Src酪氨酸激酶抑制剂口服治疗组肺表面比对照组光滑,肺重量明显小于对照组和10mg/kg/d治疗组(P<0.05),而10mg/kg/d治疗组的肺重量和对照组相比没有明显差别。A549细胞接种后35天,对照组小鼠体重显著下降(P<0.01),而治疗组未见小鼠体重明显下降。口服Src酪氨酸激酶抑制剂50mg/kg/d,明显减少肺组织内转移性肺损伤的数目和面积,同时显著减少Ki67阳性的增生性肿瘤细胞数(P<0.001)。结论:抑制Src酪氨酸激酶通过抑制局部增殖和浸润抑制A549细胞诱导的肺转移癌。     

Src酪氨酸激酶在人胃癌细胞转移中的作用和机制

背景与目的:Src酪氨酸激酶的活化在胃癌浸润和转移中发挥了重要的作用。本研究旨在探讨Src酪氨酸激酶对人胃癌细胞E-钙黏着蛋白(E-cadherin)和基质金属蛋白酶(matrix metalloproteinase,MMP)-2、9表达、血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)分泌、转录因子NF-κB和AP-1表达以及胃癌细胞体外侵袭能力的影响。方法:使用Src酪氨酸激酶抑制剂4-苯胺喹唑啉(3和10μmol/L)后,应用Western blot法检测人胃癌SGC7901细胞中E-cadherin、MMP-2和MMP-9蛋白表达变化;应用实时PCR(real-time PCR)检测细胞中E-cadherin、MMP-2和MMP-9的mRNA表达变化;应用ELISA法检测细胞培养上清液中VEGF表达变化;应用双荧光报告基因法检测NF-κB和AP-1转录活性;应用Transwell法检测肿瘤细胞侵袭能力变化。结果:当Src酪氨酸激酶抑制剂4-苯胺喹唑啉浓度为3和10μmol/L时,SGC7901细胞中E-cadherin蛋白表达量显著增加,E-cadherin的mRNA表达是对照组的263.8%(P<0.05)和403.3%(P<0.05);MMP-2和MMP-9的蛋白表达显著降低,MMP-2的mRNA表达是对照组的28.3%(P<0.05)和16.7%(P<0.05),MMP-9的mRNA表达是对照组的23.6%(P<0.05)和13.3%(P<0.05);VEGF含量是对照组的62.6%(P<0.05)和38.7%(P<0.05);AP-1转录活性是对照组的54.4%(P<0.05)和18%(P<0.05),NF-κB转录活性是对照组的38.3%(P<0.05)和11.5%(P<0.05);胃癌细胞侵袭能力是对照组的43.3%(P<0.05)和28.2%(P<0.05),呈现明显的剂量依赖性抑制作用。结论:Src酪氨酸激酶活化与人胃癌SGC7901细胞体外转移能力密切相关,其机制可能与肿瘤转移相关基因表达有关。     

Src酪氨酸激酶抑制剂dasatinib对人食管鳞癌细胞KYSE180生长及凋亡的影响

目的:探讨Src酪氨酸激酶抑制剂dasatinib对人食管鳞癌细胞生长和凋亡的影响及其相关机制.方法:采用蛋白质印迹法检测食管鳞癌细胞株KYSE180、EC109、KYSE30和人永生化食管上皮细胞株SHEE中总Src和磷酸化Src激酶的表达.用不同剂量的Src酪氨酸激酶抑制剂dasatinib作用KYSE180细胞后,分别采用MTT法、FCM法、蛋白质印迹法和裸鼠皮下移植瘤实验观察dasatinib对KYSE180细胞Src激酶的抑制作用,以及对细胞增殖、细胞周期、细胞凋亡和裸鼠皮下移植瘤的影响.结果:KYSE180、EC109和KYSE30细胞中Src激酶显著活化,而在SHEE细胞中未见活化Src激酶.Dasatinib可显著抑制KYSE180细胞增殖,阻碍细胞G1/S期转换,促进细胞凋亡,并上调caspase 3、cytochrome C和Bax等凋亡相关蛋白的表达.另外,dasatinib可显著抑制裸鼠皮下KYSE180细胞移植瘤的生长.结论:Dasatinib可通过抑制食管鳞癌细胞增殖、促进细胞凋亡以及影响细胞周期等机制,抑制食管鳞癌细胞皮下移植瘤的生长,因此其可望成为治疗食管鳞癌的一个有效药物.     

抑制Src酪氨酸激酶活性对人肺癌A549/DDP细胞耐药性及MDR1和LRP表达的影响

背景与目的本研究旨在探讨抑制Src酪氨酸激酶活性对人肺癌A549/DDP细胞耐药性及多药耐药蛋白(muti-drug resistance1,MDR1)和肺耐药相关蛋白(lungresistance-related protein,LRP)表达的影响。方法以Src酪氨酸激酶抑制剂作用于A549/DDP细胞,应用Western blot法检测肿瘤细胞Src酪氨酸激活性的变化,CellTiter-Glo发光法检测肿瘤细胞药物敏感性的变化,流式细胞仪检测肿瘤细胞Rh-123含量变化,Western blot法和RT-PCR检测肿瘤细胞MDR1和LRP表达变化。结果 Src酪氨酸激酶抑制剂可下调A549/DDP细胞中Src酪氨酸激活性,2.5M和10MSrc酪氨酸激酶抑制剂作用肿瘤细胞后,肿瘤细胞药物敏感性提高,逆转倍数(reversal fold,RF)分别为1.59倍和2.10倍,肿瘤细胞中Rh-123含量分别提高了1.21倍和1.59倍,MDR1mRNA表达分别是对照组的53.8%和27.5%,LRPmRNA表达分别是对照组的59.3%和21.4%,MDR1和LRP蛋白表达水平明显下降。结论抑制A549/DDP细胞中Src酪氨酸激酶活性可逆转肿瘤细胞多药耐药性,提高肿瘤细胞药物敏感性,其机制可能与降低细胞MDR1和LRP表达有关。