CDKL1对胃癌细胞迁移及侵袭的作用

目的:探讨细胞周期素依赖激酶样蛋白1(CDKL1)对胃癌细胞系SGC7901迁移及侵袭的作用.方法:将胃癌细胞系SGC7901分为实验组及对照组,采用慢病毒转染siRNA至胃癌细胞构成实验组,转染无意义序列作为对照组.通过细胞划痕实验检测胃癌SGC7901细胞的迁移能力;Transwell小室实验检测其侵袭能力;Western blot检测CDKL1低表达后对胃癌细胞中AEG-1和MMP-9蛋白表达的影响.结果:与对照组相比,CDKL1低表达后实验组细胞迁移及侵袭能力明显降低(P＜0.05),实验组胃癌细胞中AEG-1和MMP-9蛋白的表达水平明显下降(P＜0.05).结论:特异性下调CDKL1基因可抑制胃癌细胞的迁移及侵袭能力,表明CDKL1基因可促进胃癌细胞的侵袭以及转移,并且与AEG-1和MMP-9密切相关.     

siRNA沉默Snail基因对胃癌SGC7901细胞株增殖及侵袭能力的影响

目的探讨转录因子Snail在胃癌SGC7901细胞株增殖及侵袭转移过程中的作用,为胃癌的基因治疗提供有效靶点。方法化学合成针对Snail的靶向siRNA,同时以转染阴性对照siRNA、转染脂质体转染试剂和空白细胞作为对照。RT-PCR检测转染效率,MTT检测Snail siRNA对SGC7901细胞增殖能力的影响,Boyden chamber检测Snail siRNA对SGC7901细胞侵袭能力的影响。结果与各对照组相比,转染SnailsiRNA组SGC7901细胞Snail mRNA的表达下降,且随转染时间延长,Snail mRNA的表达下降明显(P<0.05)。MTT结果显示转染Snail siRNA组SGC7901细胞在转染后48、72 h较对照组增殖能力明显下降(P<0.05);Boyden chamber结果显示转染Snail siRNA组SGC7901细胞在转染后48、72 h较对照组穿膜细胞数明显下降(P<0.05);转染Snail siRNA组各时间点之间增殖能力和侵袭转移能力的差异也有统计学意义(P<0.05)。结论转录因子Snail在胃癌的发生、发展及侵袭转移中发挥重要作用,可作为胃癌基因治疗的有效靶点。     

抑制Src酪氨酸激酶对非小细胞肺癌细胞分泌MMP-2和MMP-9的影响

背景与目的 Src酪氨酸激酶和基质金属蛋白酶在肺癌的浸润和转移中发挥重要作用。本研究旨在探讨抑制Src酪氨酸激酶对非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)细胞分泌基质金属蛋白酶-2(matrix metalloproteinase2,MMP-2)和基质金属蛋白酶-9(matrix metalloproteinase9,MMP-9)以及NSCLC细胞侵袭浸润的影响。方法采用ELISA法检测NSCLC细胞(PC14PE6、H226、PC-9、A549)培养上清中MMP-2和MMP-9含量以及抑制Src酪氨酸激酶对NSCLC细胞分泌MMP-2和MMP-9的影响;Boyden chamber法检测抑制Src酪氨酸激酶对NSCLC细胞体外侵袭浸润的影响。结果 NSCLC细胞中PC14PE6和H226中MMP-2和MMP-9的水平较高,A549细胞中MMP-9的水平较低,而MMP-2和MMP-9在PC-9细胞中检测不到。Src酪氨酸激酶抑制剂对PC14PE6中的MMP-2水平以及PC14PE6、H226和A549细胞中的MMP-9水平呈剂量依赖性抑制关系。10μM Src酪氨酸激酶抑制剂使PC14PE6细胞中的MMP-2水平、H226细胞和A549细胞中的MMP-9水平降低50%以上。10μM Src酪氨酸激酶抑制剂对H226细胞中的MMP-2无明显抑制作用。Src酪氨酸激酶抑制剂对4种NSCLC细胞体外侵袭浸润的抑制程度略有差异,但均呈现明显的剂量依赖性抑制作用。3μM Src酪氨酸激酶抑制剂对PC14PE6、H226、A549和PC-9细胞体外侵袭浸润的抑制率分别为79.1%、68.09%、90.96%和96.98%(P<0.001)。结论通过抑制NSCLC细胞分泌MMP-2和MMP-9,抑制Src酪氨酸激酶可降低细胞的体外侵袭浸润能力。     

丹参酮ⅡA对胃癌细胞迁移和侵袭能力的抑制作用及机制

背景与目的：有研究证实,丹参酮ⅡA (tanshinone ⅡA)对肿瘤细胞具有抑制增殖、诱导分化和促凋亡的作用,并可抑制骨肉瘤细胞迁移和侵袭。但丹参酮ⅡA抑制胃癌侵袭和转移的机制尚不明确。本研究主要探讨丹参酮ⅡA对人胃癌SGC7901细胞体外迁移和侵袭的影响。方法：不同浓度(0.5、1、2、4 μg/mL)丹参酮ⅡA分别作用体外培养的胃癌SGC7901细胞24、48、72 h后,MTT比色法检测细胞增殖活力的改变;细胞划痕实验观察细胞的迁移能力的改变;3D侵袭实验观察细胞侵袭能力的改变;Real-time PCR和蛋白质印迹法(Western blot)分别检测细胞间黏附分子1(ICAM-1)、基质金属蛋白酶-2(MMP-2)、基质金属蛋白酶-9(MMP-9)、金属蛋白酶抑制剂-2(TIMP-2)mRNA和蛋白的表达水平改变。结果：1、2、4 μg/mL丹参酮ⅡA对胃癌细胞株SGC7901有明显的抑制作用,且抑制作用存在时间-剂量依赖性(P<0.05);2 μg/mL丹参酮ⅡA呈时间依赖性抑制SGC7901细胞迁移;1、2、4 μg/mL丹参酮ⅡA呈浓度依赖性抑制SGC7901细胞侵袭;丹参酮ⅡA下调SGC7901细胞ICAM-1、MMP-2、MMP-9表达,同时可上调TIMP-2表达(P<0.05)。结论：丹参酮ⅡA可抑制胃癌SGC7901细胞的迁移和侵袭,上调TIMP-2的表达,下调ICAM-1、MMP-2、MMP-9的表达,可能是其作用机制之一。     

Embelin对HL-60细胞MMP-9 mRNA、NF-κB及VEGF表达的影响

目的:研究Embelin对人类髓系白血病HL-60细胞株基质金属蛋白酶-9(MMP-9)mRNA、血管内皮生长因子(VEGF)及NF-κB表达的影响,并探讨相互之间的关系。方法:应用RT-PCR检测MMP-9mRNA的表达,Western blot检测VEGF及NF-κB的表达。结果:Embelin可以抑制NF-κB、MMP-9 mRNA及VEGF的表达,且具有浓度依赖性。结论:Embelin可通过抑制NF-κB降低MMP-9 mRNA及VEGF表达,从而可能降低白血病细胞的侵袭性。     

miRNA-200c通过抑制Akt通路提高胃癌SGC7901/DDP细胞对顺铂的敏感性

目的:研究miRNA-200c对人胃癌耐药SGC7901/DDP细胞顺铂敏感性的影响及其机制。方法:Western blotting检测SGC7901/DDP及其亲代SGC7901细胞E-cadherin、PTEN、p-Akt及总Akt蛋白的表达;瞬时转染miRNA-200c前体(miR-NA-200c precursor,Pre-200c)提高SGC7901/DDP细胞miRNA-200c的表达,MTT法检测转染后SGC7901/DDP细胞对顺铂的敏感性,并分析p-Akt表达的改变;应用Akt通路抑制剂LY94002处理SGC7901/DDP细胞抑制Akt磷酸化,检测处理后细胞对顺铂的敏感性。结果:与SGC7901细胞相比,SGC7901/DDP细胞中p-Akt蛋白的表达量显著增高(1.02±0.09 vs 0.17±0.02,P<0.05),E-cadherin、PTEN蛋白的表达量显著降低(0.10±0.03 vs 0.47±0.06,0.18±0.06 vs 0.87±0.06;均P<0.05)。转染Pre-200c后,顺铂对SGC7901/DDP细胞的IC50显著低于对照组[(7.52±0.19)vs(12.18±0.29)mg/L,P<0.05],细胞中p-Akt蛋白的表达量也显著低于对照组(0.22±0.04 vs 0.69±0.09,P<0.05);LY94002处理后,SGC7901/DDP细胞p-Akt蛋白的表达显著抑制(0.18±0.06 vs 0.66±0.10,P<0.05),顺铂对细胞的IC50显著低于对照组[(6.80±0.28)vs(11.94±1.73)mg/L,P<0.05]。结论:SGC7901/DDP细胞的耐药可能与E-cadherin和PTEN蛋白的表达缺失及Akt通路的异常激活有关,而miRNA-200c提高该细胞对顺铂的敏感性可能是通过抑制Akt通路而发挥作用。     

抑制Src酪氨酸激酶对非小细胞肺癌细胞VEGF表达的影响

目的:探讨抑制Src酪氨酸激酶对非小细胞肺癌细胞VEGF表达的影响。方法:采用ELISA法检测非小细胞肺癌细胞株培养上清中VEGF表达以及抑制Src酪氨酸激酶对VEGF表达的影响;采用雄性严重联合免疫缺陷(SCID)小鼠,敲除NK细胞,建立非小细胞肺癌细胞诱导的皮下肿瘤和实验性肺转移瘤动物模型,采用免疫组化法研究抑制Src酪氨酸激酶对皮下肿瘤和肺转移瘤中VEGF表达的影响。结果:本实验采用的3种非小细胞肺癌细胞都表达VEGF。0.1μmol/L、0.3μmol/L、1μmol/L和3μmol/L Src酪氨酸激酶抑制剂对H226细胞VEGF表达的抑制率分别为18%、8%、24%和47%,对A549细胞VEGF表达的抑制率分别为14%、23%、50%和43%,对PC-9细胞VEGF表达的抑制率分别为25%、56%、51%和71%。抑制Src酪氨酸激酶明显抑制VEGF在肺转移瘤和皮下肿瘤中的表达。结论:抑制Src酪氨酸激酶能够抑制非小细胞肺癌细胞体外和体内VEGF的表达。     

Src激酶抑制剂PP2在乳腺癌MCF-7细胞转移中的作用和机制

  目的  探讨Src激酶抑制剂PP2在乳腺癌MCF-7细胞转移中的作用和机制。  方法  乳腺癌MCF-7细胞经PP2作用48 h后, 检测肿瘤细胞体外粘附、侵袭能力的改变, 细胞周期的改变, Western blot及Real-time PCR试验检测肿瘤细胞转移相关基因表达的变化, 报告基因试验检测AP-1和NF-κB启动子活性的变化。  结果  PP2可抑制MCF-7细胞中Src激酶活性, 2.5μM和5μMPP2作用后, 肿瘤细胞粘附能力下降63.4%和34.7%;侵袭能力下降44.3%和20.2%;细胞周期显著阻滞在G₀/G₁期; CD44、MMP-2/9以及p-β-catenin表达显著下降, E-cadherin表达显著升高; AP-1启动子活性下降64.5%和37.9%, NF-κB启动子活性下降55.7%和31.8%。  结论  Src激酶与乳腺癌MCF-7细胞肿瘤转移能力密切相关, 阻断Src激酶活性可抑制肿瘤细胞转移能力。      

NS398对SGC7901胃癌细胞生长及CD44V6、MMP-9基因表达的影响

目的探讨COX-2特异性抑制剂NS398对SGC7901胃癌细胞体外生长及CD44V6、MMP-9基因表达的影响。方法体外培养SGC7901胃癌细胞,应用免疫细胞化学方法,检测SGC7901胃癌细胞中COX-2、CD44V6、MMP-9蛋白表达水平,酶联免疫吸附试验(ELISA)检测NS398对胃癌细胞PGE2分泌水平的影响,MTT法检测NS398对SGC7901胃癌细胞体外生长的抑制效应,半定量RT-PCR检测NS398作用后胃癌细胞株中CD44V6、MMP-9基因表达水平的变化。结果 SGC7901胃癌细胞中COX-2、CD44V6、MMP-9呈阳性表达,NS398可显著抑制SGC7901胃癌细胞PGE2的分泌,200μmol/L NS398抑制率达64.3%,NS398对胃癌细胞生长抑制作用呈时间及浓度依赖性;NS398作用24 h后胃癌细胞中CD44V6、MMP-9基因表达水平下降,200μmol/L NS398对CD44V6、MMP-9基因表达抑制率分别为45.7%、43.6%。结论 SGC7901胃癌细胞中COX-2、CD44V6、MMP-9呈阳性表达,NS398可有效抑制SGC7901胃癌细胞PGE2的分泌和胃癌细胞生长,并可抑制与胃癌转移相关的CD44V6、MMP-9基因的表达。     

Smad4过表达对人胃癌细胞增殖和NF-êB通路的影响

目的:构建pEGFP-C1-Smad4表达载体,观察Smad4过表达对人胃癌SGC7901细胞增殖的影响,探讨其与NF-êB的相关性.方法:构建增强绿色荧光蛋白(EGFP)与Smad4的融合表达载体, 转染人胃癌SGC7901细胞,荧光显微镜观察转染后细胞EGFP的表达,Western blotting检测SGC7901-Smad4细胞中Smad4和NF-kB的表达,电泳迁移率变异分析(electrophoretic mobility shif assay,EMSA)检测过表达Smad4对胃癌SGC7901细胞NF-kB 活化的影响,MTT法检测过表达Smad4对SGC7901细胞增殖的影响.结果:在转染pEGFP-C1-Smad4的人胃癌SGC7901细胞(SGC7901-Smad4)中观察到EGFP的表达;Western blotting检测显示,SGC7901- Smad4细胞中Smad4过表达,并伴随核转录因子NF-êB p65的表达水平下调;EMSA检测显示Smad4过表达可下调NF-êB活化;MTT法显示过表达Smad4显著抑制SGC7901细胞增殖(P<0.05或P<0.01).结论:Smad4过表达显著抑制人胃癌细胞增殖,其机制可能与下调NF-kB信号通路有关.     

Gab2通过调节EMT促进胃癌的侵袭转移

目的 探讨Gab2在胃癌组织中的表达情况及其对胃癌细胞侵袭转移能力的影响与机制。方法 采用免疫组织化学SP法检测胃癌组织中Gab2、E-cadherin、N-cadherin及MMP-9的表达并分析其与淋巴结转移的关系。应用小RNA干扰技术,转染SGC7901细胞株,RT-PCR法检测瞬时转染后Gab2基因表达情况,体外侵袭实验检测细胞转染后侵袭能力的变化,Western blot法检测各蛋白的表达。结果 胃癌组织中Gab2的表达水平与淋巴结转移显著相关（P=0.002）,与E-cadherin的表达负相关（r=-0.693, P=0.000）,而与N-cadherin和MMP-9的表达水平正相关（r=0.407, P=0.021; r=0.335, P=0.017）。小RNA干扰技术降低Gab2蛋白的表达后SGC7901细胞侵袭转移能力降低,同时E-cadherin表达增多,N-cadherin和MMP-9蛋白表达降低。结论 Gab2可能通过调节EMT在胃癌侵袭转移中发挥重要作用。     

抑制核转录因子活化逆转胃癌细胞株耐药性研究

目的　探讨核转录因子（ＮＦ-κＢ）的活化在胃癌细胞株耐药性机制中的作用。方法　用阿霉素（ＡＤＭ）诱导培养胃癌细胞耐药亚株ＳＧＣ７９０１／ＡＤＭ,ＭＴＴ法检测ＡＤＭ对胃癌细胞株的细胞毒作用,流式细胞仪检测胃癌细胞株凋亡率的变化,免疫细胞化学染色法检测胃癌细胞株ＮＦ κＢ的活化情况。吡咯烷二硫代氨基甲酸脂（ＰＴＤＣ）抑制ＮＦ-κＢ活化,并检测ＡＤＭ对胃癌细胞株的细胞毒作用。结果　ＳＧＣ７９０１／ＡＤＭ的ＩＣ_５０为２.６３μｇ／ｍｌ,ＳＧＣ７９０１的ＩＣ_５０为０.２９μｇ／ｍｌ,ＳＧＣ７９０１／ＡＤＭ相对耐药度较亲本细胞提高了８.９倍。４８ｈ内ＳＧＣ７９０１和ＳＧＣ７９０１／ＡＤＭ胃癌细胞株发生的凋亡率随ＡＤＭ浓度增加而升高,随着作用时间延长而升高;１０μｇ／ｍｌＡＤＭ分别作用４８ｈ时ＳＧＣ７９０１和ＳＧＣ７９０１／ＡＤＭ胃癌细胞株发生的凋亡率为（４８.５３±１.０２）％和（１７.５３±１.０２）％。免疫细胞化学染色显示ＡＤＭ作用ＳＧＣ７９０１／ＡＤＭ胃癌细胞９ｈ后可检测到ＮＦ-κＢ核移位,最高达到６５％;ＡＤＭ作用ＳＧＣ７９０１胃癌细胞株１８ｈ后可检测到少量ＮＦ-κＢ核移位;所有的细胞株ＮＦ-κＢ核移位均于２４ｈ后减弱;ＰＴＤＣ抑制核转录因子活化后ＡＤＭ细胞毒效应增强（Ｐ＜０.０５）。结论　ＮＦ-κＢ活化所导致的胃癌细胞株凋亡率下降在胃癌细胞株耐药性机制中发挥一定作用,抑制ＮＦ-κＢ活化后可以逆转胃癌细胞株对ＡＤＭ耐药性。     

A Sphingosine Kinase-1 Inhibitor,SKI-II,Induces Growth Inhibition and Apoptosis in Human Gastric Cancer Cells

SKI-II has been reported as an inhibitor of sphingosine kinase 1 and has been extensively used to prove theinvolvement of sphingosine kinase and sphingosine-1-phosphate (Sphk1) in cellular processes. In the currentstudy, we investigated the effects of SKI-II and its potential mechanisms in human gastric cancer SGC7901cells. After treatment with SKI-II, cell growth, cell cycle distribution, apoptosis, expression of Sphk1, NF-κB,Bcl-2, Bax and p27 were assessed by MTT assay, flow cytometry, electron microscopy, immunocytochemistryand Western-blot assay, respectively. Our results showed that SKI-II markedly inhibited SGC7901 cell survivalin a dose-dependent manner, reduced cell proliferation with accumulation of cells in the G0/G1 phase andinduced apoptosis in the tumor cells. Furthermore, Western blotting and immunocytochemistry showed that theexpression of p27 and Bax was increased significantly, but the expression of NF-κB, Bcl-2 and Sphk1 decreasedby different degrees. These results indicate that SKI-II induced cell growth arrest and apoptosis. The increasedapoptotic sensitivity of SGC7901 was correlated with NF-κB or Bcl-2/Bax activation.     

lncRNA MALAT1/miR-141-3p/ZEB1 分子轴调控胃癌SGC7901 细胞的侵袭、迁移及上皮间质转化

[摘要] 目的：探究lncRNA MALAT1/miR-141-3p/ZEB1 分子轴对胃癌（GC）SGC7901 细胞侵袭、迁移及上皮间质转化（EMT）的调控作用。方法：收集2014 年4 月至2017 年5 月武汉商职医院普外科手术切除的GC组织（非坏死部分）和配对癌旁组织（距肿瘤组织>5 cm）标本38 例,同时选取正常胃上皮细胞GES1 及GC细胞系SGC7901、HGC27、BGC823、MKN45 和MKN28。qPCR实验检测MALAT1、miR-141-3p 在GC组织和细胞系中的表达水平,CCK-8 和Transwell 实验检测敲降MALAT1 对SGC7901 细胞增殖、迁移和侵袭的影响,WB 实验检测ZEB1、E-cadherin、N-cadherin 和Vimentin 的表达情况。双荧光酶素报告基因验证MALAT1、miR-141-3p 和ZEB1 的靶向关系,CCK-8 和Transwell 实验检测MALAT1/miR-141-3p/ZEB1 分子轴对SGC7901 细胞生物学行为的影响。结果：MALAT1 在GC组织和细胞系中高表达（P<0.05 或P<0.01）。敲降MALAT1 显著抑制了SGC7901 细胞增殖、迁移、侵袭及EMT（P<0.05 或P<0.01）;MALAT1 与miR-141-3p、miR-141-3p 与ZEB1 均具有直接靶向关系;进一步研究表明,同时过表达miR-141-3p 和MALAT1 或ZEB1 能够逆转miR-141-3p 对SGC7901 细胞生物学行为的抑制作用。结论：MALAT1通过靶向下调miR-141-3p 对ZEB1 的抑制作用,进而促进SGC7901 细胞侵袭、迁移及EMT。     

LINC00997在胃贲门腺癌中表达的临床意义及其对SGC7901细胞迁移、侵袭和EMT的影响

目的： 检测LINC00997在胃贲门腺癌（GCA）组织及胃癌细胞中的表达,分析其表达与患者临床病理特征和预后的关系,探讨敲减LINC00997对胃癌SGC7901细胞迁移、侵袭及上皮间质转化（EMT）的影响。 方法： 基于TCGA和GTEx数据库分析LINC00997在胃癌组织中的表达及其与患者预后的关系。应用qPCR法检测68例GCA组织和相应癌旁组织以及胃癌细胞中LINC00997的表达水平,分析其表达与患者临床病理特征及预后的关系。通过划痕愈合、Transwell侵袭实验分别检测敲减LINC00997 对 SGC7901 细胞迁移和侵袭的影响,qPCR 法和 WB 法检测敲减LINC00997对EMT 相 关 标 志 物 E-cadherin、N-cadherin及vimentin表达的影响。 结果： LINC00997在胃癌组织中的表达水平显著高于癌旁组织（P<0.05）,且LINC00997高表达组患者的OS及DFS显著低于LINC00997低表达组患者（P<0.01 或 P<0.05）。在 68例在GCA组织中,LINC00997的表达水平显著高于癌旁组织（P<0.01）,其表达与患者淋巴结转移、TNM 分期及 OS相关联（P<0.05或P<0.01）。敲减LINC00997的 SGC7901 细胞的迁移和侵袭能力均显著降低（均 P<0.01）,细胞中E-cadherin的表达显著升高,N-cadherin、vimentin的表达均显著降低（P<0.05或P<0.01）。 结论： LINC00997在GCA组织和胃癌细胞中高表达,其高表达可能促进了胃癌细胞的迁移、侵袭及EMT进程,有望成为GCA患者预后评估的分子标志物。     

幽门螺杆菌感染与胃癌细胞侵袭转移的关系研究

目的探讨幽门螺杆菌(H.pylori)感染与胃癌细胞侵袭转移的关系及可能机制。方法将幽门螺杆菌与胃癌细胞株SGC7901共培养12 h;按胃癌细胞与H.pylori菌落之比为1∶100,与SGC7901共培养0、12、24 h来进行Western-blot实验,测定基质金属蛋白酶9(MMP-9)、细胞外总调节蛋白激酶1/2(t-ERK1/2)、磷酸化细胞外调节蛋白激酶1/2(p-ERK1/2)在胃癌细胞中表达水平的变化;共培养24 h后,分为两组,不处理组和加入ERK抑制剂U0126的处理组,应用Transwell小室细胞侵袭实验,比较抑制ERK前后对胃癌细胞运动、侵袭能力的影响。结果随着胃癌细胞与H.pylori比例增大,胃癌细胞中MMP-9、p-ERK1/2表达明显增高(P<0.01),t-ERK1/2表达水平无明显差异(P>0.05)。不处理组胃癌细胞穿透基膜的数量与H.pylori比例呈正相关,而U0126处理组的胃癌细胞穿透基膜数量明显减少。各组之间的差异有统计学意义(P<0.01)。结论幽门螺杆菌感染能促进胃癌细胞的侵袭迁移能力,可能与其通过ERK信号途径增强MMP-9表达而诱导胃癌的发生发展有关。